酶联免疫实验(定量法)
ELISA的原理与应用解读
ELISA的原理与应用解读ELISA（酶联免疫吸附试验）是一种常用于检测抗原或抗体的免疫学实验技术。
它使用酶标记的抗体或抗原与被测物相结合，并通过测量酶催化产生的颜色变化或荧光强度来定量检测目标物。
ELISA是一种灵敏、专一、经济且相对简单的实验方法，在许多领域中都得到广泛应用。
ELISA的原理是建立在免疫学原理的基础上。
ELISA通常通过将样品（如血清、细胞上清等）与涂有特定抗原或抗体的微孔板高度特异性地结合。
然后，通过给予酶标记的二抗或底物特异结合于该反应体系，并产生可定量测量的信号。
常见的ELISA有直接ELISA、间接ELISA、竞争ELISA和间接捕获ELISA。
直接ELISA是通过将标记有酶的一抗直接与靶抗原相结合来进行检测。
这种方法对目标抗原具有高度特异性，并具有较高的灵敏性和检测限制。
间接ELISA则使用非标记的靶抗原与目标抗体相结合，然后再使用标记有酶的二抗与目标抗体结合。
该方法对目标抗体更加敏感，并可以用于定量抗体的浓度。
竞争ELISA利用标记抗原和未标记抗原竞争与抗体结合，从而定量样品中抗原或抗体的浓度。
间接捕获ELISA使用两个特异性抗体来捕获目标抗原，并通过标记有酶的第三抗体来定量检测。
这种方法对于检测低浓度的目标抗原非常敏感。
在生物医学研究中，ELISA被用于检测特定抗原或抗体的存在，并用于疾病诊断、疫苗开发、药物筛选和基因工程等领域。
例如，通过ELISA可以检测感染的病原体、肿瘤标志物、免疫球蛋白等。
ELISA还可以用于测定生物样品中特定蛋白质的浓度，如血清蛋白、细胞因子、激素等。
在临床诊断中，ELISA是常用的实验技术之一、利用ELISA可以检测并诊断多种疾病，如艾滋病、疟疾和癌症等。
这些检测通常基于特定抗体与疾病相关蛋白质之间的相互作用。
例如，艾滋病的诊断可以通过检测患者血液中是否存在HIV抗体来进行。
此外，ELISA还被广泛用于食品安全检测、环境污染监测和生物技术产业中。
免疫分析定量操作规程
免疫分析定量操作规程免疫分析是一种用于检测抗原或抗体的定量方法，其中包括了酶联免疫吸附测定法（ELISA）、放射免疫测定法（RIA）和荧光免疫测定法（FIA）等多种技术手段。
在进行免疫分析的定量操作时，需要按照一定的规程进行操作，以保证结果的准确性和可重复性。
以下是免疫分析的定量操作规程的一些要点：1.试剂准备：a.充分摇匀试剂瓶，确保试剂溶液均匀混合。
b.避免试剂受到阳光暴晒或高温，保持存储环境稳定。
c.注意试剂的保质期，过期试剂不得使用。
2.标准曲线制备：a.按照实验要求准备不同浓度的标准品。
b.将标准品依次加入已标记编号的试管中，制备标准曲线。
c.准备相应的空白对照，标准曲线上和标本测定时要包含空白对照。
3.样本处理：a.样本提取：按照实验方法的要求，采用适当的提取方法，将样本处理成所需的形式。
b.稀释样本：根据样本浓度情况，选择适当的稀释倍数，使其在标准曲线范围内测量。
c.确保样本处理的准确性，避免交叉污染。
4.试剂加入：a.按照试剂方案加入试剂，避免试剂倒错或加漏。
b.试剂加入后要立即轻轻摇匀，使试剂和样本充分混合。
c.确保试剂加入的准确量和顺序，避免对结果产生影响。
5.孵育和洗涤：a.按照实验要求，在适当的温度和时间下进行孵育，保证所需的反应充分进行。
b.洗涤操作要准确、迅速，避免反应物的非特异性结合和干扰物的残留。
c.注意洗涤缓冲液的配制和使用时间，确保洗涤效果。
6.信号检测和数据处理：a.按照实验要求选择恰当的信号检测方法，如酶标仪、放射计或荧光仪等。
b.确保检测设备的正常工作和实验环境稳定。
c.数据处理要谨慎，确保数据的准确性和可靠性，如标准曲线拟合、计算和结果分析等。
7.质量控制：a.每天开始实验前，进行设备的校准和质控品的测量。
b.在实验过程中，每个批次样本测定时要配备质控品，以确保实验结果的准确性和可靠性。
