动物生物化学实验
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一、实验室规则
1. 实验前认真预习实验内容。 2. 实验时遵守课堂纪律，不大声喧哗。 3. 严格按操作规程操作。 4. 爱护实验室各种器具及仪器设备，如有损坏，及时报告，
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采用修正法消除系统误差
预先将仪器的系统误差检定出来或计算出来，做出误差
表或误差曲线，然后取与误差数值大小相同、符号相反的 值作为修正值，进行误差修正。
即：x真=x测+x修
如天平砝码不准，应采用标准砝码进行校核，确定每个砝码的修 正值。在称量时就应加上相应砝码的修正值，容量瓶、滴定管、移液 管等容量仪器均可用水重量法求出各自的修正值。
ra v=( r min＋rmax) / 2
Rmin
r的测量
旋转轴
Rave
Rmax
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离心机的主要类型
离心机可分为工业用离心机和实验用离心机
实验用离心机又分为：
制备型离心机：主要用于分离各种生物材料，每次分离 的样品容量比较大.
分析型离心机：一般都带有光学系统，主要用于研究纯的 生物大分子和颗粒的理化性质，依据待测物质在离心场中 的行为（用离心机中的光学系统连续监测），能推断物质 的纯度、形状和分子量等。 分析性离心机都是超速离心机 。
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2. 准确称量、量取
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3. 溶解
4. 定容
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四、实验误差与克服
由于外界条件的影响、仪器的优劣以及感觉器官的限
制，实验测得的数据只能达到一定的准确度。
实验测得的数据与真实值之间的差就是实验误差
实验误差一般可分为系统误差、偶然误差和过失误差
。
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系统误差
在相同条件下多次测量同一物理量时，测量误差的大小 和符号都不变；在改变测量条件时，它又按照某一确定规 律而变化的测量误差称为系统误差。
球重力的倍数，单位是重力加速度“g” （980cm/sec2），
相对离心力RCF可用下式计算：
RCF = 1.119×10－5×(rpm)2 r
( rpm — revolutions per minute每分钟转数，r/min )
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由上式可见，只要给出旋转半径r，则RCF和rpm之间 可以相互换算。但是由于转头的形状及结构的差异，使每台离 心机的离心管，从管口至管底的各点与旋转轴之间的距离是不 一样的，所以在计算时规定旋转半径均用平均半径“ra v”代 替：
离心技术主要用于各种生物样品的分离和制备。 生物样品悬浮液在高速旋转下，由于巨大的离心力作用 ，使悬浮的微小颗粒（细胞器、生物大分子的沉淀等）以一 定的速度沉降，从而与溶液得以分离，而沉降速度取决于颗 粒的质量、大小和密度。
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离心的基本原理
离心力：当一个粒子（生物大分子或细胞器）在高速旋
转下受到离心力作用时，此离心力“F”由下式定义，即：
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（3）电热恒温水浴锅
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三、试剂配制
1.确定所配试剂浓度
重量浓度：单位体积中所含溶质的重量。表示为克/升（g/L）
，或毫克/升（mg/L），微克/升（ug/L）
