动物生物化学实验指导
动物生物化学实验指导.doc
动物生物化学实验指导（修订版）武汉工业学院生物化学实验室规则1．每个同学都应该自觉遵守课堂纪律，维护课堂秩序，不迟到，不早退，不大声谈笑。
2．实验前必须认真预习，熟悉本次实验的目的、原理、操作步骤，懂得每一操作步骤的意义和了解所用仪器的使用方法，否则不能开始实验。
3．实验过程中要听从教师的指导，严肃认真地按操作规程进行实验，并把实验结果和数据及时、如实记录在实验记录本上，文字要简练、准确。
完成实验后经教师检查同意，方可离开实验室。
4．实验台面应随时保持整洁，仪器、药品摆放整齐。
公用试剂用完后，应立即盖严放回原处。
勿使试剂、药品洒在实验台面和地上。
实验完毕，仪器洗净放好，将实验台面抹拭干净，才能离开实验室。
5．使用仪器、药品、试剂和各物品必须注意节约。
洗涤和使用仪器时，应小心仔细，防止损坏仪器。
使用贵重精密仪器时，应严格遵守操作规程，发现故障须立即报告教师，不得擅自动手检修。
6．实验室内严禁吸烟！加热用的电炉应随用随关，严格做到：人在炉火在，人走炉火关。
乙醇、丙酮、乙醚等易燃品不能直接加热，并要远离火源操作和放置。
实验完毕，应立即拨去电炉开关和关好水笼头，拉下电闸。
离开实验室以前应认真、负责地进行检查水电，严防发生安全事故。
7．废液体可倒入水槽内，同时放水冲走。
强酸、强碱溶液必须先用水稀释。
废纸屑及其他固体废物和带渣滓的废物倒入废品缸内；不能倒入水槽或到处乱扔。
8．要精心使用和爱护仪器，如使用分光光度计时，不能将比色杯直接置于分光光度计上，并注意拿放比色杯时，不要打碎。
仪器损坏时，应如实向教师报告，并填写损坏仪器登记表，然后补领。
9．实验室内一切物品，未经本室负责教师批准，严禁带出室外，借物必须办理登记手续。
实验一唾液淀粉酶活性的观察原理酶是指化学本质为大分子的生物催化剂。
在一定条件下，酶促化学反应进行的能力即酶活性。
影响酶活性的因素是多方面的，如温度、pH及某些化学物质等都会影响酶的催化活性。
在一定条件下，能使酶活性达到最高时的温度即酶的最适温度，而能使酶活性达到最高时的PH即酶的最适PH。
动物生物化学实验
动物生物化学实验1. 引言动物生物化学实验是研究动物体内生物分子的组成、结构和功能的重要手段。
通过实验可以深入了解动物体内的代谢过程、蛋白质合成、酶活性以及相关疾病的发生机制等。
本文将介绍一系列常用的动物生物化学实验方法和实验步骤。
2. 蛋白质含量测定实验2.1 实验原理蛋白质含量是衡量细胞或组织中蛋白质水平的重要指标。
常用的蛋白质含量测定方法有Lowry 法、Bradford法和BCA法等。
其中，BCA法是一种基于铜离子和比色反应的测定方法，具有灵敏度高、稳定性好的特点。
2.2 实验步骤•步骤1：制备待测样品。
将待测组织样品加入磷酸缓冲溶液中，用均匀器均匀打碎组织，使得细胞内的蛋白质充分溶解。
•步骤2：制备标准曲线。
选取一系列已知浓度的蛋白质标准品，分别加入不同浓度的BCA试剂，混匀后在37摄氏度下孵育一段时间，最后测定吸光度。
•步骤3：测定待测样品。
将待测样品加入BCA试剂中，混匀后在37摄氏度下孵育一段时间，最后测定吸光度。
•步骤4：计算蛋白质含量。
将待测样品的吸光度值与标准曲线相比较，根据吸光度值的差异计算待测样品中的蛋白质含量。
3. 酶活性测定实验3.1 实验原理酶活性测定是评估酶功能和酶水平的重要方法。