c.记录和分析质控品的结果，如出现异常情况要及时调查和处理。
免疫分析的定量操作规程是确保实验结果准确和可靠性的重要环节，需要严格遵守。
ELISA的数据分析
ELISA的数据分析引言概述：ELISA（酶联免疫吸附试验）是一种常用的生物化学实验技术，用于检测和定量分析抗原或者抗体在样本中的存在量。
ELISA的数据分析是评估实验结果的关键步骤，它能提供准确的定量测量和可靠的结果。
本文将介绍ELISA数据分析的五个部份，包括样本浓度计算、标准曲线绘制、样本浓度插值、数据质量控制和结果解读。
一、样本浓度计算：1.1 样本浓度计算是ELISA数据分析的关键步骤之一。
首先，需要根据实验设计和样本的特性选择适当的计算方法。
常用的计算方法包括直接读数法、标准曲线法和回归分析法。
1.2 直接读数法适合于定性分析，即判断样本中是否存在目标抗原或者抗体。
通过比较样本的吸光度值与阴性对照的吸光度值，可以确定样本是否阳性。
1.3 标准曲线法适合于定量分析，即确定样本中目标抗原或者抗体的浓度。
通过测量一系列已知浓度的标准样品的吸光度值，可以绘制标准曲线，并根据样本的吸光度值在曲线上插值计算样本的浓度。
二、标准曲线绘制：2.1 标准曲线是ELISA数据分析的重要工具，用于将样本的吸光度值转化为浓度值。
首先，准备一系列已知浓度的标准样品，并测量它们的吸光度值。
2.2 将标准样品的吸光度值绘制成曲线图，横坐标为浓度，纵坐标为吸光度值。
可以使用线性或者非线性回归分析方法拟合标准曲线，选择最佳拟合模型。
2.3 根据标准曲线的拟合方程，可以将样本的吸光度值转化为浓度值。
通过插值计算，可以准确地确定样本的浓度。
三、样本浓度插值：3.1 样本浓度插值是ELISA数据分析的关键步骤之一，用于确定样本的浓度。
根据标准曲线的拟合方程和样本的吸光度值，可以通过插值计算得出样本的浓度。
3.2 插值计算可以使用线性插值法或者非线性插值法。
线性插值法适合于线性标准曲线，通过直线的斜率和截距计算样本的浓度。
非线性插值法适合于非线性标准曲线，通过曲线的方程计算样本的浓度。
3.3 插值计算的准确性与标准曲线的拟合质量密切相关。
人C肽定量检测试剂盒(酶联免疫法)说明书V7.0
人C肽定量检测试剂盒（酶联免疫法）说明书V7.0 即用10-1136-0196人份试剂由瑞典Mercodia AB制造用于标签上的标识的说明预期用途C肽定量检测试剂盒（酶联免疫法）提供了一种人血清、血浆、尿液样本中C肽的定量检测方法。
本试验综述和说明胰岛β细胞功能的定性与定量评估不仅用于糖尿病自然历史的诊前和诊后研究，也在临床上作为选择正确疗法的导向。
外周胰岛素不能用于评估β细胞功能，鉴于门静脉循环使得肝脏吸收的大量化和复杂化，并且胰岛素试验不能区分内源性胰岛素和外源性胰岛素。
胰岛β细胞内的胰岛素原可裂解为1分子的C肽和1分子的胰岛素，C肽以和胰岛素等摩尔浓度量释放到循环中，相比胰岛素而C肽最低限度被肝脏吸收，因此，外周C肽浓度更能反映β细胞的分泌量，比胰岛素更准确。
尿液中C肽含量与血浆中C肽含量相关，但个体内和人体间存在很高的差异性，所以测定β细胞功能不够精确。
检测程序的原理C肽检测试剂盒（酶联免疫法）是一种固相双表位酶联免疫试剂。
它基于双夹心技术，两单克隆抗体分别结合在C肽分子的抗原决定簇上。
在孵育过程中，样本中的C肽与结合在微孔(板)中的C肽抗体和酶标C肽抗体反应。
洗涤移去非结合的酶标抗体。
结合的偶联物(标记物)通过与3,3’,5,5’-四甲基联苯胺（TMB）反应而被检测到。
加入酸后反应终止，然后通过分光光度计（酶标仪）读取反应的终点。
警告与注意事项●用于体外诊断。
●不能让反刍动物或猪接触到本试剂盒的内容物及其残余物。
●本试剂盒的终止溶液含有0.5M的硫酸。
按常规预防措施处理危险化学品。
●所有的患者样本都应按潜在传染物处理。
