用于中性粒细胞胞外诱捕网检测的试剂盒及检测方法
中性粒细胞胞外诱捕网促进肿瘤局部生长
·92·中性粒细胞胞外诱捕网促进肿瘤局部生长夏 杰，倪 浩，汤 静，胡 倩( 黄冈职业技术学院 医药学院，湖北 黄冈 438002)摘 要：中性粒细胞胞外诱捕网（NETs）的释放是新发现的中性粒细胞天然免疫手段。
近年来发现NETs 不仅执行针对病原体的免疫作用，还参与机体的某些其他病理过程，特别是在肿瘤的生长过程中发挥着重要作用。
NETs 的成分除了染色质DNA 外，还有包括各种组蛋白和胞内颗粒释放蛋白，许多研究证实这些蛋白质与肿瘤的发生、发展有关，如中性粒细胞弹性蛋白酶、基质金属蛋白酶9、白细胞介素8、粒细胞集落刺激因子等可通过降解胰岛素受体底物-1，促进血管内皮生长因子释放，启动NETosis 等多种途径促进肿瘤的局部生长。
关键词：中性粒细胞；细胞外诱捕网；肿瘤局部生长；免疫作用 中图分类号：R73-35+4 文献标志码：A 文章编号：1672-1047（2020）02-0092-04DOI:10.3969/j.issn.1672-1047.2020.02.22收稿日期：2020-03-06基金项目：黄冈职业技术学院科研项目“中性粒细胞胞外诱捕网在癌症病理过程中的作用”（2018C2022127）。
作者简介：夏 杰，男，湖北黄冈人，硕士，主治医师，讲师。
研究方向：生物化学、免疫学。
中性粒细胞是人体防御机制的第一道防线，是机体发挥天然免疫功能的主要细胞。
中性粒细胞缺乏的患者免疫功能严重缺失，往往在年轻时死于细菌或真菌感染。
然而中性粒细胞过度活化可导致大量活性氧和促炎细胞因子等细胞毒性介质的释放，可直接或间接损伤内皮细胞，导致细胞死亡[1]。
2004年，Brinkmann V [2]等发现了一种新的中性粒细胞防御机制，当病原体入侵时，中性粒细胞释放出网状结构的物质，将病原体捕获并杀灭。
这种网状结构称为中性粒细胞胞外诱捕网(neutrophil extracellular traps ，NETs)，其化学组成主要是染色质DNA 和蛋白质。
211105470_中性粒细胞胞外诱捕网通过诱导巨噬细胞M2型极化促进非小细胞肺癌增殖和侵袭
中性粒细胞胞外诱捕网通过诱导巨噬细胞M2型极化促进非小细胞肺癌增殖和侵袭①苏莹 马丽丽 柳江 韩忠诚 （新疆维吾尔自治区人民医院肿瘤科，乌鲁木齐830000）中图分类号 R734.2 文献标志码 A 文章编号 1000-484X （2023）03-0472-06［摘要］ 目的：探究中性粒细胞胞外诱捕网（NETs ）诱导巨噬细胞极化在非小细胞肺癌（NSCLC ）增殖和侵袭中的作用及其相关机制。
方法：采集28例NSCLC 患者肿瘤组织及其癌旁组织，通过免疫组化检测PAD4和Arg -1表达水平。
采用PMA/LPS 和PMA/IL -4极化THP -1细胞为M1和M2型巨噬细胞的过程中加入NETs 共孵育，qRT -PCR 检测巨噬细胞iNOS 、IL -6、TNF -α、Arg -1、IL -10和TGF -β表达水平。
将各组M2型巨噬细胞与A549细胞共孵育，CCK8检测A549细胞增殖变化，Transwell 检测细胞侵袭能力变化，qRT -PCR 和Western blot 检测细胞VEGF 表达水平变化。
结果：与癌旁组织比较，NSCLC 患者肿瘤组织PAD4和Arg -1表达水平升高。
在向M1型巨噬细胞极化过程中，加入NETs 后巨噬细胞iNOS 、IL -6、TNF -α表达水平降低，Arg -1、 IL -10、TGF -β表达水平升高。
在向M2型巨噬细胞极化过程中，加入NETs 后巨噬细胞Arg -1、IL -10、TGF -β表达水平升高。
与Control 组比较，M2组A549细胞增殖、侵袭能力和VEGF 表达水平升高。
与M2组比较，M2+NETs 组A549细胞增殖、侵袭能力和VEGF 表达水平升高。
结论：NETs 通过诱导巨噬细胞向M2型极化，促进NSCLC 增殖和侵袭。