常用的酶活性测定方法有过氧化物酶（POD）活性测定、超氧化物歧化酶（SOD）活性测定和碱性磷酸酶（ALP）活性测定等。
3.2 实验步骤以POD活性测定为例：•步骤1：制备待测样品。
将待测组织样品加入磷酸缓冲液中，通过离心等方法使得细胞内的酶充分溶解。
•步骤2：制备标准曲线。
选取一系列已知浓度的酶标准品，分别加入过氧化氢溶液和柱剂，混匀后在一定时间内测定吸光度。
•步骤3：测定待测样品。
将待测样品加入过氧化氢溶液和柱剂中，混匀后在一定时间内测定吸光度。
•步骤4：计算酶活性。
将待测样品的吸光度值与标准曲线相对比，根据吸光度值的差异计算酶的活性。
4. 代谢产物检测实验4.1 实验原理代谢产物是动物体内代谢过程的关键物质，其含量和比例变化可以反映动物的代谢状态。
动物生物化学实验讲义
实验讲义（霍金龙老师）实验一实验基本知识与基本操作，血液样品的处理及组织匀浆的制备实验二考马斯亮蓝法测定蛋白质含量实验三琥珀酸脱氢酶的作用及其竞争性抑制的观察实验四血液葡萄糖的测定（福林—吴宪氏法）实验五核酸的定量测定（紫外吸收法）实验六全血基因组DNA的提取（离心柱型试剂盒提取法）实验七PCR扩增基因实验八琼脂糖凝胶电泳实验九凝胶层析法分离血红蛋白和胰岛素实验十生物化学实验技术理论讲授核酸蛋白层析分离系统实验工作流程一，准备工作1，核酸蛋白检测仪（紫外检测仪） 1台2，色谱采集器 1套3，自动部分收集器 1台4，恒流泵 1台5, 层析柱 1支6，溶液容器和试剂样品二，开机调试1，核酸蛋白检测仪应提前开机半小时预热，然后按仪器使用说明书来调整仪器的透光度，灵敏度，使其稳定在：“100”或“0”上。
2，设定自动部分收集器收集样品的所需时间。
3，设定恒流泵的所需流量。
三，进行实验前的洗脱工作等仪器都设置完成，检测仪工作稳定后，进行样品池实验冲洗，并调整透过率（T100%）和灵敏度A在0.5上检测仪显示读数为“0”（基线）。
四，数据采集及计算分析把样品加入层析柱进行实验，并连接电脑（或记录仪），打开信号采集器，打开电脑上装入电脑层析的应用软件，并进行记录保存。
然后再对实验所记录的数据进行分析和计算。
以上为一个完整的实验操作过程实验一实验基本知识与操作一.目的1.熟悉实验室规则及常用生化仪器。
2.掌握各种仪器的正规操作。
3.清点洗刷实验用具。
二．实验内容（一）常用生化仪器量器：量筒、容量瓶、吸量管、离心管、微量取液器玻璃仪器容器：烧杯、试管、锥形瓶、滴管仪器：离心机、水浴箱、电泳仪、分光光度计等（二）玻璃仪器的洗涤1、初用的玻璃仪器的清洗：表面附有碱性物质，先用去污粉洗，再用自来水冲洗干净，然后浸于盐酸溶液浸泡过夜，再用自来水反复冲洗干净，最后用蒸馏水冲洗1－2次，80℃烤干备用。
2、使用过的玻璃仪器洗涤（1）一般非计量玻璃仪器或粗容量仪器，如烧杯、试管、量筒等先用肥皂水刷洗，再用自来水冲洗干净，最后用蒸馏水冲洗1－2次，洗净之器皿倒置干净处晾干或烘箱烤干（量筒不可烘烤）。
动物的生物化学实验
结果呈现与解释
将实验结果以图表形式呈现，并结合专业知识对 结果进行解释和讨论。
ABCD
数据处理与分析
运用统计学方法对实验数据进行处理和分析，如 描述性统计、方差分析、回归分析等。
实验报告撰写
按照学术规范撰写实验报告，包括实验目的、方 法、结果、讨论和结论等部分。
05
实验结果分析与解读
数据统计与分析方法
描述性统计
对实验数据进行整理、归类，计算均值、标准差等统计量，以描述数 据的基本特征。
