大肠菌群测定ppt课件
具体操作参见 SN0169—92 《中华人民共和国进出口商品检验行业标 准 出口食品中大肠菌群程
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6
大肠菌群的测定的原理
❖ 大肠菌群之一群能在37℃经24h能发酵乳糖，产生气体，需 氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。该菌主要来源于人 畜粪便，故以此作为粪便污染指标来评价食品的卫生质量， 具有广泛的卫生学意义。它反映了食品是否被粪便污染，同 时间结指出食品是否有肠道致病菌污染的可能。
将3个稀释梯度的待检验样品稀释液接种于9支或15支试管培
养基中，每个稀释梯度试液接种3或5支。经过培养后，根据
结果查阅MPN检索表，就可以得到原样品中微生物的估计数
量。MPN检测方法尤其适用于带菌量、其他方法不能检测的
食品，如水、乳制品及其其他食品中大肠菌群的计数。
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7
材料
• 3.1食品样品：乳、肉、果汁、糕点、发酵调味品及其他食品。 • 3.2 菌种 阳性对照菌
❖ 三步法：（1）发酵乳糖，产气产酸发酵试验；（2）初发酵 阳性管通过伊红美兰平板进行分离；（3）复发酵对分离菌 做证实实验。
❖ 食品中大肠菌群数系以每100g（或100ml）检样内大肠菌群
最近数(the most probable number 简称MPN)表示。最近数
MPN法是一种将样品“多次（管）稀释至无菌”的计数方法。
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3
食品中查出大肠菌群超标
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4
检验方法
由于大肠菌群指的是具有某些特性的一组与粪便污染有关的细菌，即需氧及兼性 厌氧、在37℃能分解乳糖产酸产气的革兰氏阴性无芽孢杆菌。因此大肠菌群的检 测一般都是按照它的定义进行。
中国采用的进出口食品大肠菌群检测方法主要有国家标准和原国家商检局制 定的行业标准。两个标准方法在检测程序上略有不同。
大肠菌群测定
小组成员：蔡川川 金思利 杜梦娇 叶岳成 郑文龙
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1
讨论的问题
依据GB4789．3-2010，讨论若进行 食品中大肠菌群的测定，需准备好哪 些材料，且如何进行测定？
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2
大肠菌群的概述
大肠菌群指的是具有某些特性的一组与粪便污染有关的细
菌，这些细菌在生化及血清学方面并非完全一致，一般认为该 菌群细菌可包括大肠杆菌、产气克雷白氏菌和阴沟肠杆菌等。
国家标准 国家标准采用三步法，即乳糖发酵试验、分离培养和证实试验。 乳糖发酵试验：样品稀释后，选择三个稀释度，每个稀释度接种三管乳糖胆 盐发酵管。36±1℃培养48±2h，观察是否产气。 分离培养：将产气发酵管培养物转种于伊红美蓝琼脂平板上，36±1℃培养 18-24h，观察菌落形态。 证实试验：挑取平板上的可疑菌落，进行革兰氏染色观察。同时接种乳糖发 酵管36±1℃培养24±2h，观察产气情况。 报告：根据证实为大肠杆菌阳性的管数，查MPN最大可能数表，报告每 100mL（g）大肠菌群的MPN值。具体操作参见GB4789.3—94 《中华人民共和 国国家标准 食品卫生微生物学检验 大肠菌群测定》
– 大肠杆菌 3.3除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：
– 恒温培养箱、恒温水浴箱、 均质器、振荡器、无菌吸管或微量移液
器及吸头、无菌锥形瓶、无菌培养皿、菌落计数器等。
– 3.4培养基和试剂：月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST ）肉汤、 煌绿乳
糖胆盐（BGLB ）肉汤、结晶紫中性红胆盐琼脂（VRBA ) 、无菌生
理盐水或磷酸盐缓冲液、1mol/L氢氧化钠（NaOH ) 、 1mol/L 盐酸
（HCI ) 。
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8
第一法大肠菌群MPN 计数
操作步骤 6.1、样品的稀释 6.1.1、 固体和半固体样品：称取25g 样品，放人盛有225ml磷酸盐缓冲液或生理盐水 的无菌均质杯内，8 00or/min-10 000r/min 均质1 min-2 min ，或放人盛有225ml磷酸 盐缓冲液或生理盐水的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1 min-2 min ，制成1:10 的 样品匀液。 6.1.2、 液体样品：以无菌吸管吸取25ml样品，置盛有225ml磷酸盐缓冲液或生理盐水 的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分棍匀，制成1:10 的样品匀 液。 6.1.3、 样品匀液的pH 值应在6.5-7.5 之间，必要时分别用1mol/L 氢氧化钠（NaOH ） 或1 mol/L 盐酸（HCI ）调节。 6.1.4、 用1ml无菌吸管或微量移液器吸取1:10 样品匀液1ml，沿管壁缓缓注人9ml磷酸 盐缓冲液或生理盐水的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试 管或换用1 支1ml无菌吸管反复吹打，使其混合均匀，制成1:100 的样品匀液。
大肠菌群是作为粪便污染指标菌提出来的，主要是以该菌 群的检出情况来表示食品中有否粪便污染。
大肠菌群数的高低，表明了粪便污染的程度，也反映了对 人体健康危害性的大小。粪便是人类肠道排泄物，其中有健康 人粪便，也有肠道患者或带菌者的粪便，所以粪便内除一般正 常细菌外，同时也会有一些肠道致病菌存在（如沙门氏菌、志 贺氏菌等），因而食品中有粪便污染，则可以推测该食品中存 在着肠道致病菌污染的可能性，潜伏着食物中毒和流行病的威 胁，必须看作对人体健康具有潜在的危险性。
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5
原国家商检局制定的行业标准
原国家商检局制定的行业标准采用美国FDA的标准方法，用于对出口食 品中的大肠杆菌进行检测。
推测试验：样品稀释后，选择三个稀释度，每个稀释度接种三管LST肉 汤。36±1℃培养48±2h，观察是否产气。
证实试验：将产气管培养物接种煌绿乳糖胆盐（BGLB）肉汤管中， 36±1℃培养48±2h，观察是否产气。以BGLB产气为阳性。查MPN表，报 告1mL(g)样品中大肠菌群的MPN值。
.