百分浓度：%，需注明W/W, W/V, V/V
摩尔浓度：每升溶液中所含溶质的摩尔数。mol/L, mmol/L,
umol/L
并按规定赔偿。 5. 公用试剂用后放回原处，瓶盖随开随盖防止污染。 6. 注意安全，不得将易燃试剂接近火焰，严禁用口吸取有毒
药品和试剂，凡发生烟雾，有毒气体和不良气味的实验应在 通风橱内进行。 7. 保持实验室整洁，每次实验毕，由三个组同学打扫及整理 实验室。
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二、实验室常用量器及仪器设备介绍 1. 常用量器
（1）容量瓶 凡要求准确（0.01)配制一
定浓度的溶液时，必须使用容 量瓶。
以容量瓶配制试剂时的操作
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（2）刻度吸管
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（3）移液器
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2.常用仪器设备
（1）离心机 承载离心管，并以离心力使管
内物质沉降进而造成固体和液体分 离的机具。
高速冷冻离心机
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离心技术简介
离心技术在生物科学，特别是在生物化学和分子生物 学研究领域，已得到十分广泛的应用，每个生物化学和分子 生物学实验室都要装备多种型出现的系统误差大小相
等、符号相反。两次测量值的平均值作为测量结果，以 消除系统误差。 例如，由于仪器灵敏度的限制，测量仪器的旋钮由右 边调近测量值与由左边调近测量值的结果往往不同。这 时，可取两个读数的平均值作为测量值。
系统误差的消除很难找到一个普遍有效的方法。这 是因为造成系统误差的各个因素，没有内在的联系。要 克服它们，只能具体问题具体分析。
最大可达510000×g，最著名的生产厂商有美国的贝克
曼公司和日本的日立公司等，离心容量由几十毫升至2
升
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超速离心 机
（2）分光光度计
分光光度计是现代生化及 分子生物学实验室常规仪器 。常用于核酸，蛋白定量以 及细菌生长浓度的定量。
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基本原理
溶液中的物质在光的照射下，产生了对光吸收的 效应，物质对光的吸收是具有选择性的。各种不同的 物质都具有其各自的吸收光谱，因此当某单色光通过 溶液时，其能量就会被吸收而减弱，光能量减弱的程 度和物质的浓度有一定的比例关系，也即符合比色原 理——兰伯特-比耳定律
动物生物化学实验
2020年5月22日星期五
动物生物化学实验
实验一 实验室基本知识 实验二 氨基酸纸层析 实验三 血清蛋白含量测定 实验四 影响酶活性的因素 实验五 脂质的薄层层析 实验六 凝胶层析法基本练习 实验七 血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳 实验八 动物组织中DNA提取
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实验一 实验室基本知识
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实验记录
准备一本正规的笔记本作为实验记录本。 将实验条件下观察到的现象仔细地记录下来。 将实验中观测的每个结果和数据及时如实地记录。 实验中使用仪器的类型、编号以及试剂的规格、化学式
、分子量、准确的浓度等，也应记录清楚。
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工业离心机：主要用于工业上的分离。
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制备性离心机可分为三类：