［关键词］ 非小细胞肺癌；中性粒细胞胞外诱捕网；巨噬细胞；M2型极化Neutrophil extracellular traps promote proliferation and invasion of NSCLC byinducing M2-type polarization of macrophagesSU Ying ， MA Lili ， LIU Jiang ， HAN Zhongcheng. Department of Oncology ， People's Hospital of Xinjiang Uygur Autonomous Region ， Urumqi 830000， China［Abstract ］ Objective ：To investigate the role of neutrophil extracellular trap （NETs ） induced macrophage polarization in pro⁃liferation and invasion of non -small cell lung cancer （NSCLC ） and its related mechanisms. Methods ：Tumor tissues and adjacent tis⁃sues of 28 NSCLC patients were collected and the expression levels of PAD4 and ARG -1 were detected by immunohistochemistry. The expression levels of iNOS ， IL -6， TNF -α， ARG -1， IL -10 and TGF -β in macrophages were detected by qRT -PCR when PMA/LPS and PMA/IL -4-polarized THP -1 cells were incubated with NETs. M2 macrophages in each group were co -incubated with A549 cells. Prolife -ration of A549 cells were detected by CCK8， invasion ability of A549 cells were detected by Transwell ， and expression level of VEGFwas detected by qRT -PCR and Western blot. Results ：Compared with adjacent tissues ， the expression levels of PAD4 and ARG -1 intumor tissues of NSCLC patients were increased. During the polarization to M1-type macrophages ， the expression levels of iNOS ， IL -6 and TNF -α in macrophages were decreased after co -incubation with NETs ， while the expression levels of ARG -1， IL -10 and TGF -β were increased. During the polarization of M2-type macrophages ， the expression levels of ARG -1， IL -10 and TGF -β in macrophages increased after co -incubation with NETs. Compared with Control group ， the proliferation ， invasion and VEGF expression levels of A549 cells in M2 group were increased. Compared with M2 group ， proliferation ， invasion and VEGF expression levels of A549 cells inM2+NETs group were increased. Conclusion ：NETs promote proliferation and invasion of NSCLC by inducing macrophage polarization to M2 type.［Key words ］ Non -small cell lung cancer ；Neutrophil extracellular trap ；Macrophage ；M2 type polarization世界卫生组织国际癌症研究机构（International Agency for Research on Cancer ，IARC ）发布的2020年全球癌症数据显示，肺癌是目前威胁全球人类生命健康的第二大癌症［1］。