9
6.1.5、 根据对样品污染状况的估计，按上述操作，依次制成10 倍递增系列稀 释样品匀液。每递增稀释1 次，换用1 支1ml无菌吸管或吸头。从制备样品匀液 至样品接种完毕，全过程不得超过15 min 。 6.2、 初发酵试验 每个样品，选择3 个适宜的连续稀释度的样品匀液（液体样品可以选择原液）， 每个稀释度接种3 管月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤，每管接种1ml（如接 种量超过1ml，则用双料LST肉汤）, 36℃±1℃ 培养24h±Zh ，观察倒管内是 否有气泡产生，如未产气则继续培养至48h±2h 。记录在24h 和48h 内产气的 LST 肉汤管数。未产气者为大肠菌群阴性，产气者则进行复发酵试验。 6.3、 复发酵试验 用接种环从所有48h±2h 内发酵产气的LST 肉汤管中分别取培养物l环，移种 于煌绿乳糖胆盐( BGLB）肉汤管中，36℃±1℃ 培养48h±2h ，观察产气情 况。产气者，计为大肠菌群阳性管。 6.4、 大肠菌群最可能数（MPN ）的报告 根据大肠菌群阳性管数，检索MPN 表（见附录B ) ，报告每克（或毫升）样品 中大肠菌群的MPN 值。
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大肠菌群的测定的原理
❖ 大肠菌群之一群能在37℃经24h能发酵乳糖，产生气体，需 氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。该菌主要来源于人 畜粪便，故以此作为粪便污染指标来评价食品的卫生质量， 具有广泛的卫生学意义。它反映了食品是否被粪便污染，同 时间结指出食品是否有肠道致病菌污染的可能。
将3个稀释梯度的待检验样品稀释液接种于9支或15支试管培
养基中，每个稀释梯度试液接种3或5支。经过培养后，根据
结果查阅MPN检索表，就可以得到原样品中微生物的估计数
量。MPN检测方法尤其适用于带菌量、其他方法不能检测的
食品，如水、乳制品及其其他食品中大肠菌群的计数。
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材料
• 3.1食品样品：乳、肉、果汁、糕点、发酵调味品及其他食品。 • 3.2 菌种 阳性对照菌
❖ 三步法：（1）发酵乳糖，产气产酸发酵试验；（2）初发酵 阳性管通过伊红美兰平板进行分离；（3）复发酵对分离菌 做证实实验。
❖ 食品中大肠菌群数系以每100g（或100ml）检样内大肠菌群
最近数(the most probable number 简称MPN)表示。最近数
MPN法是一种将样品“多次（管）稀释至无菌”的计数方法。
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食品中查出大肠菌群超标
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检验方法
由于大肠菌群指的是具有某些特性的一组与粪便污染有关的细菌，即需氧及兼性 厌氧、在37℃能分解乳糖产酸产气的革兰氏阴性无芽孢杆菌。因此大肠菌群的检 测一般都是按照它的定义进行。
中国采用的进出口食品大肠菌群检测方法主要有国家标准和原国家商检局制 定的行业标准。两个标准方法在检测程序上略有不同。
大肠菌群测定
小组成员：蔡川川 金思利 杜梦娇 叶岳成 郑文龙
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1
讨论的问题
依据GB4789．3-2010，讨论若进行 食品中大肠菌群的测定，需准备好哪 些材料，且如何进行测定？
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2
大肠菌群的概述
大肠菌群指的是具有某些特性的一组与粪便污染有关的细
菌，这些细菌在生化及血清学方面并非完全一致，一般认为该 菌群细菌可包括大肠杆菌、产气克雷白氏菌和阴沟肠杆菌等。
国家标准 国家标准采用三步法，即乳糖发酵试验、分离培养和证实试验。 乳糖发酵试验：样品稀释后，选择三个稀释度，每个稀释度接种三管乳糖胆 盐发酵管。36±1℃培养48±2h，观察是否产气。 分离培养：将产气发酵管培养物转种于伊红美蓝琼脂平板上，36±1℃培养 18-24h，观察菌落形态。 证实试验：挑取平板上的可疑菌落，进行革兰氏染色观察。同时接种乳糖发 酵管36±1℃培养24±2h，观察产气情况。 报告：根据证实为大肠杆菌阳性的管数，查MPN最大可能数表，报告每 100mL（g）大肠菌群的MPN值。具体操作参见GB4789.3—94 《中华人民共和 国国家标准 食品卫生微生物学检验 大肠菌群测定》
– 大肠杆菌 3.3除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：
– 恒温培养箱、恒温水浴箱、 均质器、振荡器、无菌吸管或微量移液
器及吸头、无菌锥形瓶、无菌培养皿、菌落计数器等。