假设检验
通过设定假设、选择适当的检验方法（如t检验、F检验等），判断实 验数据是否存在显著差异。
方差分析
用于分析不同因素对实验结果的影响程度，以及因素间的交互作用。
回归分析
通过建立数学模型，探讨自变量与因变量之间的关系，预测实验结果 。
动物饲养管理
确保动物饲养环境符合标准， 提供充足的食物和水，避免应 激。
实验设计与伦理审查
制定详细的实验计划，并通过 伦理审查确保实验符合相关法 规。
试剂与仪器准备
提前准备好所需试剂和仪器， 确保其质量和性能符合要求。
实验操作规范与技巧
动物麻醉与固定
根据实验需求选择合适的麻醉方法和固 定方式，确保动物在无痛状态下进行实
生物安全研究
动物实验可用于评估生物武器、生物恐怖主义等生物安全威胁的风 险和防范措施。
THANKS
感谢观看
阐明生物小分子代谢途径
分析动物体内糖类、脂类、氨基酸等小分子的代谢过程，揭示其在能量供应、 物质合成与分解等方面的作用。
了解动物生理生化过程
探究动物细胞信号传导机制
通过研究动物细胞内的信号分子、受体、传导通路等，揭示细胞对外界刺激的响 应机制及细胞间的通讯方式。
动物生物化学实验教程正式
动物生物化学实验教程正式实验一血清蛋白质含量测定牛血清蛋白：BSA。
血浆：指血液的液体成分，淡黄色（因含胆红素）。
含白蛋白、球蛋白、纤维蛋白原。
血液经抗凝处理、离心沉淀后，获得的液体部分。
血清：血液凝固后，释出的液体。
不含纤维蛋白原及游离钙离子。
蛋白质定量分析是动物生物化学和其他生命科学研究中经常用到的实验项目。
蛋白质是生物体内最为重要的生物大分子之一，其种类繁多、结构多样、功能各异，而且分子量相差很大，所以很难建立一个理想而通用的蛋白质定量分析方法。
目前测定蛋白质含量的方法很多，常用的测定方法有Folin—酚法（Lowry法）、紫外吸收法、凯氏定氮法、考马斯亮蓝染料结合法等，每种方法在实践中都有其优点和局限性。
本实验采用考马斯亮蓝染料结合法（Bradford法）。
(灵敏度最高)一、实验目的1．掌握分光光度法测定的原理，分光光度计的结构和基本操作要点（光源-单色器-样品室-检测器-显示器）2．掌握考马斯亮蓝染料结合法测定蛋白质含量的原理和操作方法3．掌握微量移液器的使用方法4．了解蛋白质含量测定中标准曲线的制作方法二、实验原理染料考马斯亮蓝G-250（R250，结合后可以解离）在游离状态下呈红色，最大吸收峰为465nm。
它能与蛋白质的疏水微区结合，形成蓝色复合物，该复合物的最大吸收峰为595nm，在一定浓度范围内（为什么在一定范围内），其吸光度值与蛋白质含量成正比，故可用于蛋白质含量的测定。
三、实验操作步骤表1-1考马斯亮蓝染料结合法测定蛋白质含量试管号稀释的血清样品（mL）0.9%NaCl溶液（mL）考马斯亮蓝G-250溶液（mL）空白管-0.15样品管0.1-5室温静置5min，于波长595nm处，以空白管调“0”，测定样品管的吸光度值，查标准曲线，吸光度测定值所对应的蛋白质浓度就是稀释样品的蛋白质含量，然后乘以血清的稀释倍数（10倍），可得血清中蛋白质的含量。
四、实验试剂1．考马斯亮蓝G-250溶液（0.01%）：称取考马斯亮蓝G-250100mg，溶于50mL95%乙醇中，再加入100mL85%(W/V)浓磷酸，然后用蒸馏水定容至1000mL，置棕色瓶过夜（如有不容物，可用二层滤纸过滤）。
动物生物化学实验教程