中性粒细胞胞外诱捕网在糖尿病肾病肾小球内皮细胞损伤中的作用和机制研究演示课件
在糖尿病肾病肾小球内
皮细胞损伤中的作用和
机制研究
汇报人：XXX
2024-01-09
目录
Contents
• 引言 • 中性粒细胞胞外诱捕网概述 • 糖尿病肾病肾小球内皮细胞损伤机
制 • 实验研究 • 中性粒细胞胞外诱捕网在糖尿病肾
病治疗中的应用前景 • 结论
01 引言
研究背景和意义
实验结论和讨论
中性粒细胞胞外诱捕网对糖尿病肾病肾小球内皮细胞 具有保护作用，能够减轻细胞损伤程度，降低炎症因
子表达水平，改善氧化应激状态。
中性粒细胞胞外诱捕网的作用机制可能与抑制炎症反 应、减轻氧化应激损伤等有关，为糖尿病肾病的治疗
提供了新的思路和方法。
进一步研究中性粒细胞胞外诱捕网在糖尿病肾病中的 具体作用机制和临床应用价值具有重要意义。
NETs通过激活GEnC表面的TLR4受体，触发NF-κB信号通路，导致炎症 因子（如TNF-α、IL-1β）和趋化因子（如MCP-1）的表达增加，进一步
招募和激活炎症细胞，形成正反馈循环，加重GEnC损伤。
此外，NETs还能够诱导GEnC发生氧化应激反应，导致细胞内ROS水平 升高，抗氧化酶（如SOD、CAT）活性降低，从而造成GEnC的氧化损伤 。
01
糖尿病肾病
糖尿病肾病（DN）是糖尿病（DM）的一种严重并发症，以肾小球内
皮细胞（GEC）损伤为主要特征，导致肾功能逐渐丧失。
02
中性粒细胞胞外诱捕网（NETs）
NETs是中性粒细胞在活化或凋亡时释放的一种网状结构，具有捕获和
杀死微生物的功能，同时也参与无菌性炎症的调节。
03
NETs与糖尿病肾病
近年来研究发现，NETs在DN的发生和发展中起重要作用，通过影响
Sartorius赛多利斯用于细胞分析的试剂和耗材
Sartorius赛多利斯用于细胞分析的试剂和耗材优化的试剂盒，以用于免疫肿瘤学分析、基于免疫的药物发现、细胞系开发及抗体发现。
赛多利斯拥有各种各样的经过验证的特定应用试剂和耗材，旨在最大限度地提高免疫肿瘤学分析、基于免疫的药物发现、细胞系开发和抗体发现的效率。
活细胞分析系统搭配 IncuCyte试剂、细胞系和耗材使用，作为一套整体解决方案，应用广泛。
通过使用赛多利斯的检测试剂盒、活细胞标记试剂、预标记细胞系、专用微孔板、专用图像采集和分析软件，您能够实现实时定量的活细胞分析。
经验证的 MultiCyt 试剂盒专为 Intellicyt iQue Screener PLUS 设计，具有灵活的通量规格和免洗配方，不仅能够节省时间，提高可重复性，还能满足微量化测定需求。
IncuCyte试剂和耗材IntelliCyt 试剂和耗材细胞分析仪器●IncuCyte 活细胞分析系统能够直接在培养箱内对数天、数周及数月的细胞健康、运动、形态和功能进行实时成像和分析。
●全新的! Intellicyt iQue3流式细胞仪一款更快速、更智能的流式细胞仪，支持多路复用细胞表型，可帮助您在极短的时间内从样本中获取可执行的结果。
活细胞分析加速药物发现和开发活细胞分析系统搭配试剂、细胞系和耗材使用，作为一套整体解决方案，应用广泛。
通过使用赛多利斯的检测试剂盒、活细胞标记试剂、预标记细胞系、专用微孔板、专用图像采集和分析软件，无需从标准培养箱中取出，您便能够对一定时间内的各种细胞变化进行实时定量活细胞分析。
●细胞健康（细胞凋亡、细胞毒性、细胞增殖）●细胞球●免疫细胞杀伤●细胞迁移/侵袭●趋化作用●抗体内化●免疫细胞化学●吞噬作用●神经突动力学●血管新生●中性粒细胞胞外诱捕网致死（NETosis）通过使用赛多利斯的检测试剂盒、活细胞标记试剂、预标记细胞系、专用微孔板、专用图像采集和分析软件，无需从标准培养箱中取出，您便能够对一定时间内的各种细胞变化进行定量活细胞分析。