– 3.4培养基和试剂：月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST ）肉汤、 煌绿乳
糖胆盐（BGLB ）肉汤、结晶紫中性红胆盐琼脂（VRBA ) 、无菌生
理盐水或磷酸盐缓冲液、1mol/L氢氧化钠（NaOH ) 、 1mol/L 盐酸
（HCI ) 。
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第一法大肠菌群MPN 计数
操作步骤 6.1、样品的稀释 6.1.1、 固体和半固体样品：称取25g 样品，放人盛有225ml磷酸盐缓冲液或生理盐水 的无菌均质杯内，8 00or/min-10 000r/min 均质1 min-2 min ，或放人盛有225ml磷酸 盐缓冲液或生理盐水的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1 min-2 min ，制成1:10 的 样品匀液。 6.1.2、 液体样品：以无菌吸管吸取25ml样品，置盛有225ml磷酸盐缓冲液或生理盐水 的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分棍匀，制成1:10 的样品匀 液。 6.1.3、 样品匀液的pH 值应在6.5-7.5 之间，必要时分别用1mol/L 氢氧化钠（NaOH ） 或1 mol/L 盐酸（HCI ）调节。 6.1.4、 用1ml无菌吸管或微量移液器吸取1:10 样品匀液1ml，沿管壁缓缓注人9ml磷酸 盐缓冲液或生理盐水的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试 管或换用1 支1ml无菌吸管反复吹打，使其混合均匀，制成1:100 的样品匀液。
大肠菌群是作为粪便污染指标菌提出来的，主要是以该菌 群的检出情况来表示食品中有否粪便污染。
大肠菌群数的高低，表明了粪便污染的程度，也反映了对 人体健康危害性的大小。粪便是人类肠道排泄物，其中有健康 人粪便，也有肠道患者或带菌者的粪便，所以粪便内除一般正 常细菌外，同时也会有一些肠道致病菌存在（如沙门氏菌、志 贺氏菌等），因而食品中有粪便污染，则可以推测该食品中存 在着肠道致病菌污染的可能性，潜伏着食物中毒和流行病的威 胁，必须看作对人体健康具有潜在的危险性。
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原国家商检局制定的行业标准
原国家商检局制定的行业标准采用美国FDA的标准方法，用于对出口食 品中的大肠杆菌进行检测。
推测试验：样品稀释后，选择三个稀释度，每个稀释度接种三管LST肉 汤。36±1℃培养48±2h，观察是否产气。
证实试验：将产气管培养物接种煌绿乳糖胆盐（BGLB）肉汤管中， 36±1℃培养48±2h，观察是否产气。以BGLB产气为阳性。查MPN表，报 告1mL(g)样品中大肠菌群的MPN值。
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6.1.5、 根据对样品污染状况的估计，按上述操作，依次制成10 倍递增系列稀 释样品匀液。每递增稀释1 次，换用1 支1ml无菌吸管或吸头。从制备样品匀液 至样品接种完毕，全过程不得超过15 min 。 6.2、 初发酵试验 每个样品，选择3 个适宜的连续稀释度的样品匀液（液体样品可以选择原液）， 每个稀释度接种3 管月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤，每管接种1ml（如接 种量超过1ml，则用双料LST肉汤）, 36℃±1℃ 培养24h±Zh ，观察倒管内是 否有气泡产生，如未产气则继续培养至48h±2h 。记录在24h 和48h 内产气的 LST 肉汤管数。未产气者为大肠菌群阴性，产气者则进行复发酵试验。 6.3、 复发酵试验 用接种环从所有48h±2h 内发酵产气的LST 肉汤管中分别取培养物l环，移种 于煌绿乳糖胆盐( BGLB）肉汤管中，36℃±1℃ 培养48h±2h ，观察产气情 况。产气者，计为大肠菌群阳性管。 6.4、 大肠菌群最可能数（MPN ）的报告 根据大肠菌群阳性管数，检索MPN 表（见附录B ) ，报告每克（或毫升）样品 中大肠菌群的MPN 值。
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大肠菌群检验技术ppt课件
大肠菌群分布较广，在温血动物粪便和自然界广泛存在。调查研 讨阐明，大肠菌群细菌多存在于温血动物粪便、人类经常活动的 场所以及有粪便污染的地方，人、畜粪便对外界环境的污染是大 肠菌群在自然界存在的主要缘由。粪便中多以典型大肠杆菌为主， 而外界环境中那么以大肠菌群其他型别较多。