动物生物化学实验教程胡兰版目录第一章动物生物化学实验常识第一节动物生化实验技术发展简史第二节动物生化实验室常识与规则一、实验室规则二、实验室安全及防护知识第三节生化实验基本操作一、玻璃仪器的洗涤二、刻度吸管的使用三、微量移液器的使用四、试管中液体的混匀法第四节常用实验样品的处理一、血液样品的采集二、血清的制备三、全血及血浆的制备四、无蛋白血滤液的制备五、生物大分子的基本制备技术第五节实验报告的撰写规范一、实验记录二、定性实验报告书写格式三、定量实验报告书写格式第二章常用生化实验技术原理及应用第一节离心技术的原理及应用一、离心技术的基本原理二、离心机的主要类型三、常用的离心分离方法四、离心操作的注意事项第二节光度测定法的原理及应用一、分光光度法的基本原理二、光度法的计算三、使用分光光度计的注意事项四、自动生化分析技术第三节电泳技术的原理及应用一、影响电泳迁移率的因素二、几种常用的电泳法第四节层析技术的原理及应用一、层析技术的常用术语二、层析技术的分类三、常用的层析方法四、柱层析的基本装置五、柱层析的基本操作第五节DNA重组技术一、多聚酶链式反应（PolymeraseChainReaction，PCR）的基本过程二、DNA重组技术（RecombinantDNATechnology）三、DNA重组技术的基本步骤第三章酶学实验内容实验一唾液淀粉酶活性观察实验二转氨酶活性测定——King氏法实验三琥珀酸脱氢酶的作用及竞争性抑制的观察第四章糖类实验内容实验四血糖的测定1.福林一吴宪氏法2.葡萄糖氧化酶法实验五肝糖原的提取和鉴定第五章脂类实验内容实验六血清总脂含量测定（香草醛法）实验七肝组织的生酮作用实验八血清游离脂肪酸测定（一次提取比色法）实验九血清总胆固醇测定（胆固醇氧化酶法）第六章蛋白质实验内容实验十醋酸纤维薄膜电泳法分离血清蛋白质实验十一蛋白质的含量测定Ⅰ.双缩脲法Ⅱ.Folin-酚试剂法Ⅲ.紫外光吸收法Ⅳ.考马斯亮蓝结合法实验十二血清尿素氮（BUN）的测定（二乙酰一肟法）实验十三氨基酸纸上层析第七章核酸实验内容实验十四动物组织DNA提取实验十五DNA的定量测定（二苯胺法）实验十六动物肝脏总RNA的制备实验十七RNA的定量测定（地衣酚法）实验十八紫外吸收法测定核酸的含量第八章维生素实验内容实验十九维生素B2的定量测定（荧光法）第九章综合性实验内容附录参考文献。
(整理)动物生物化学实验指导
动物生物化学实验指导（修订版）武汉工业学院生物化学实验室规则1．每个同学都应该自觉遵守课堂纪律，维护课堂秩序，不迟到，不早退，不大声谈笑。
2．实验前必须认真预习，熟悉本次实验的目的、原理、操作步骤，懂得每一操作步骤的意义和了解所用仪器的使用方法，否则不能开始实验。
3．实验过程中要听从教师的指导，严肃认真地按操作规程进行实验，并把实验结果和数据及时、如实记录在实验记录本上，文字要简练、准确。
完成实验后经教师检查同意，方可离开实验室。
4．实验台面应随时保持整洁，仪器、药品摆放整齐。
公用试剂用完后，应立即盖严放回原处。
勿使试剂、药品洒在实验台面和地上。
实验完毕，仪器洗净放好，将实验台面抹拭干净，才能离开实验室。
5．使用仪器、药品、试剂和各物品必须注意节约。
洗涤和使用仪器时，应小心仔细，防止损坏仪器。
使用贵重精密仪器时，应严格遵守操作规程，发现故障须立即报告教师，不得擅自动手检修。
6．实验室内严禁吸烟！加热用的电炉应随用随关，严格做到：人在炉火在，人走炉火关。
乙醇、丙酮、乙醚等易燃品不能直接加热，并要远离火源操作和放置。