普通离心机：最大转速6000 rpm左右，最大相对离心力近 6000×g，容量为几十毫升至几升，
高速冷冻离心机：最大转速为20000～25000rpm（ r/min），最大相对离心力为89000×g，最大容量可达 3升，
超速离心机：转速可达50000～80000 rpm，相对离心力
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（三）实验室急救
1. 触电 2. 玻璃割伤及其他机械损伤 3. 烫伤 4. 化学试剂灼伤 5. 汞中毒
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六、实验记录及实验报告
每次实验要做到课前认真预习，实验 操作中仔细观察并如实记录实验现象与数 据，课后及时完成实验报告。
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课前预习
实验课前要将实验名称、目的和要 求、实验内容与原理、操作方法和步骤 等简单扼要地写在记录本中，做到心中 有数。
系统误差的特点：
和偶然误差不同，它不具有抵偿性，即在相同条件下重 复多次测量，系统误差无法相互抵消。
产生系统误差的诸因素是可以被发现和加以克服的。
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系统误差的减小和消除
消除产生系统误差的根源 从产生误差的根源上消除系统误差是最根本的方法。通
过对测量过程中可能产生系统误差的各种环节作仔细分析 ，找出原因并在测量前加以消除。 如果系统误差是由外界条件变化引起的，应在外界条件 比较稳定时进行测量。
差可采取多次测量，取平均值的办法来消除，而且测量 次数越多（在没有系统误差存在的情况下），平均值就 接近于"真值"。
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五、实验室安全知识简介
（一）实验室安全
1. 安全用电 2. 水火无情 3. 严防中毒
4. 避免伤害 5. 生物危害 6. 射线伤害
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（二）实验室灭火
1. 切断室内所有电源，火源 2. 报警 3. 导线着火时，切断电源或使用四氯化碳灭火器，不 能用水及二氧化碳灭火器，以免触电 4. 可燃性液体着火时，可用湿布或沙土覆盖，隔绝空 气灭火。不能用水灭火，这样会扩大燃烧面积。 5. 金属钠着火时可用砂子覆盖 6. 衣服着火切忌奔走，应卧地滚动灭火。
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偶然误差
在实验时即使采用了最完善的仪器、选择了最恰当的方 法、经过了十分精细的观测，所测得的数据也不可能每次 重复，这样的误差即为偶然误差
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偶然误差的克服
偶然误差是由于相互制约、相互作用的一些偶然因 素所造成的，它有时大、有时小、有时正、有时负，方 向不一定，大小和符号一般服从正态分布规律。偶然误
F = m·a =m.V2/r= m·ω2 r
a — 粒子旋转的加速度， m — 沉降粒子的有效质量， ω—粒子旋转的角速度， r—粒子的旋转半径( cm )。
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相对离心力： 离心力常用地球引力的倍数来表示，因而称为
相对离心力 “ RCF ”。或者用数字乘“g”来表示。 相对离心力是指在离心场中，作用于颗粒的离心力相当于地
动物生物化学实验河南科技大学
凡盐析产品所获得的粗蛋白质中均含有硫酸铵等盐类，这些将影响以后的纯化，所以纯化前均应除去，此过程称为“脱盐”。
脱盐常用透析法和凝胶过滤法。
前者透析后样品的终体积较小，所需时间较长，盐不易除尽。
常用的办法是透析，即把蛋白质溶液装入秀析袋内（常用的是玻璃纸），用缓冲液进行透析，并不断的更换缓冲液，因透析所需时间较长，所以最好在低温中进行。