大肠菌群是作为粪便污染目的菌提出来的，主要是以该菌群 的检出情况来表示食品中有否粪便污染。大肠菌群数的高低，阐 明了粪便污染的程度，也反映了对人体安康危害性的大小。粪便 是人类肠道排泄物，其中有安康人粪便，也有肠道患者或带菌者 的粪便，所以粪便内除普通正常细菌外，同时也会有一些肠道致 病菌存在〔如沙门氏菌、志贺氏菌等〕，因此食品中有粪便污染， 那么可以推测该食品中存在着肠道致病菌污染的能够性，埋伏着 食物中毒和流行病的要挟，必需看作对人体安康具有潜在的危险 性。
1．MPN检索表 2．初发酵和证明实验 பைடு நூலகம்．产气量与倒管 4．挑选菌落 5．抑菌剂
1．MPN检索表： MPN 为最大能够数(Most
Probable Number)的简称。这 种方法，对样品进展延续系列进
展稀释，参与培育基进展培育， 从 M释P度N规，检那定索么表的表只内给反数了响字三应个呈相稀应阳释降度性低，或管如添改数加用1不的0倍同出。的留稀现 率 意国，家规用范概和行率业论规范来中所推附算MP样N表品所用中稀菌释度数 最 是不近同的似，的而且数结值果报。告单位也不一样。
可以看到在发酵倒管内极微少的气 泡〔有时比小米粒还小〕，有时可 以遇到在初发酵时产酸或沿管壁有 渐渐上浮的小气泡。实验阐明，大 肠菌群的产气量，多者可以使发酵 倒管全部充溢气体，少者可以产生 比小米粒还小的气泡。假设对产酸
4．挑选菌落： 国家规范中，需求对初发酵阳性培
大肠菌群是作为粪便污染目的菌提出来的，主要是以该菌群 的检出情况来表示食品中有否粪便污染。大肠菌群数的高低，阐 明了粪便污染的程度，也反映了对人体安康危害性的大小。粪便 是人类肠道排泄物，其中有安康人粪便，也有肠道患者或带菌者 的粪便，所以粪便内除普通正常细菌外，同时也会有一些肠道致 病菌存在〔如沙门氏菌、志贺氏菌等〕，因此食品中有粪便污染， 那么可以推测该食品中存在着肠道致病菌污染的能够性，埋伏着 食物中毒和流行病的要挟，必需看作对人体安康具有潜在的危险 性。
1．MPN检索表 2．初发酵和证明实验 பைடு நூலகம்．产气量与倒管 4．挑选菌落 5．抑菌剂
1．MPN检索表： MPN 为最大能够数(Most
Probable Number)的简称。这 种方法，对样品进展延续系列进
展稀释，参与培育基进展培育， 从 M释P度N规，检那定索么表的表只内给反数了响字三应个呈相稀应阳释降度性低，或管如添改数加用1不的0倍同出。的留稀现 率 意国，家规用范概和行率业论规范来中所推附算MP样N表品所用中稀菌释度数 最 是不近同的似，的而且数结值果报。告单位也不一样。
可以看到在发酵倒管内极微少的气 泡〔有时比小米粒还小〕，有时可 以遇到在初发酵时产酸或沿管壁有 渐渐上浮的小气泡。实验阐明，大 肠菌群的产气量，多者可以使发酵 倒管全部充溢气体，少者可以产生 比小米粒还小的气泡。假设对产酸
4．挑选菌落： 国家规范中，需求对初发酵阳性培
食品中大肠菌群检测PPT课件
食品卫生监督中的应用
餐饮业卫生监督
在餐饮业卫生监督中，大肠菌群 检测是重要的检测指标之一，用 于评估餐饮企业的卫生状况和食
品安全水平。
超市食品安全检测
超市食品安全检测中，大肠菌群 检测是必检项目之一，用于检测 食品是否符合国家食品安全标准。
食品进出口检验
在食品进出口检验中，大肠菌群 检测是重要的检测指标之一，用 于评估食品的卫生状况和安全性，
自动化检测技术
利用机器人和自动化设备进行样品处理和数据分析，提高检测效 率。
快速检测技术
开发新型培养基和试剂，缩短检测时间，提高检测速度。
基因检测技术
利用基因测序和生物信息学技术，提高检测准确性和特异性。
提高检测效率和准确性的方法
标准化操作流程
01
制定统一的大肠菌群检测标准，规范操作流程，减少误差。
05
大肠菌群检测的挑战和未来发展
当前面临的挑战
检测方法不统一
目前大肠菌群检测方法多样，缺乏统一的标准， 导致检测结果存在差异。
检测效率低下
传统检测方法过程繁琐，耗时长，无法满足快速、 大批量检测的需求。
检测准确性不高
由于操作复杂和干扰因素多，传统检测方法容易 出现假阳性或假阴性结果。
技术发展与未来趋势
检测步骤
采集样品、增菌培养、分 离培养、生化鉴定和计数。
培养法检测
传统培养法
将样品接种在选择性培养 基上，通过培养后观察菌 落形态、染色和生化反应 等特征进行鉴定。
自动化培养法
利用自动化仪器进行样品 接种、培养和检测，提高 检测效率和准确性。
培养法优缺点
培养法准确度高，但检测 周期较长，需要专业人员 操作。
确保食品的安全进出口。
样品中大肠菌群的测定完美版PPT
3.分离培养
将产气的发酵管分别转种在伊红美蓝琼脂平板上，置 36℃±1℃温箱内，培养18h~24h，然后取出，观察菌落形 态并做革兰氏染色和证实试验。
4.证实试验
在上述平板上，挑取可疑大肠菌群菌落1个~2个进行革 兰氏染色，同时接种乳糖发酵管，置36℃±1℃的温箱内培 养24h±2h，观察产气情况。
40
1200
70 3
0
1
390
70
1300
13
0
2
640
150
3800
13
0
3
950
在上述平板上，挑取可疑大肠菌群菌落1个~2个进行革兰氏染色，同时接种乳糖发酵管，置36℃±1℃的温箱内培养24h±2h，观察产气
情况3。
1
0
430
70
2100
13
1
1
750
140
2300
3
1
2
1200