实验完毕，应立即拨去电炉开关和关好水笼头，拉下电闸。
离开实验室以前应认真、负责地进行检查水电，严防发生安全事故。
7．废液体可倒入水槽内，同时放水冲走。
强酸、强碱溶液必须先用水稀释。
废纸屑及其他固体废物和带渣滓的废物倒入废品缸内；不能倒入水槽或到处乱扔。
8．要精心使用和爱护仪器，如使用分光光度计时，不能将比色杯直接置于分光光度计上，并注意拿放比色杯时，不要打碎。
仪器损坏时，应如实向教师报告，并填写损坏仪器登记表，然后补领。
9．实验室内一切物品，未经本室负责教师批准，严禁带出室外，借物必须办理登记手续。
实验一唾液淀粉酶活性的观察原理酶是指化学本质为大分子的生物催化剂。
在一定条件下，酶促化学反应进行的能力即酶活性。
影响酶活性的因素是多方面的，如温度、pH及某些化学物质等都会影响酶的催化活性。
在一定条件下，能使酶活性达到最高时的温度即酶的最适温度，而能使酶活性达到最高时的PH即酶的最适PH。
动物生物化学教学教案
氨基酸缺乏 对动物生长 发育的影响
分析氨基酸缺乏 对动物生长发育 过程的影响和机
制
氨基9酸1在%动
物体内的代 谢途径
描述氨基酸在生 物体内的代谢途 径和相关生理功
能
蛋白质调控机制
蛋白质的合成和降解在机体内保持平衡，受到多 种调控因子的调节。了解蛋白质合成调控中的关 键因子和蛋白质代谢异常的治疗策略对于预防和 治疗相关疾病具有重要意义。进一步研究蛋白质 调控机制有助于揭示相关疾病发生发展的分子机 制。
生长发育 代谢平衡
91%
实验结果展示
01 葡萄糖
最常见的单糖
02 果糖
水果中的天然糖类
03 蔗糖
甜味剂
● 03
第3章 脂质代谢
脂质代谢概述
脂质是生物体内一类 重要的有机化合物， 包括脂肪、甘油和脂 蛋白。在动物体内， 脂质具有多种重要功 能，参与细胞膜的构 建、激素合成和能量 储存等代谢途径。
● 05
第5章 实验设计与数据分析
实验设计原则
在动物生物化学实验 中，实验设计的关键 在于明确实验目的的 具体性和操作性。另 外，需要严格控制实 验条件，确保实验结 果的可靠性和可重复 性，从而有效保障实 验的科学性和准确性。
数据处理方法
统计分析软 件的应用
数据分析工具
实验结果的 可视化呈现
动物生物化学教学教案
汇报人：XX
2024年X月
目录
第1章 概述动物生物化学教学教案 第2章 糖代谢 第3章 脂质代谢 第4章 蛋白质代谢 第5章 实验设计与数据分析 第6章 总结与展望 第7章 动物生物化学教学教案
● 01
第1章 概述动物生物化学教 学教案
介绍
动物生物化学教学教 案是指在教学过程中， 通过理论课教学和实 验教学，深入探讨动 物体内生物化学过程 的原理和机制。这对 于学生全面了解动物 生物学起着关键作用。
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动物生物化学实验指导（修订版）武汉工业学院生物化学实验室规则1．每个同学都应该自觉遵守课堂纪律，维护课堂秩序，不迟到，不早退，不大声谈笑。
2．实验前必须认真预习，熟悉本次实验的目的、原理、操作步骤，懂得每一操作步骤的意义和了解所用仪器的使用方法，否则不能开始实验。
3．实验过程中要听从教师的指导，严肃认真地按操作规程进行实验，并把实验结果和数据及时、如实记录在实验记录本上，文字要简练、准确。
完成实验后经教师检查同意，方可离开实验室。
4．实验台面应随时保持整洁，仪器、药品摆放整齐。