要求但未提供的材料●配备相应的移液管（重复移取加入酶结合物溶液、试验缓冲液、TMB底物和终止溶液）●用于试剂制备的试管、烧杯和量筒●重蒸水●磁力搅拌器●涡轮混合器●酶标仪（含450nm滤光片）●平板振荡器（建议速率700-900循环/分钟，轨道运动）●微孔板（酶标板）洗涤设备试剂各Mercodia胰岛素ELISA检测试剂盒（10-1128-01）都包含96孔的试剂，足够用于双份测试的42个样本、1个校准曲线。
酶联免疫吸附测定法
酶联免疫吸附测定法（ELISA）1.定义 (3)2.原理 (3)2.1抗原抗体反应 (3)2.2免疫测定在临床检验中的应用 (5)3.ELISA的类型 (5)3.1双抗体夹心法测抗原： (6)3.2双抗原夹心法测抗体 (6)3.3间接法测抗体 (6)3.4竞争法测抗体 (7)3.5竞争性测抗原 (7)3.6捕获包被法测抗体 (7)3.7ABS-ELISA法 (8)4.ELISA试剂的组成 (9)4.1固相载体： (9)4.2包被的方式 (9)4.3包被用抗原：天然抗原、重组抗原、合成多肽抗原。
(10)4.4包被的条件： (10)4.5洗涤液： (10)4.7酶的催化性； (11)4.8结合物的制备 (11)4.9结合物的保存 (12)4.10酶的底物 (12)4.11酶反应终止液 (12)4.12参考标准品 (13)4.13加样： (13)4.14保温 (13)4.15保温方式： (13)4.16室温温育的反应 (13)4.17洗涤 (14)4.18显色 (14)4.19比色 (14)4.20酶标比色仪 (15)4.21结果判定 (15)4.22定量测定 (16)4.23ELISA的操作要点 (16)1.定义酶联免疫吸附测定法（Enzyme Linked ImmunoSorbent Assay），简称ELISA，采用抗原与抗体的特异反应将待测物与酶连接，然后通过酶与底物产生颜色反应，对受检物质进行定性或定量分析的一种检测方法。
2.原理采用抗原与抗体的特异反应将待测物与酶连接，然后通过酶与底物产生颜色反应，可对受检物质的定性或定量分析。
2.1抗原抗体反应2.1.1可逆性抗原与抗体结合形成抗原抗体复合物的过程是一种动态平衡，其反应式为：Ag+Ab→Ag·Ab抗体的亲和力（affinity），可以用平衡常数K表示：K=[Ag·Ab]／[Ag][Ab]，Ag·Ab 的解离程度与K值有关。
ELISA六种方法类型及原理
ELISA六种方法类型及原理ELISA（酶联免疫吸附测定）是一种常用的实验技术，用于测定样品中特定抗原或抗体的存在和浓度。
它的原理基于抗原和抗体之间的专一结合，利用酶标记的抗体或抗原来检测并定量目标物。
ELISA有多种不同的方法类型，以下将对其中六种方法类型及其原理进行详细介绍。
1.直接ELISA：直接ELISA是最简单和最常用的ELISA方法，适用于寻找目标抗原。
在这种方法中，被测抗原直接吸附在固相或表面上，然后与特异性酶标记的抗原特异性结合。
最后，通过酶标记的底物的反应来定量测定目标物的浓度。
2.间接ELISA：间接ELISA也是常用的方法，适用于寻找目标抗体。
首先，将被测抗原吸附在固相或表面上，然后加入待测抗体。
之后，特异性结合的第二抗体（酶标记的）被加入用于识别和检测第一抗体。
最后通过酶标记的底物的反应来定量测定目标物的浓度。
3.竞争ELISA：竞争ELISA用于检测样品中的特定抗原或抗体。
在这种方法中，特异性酶标记的抗原或抗体与待测样品中的抗原或抗体竞争结合。
通过测定酶标记物的信号强度，可以确定待测样品中目标物的含量。
4.间接竞争ELISA：间接竞争ELISA是一种用于定量测定目标抗原的方法。
首先，在固相或表面上吸附被测抗原，然后加入特异性抗体。
该抗体与样品中的目标物竞争结合。
接着，再加入另一特异性抗体，该抗体与前面结合的抗体有竞争关系。
最后通过测定酶标记物的信号强度，可以确定目标物的浓度。