300
3800
3
实验十五 样品中大肠菌群的测定
大肠菌群：一群能发酵乳糖、产酸产气、 需氧盒兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。该 菌主要来源于人畜粪便，故以此作为粪便污染 指标来评价食品的卫生质量，推断食品中有否 染肠道致病菌的可能。
样品中大肠菌群系以100mL（g）检样内 大肠菌群最可能数（MPN)表示。
设备和材料： 恒温培养箱（36℃±1℃ ）、恒温水浴锅（46℃±1℃ ） 、
③另取1ml灭菌吸管，按上述操作依次作10倍递增稀释液。 ④根据食品卫生要求或对检验样品污染情况估计，选择三个稀 释度，每个稀释度，接种3管。
2. 乳糖发酵试验
将待检样品接种于乳糖胆盐发酵管内，接种量在1mL以 上者，用双料乳糖胆盐发酵管；1mL及1mL以下者，用单料 乳糖发酵管。每一个稀释度接种3管，置36℃±1℃温箱内， 培养24h±2h，如所有乳糖胆盐发酵管都不产气，则可报告为 大肠菌群阴性，如有产生者，则按下列程续进行。
大肠菌群检验方法课件
平板计数
证实实验
分离培养
证实试验
↓ 报告
两步法
MPN计数法
1.推测试验：样品稀释后，选择三个稀释度，每个 稀释度接种三管LST肉汤。36±1℃ 培养48±2h，观察是否产气。 2.证实试验：将产气管培养物接种煌绿乳糖胆盐 （BGLB）肉汤管中，36±1℃培养 48±2h，观察是否产气。以BGLB产 气为阳性。查MPN表，报告每ml(g) 样品中大肠菌群的MPN值。
大肠菌群检验方法
介绍
由于大肠菌群指的是具有某些特性的一组 与粪便污染有关的细菌，即：需氧及兼性 厌氧、在37℃能分解乳糖产酸产气的革兰 氏阴性无芽胞杆菌。 因此大肠菌群的检测一般都是按照它的 定义进行。有两步法、三步法
大肠菌群
两部法 三步法
↓
MPN计数法
↓
平板计数法
↓
↓
乳糖发酵试验
↓
↓
推测试验
证实实验
三步法
乳糖发酵试验、分离培养和证实试验
三步法：
1.乳糖发酵试验：样品稀释后，选择三个稀释度，每个释 度接种三管乳糖蛋白胨发酵管。36±1℃ 培 养 48±2h，观察是否产气。 2.分离培养：将产气发酵管培养物转种于伊红美蓝琼脂平 板上，36±1℃培养18-24h，观察菌落形态。
3.证实试验：挑取平板上的可疑菌落，进行革兰氏染色观 察，同时接种普通乳糖发酵管36±1℃， 24±2h，观察产气情况。
主题一
示例一，引出主题 解释细节 进行练习以巩固所学内容
主题二
示例二，引出主题 解释细节 进行练习以巩固所学内容
总结
回顾所学内容 总结学习方法 与学员的互动交流，获取反馈信息
其它信息
参考书籍、电子文档等 咨询服务联系方式 ……
大肠菌群检验PPT课件
四、应用茜素-β-D-半乳糖苷快速检验食品中的大肠菌群
1、检测步骤 0.1g×2 样品 0.01g × 2 0.001g × 2
Aliz-gal琼脂37 ℃ 24hr
计数紫色和红色菌落，乘以稀释倍数报告
大肠菌群β-D-半乳糖苷酶 茜素-β-D-半乳糖苷 茜素—Fe.NH4.Al.K（紫色和红色）
调调ph74ph741322试验情况简介试验情况简介alizalizgalgal检测食品中大肠菌群可在检测食品中大肠菌群可在18182424hh内显示出半内显示出半乳糖苷酶反应乳糖苷酶反应在同类性质的酶底物中在同类性质的酶底物中alizalizgalgal的的用量较低用量较低做倾注培养时在琼脂深层菌落特征较明做倾注培养时在琼脂深层菌落特征较明由于采用测定由于采用测定半乳糖苷半乳糖苷酶的方法易于检出迟缓发酶的方法易于检出迟缓发酵乳糖的大肠菌群和厌氧大肠杆菌酵乳糖的大肠菌群和厌氧大肠杆菌
样品
0.1g×2
0.01g × 2
0.001g × 2
结晶紫中性红胆盐琼脂（VRBA）37 ℃ 24hr
计数紫红色菌落，乘以稀释倍数报告
3、ISO关于大肠菌群的定义（ISO9308-1：2000）
（ISO：INTERNATIONAL STARDIZATION ORGANIZATION国际标准化组织）
茜素-β-D-半乳糖苷琼脂 （Alig-gal琼脂）： Aliz-gal 50mg 蛋白胨20g 无水磷酸氢二钾2.75g 无水磷酸二氢钾2.75g 氯化钠5g 月桂基硫酸钠0.1g 异丙基硫代半乳糖苷0.03g 硫酸铝钾0.5g 柠檬酸铁铵0.5g 琼脂15g 蒸馏水1000mL。 调Ph7.4
（1）最近拟数法（MPN）（GB4789.2-1994）
《大肠菌群测定》PPT课件
GB4789.3-2010 大肠菌群测定
GB4789.3-2010 大肠菌群测 定
• 定义：大肠菌群：一群在36℃培养48h可发酵 乳糖、产酸产气的需氧和 兼性厌氧革兰氏染色阴性 无芽孢杆菌。该菌主要来 源自人畜粪便，作为粪便 污染指标评价食品的卫生 状况，推断 食品中肠道致 病菌污染的可能。
2
大肠菌群的食品卫生学意义
标准MPN表有64个组合，而现标准MPN表只有40个 组合。 3 报告单位不同。现报告单位为g/ml，而原报告单 位是100g/ml。
10
关于新国标大肠菌群MPN表的理解问题
新国标的MPN表的基准问题。