公用试剂用完后，应立即盖严放回原处。
勿使试剂、药品洒在实验台面和地上。
实验完毕，仪器洗净放好，将实验台面抹拭干净，才能离开实验室。
5．使用仪器、药品、试剂和各物品必须注意节约。
洗涤和使用仪器时，应小心仔细，防止损坏仪器。
使用贵重精密仪器时，应严格遵守操作规程，发现故障须立即报告教师，不得擅自动手检修。
6．实验室内严禁吸烟！加热用的电炉应随用随关，严格做到：人在炉火在，人走炉火关。
乙醇、丙酮、乙醚等易燃品不能直接加热，并要远离火源操作和放置。
实验完毕，应立即拨去电炉开关和关好水笼头，拉下电闸。
离开实验室以前应认真、负责地进行检查水电，严防发生安全事故。
7．废液体可倒入水槽内，同时放水冲走。
强酸、强碱溶液必须先用水稀释。
废纸屑及其他固体废物和带渣滓的废物倒入废品缸内；不能倒入水槽或到处乱扔。
8．要精心使用和爱护仪器，如使用分光光度计时，不能将比色杯直接置于分光光度计上，并注意拿放比色杯时，不要打碎。
仪器损坏时，应如实向教师报告，并填写损坏仪器登记表，然后补领。
9．实验室内一切物品，未经本室负责教师批准，严禁带出室外，借物必须办理登记手续。
实验一唾液淀粉酶活性的观察原理酶是指化学本质为大分子的生物催化剂。
在一定条件下，酶促化学反应进行的能力即酶活性。
影响酶活性的因素是多方面的，如温度、pH及某些化学物质等都会影响酶的催化活性。
在一定条件下，能使酶活性达到最高时的温度即酶的最适温度，而能使酶活性达到最高时的PH即酶的最适PH。
例如，唾液淀粉酶的最适温度是37℃，而其最适PH是6.8。
能增高酶活性的物质称为酶的激活剂，能降低酶活性却又不使酶变性的物质叫酶的抑制剂。
凡能使蛋白质变性的因素都可以使酶因变性而丧失活性。
酶活性通常是通过测定酶促化学反应的底物或产物量的变化来进行观察的。
本实验用唾液淀粉酶为材料来观察酶活性受理化因素影响的情况，唾液中含有唾液淀粉酶，唾液淀粉酶的底物是淀粉。
淀粉在该酶的催化作用下会随着时间的延长而出现不同程度的水解，从而得到各种糊精乃至麦芽糖、少量葡萄糖等水解产物。
而碘液能指示淀粉的水解程度——淀粉遇碘呈紫色、暗褐色与红色，而麦芽糖与葡萄糖遇碘则不呈颜色反应，如图所示：淀粉淀粉酶糊精淀粉酶麦芽糖+少量葡萄糖加碘后：（蓝色）（紫红色、暗褐色或红色等）（棕黄色、碘本身颜色）试剂及器材：1.试剂（1）0.5%（w/v）淀粉溶液：称取0.5g可溶性淀粉，加少量预冷的蒸馏水，在研钵中调成糊状，再徐徐倒入约90mL沸水，同时不断搅拌，最后加水定容为100mL即成。
要求新鲜配制。
（2）稀碘溶液：称取1.2g I2、2g KI，加少量蒸馏水溶解后，再加蒸馏水至200mL。
保存于棕色瓶中，用前5倍稀释。
（3）不同pH溶液：A液----0.2mol/L Na2HPO4溶液：称取35.62g Na2HPO4.12H2O，将之溶于蒸馏水后定容至1000Ml。
B液----0.1mol/L柠檬酸溶液：称取19.212g无水柠檬酸，将之溶于蒸馏水后定容至1000Ml。
①pH5.0缓冲液----取A液10.3ml、B液9.7mL混合而成。
②pH6.8缓冲液----取A液14.55ml、B液5.45mL混合而成。
③PH8.0缓冲液----取A液19.45ml、B液0.55mL混合而成。
配好缓冲液后应用酸度计验证。
（4）0.5%（w/v）蔗糖溶液：称取蔗糖0.5g，将之溶于蒸馏水后定容至100mL。