5.间接夹心ELISA：间接夹心ELISA用于寻找样品中的特定抗体。
首先，在固相或表面上吸附被测抗原，然后加入待测抗体。
随后，特异性酶标记的第二抗体被加入，用于识别和检测待测抗体。
最后通过测定酶标记物的信号强度，可以定量测定目标抗体的浓度。
6.双抗体ELISA：双抗体ELISA常用于寻找特定抗原。
首先，在固相或表面上吸附被测特异性抗体，然后加入样品。
目标抗原与抗体特异性结合。
接着，酶标记的第二抗体被加入，该抗体与目标抗原结合。
简述酶联免疫吸附实验的原理
简述酶联免疫吸附实验的原理酶联免疫吸附实验（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，ELISA）是一种常用的免疫学实验技术，用于检测和定量分析特定抗原或抗体的存在和浓度。
其原理基于抗原与抗体的高度特异性结合，利用酶的催化作用产生可见的信号。
ELISA实验通常包括以下步骤：涂布、阻断、孵育、洗涤、底物反应和读数。
首先，在实验板的孔中涂布特定抗原或抗体，使其吸附在孔壁上。
然后，通过阻断剂阻止非特异性的蛋白质与孔壁结合。
接下来，将待测样品加入孔中与抗原或抗体结合，形成特异性抗原-抗体复合物。
孔中的抗原-抗体复合物会与特异性酶标记的二抗发生结合，形成固定复合物。
随后，通过洗涤步骤去除未结合的物质。
最后，通过底物反应使酶催化底物产生可见的信号，例如颜色的变化。
这个信号的强度与待测样品中特定抗原或抗体的浓度成正比。
最后，通过读数仪器测定信号的强度，并通过标准曲线来计算出待测样品中抗原或抗体的浓度。
ELISA实验的原理是基于免疫学的基本原理。
抗原和抗体是免疫反应中的重要组成部分。
抗原是能够诱导机体免疫应答并与特定抗体结合的分子。
抗体是由机体免疫系统产生的一类蛋白质，能够与特定抗原结合并识别和中和它们。
在ELISA实验中，通过将抗原或抗体固定在实验板上，使其吸附在孔壁上，然后与待测样品中的特定抗原或抗体结合，形成特异性的抗原-抗体复合物。
随后，通过酶标记的二抗与复合物结合，产生可见的信号。
ELISA实验具有高度特异性和灵敏度的优势。
由于抗原与抗体的高度特异性结合，ELISA可以准确地检测和定量特定抗原或抗体的存在和浓度。
此外，ELISA还具有广泛的应用范围，可以用于医学诊断、生物学研究和药物开发等领域。
虽然ELISA实验是一种常用的免疫学实验技术，但在进行实验时仍需注意一些问题。
首先，实验条件的控制非常重要，包括温度、时间、洗涤缓冲液的浓度和洗涤次数等。
这些条件的不准确会影响实验结果的准确性和可重复性。
elisa的检测原理
elisa的检测原理Elisa（酶联免疫吸附试验）是一种常用于生物学和医学领域，用于检测目标物质的方法。
Elisa的检测原理基于抗原与抗体之间的特异性结合，通过化学反应产生可测量的信号。
本文将介绍Elisa的检测原理及其具体步骤。
第一部分：Elisa的背景介绍Elisa是一种非常敏感和特异的实验技术，被广泛应用于疾病诊断、药物筛选、蛋白质定量等领域。
其原理是利用特异性抗原与抗体之间的结合反应，通过酶作用产生颜色或荧光信号，从而实现对目标物质的定量检测。
第二部分：Elisa的原理与步骤1. 血清处理在进行Elisa实验之前，需要从样本中提取血清，并进行预处理。
预处理的目的是去除可能干扰结果的物质，如红细胞、血浆等。
经过预处理后的血清样本即可用于后续的实验步骤。
2. 固相吸附在Elisa实验中，一般会使用96孔板作为固相载体。
首先，将需要检测的抗原溶液加入孔板中，并在孔板内表面上形成一层均匀的抗原薄膜。
通常，每个孔位会添加同样的抗原浓度，以确保实验的可靠性和准确性。
3. 特异性结合在已固定的抗原上，加入待测样本（可能存在的抗体），与孔板中的抗原进行特异性结合。
如果待测样本中存在与抗原相匹配的抗体，则会发生结合反应。
这种特异性结合可以用于检测某种特定抗体的存在。