中性粒细胞胞外诱捕网研究最新进展
Ｃｈｉｎ Ｊ Ｌａｂ Ｄｉａｇｎ，Ｊａｎｕａｒｙ，２０１８，Ｖｏｌ ２２，Ｎｏ．１
中性 粒 细胞 胞 外 诱 捕 网研 究 最 新 进 展
崔 蕊 ，方 玲 ，谢 风 （吉 林 大 学 中 日联 谊 医 院 检 验科 ，吉 林 长 春 １３００３３）
当机 体受 到 病 原微 生 物 侵 害时 ，因为 巨噬细 胞 等 分泌 的炎性 因子 ，导 致 中性 粒 细 胞 大 量 聚集 在 感 染 部位 ，分 泌 形 成 ＮＥＴｓ结 构 中 富 含 的组 蛋 白、蛋 白肽 和抗菌 肽等 ，其 杀 伤 力强 于 中性 粒 细胞 吞 噬 引 起 的 杀 菌效 率 ，ＮＥＴｓ可 以对 多 种 病 原 微 生物 都 有 杀 灭 和清除 的作 用 ，但 是 人体 血 液 中存 在 可 以降 解 ＮＥＴｓ的脱 氧 核 糖 核 酸 酶 １（Ｄｎａｓｅ１），当 此 酶 缺 乏 时 ，大量 ＮＥＴ ｓ 会 聚集 ，ＮＥＴｓ中 的 多种 蛋 白酶 和抗 菌肽 可以导致 内皮 及上皮细胞 的损伤 ，而组蛋 白是造
＊通 讯 作 者
究证 明ｌ１ ］，巨噬细胞 、肥大 细胞 、嗜酸 性粒 细胞也可 产生 网状结构 ，在体 内发挥一定 的免疫作用 。 ２ ＮＥＴｓ的 免 疫 原 性
宿主 来源 或 者 某些 外 源 的 物质 如 细 菌 、真菌 等 均 可 以刺 激 中性 粒 细胞 产 生 ＮＥＴｓｌ】 ，比如 ：１２一豆 蔻 酸 一ｌ３一乙 酸 佛 波 醇 可 以 在 短 时 间 内 诱 导 产 生 ＮＥＴｓ，因此 ，它是体 外 实 验 常用 到 的 ＮＥＴｓ体 外 引 物 。血 清淀粉 样 蛋 白 Ａ 也 可 以诱 导 ＮＥＴｓ形 成［１ ， 一 些 炎 性介 质 也 可 以诱 导 ＮＥＴｓ的生 成 ［１ 。在 引 物诱 导 下 ，蛋 白激 酶 Ｃ在 活 化 后 可 以通 过 丝 氨 酸 ／ 苏 氨酸 蛋 白激 酶 ／丝 裂 素 活化 蛋 白激酶 激 酶 ／细胞 外 的信 号调节 激 酶信号 通路 磷酸 化烟 酰胺 腺 嘌呤二 核苷 酸磷 酸 氧化 酶 ，生 成 ＮＥＴｓ形成 所需 ＲＯＳ。烟 酰胺 腺 嘌呤二 核 苷酸磷 酸 氧化酶 等经 一 系列酶 促反 应 生 成 超 氧 化 氧 离 子 、过 氧 化 氢 （Ｈ２０２）、次 氯 酸 （ ＨＯＣ１）等 。ＨｏＣｌ是 刺 激 ＮＥＴｓ释 放 的关 键 ＲＯＳ 成 分口 。ＲＯＳ 和 自 噬 影 响 下 的 染 色 体 解 聚 是 ＮＥＴｓ形成 的 特 征 之 一 。ＮＥ、精 氨 酸 脱 亚 胺 酶 ４（ ｐｅｐｔ试ｙｌａｒｇｉｎｉｎｅ ｄｅｉｍｉｎａｓｅ ｔｙｐｅ ４ ＰＡＤ４）和髓 过氧 化物 酶 （ｍｙｅｌｏｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ，ＭＰＯ ）共 同参 与 这一 过 程 ，尤其 ＰＡＩＮ 可催化 ３／４的精 氨酸残 基瓜 氨酸化 ， 从而 减弱静 电吸引 ，造 成组 蛋 白结合 ＤＮＡ 的能 力下 降＿】 。而 ＮＥＴ的抗菌 策 略 主要 可 以分 为 ①将 表 面 带有 正 电荷 的病 原体 捕 获 ，限制其 扩散 ［１引。②ＮＥＴｓ 内含 有抗 菌 酶 及 组 蛋 白可 以杀 伤 病原 体 。③ＮＥＴｓ 内部 含有的 ＮＥ可分 解沙 门菌等 细菌的毒力 因子 。 ３ ＮＥＴｓ与临床 疾病 ３．１ ＮＥＴｓ与 感 染
中性粒细胞胞外诱捕网放大脂多糖诱导的肺泡巨噬细胞炎症反应
中性粒细胞胞外诱捕网放大脂多糖诱导的肺泡巨噬细胞炎症反应赵宁;李勇;邵强;杨云;陈家泉;彭巍;胡世林;钱克俭;刘芬【摘要】Objective To observe the amplification effect of neutrophil extracellular traps (NETs) on inflammatory response ofalveolar macrophages induced by lipopolysaccharide (LPS). Methods Neutrophils were isolated and extracted from peripheral bloodof C57 BL/6 mice by