此外也可用葡萄糖凝胶G-25或G-50过柱的办法除盐，所用的时间就比较短。
试剂与器材(1)奈氏（Nessler）试剂：于500ml锥形瓶内加入碘化钾150g，碘110g，汞150g及蒸馏水100ml。
用力振荡7－15分钟，至碘的棕色开始转变时，混合液温度升高，将此瓶侵入冷水内继续振荡，直到棕色的碘转变为绿色的碘化钾汞液为止。
将上清液2000ml量筒内，加蒸馏水至2000ml，混均备用。
应用时取母液150ml，加10％氢氧化钠溶液700ml。
蒸馏水150ml，混均即可。
若发生混浊，可静置1日，取上清液使用。
（2）20％（W/V）磺基水杨酸溶液（3）白比色磁盘。
操作（1）透析袋准备：商品透析袋制成管状，其扁平宽度为23 mm～50 mm不等。
为防干裂，出厂时都用10％的甘油处理过，并含有极微量的硫化物、重金属和一些具有紫外吸收的杂质，它们对蛋白质和其它生物活性物质有害，用前必须除去。
可先用50％乙醇煮沸1小时，再依次用50％乙醇、0.01 mol/L碳酸氢钠和0.001 mol/L EDTA溶液洗涤，最后用蒸馏水冲洗即可使用。
实验证明，50％乙醇处理对除去具有紫外吸收的杂质特别有效。
使用后的透析袋洗净后可存于4℃蒸馏水中，若长时间不用，可加少量NaN2，以防长菌。
洗净凉干的透析袋弯折时易裂口，用时必须仔细检查，不漏时方可重复使用。
新透析袋如不作如上的特殊处理，则可用沸水煮五至十分钟，再用蒸馏水洗净，即可使用。
使用时，一端用橡皮筋或线绳扎紧，也可以使用特制的透析袋夹夹紧，由另一端灌满水，用手指稍加压，检查不漏，方可装入待透析液，通常要留三分之一至一半的空间，以防透析过程中，透析的小分子量较大时，袋外的水和缓冲液过量进入袋内将袋涨破。
动物生化实验报告
一、实验目的1. 掌握动物生化实验的基本操作方法。
2. 了解动物生化实验中常用的实验原理和实验技术。
3. 通过实验，熟悉动物生化指标的正常范围及其临床意义。
二、实验原理动物生化实验是研究动物生理、病理和生物化学变化的重要手段。
通过检测动物体内的生化指标，可以了解动物的营养状况、生长发育、健康状况等。
本实验主要检测以下指标：1. 血清总蛋白（TP）：反映机体蛋白质代谢和营养状况。
2. 白蛋白（ALB）：反映肝脏合成蛋白质的能力。
3. 球蛋白（GLB）：反映机体免疫功能。
4. 谷丙转氨酶（ALT）：反映肝细胞损伤程度。
5. 谷草转氨酶（AST）：反映肝细胞损伤程度。
6. 肌酸激酶（CK）：反映肌肉损伤程度。
三、实验材料与试剂1. 实验动物：小鼠2. 仪器：离心机、酶标仪、电热恒温水浴锅等3. 试剂：血清总蛋白、白蛋白、球蛋白、ALT、AST、CK试剂盒，EDTA-Na2、肝素钠、生理盐水等四、实验步骤1. 实验动物处死，取血液样本。
2. 将血液样本加入EDTA-Na2或肝素钠抗凝剂，混匀后离心分离血清。
3. 按照试剂盒说明书，分别测定血清总蛋白、白蛋白、球蛋白、ALT、AST、CK含量。
五、实验结果与分析1. 血清总蛋白（TP）：正常范围为60-80g/L，本实验小鼠血清总蛋白含量为70g/L，处于正常范围内。
2. 白蛋白（ALB）：正常范围为35-55g/L，本实验小鼠白蛋白含量为45g/L，处于正常范围内。
3. 球蛋白（GLB）：正常范围为20-30g/L，本实验小鼠球蛋白含量为25g/L，处于正常范围内。
4. 谷丙转氨酶（ALT）：正常范围为5-40U/L，本实验小鼠ALT含量为20U/L，处于正常范围内。
5. 谷草转氨酶（AST）：正常范围为8-40U/L，本实验小鼠AST含量为15U/L，处于正常范围内。
6. 肌酸激酶（CK）：正常范围为30-200U/L，本实验小鼠CK含量为100U/L，处于正常范围内。
动物生化学实训报告总结
一、实训背景动物生化学作为生命科学的一个重要分支，主要研究动物体内的生物化学过程及其调控机制。
为了加深对动物生化学理论知识的理解，提高实验技能，我们开展了为期两周的动物生化学实训。
本次实训旨在通过实验操作，掌握动物生化学的基本实验方法，了解动物体内重要的生物化学过程，并培养科学实验的基本素养。
二、实训内容1. 实验一：动物组织样品的制备（1）实验目的：学习动物组织样品的制备方法，掌握组织匀浆的制备技术。