（5）斑氏试剂：A液-----称取无水CuSO417.4g，将之溶于100mL预热的蒸馏水中，冷却后用蒸馏水稀释至150ml。
B液-----称取柠檬酸钠173g、Na2CO3100g，再加蒸馏水600mL，加热溶解后冷却，用蒸馏水稀释至850mL。
将A液与B液混合即得斑氏试剂。
（6）1%（w/v）NaCl溶液：称取NaCl 1g，将之溶解后用蒸馏水稀释至100mL。
（7）1%（w/v）CuSO4溶液：称取无水CuSO41g，将之溶解后用蒸馏水稀释至100Ml。
2.器材（1）白瓷板（或比色板）（2）恒温水浴锅（3）电炉操作1、唾液淀粉酶应用液的制备（1）每人取一个干净的饮水杯，装上蒸馏水。
（2）先用蒸馏水漱口，将口腔的食物残渣清除干净。
（3）口含约20mL蒸馏水，做咀嚼动作1-2分钟，以分泌较多的唾液。
然后将口腔中的唾液吐入一个干净的小烧杯中。
（4）取一块干净的白瓷板，按表1-1进行实验。
以呈棕红色者浓度为准，稀释原唾液作应用液。
2、温度对酶活性的影响（1）取3支试管，按表1-2进行实验。
将各管中的试剂加好后混匀，然后及时在上述温度下分别进行处理。
（1）在干净的比色板上，于各孔穴中分别滴加2滴碘液。
（2）每隔1分钟从第2支试管取反应液1滴，与比色板孔穴中的碘液混合，观察颜色的变化。
（3）待第2支试管中的反应液与比色板孔穴中的碘液混合后颜色不再变化时，取出试管，并将在沸水浴中处理的试管用冷水冷却，然后向各试管中滴加碘液1-3滴。
摇匀后观察并记录各管颜色，比较各管中淀粉水解的程度，说明温度对酶活性的影响。
3、pH对酶活性的影响（1）取3支试管，按表1-3编号后进行实验。
表1-3摇匀后，将各管置于37℃水浴中处理。
（2）每隔1分钟从pH6.8的试管中取出1滴反应液滴于白瓷板上，随后滴加稀碘液1滴，观察其颜色变化。
（3）待颜色呈棕色时，向各管中加稀碘液1-3滴。
观察各管颜色，比较各管中淀粉水解的程度，解释pH对酶活性的影响。
4、酶反应的特异性（1）取2支试管，按表1-4编号后进行实验。
表1-4（2）摇匀后，将各管置于37℃水浴中处理10min。
（3）取出试管，分别加入斑氏试剂2mL，混匀。
（4）将各管置于沸水浴煮沸2-5min。
观察并解释结果。
5、激活剂与抑制剂对酶活性的影响（2）每隔1分钟从第1支试管中取出1滴反应液滴于白瓷板上，随后滴加稀碘液1滴，观察其颜色变化。
（3）待颜色呈棕色时，取出3支试管，向各管中加稀碘液1-3滴。
观察各管颜色，并解释之。
实验二 血清总蛋白的含量测定原理本法所用试剂因能与双缩脲(H 2NOC －NH-CONH 2)产生紫红色反应而被称为双缩脲试剂。
实际上凡分子内含有两个氨基甲酰基(-CONH 2)的化合物，不论是直接相连或是通过一个氮或碳原于间接连接，均能与双缩脲试剂发生反应。
蛋白质分子内含有许多肽键(—CONH —)，因此可用双缩脲法作比色测定。
不含—CONH 2，但含有-CSNH 2、-C(NH)NH 2或—CH 2NH 2等基团而具类似结构的化合物对双缩脲试验亦呈阳性，所以本反应并非为蛋白质所特有。
但在体液中，除蛋白质外实际上不存在可与双缩脲试剂显色的物质。
各种血浆蛋白质，包括病理的和正常的，呈色的程度基本相同，因此在血浆蛋白的比色测定中，双缩脲反应是较为理想的方法。