using a mouse peripheral blood neutrophil separation kit. NETs were induced by PMA (100 nmol/L). Observa-tion of NETs by fluorescence microscopy and scanning electron microscopy. NR8383 rat alveolar macrophages were cultured invitro and divided into ⑴controlgroup:adding equal volume PBS;⑵NETs group:adding prepared (1.7×106 cell/ml) NETs;⑶LPSgroup: adding 1 mg/L LPS; ⑷LPS+NETs group:LPS combined with NETs co-stimulation. All groups were stimulated for 12 hours.Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) was used to detect the contents of interleukin-1β (IL-1β) and tumor necrosis fac-tor-α (TNF-α) in the supernatant of cells. Results Fluorescence microscopy showed that the nucleus of neutrophils in the controlgroup was complete, and there was no extracellular co-localized reticular structure between DNA and NETs. DNA reticular struc-ture could be seen in PMA stimulation group and co-localized with NETs. Scanning electron microscopy also showed that thechromatin of neutrophils was released into extracellular structure, suggesting that the formation of NETs was successfully inducedby PMA.LPS and NETs were used to stimulate alveolar macrophages for 12 hours respectively, the contents of IL-1β and TNF-αin supernatant of alveolar macrophages were significantly higher than those in control group.The contents of IL-1β in supernatantof LPS+NETs group were significantly higher than those of LPS group (P＜0.05). There was no significant difference in TNF-α insupernatant between LPS +NETs group and LPS group (P＞0.05). Conclusion NETs can amplify LPS-induced inflammation inalveolar macrophages. NETs increased LPS-induced alveolar macrophage inflammatory factor release, suggesting that NETs canamplify LPS-induced alveolar macrophage inflammatory response.%目的观察中性粒细胞胞外诱捕网 (NETs) 对脂多糖 (LPS) 诱导的肺泡巨噬细胞炎症反应的放大作用.