（2）实验原理：通过物理或化学方法破坏细胞结构，使细胞内物质释放出来，形成匀浆。
（3）实验步骤：取新鲜动物组织，加入生理盐水，使用组织匀浆器进行匀浆处理，过滤后得到组织匀浆。
2. 实验二：蛋白质的定量测定（1）实验目的：学习蛋白质定量测定方法，掌握双缩脲法测定蛋白质含量的原理和操作。
（2）实验原理：蛋白质分子中含有肽键，与双缩脲试剂作用产生紫色反应，其颜色深浅与蛋白质含量成正比。
（3）实验步骤：取组织匀浆，加入双缩脲试剂，观察颜色变化，通过比色法测定蛋白质含量。
3. 实验三：氨基酸的分离与鉴定（1）实验目的：学习氨基酸的分离与鉴定方法，掌握薄层层析技术。
（2）实验原理：氨基酸分子在薄层色谱上的迁移速度不同，通过比移值（Rf值）进行鉴定。
（3）实验步骤：取组织匀浆，进行氨基酸提取，点样于薄层板上，用正己烷-醋酸乙酯-氨水溶液进行展开，观察氨基酸斑点。
4. 实验四：酶活性测定（1）实验目的：学习酶活性测定方法，掌握紫外分光光度法测定酶活性的原理和操作。
（2）实验原理：酶催化反应过程中，底物浓度随时间变化，通过测定反应体系中特定波长处的吸光度变化，计算酶活性。
（3）实验步骤：取组织匀浆，加入底物，在特定波长下测定吸光度，根据吸光度变化计算酶活性。
三、实训总结1. 实验技能方面通过本次实训，我们掌握了动物组织样品的制备、蛋白质定量测定、氨基酸分离与鉴定、酶活性测定等实验操作，提高了实验技能。
2. 理论知识方面在实训过程中，我们深入理解了动物生化学的基本理论，如蛋白质、氨基酸、酶等生物大分子的结构和功能，为今后的学习和研究打下了基础。
动物生物化学实验
动物生物化学实验1. 引言动物生物化学实验是研究动物体内生物分子的组成、结构和功能的重要手段。
通过实验可以深入了解动物体内的代谢过程、蛋白质合成、酶活性以及相关疾病的发生机制等。
本文将介绍一系列常用的动物生物化学实验方法和实验步骤。
2. 蛋白质含量测定实验2.1 实验原理蛋白质含量是衡量细胞或组织中蛋白质水平的重要指标。
常用的蛋白质含量测定方法有Lowry 法、Bradford法和BCA法等。
其中，BCA法是一种基于铜离子和比色反应的测定方法，具有灵敏度高、稳定性好的特点。
2.2 实验步骤•步骤1：制备待测样品。
将待测组织样品加入磷酸缓冲溶液中，用均匀器均匀打碎组织，使得细胞内的蛋白质充分溶解。
•步骤2：制备标准曲线。
选取一系列已知浓度的蛋白质标准品，分别加入不同浓度的BCA试剂，混匀后在37摄氏度下孵育一段时间，最后测定吸光度。
•步骤3：测定待测样品。
将待测样品加入BCA试剂中，混匀后在37摄氏度下孵育一段时间，最后测定吸光度。
•步骤4：计算蛋白质含量。
将待测样品的吸光度值与标准曲线相比较，根据吸光度值的差异计算待测样品中的蛋白质含量。
3. 酶活性测定实验3.1 实验原理酶活性测定是评估酶功能和酶水平的重要方法。
常用的酶活性测定方法有过氧化物酶（POD）活性测定、超氧化物歧化酶（SOD）活性测定和碱性磷酸酶（ALP）活性测定等。
3.2 实验步骤以POD活性测定为例：•步骤1：制备待测样品。
将待测组织样品加入磷酸缓冲液中，通过离心等方法使得细胞内的酶充分溶解。
•步骤2：制备标准曲线。
选取一系列已知浓度的酶标准品，分别加入过氧化氢溶液和柱剂，混匀后在一定时间内测定吸光度。
•步骤3：测定待测样品。
将待测样品加入过氧化氢溶液和柱剂中，混匀后在一定时间内测定吸光度。
•步骤4：计算酶活性。
将待测样品的吸光度值与标准曲线相对比，根据吸光度值的差异计算酶的活性。
4. 代谢产物检测实验4.1 实验原理代谢产物是动物体内代谢过程的关键物质，其含量和比例变化可以反映动物的代谢状态。
动物生物化学实验讲义
实验讲义（霍金龙老师）实验一实验基本知识与基本操作，血液样品的处理及组织匀浆的制备实验二考马斯亮蓝法测定蛋白质含量实验三琥珀酸脱氢酶的作用及其竞争性抑制的观察实验四血液葡萄糖的测定（福林—吴宪氏法）实验五核酸的定量测定（紫外吸收法）实验六全血基因组DNA的提取（离心柱型试剂盒提取法）实验七PCR扩增基因实验八琼脂糖凝胶电泳实验九凝胶层析法分离血红蛋白和胰岛素实验十生物化学实验技术理论讲授核酸蛋白层析分离系统实验工作流程一，准备工作1，核酸蛋白检测仪（紫外检测仪） 1台2，色谱采集器 1套3，自动部分收集器 1台4，恒流泵 1台5, 层析柱 1支6，溶液容器和试剂样品二，开机调试1，核酸蛋白检测仪应提前开机半小时预热，然后按仪器使用说明书来调整仪器的透光度，灵敏度，使其稳定在：“100”或“0”上。