1、新国标的MPN表采用了3个稀释度，分别是十 倍－百倍－千倍，加样量是3管，每管1毫升，意 味着加入样品的量为0.333克。
大肠菌群并非细菌学分类命名，而是卫生细菌领域的用语， 它不代表某一个或某一属细菌，而指的是具有某些特性的 一组与粪便污染有关的细菌，这些细菌在生化及血清学方 面并非完全一致。一般认为可包括大肠埃希氏菌、柠檬酸
杆菌、产气克雷白氏菌和阴沟肠杆菌等。
大肠杆菌是人和温血动物肠道 内普遍存在的细菌，是粪便中 的主要菌种产。气一克般雷生白活氏在菌人大 肠中并不致病，但它侵入人体 一些部位时，可引起感染 。
4
第一法 大肠菌群MPN计数法
• 初发酵：月桂基硫酸盐蛋白胨肉汤（LST）替代 了乳糖胆盐发酵培基
• 确证实验：煌绿乳糖胆盐肉汤 （BGLB）替代了乳糖复发酵培 养基，取消了革兰氏染色实验
• 培养时间：由24h延长至48h • 单位：由MPN/100g变为
MPN/g
5
第一法 大肠菌群MPN计数法
12
关于新国标大肠菌群MPN表的理解问题
改变加样量的问题。 这样查表得到的数值，应该降低10倍。
GB4789.3-2010 大肠菌群测 定
• 定义：大肠菌群：一群在36℃培养48h可发酵 乳糖、产酸产气的需氧和 兼性厌氧革兰氏染色阴性 无芽孢杆菌。该菌主要来 源自人畜粪便，作为粪便 污染指标评价食品的卫生 状况，推断 食品中肠道致 病菌污染的可能。
2
大肠菌群的食品卫生学意义
标准MPN表有64个组合，而现标准MPN表只有40个 组合。 3 报告单位不同。现报告单位为g/ml，而原报告单 位是100g/ml。
10
关于新国标大肠菌群MPN表的理解问题
新国标的MPN表的基准问题。
1、新国标的MPN表采用了3个稀释度，分别是十 倍－百倍－千倍，加样量是3管，每管1毫升，意 味着加入样品的量为0.333克。
大肠菌群并非细菌学分类命名，而是卫生细菌领域的用语， 它不代表某一个或某一属细菌，而指的是具有某些特性的 一组与粪便污染有关的细菌，这些细菌在生化及血清学方 面并非完全一致。一般认为可包括大肠埃希氏菌、柠檬酸
杆菌、产气克雷白氏菌和阴沟肠杆菌等。
大肠杆菌是人和温血动物肠道 内普遍存在的细菌，是粪便中 的主要菌种产。气一克般雷生白活氏在菌人大 肠中并不致病，但它侵入人体 一些部位时，可引起感染 。
4
第一法 大肠菌群MPN计数法
• 初发酵：月桂基硫酸盐蛋白胨肉汤（LST）替代 了乳糖胆盐发酵培基
• 确证实验：煌绿乳糖胆盐肉汤 （BGLB）替代了乳糖复发酵培 养基，取消了革兰氏染色实验
• 培养时间：由24h延长至48h • 单位：由MPN/100g变为
MPN/g
5
第一法 大肠菌群MPN计数法
12
关于新国标大肠菌群MPN表的理解问题
改变加样量的问题。 这样查表得到的数值，应该降低10倍。
微生物大肠菌群检测ppt
平板分离：将产酸产气及只产酸的发酵管，接种于伊红美蓝 （紫黑色有金属光泽）或远滕氏（淡粉红色）、麦康凯 （玫瑰红色）琼脂平板上，35-37度培养24小时。
证实试验：将革兰氏染色阴性无芽孢杆菌菌落接种于单料乳 糖发酵管中， 35-37度培养24小时，产酸产气，即证实 有大肠菌群存在。
水源水 严重污染水：1，0.1,0.01,0.001mL 中度污染水：10，1，0.1,0.01mL 轻度污染水：100，10，1，0.1mL 大肠菌群变异不大的水源水：10mL10份 接种量1mL及1mL以内用单料乳糖胆盐 发酵管，接种量在1mL以上者，应保证接 种后发酵管中的总液体为单料培养液。
3.注意事项
乳糖发酵试验—分离培养—证实试验三步中，初发酵与证 实试验可能相差较大。
抑菌剂如胆盐等对大肠菌群中的某些菌株会有抑制作用。 猪、牛、羊的胆盐效果较好，去氧胆酸钠对结果影响较大， 胆盐剂量以0.5%较适宜。
挑选菌落时，EMB平板上，紫色菌落检出率较高，红色、 粉色较低；无典型菌落时，宜多挑选。
第二节 测定方法
1、测定程序
检样 稀释 乳糖胆盐发酵管
胆盐、或去氧胆酸钠
不产气 阴性 报告
革兰氏染色
产气 EMB、远腾氏等
乳糖发酵管
革兰氏阳性 革兰氏阴性无芽孢
阴性 报告
阳性 报告
产气
不产气 阴性 报告
2.多管发酵法测定方法
发酵试验：在2个装有50mL的3倍浓缩（三料）乳糖胆盐蛋 白胨培养液（含溴钾酚紫指示剂）的大试管或烧瓶中，无 菌操作加水样100mL.在10支装有5mL的三料乳糖胆盐发 酵管中（内有倒置小管），以无菌操作各加水样10mL,摇 匀后，37度培养24小时。
其它粪便污染指示菌 分支杆菌、拟杆菌、乳酸菌、梭状芽孢杆菌、粪链球菌 克雷伯菌、变形杆菌、副大肠杆菌
证实试验：将革兰氏染色阴性无芽孢杆菌菌落接种于单料乳 糖发酵管中， 35-37度培养24小时，产酸产气，即证实 有大肠菌群存在。
水源水 严重污染水：1，0.1,0.01,0.001mL 中度污染水：10，1，0.1,0.01mL 轻度污染水：100，10，1，0.1mL 大肠菌群变异不大的水源水：10mL10份 接种量1mL及1mL以内用单料乳糖胆盐 发酵管，接种量在1mL以上者，应保证接 种后发酵管中的总液体为单料培养液。