方法采用小鼠外周血中性粒细胞分离试剂盒分离提取C57BL/6小鼠外周血中性粒细胞.采用佛波酯 (PMA) (100nmol/L) 诱导中性粒细胞形成NETs, 采用荧光显微镜及扫描电子显微镜观察NETs.体外培养大鼠肺泡巨噬细胞NR8383, 分为⑴对照组:加入等体积PBS;⑵NETs组:加入制备好的 (1.7×106个/ml) NETs;⑶LPS组:加入1mg/L LPS;⑷LPS+NETs组:LPS联合NETs共刺激, 各组均刺激12h.采用酶联免疫吸附试验 (ELISA) 检测细胞上清液中白细胞介素-1β (IL-1β) 、肿瘤坏死因子-α (TNF-α) 含量.结果荧光显微镜下观察示对照组中性粒细胞核形态完整, 无DNA与NETs的胞外共定位网状结构, PMA刺激组可见DNA网状结构, 且与NETs共定位;扫描电子显微镜下也观察到中性粒细胞染色质呈网状结构释放至胞外, 提示PMA诱导NETs形成成功.采用LPS、NETs分别刺激肺泡巨噬细胞12h, 细胞上清液中的IL-1β、TNF-α含量均较对照组显著升高, LPS+NETs组上清液中的IL-1β含量较LPS 组显著升高 (P＜0.05), 上清液中的TNF-α较LPS组相比差异无统计学意义 (P＞0.05).结论 NETs增加LPS诱导的肺泡巨噬细胞炎症因子释放, 提示NETs可以放大LPS诱导的肺泡巨噬细胞炎症反应.【期刊名称】《江西医药》【年(卷),期】2019(054)001【总页数】4页(P23-26)【关键词】中性粒细胞胞外诱捕网;肺泡巨噬细胞;炎症反应白细胞介素-1β;肿瘤坏死因子-α【作者】赵宁;李勇;邵强;杨云;陈家泉;彭巍;胡世林;钱克俭;刘芬【作者单位】南昌大学第一附属医院重症医学科, 南昌 330006;南昌大学第一附属医院肿瘤科, 南昌 330006;南昌大学第一附属医院重症医学科, 南昌 330006;南昌大学第一附属医院重症医学科, 南昌 330006;南昌大学第一附属医院重症医学科, 南昌 330006;南昌大学第一附属医院重症医学科, 南昌 330006;南昌大学第一附属医院重症医学科, 南昌 330006;南昌大学第一附属医院重症医学科, 南昌 330006;南昌大学第一附属医院重症医学科, 南昌 330006【正文语种】中文【中图分类】R-332中性粒细胞胞外诱捕网（NETs）是中性粒细胞受到炎症刺激后，细胞核内组分如解聚的DNA、组蛋白和颗粒蛋白等释放至细胞外形成的一种网状纤维结构[1]。
中性粒细胞胞外诱捕网(NETs)与结直肠癌的研究进展
中性粒细胞胞外诱捕网(NETs)与结直肠癌的研究进展发布时间：2023-03-10T01:11:26.371Z 来源：《中国医学人文》2022年5月5期作者：李扬何其勇程卓鑫李加成洪治国[导读] 中性粒细胞胞外诱捕网(NETs)是中性粒细胞形成的一种网状结构，其中含有DNA和蛋白质。
NETs既在先天免疫反应中发挥着作用，还参与了自身免疫性疾病，如类风湿性关节炎和系统性红斑狼疮，以及其他非感染性病理过程，如血管炎、血栓形成、糖尿病、动脉粥样硬化、凝血障碍和癌症。
同时相关研究发现NETs参与了结直肠癌的进展和转移。
本文将主要关注NETs对结直肠癌的影响进行综述，为寻找治疗结直肠癌的潜在靶点提供参考。
李扬，何其勇[通讯作者]，程卓鑫，李加成，洪治国佳木斯大学附属第一医院佳木斯市（154002）【摘要】中性粒细胞胞外诱捕网(NETs)是中性粒细胞形成的一种网状结构，其中含有DNA和蛋白质。
NETs既在先天免疫反应中发挥着作用，还参与了自身免疫性疾病，如类风湿性关节炎和系统性红斑狼疮，以及其他非感染性病理过程，如血管炎、血栓形成、糖尿病、动脉粥样硬化、凝血障碍和癌症。
同时相关研究发现NETs参与了结直肠癌的进展和转移。
本文将主要关注NETs对结直肠癌的影响进行综述，为寻找治疗结直肠癌的潜在靶点提供参考。
【关键词】中性粒细胞外诱捕网；结直肠癌；结直肠癌（CRC）在消化系统中是最常见的恶性肿瘤，在恶性肿瘤的病死率中已达第三位，是我国的发病率第一的恶性肿瘤。
中性粒细胞外诱捕网(NETs)是一种复杂的网状结构，能够捕获真菌、细菌、原生动物和病毒等。
一些研究调查了NETs在肿瘤中的作用，报告显示它们参与了癌症的免疫编辑、进展、转移扩散和癌症相关血栓形成。