2，设定自动部分收集器收集样品的所需时间。
3，设定恒流泵的所需流量。
三，进行实验前的洗脱工作等仪器都设置完成，检测仪工作稳定后，进行样品池实验冲洗，并调整透过率（T100%）和灵敏度A在0.5上检测仪显示读数为“0”（基线）。
四，数据采集及计算分析把样品加入层析柱进行实验，并连接电脑（或记录仪），打开信号采集器，打开电脑上装入电脑层析的应用软件，并进行记录保存。
然后再对实验所记录的数据进行分析和计算。
以上为一个完整的实验操作过程实验一实验基本知识与操作一.目的1.熟悉实验室规则及常用生化仪器。
2.掌握各种仪器的正规操作。
3.清点洗刷实验用具。
二．实验内容（一）常用生化仪器量器：量筒、容量瓶、吸量管、离心管、微量取液器玻璃仪器容器：烧杯、试管、锥形瓶、滴管仪器：离心机、水浴箱、电泳仪、分光光度计等（二）玻璃仪器的洗涤1、初用的玻璃仪器的清洗：表面附有碱性物质，先用去污粉洗，再用自来水冲洗干净，然后浸于盐酸溶液浸泡过夜，再用自来水反复冲洗干净，最后用蒸馏水冲洗1－2次，80℃烤干备用。
2、使用过的玻璃仪器洗涤（1）一般非计量玻璃仪器或粗容量仪器，如烧杯、试管、量筒等先用肥皂水刷洗，再用自来水冲洗干净，最后用蒸馏水冲洗1－2次，洗净之器皿倒置干净处晾干或烘箱烤干（量筒不可烘烤）。
动物的生物化学实验
结果呈现与解释
将实验结果以图表形式呈现，并结合专业知识对 结果进行解释和讨论。
ABCD
数据处理与分析
运用统计学方法对实验数据进行处理和分析，如 描述性统计、方差分析、回归分析等。
实验报告撰写
按照学术规范撰写实验报告，包括实验目的、方 法、结果、讨论和结论等部分。
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实验结果分析与解读
数据统计与分析方法
描述性统计
对实验数据进行整理、归类，计算均值、标准差等统计量，以描述数 据的基本特征。
假设检验
通过设定假设、选择适当的检验方法（如t检验、F检验等），判断实 验数据是否存在显著差异。
方差分析
用于分析不同因素对实验结果的影响程度，以及因素间的交互作用。
回归分析
通过建立数学模型，探讨自变量与因变量之间的关系，预测实验结果 。
动物饲养管理
确保动物饲养环境符合标准， 提供充足的食物和水，避免应 激。
实验设计与伦理审查
制定详细的实验计划，并通过 伦理审查确保实验符合相关法 规。
试剂与仪器准备
提前准备好所需试剂和仪器， 确保其质量和性能符合要求。
实验操作规范与技巧
动物麻醉与固定
根据实验需求选择合适的麻醉方法和固 定方式，确保动物在无痛状态下进行实
生物安全研究
动物实验可用于评估生物武器、生物恐怖主义等生物安全威胁的风 险和防范措施。
THANKS
感谢观看
阐明生物小分子代谢途径
分析动物体内糖类、脂类、氨基酸等小分子的代谢过程，揭示其在能量供应、 物质合成与分解等方面的作用。
了解动物生理生化过程
探究动物细胞信号传导机制
通过研究动物细胞内的信号分子、受体、传导通路等，揭示细胞对外界刺激的响 应机制及细胞间的通讯方式。
动物生物化学实验教程正式
动物生物化学实验教程正式实验一血清蛋白质含量测定牛血清蛋白：BSA。
血浆：指血液的液体成分，淡黄色（因含胆红素）。
含白蛋白、球蛋白、纤维蛋白原。
血液经抗凝处理、离心沉淀后，获得的液体部分。
血清：血液凝固后，释出的液体。
不含纤维蛋白原及游离钙离子。
蛋白质定量分析是动物生物化学和其他生命科学研究中经常用到的实验项目。
蛋白质是生物体内最为重要的生物大分子之一，其种类繁多、结构多样、功能各异，而且分子量相差很大，所以很难建立一个理想而通用的蛋白质定量分析方法。
目前测定蛋白质含量的方法很多，常用的测定方法有Folin—酚法（Lowry法）、紫外吸收法、凯氏定氮法、考马斯亮蓝染料结合法等，每种方法在实践中都有其优点和局限性。