4. 洗涤步骤为了去除未结合的物质，以及降低非特异性背景信号的干扰，需要进行洗涤步骤。
在洗涤过程中，用缓冲液冲洗反应孔位，去除非特异性结合的物质。
5. 检测物的结合在完成洗涤步骤后，加入与待测抗体特异结合的检测物（如辣根过氧化物酶标记的二级抗体）。
该检测物会与特异性结合的抗体形成复合物，并固定在孔板内。
6. 底物反应与信号检测加入底物反应液，通过酶促反应产生可测量的色素或荧光信号。
底物反应液的选择取决于检测系统的设定，在特定条件下，底物与酶的活性发生反应，产生信号。
7. 信号测量与数据分析使用光度计或荧光分析仪测量底物反应产生的信号强度。
根据标准曲线或其他定量方法，可以计算出待测样本中抗原的浓度或抗体的含量。
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注意事项
1 试剂盒使用前要充分恢复到室温。 2 洗涤要彻底，防止假阳性，但不可洗 涤过猛过急造成假阴性。 3标准品OD值要满足以下要求：20 ng／ ml＞0.150;400 ng／ml ＞1.000,否则应 视为实验失败，全部试验重做。
使固相抗原抗体复合物与酶标抗体结 合，形成固相抗体-待测抗原-酶标记 抗体复合物（双抗体夹心），洗涤 除去未结合酶标记抗体；加底物显 色，固相上的酶催化底物成为有色 产物，根据颜色反应的程度进行该 抗原的定性或定量检测。
定量免疫测定的标准曲线的建立
定量测定顾名思义就是测定待测物的含 量。定量免疫测定在测定未知临床标本 得同时，亦需要测定系列不同浓度的标 准品或校准品，然后根据标准品或校准 品浓度与测定信号之间的比例关系来推 算未知标本得浓度，建立标准品或校准 品浓度与测定信号之间的比例关系的数 学公式及相应作图，称为曲线拟合。
实验步骤
1、加样；取出包被板，做好标记。留一孔做空白对照， 其余孔用微量加样器依次加入50μ l标准品及待测样品， 随即加酶结合物50 μ l 。轻轻振荡混匀后，置37度温 箱中温育30min。 2、洗涤：将各孔液体甩掉，用稀释的洗涤液注满各孔， 静置20秒，甩掉，重复5次后在吸水纸上拍干。 3、显色：每空加入底物50 μ l ，再加入显色剂50 μ l ，充分混匀，室温避光反应5min。 4、加终止液50 μ l 终止反应。 5、以空白调零，450nm波长处用酶标仪测各孔OD值。
标准曲线的特点：
定量免疫测定的标准曲线的建立有以下三 个特点： 1、标准品或校准品浓度与测定反应之间 关系是非线性的。 2、可能存在与系列标准品或校准品的测 定数据拟合的多条曲线。 3、具有相对大的且方差不齐的测定误差。
为了尽可能避免或减少误差，可以通过 增加校准系列中校准品的数量，使校准 物的浓度密切接近，以及对每一个校准 物多次重复测定来进行。在免疫测定中， 曲线拟合的方法有两大类，分别是完全 根据经验的方法和数学模式的方法。
酶联免疫实验（定量法）
检测甲胎蛋白AFP
实验原理
试剂盒 采用针对不同抗原决簇的双克隆抗体分 别制备成包被板和酶结合物，利用ELISA 双抗体夹心法原理检测人血清中的AFP含 量。
ELISA双抗体夹心法
属于非竞争结合测定，是检测抗原最常用 的方法，适用于检测含有至少两个抗原 决定簇的多价抗原。 其基本原理：先将特异性抗体连接在固相 载体上，形成固相抗体；加入待测标本 并温育，使标本中的抗原与固相抗体充 分反应，形成固相抗体抗原复合物，洗 涤除去其他未结和物；然后加入酶标抗 体并温育。
结果判定
计算：用双对数线性回归或其他适宜的 曲线拟合方式绘制标准曲线，利用该标 准曲线计算待测样品的AFP的含量。源自正常参考值：
1.建议实验室建立自己的正常AFP范围。 2.参考值：健康成人≤20ng／ml. 3.对AFP含量在20~400 ng／ml之间者， 建议动态观察。 4.对AFP大于400 ng／ml的样品，请系列 稀释后重做。