NETs可以发挥抗肿瘤或促肿瘤活性。
NETs的一些成分如髓过氧化物酶(MPO)、蛋白酶和组蛋白可以杀死肿瘤并抑制肿瘤的生长和转移。
然而NETs蛋白酶还可以降解细胞外基质，促进癌细胞外渗和转移[1]。
中性粒细胞实训报告
一、实训背景中性粒细胞是白细胞的一种，主要作用是吞噬细胞和细菌，是人体免疫系统的重要组成部分。
近年来，中性粒细胞在癌症转移中的作用逐渐受到关注。
为了深入了解中性粒细胞在免疫系统中的作用及其与癌症转移的关系，我们进行了中性粒细胞实训。
二、实训目的1. 熟悉中性粒细胞的生物学特性及其在免疫系统中的作用；2. 掌握中性粒细胞的分离、培养和检测方法；3. 研究中性粒细胞在癌症转移中的作用及其相关机制。
三、实训内容1. 中性粒细胞的分离与培养（1）实验材料：中性粒细胞分离液、抗凝剂、淋巴细胞分离液、PBS缓冲液、胎牛血清、中性粒细胞培养液等。
（2）实验步骤：① 收集血液样本，加入抗凝剂；② 将血液样本与淋巴细胞分离液混合，离心分离得到单个核细胞；③ 将单个核细胞与中性粒细胞分离液混合，离心分离得到中性粒细胞；④ 收集中性粒细胞，用PBS缓冲液洗涤2次，加入胎牛血清和培养液，置于培养箱中培养。
2. 中性粒细胞的检测（1）中性粒细胞计数：采用血液分析仪检测中性粒细胞计数。
（2）中性粒细胞吞噬功能检测：将中性粒细胞与细菌混合，观察吞噬细胞数量和吞噬能力。
（3）中性粒细胞胞外诱捕网（NET）检测：采用ELISA方法检测NET蛋白水平。
3. 中性粒细胞与癌症转移的研究（1）建立小鼠肿瘤模型，观察中性粒细胞在肿瘤转移中的作用；（2）分析中性粒细胞与肿瘤细胞相互作用的相关分子；（3）研究中性粒细胞在癌症转移中的信号通路。
四、实训结果与分析1. 中性粒细胞分离与培养：成功分离和培养中性粒细胞，中性粒细胞计数为（2.5±0.5）×10^9/L。
2. 中性粒细胞检测：中性粒细胞吞噬功能良好，吞噬细胞数量和吞噬能力均高于正常值；NET蛋白水平为（50.2±2.1）ng/mL。
3. 中性粒细胞与癌症转移的研究：在肿瘤转移模型中，中性粒细胞数量与肿瘤转移程度呈正相关；中性粒细胞与肿瘤细胞相互作用后，相关分子表达水平发生变化；中性粒细胞在癌症转移中的信号通路涉及PI3K/Akt和NF-κB等。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
用于中性粒细胞胞外诱捕网检测的试剂盒及检测方法
中性粒细胞胞外诱捕网（neutrophil extracellular traps，NETs）
是一种重要的免疫反应机制，其通过释放DNA纤维形成的结构来捕捉和杀
灭病原体。
NETs在感染、炎症、肿瘤和自身免疫性疾病等疾病中发挥着
重要的作用。
因此，快速、准确检测NETs的能力对于疾病的早期诊断、
病情判断和治疗策略的制定至关重要。
为了满足这些需求，研究人员开发了用于中性粒细胞胞外诱捕网检测
的试剂盒和检测方法。
这些试剂盒主要包括特异性抗体、染料和相关的检
测试剂。
以下是一个使用试剂盒进行中性粒细胞胞外诱捕网检测的基本步骤：
1.血液或其他样本的采集：从受试者的静脉中采集血液样本，或者从
其他体液（例如尿液、唾液等）中采集样本。
2.缓冲液的制备：根据试剂盒的说明书，制备相应的缓冲液，用于稀
释和处理样本。
3.样本的准备：将采集到的样本转移到离心管中，离心以除去固体颗粒。
然后，将上清液转移到新的离心管中。
4.细胞抗原的处理：将特定浓度的抗体加入到上一步骤中的离心管中，与样品中的细胞抗原发生特异性结合。
5.染料处理：将染料加入到上一步骤中的离心管中，用于检测或标记
特定的细胞成分或结构。
6.洗涤：通过离心和上清液的去除，将非特异性的结合物洗涤干净，
以减少背景干扰。
7.信号检测：使用特定的检测试剂盒，对样品中的特定标记进行信号检测。
这可以通过光学显微镜观察、流式细胞仪读数或其他信号检测方法来完成。
8.数据分析：对得到的信号进行定量或定性分析，以获得有关样品中中性粒细胞胞外诱捕网的信息。
这是一个基本的流程，实际使用的试剂盒和方法可能会因不同的实验目的和要求而有所不同。
此外，还可以根据具体疾病的特点和临床需求进行优化和调整。
总的来说，中性粒细胞胞外诱捕网检测的试剂盒和方法在临床研究和诊断中起到了重要的作用，有助于提高疾病的早期诊断和治疗水平。