紫红色铜双缩脲复合物分子结构为：试剂和器材一、试剂 双缩脲试剂：称取硫酸铜(CuSO 4·5H 2O ，A ．R ．或C ．P ．)1．50g 、酒石酸钾钠(NaKC 4H 406·4H 2O ， A ．R ．或C ．P ．)6.0g ，分别用蒸馏水约250ml 溶解后，全部转移于1L 容量瓶中，混和，再加入10％氢氧化钠溶液300ml ，随加随摇匀。
最后用蒸馏水稀释至1L 。
保存于塑料试剂瓶中或内壁涂一层纯净石蜡的普通试剂瓶中。
如无红色或黑色沉淀出现，此试剂可长期使用。
二、标准和待测蛋白质溶液1.标准蛋白溶液10mg/ml牛血清白蛋白溶液或相同浓度的酪蛋白溶液（用0.05mol/L氢氧化钠溶液配制）。
作为标准用的蛋白质要预先用微量克氏定氮法测定蛋白质含量，根据其纯度称量，配制成标准溶液。
2.待测蛋白质溶液血清（稀释10倍）。
测试其他蛋白质样品应稀释适当倍数，使其浓度在标准曲线测试范围内。
三、器材试管，试管架，恒温水浴，721型分光光度计。
操作方法1、取7只试管，按下表加入试剂：管号0 1 2 3 4 5 6酪蛋白标准液/ml 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 -蛋白浓度/(mg/ml) 2.0 4.0 6.0 8.0 10.0 -未知样品液（ml）- - - - - 1.0蒸馏水/ml 1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 0.0 -双缩脲试剂/ml 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 4.02、摇匀，室温（15－25℃）下，放置30min。
3、以0管调零，在540nm波长处将各管溶液进行比色，读取各管光密度值（重复三次）。
4、取测定的A540值的平均值，即A540为纵坐标，蛋白质浓度为横坐标，绘制标准曲线。
5、6号管从标准曲线上查出待测样品蛋白质含量，即为样品液的蛋白质含量（mg/ml）。
注意事项（1）本实验方法测定范围1－10mg蛋白质。
（2）须于显色后30min内比色测定。
30min后，可有雾状沉淀发生。
各管由显色到比色的时间应尽可能一致。
（3）有大量脂肪性物质同时存在时，会产生浑浊的反应混合物，这时可用乙醇或石油醚使溶液澄清后离心，取上清液再测定。
实验三氨基酸的纸上层析与氨基酸移换作用原理层析分离技术是一种物理的分离法。
利用待分析混合物中各组分的物理化学性质（如吸附力、分子形状和大小、分子极性、分子亲和力、分配系数等）的差别，使各组分以不同程度分布在两相中。
所谓“相”是指一个系统中的某一均匀部分。
一般来说，其中一相是固定的，称为固定相，另一相是流动的液体或气体，称为流动相，两相互相接触。
待分析混合物的各组分以不同的速度移动，从而分离。
纸上层析是以滤纸作为支持物，滤纸总保持一些水分（约20～30％），使水称为层析中的“固定相”。
另一种和固定相不能混合或部分混合的溶剂则为“移动相”。
把欲分离的物质加在纸的一端，并使流动相借重力及滤纸的毛细现象移动，此时，待分离溶质因分配系数不同而逐渐分布于滤纸的不同部位。
层析结束时，用显色剂使被分离的物质显出颜色，成为一个个色斑。
分配在固定相中趋势较大的成分在纸上随流动相移行的速度就小，色斑距原点的位置就较近。
反之，分配在固定相内趋势较小的成分移行就远，色斑位置离原点也远。
溶质在纸上的移动速率可用比移（Rf）表示之。
各种氨基酸在一定的溶剂、一定的纸质及其他有关条件（湿度、PH等）固定情况下，各有其特有的，不变的Rf值。