3.注意事项
乳糖发酵试验—分离培养—证实试验三步中，初发酵与证 实试验可能相差较大。
抑菌剂如胆盐等对大肠菌群中的某些菌株会有抑制作用。 猪、牛、羊的胆盐效果较好，去氧胆酸钠对结果影响较大， 胆盐剂量以0.5%较适宜。
挑选菌落时，EMB平板上，紫色菌落检出率较高，红色、 粉色较低；无典型菌落时，宜多挑选。
第二节 测定方法
1、测定程序
检样 稀释 乳糖胆盐发酵管
胆盐、或去氧胆酸钠
不产气 阴性 报告
革兰氏染色
产气 EMB、远腾氏等
乳糖发酵管
革兰氏阳性 革兰氏阴性无芽孢
阴性 报告
阳性 报告
产气
不产气 阴性 报告
2.多管发酵法测定方法
发酵试验：在2个装有50mL的3倍浓缩（三料）乳糖胆盐蛋 白胨培养液（含溴钾酚紫指示剂）的大试管或烧瓶中，无 菌操作加水样100mL.在10支装有5mL的三料乳糖胆盐发 酵管中（内有倒置小管），以无菌操作各加水样10mL,摇 匀后，37度培养24小时。
其它粪便污染指示菌 分支杆菌、拟杆菌、乳酸菌、梭状芽孢杆菌、粪链球菌 克雷伯菌、变形杆菌、副大肠杆菌
实验九水中总大肠菌群的测定ppt课件
采用PP管及配件：根据给水设计图配 置好PP管及配 件，用 管件在 管材垂 直角切 断管材 ，边剪 边旋转 ，以保 证切口 面的圆 度，保 持熔接 部位干 净无污 物
◆包扎
1．培养皿：以旧报纸密密包紧，一般以6套做一包，待灭菌。 2．吸管：在距其粗头顶端约0.5cm处，塞一小段1.5cm长的棉花。棉 花要塞得松紧恰当（过紧，吹吸液体太费劲；过松，吹气时棉花会 下滑），然后分别将每支吸管尖端斜放在旧报纸条的的近左端，与 报纸约呈60º角，并将右端多余的报纸打一小结。 3．三角玻扒：跟包扎吸管相似，将三角部分斜放在报纸条的近左端， 与报纸约呈45º角，并将右端多余的报纸打一小结。 4. 玻璃器皿、金属器械包扎完毕后置干燥箱160－170℃灭菌2 h.
采用PP管及配件：根据给水设计图配 置好PP管及配 件，用 管件在 管材垂 直角切 断管材 ，边剪 边旋转 ，以保 证切口 面的圆 度，保 持熔接 部位干 净无污 物
◆灭菌
1.灭菌器内加入一定量的水，将用防水纸包扎好的物品放入其中。
2.接通电源，进行加热。
3. 排
除高压锅内的冷空气，可将排气阀打开，待排出大气后关闭排气阀；或关闭
平板划线分离操作法示意图
采用PP管及配件：根据给水设计图配 置好PP管及配 件，用 管件在 管材垂 直角切 断管材 ，边剪 边旋转 ，以保 证切口 面的圆 度，保 持熔接 部位干 净无污 物
5 复发酵试验 上述涂片镜检的菌落如为革兰氏阴性无芽孢的杆菌，则挑选该菌落的另
一部分接种于装有普通浓度乳糖蛋白胨培养液的试管中（内有倒置管），每 管可接种分离自同一初发酵管的最典型菌落1～3个，然后置于37℃恒温箱中 培养24h，有产酸、产气者，即证实有大肠菌群存在。根据证实有大肠菌群 存在的阳性管（瓶）数查附表1“大肠菌群检数表”，报告每升水样中的大肠 菌群数。
菌落总数和大肠菌群数测定PPT讲稿
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液体接种
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复发酵
• 复发酵阳性结果，培养基变成黄色，小倒管内有气体产
生
当前你正在浏览到的事第三十七页PPTT，共四十二页。
大肠菌群数测定
• 注意事项：
1.无菌操作 2.吸管使用 3.洗去染液的方法 4.显微镜保养 5.液体接种
灭菌接种环
分区划线法
• 操作要点
1.划下一个区前必须灭菌接种环 2.划线时接种环同平板呈30-40°角 3.每次划线应该压到上一个区域的2-3条线 4.用接种环的“面”而不是“弧”在平板上
滑动
当前你正在浏览到的事第二十三页PPTT，共四十二页。
大肠菌群数测定
• 实验步骤
2.分离培养：
（5）菌落特征：
• 实验步骤
3.复发酵
（1）选取产气试管
（2）接种至10mlBGLB肉汤中 （3）培养：36℃，48h （4）观察指标：若产气则报告大肠菌群阳 性。
当前你正在浏览到的事第十九页PPTT，共四十二页。
大肠菌群数测定
• 实验步骤
2.分离培养 （1）制备伊红美蓝平板： 45 ℃，无菌，倾注，15ml （2）选产酸产气的发酵管 （3）接种至伊红美蓝平板
当前你正在浏览到的事第十一页PPTT，共四十二页。
初发酵
• 器材与试剂
样品、225ml无菌生理盐水、9ml无菌生理盐水、双料LST肉汤，单料 LST肉汤，10ml吸管、1ml吸管、吸球
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大肠菌群数测定
• 实验步骤：
1.初发酵
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液体接种
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复发酵
• 复发酵阳性结果，培养基变成黄色，小倒管内有气体产
生
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大肠菌群数测定
• 注意事项：
1.无菌操作 2.吸管使用 3.洗去染液的方法 4.显微镜保养 5.液体接种
灭菌接种环
分区划线法
• 操作要点
1.划下一个区前必须灭菌接种环 2.划线时接种环同平板呈30-40°角 3.每次划线应该压到上一个区域的2-3条线 4.用接种环的“面”而不是“弧”在平板上
滑动
当前你正在浏览到的事第二十三页PPTT，共四十二页。
大肠菌群数测定
• 实验步骤
2.分离培养：
（5）菌落特征：
• 实验步骤
3.复发酵
（1）选取产气试管
（2）接种至10mlBGLB肉汤中 （3）培养：36℃，48h （4）观察指标：若产气则报告大肠菌群阳 性。
当前你正在浏览到的事第十九页PPTT，共四十二页。
大肠菌群数测定
• 实验步骤
2.分离培养 （1）制备伊红美蓝平板： 45 ℃，无菌，倾注，15ml （2）选产酸产气的发酵管 （3）接种至伊红美蓝平板
当前你正在浏览到的事第十一页PPTT，共四十二页。
初发酵
• 器材与试剂
样品、225ml无菌生理盐水、9ml无菌生理盐水、双料LST肉汤，单料 LST肉汤，10ml吸管、1ml吸管、吸球
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大肠菌群数测定
• 实验步骤：
1.初发酵
当前你正在浏览到的事第十三页PPTT，共四十二页。
2.大肠菌群.ppt
? 4.2 煌绿乳糖胆盐（Brilliant Green Lactose Bile，BGLB） 肉汤：见附录A 中A.2。
? 4.3 结晶紫中性红胆盐琼脂（Violet Red Bile Agar， VRBA）：见附录A 中A.3。
? 4.4 磷酸盐缓冲液：见附录A 中A.4。 ? 4.5 无菌生理盐水：见附录A 中A.5。 ? 4.6 无菌1 mol/L NaOH：见附录A 中A.6。 ? 4.7 无菌1 mol/L HCl：见附录A 中A.7。
食品安全国家标准 食品微生物学检验 大肠菌群计数
? 1 范围 ? 本标准规定了食品中大肠菌群（Coliforms）计数的方法。 ? 本标准适用于食品中大肠菌群的计数。 ? 2 术语和定义 ? 2.1 大肠菌群coliforms ? 在一定培养条件下能发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌
氧革兰氏阴性无芽胞杆菌。 ? 2.2 最可能数most probable number，MPN ? 基于泊松分布的一种间接计数方法。
食品中大肠菌群的测定
一 大肠菌群的概念及组成
? 大肠菌群的概念 大肠菌群系指一群需氧及兼性厌氧，在
37℃能分解乳糖产酸、产气的革兰氏阴性无 芽胞杆菌。 ? 大肠菌群的组成
大肠埃希氏菌属、柠檬酸杆菌属、产气克 雷伯氏菌属和阴沟肠杆菌。
二、大肠菌群的测定意义
1、粪便污染的指标菌： 大肠菌群或大肠杆菌 2、以大肠菌群作为粪便指标菌原因 （1）在粪便中数量最大； （2）在外环境中存活的时间与致病菌大体相同； （3）检测方法简便容易。
2010-03-26 发布2010-06-01 实施 中 华 人 民 共 和 国 卫 生 部 发布
前言
? 本标准代替GB/T 4789.3-2008《食品卫生微生物学检验大 肠菌群计数》。
? 4.3 结晶紫中性红胆盐琼脂（Violet Red Bile Agar， VRBA）：见附录A 中A.3。
? 4.4 磷酸盐缓冲液：见附录A 中A.4。 ? 4.5 无菌生理盐水：见附录A 中A.5。 ? 4.6 无菌1 mol/L NaOH：见附录A 中A.6。 ? 4.7 无菌1 mol/L HCl：见附录A 中A.7。
食品安全国家标准 食品微生物学检验 大肠菌群计数
? 1 范围 ? 本标准规定了食品中大肠菌群（Coliforms）计数的方法。 ? 本标准适用于食品中大肠菌群的计数。 ? 2 术语和定义 ? 2.1 大肠菌群coliforms ? 在一定培养条件下能发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌
氧革兰氏阴性无芽胞杆菌。 ? 2.2 最可能数most probable number，MPN ? 基于泊松分布的一种间接计数方法。
食品中大肠菌群的测定
一 大肠菌群的概念及组成
? 大肠菌群的概念 大肠菌群系指一群需氧及兼性厌氧，在
37℃能分解乳糖产酸、产气的革兰氏阴性无 芽胞杆菌。 ? 大肠菌群的组成
大肠埃希氏菌属、柠檬酸杆菌属、产气克 雷伯氏菌属和阴沟肠杆菌。
二、大肠菌群的测定意义
1、粪便污染的指标菌： 大肠菌群或大肠杆菌 2、以大肠菌群作为粪便指标菌原因 （1）在粪便中数量最大； （2）在外环境中存活的时间与致病菌大体相同； （3）检测方法简便容易。
2010-03-26 发布2010-06-01 实施 中 华 人 民 共 和 国 卫 生 部 发布
前言
? 本标准代替GB/T 4789.3-2008《食品卫生微生物学检验大 肠菌群计数》。