本实验采用考马斯亮蓝染料结合法（Bradford法）。
(灵敏度最高)一、实验目的1．掌握分光光度法测定的原理，分光光度计的结构和基本操作要点（光源-单色器-样品室-检测器-显示器）2．掌握考马斯亮蓝染料结合法测定蛋白质含量的原理和操作方法3．掌握微量移液器的使用方法4．了解蛋白质含量测定中标准曲线的制作方法二、实验原理染料考马斯亮蓝G-250（R250，结合后可以解离）在游离状态下呈红色，最大吸收峰为465nm。
它能与蛋白质的疏水微区结合，形成蓝色复合物，该复合物的最大吸收峰为595nm，在一定浓度范围内（为什么在一定范围内），其吸光度值与蛋白质含量成正比，故可用于蛋白质含量的测定。
三、实验操作步骤表1-1考马斯亮蓝染料结合法测定蛋白质含量试管号稀释的血清样品（mL）0.9%NaCl溶液（mL）考马斯亮蓝G-250溶液（mL）空白管-0.15样品管0.1-5室温静置5min，于波长595nm处，以空白管调“0”，测定样品管的吸光度值，查标准曲线，吸光度测定值所对应的蛋白质浓度就是稀释样品的蛋白质含量，然后乘以血清的稀释倍数（10倍），可得血清中蛋白质的含量。
四、实验试剂1．考马斯亮蓝G-250溶液（0.01%）：称取考马斯亮蓝G-250100mg，溶于50mL95%乙醇中，再加入100mL85%(W/V)浓磷酸，然后用蒸馏水定容至1000mL，置棕色瓶过夜（如有不容物，可用二层滤纸过滤）。
动物生物化学实验教程
动物生物化学实验教程胡兰版目录第一章动物生物化学实验常识第一节动物生化实验技术发展简史第二节动物生化实验室常识与规则一、实验室规则二、实验室安全及防护知识第三节生化实验基本操作一、玻璃仪器的洗涤二、刻度吸管的使用三、微量移液器的使用四、试管中液体的混匀法第四节常用实验样品的处理一、血液样品的采集二、血清的制备三、全血及血浆的制备四、无蛋白血滤液的制备五、生物大分子的基本制备技术第五节实验报告的撰写规范一、实验记录二、定性实验报告书写格式三、定量实验报告书写格式第二章常用生化实验技术原理及应用第一节离心技术的原理及应用一、离心技术的基本原理二、离心机的主要类型三、常用的离心分离方法四、离心操作的注意事项第二节光度测定法的原理及应用一、分光光度法的基本原理二、光度法的计算三、使用分光光度计的注意事项四、自动生化分析技术第三节电泳技术的原理及应用一、影响电泳迁移率的因素二、几种常用的电泳法第四节层析技术的原理及应用一、层析技术的常用术语二、层析技术的分类三、常用的层析方法四、柱层析的基本装置五、柱层析的基本操作第五节DNA重组技术一、多聚酶链式反应（PolymeraseChainReaction，PCR）的基本过程二、DNA重组技术（RecombinantDNATechnology）三、DNA重组技术的基本步骤第三章酶学实验内容实验一唾液淀粉酶活性观察实验二转氨酶活性测定——King氏法实验三琥珀酸脱氢酶的作用及竞争性抑制的观察第四章糖类实验内容实验四血糖的测定1.福林一吴宪氏法2.葡萄糖氧化酶法实验五肝糖原的提取和鉴定第五章脂类实验内容实验六血清总脂含量测定（香草醛法）实验七肝组织的生酮作用实验八血清游离脂肪酸测定（一次提取比色法）实验九血清总胆固醇测定（胆固醇氧化酶法）第六章蛋白质实验内容实验十醋酸纤维薄膜电泳法分离血清蛋白质实验十一蛋白质的含量测定Ⅰ.双缩脲法Ⅱ.Folin-酚试剂法Ⅲ.紫外光吸收法Ⅳ.考马斯亮蓝结合法实验十二血清尿素氮（BUN）的测定（二乙酰一肟法）实验十三氨基酸纸上层析第七章核酸实验内容实验十四动物组织DNA提取实验十五DNA的定量测定（二苯胺法）实验十六动物肝脏总RNA的制备实验十七RNA的定量测定（地衣酚法）实验十八紫外吸收法测定核酸的含量第八章维生素实验内容实验十九维生素B2的定量测定（荧光法）第九章综合性实验内容附录参考文献。
动物生物化学实验全文编辑修改
对消法消除系统误差
进行两次测量，使两次读数时出现的系统误差大小相等、符号相反。两次测量值的平均值作为测量结果，以消除系统误差。 例如，由于仪器灵敏度的限制，测量仪器的旋钮由右边调近测量值与由左边调近测量值的结果往往不同。这时，可取两个读数的平均值作为测量值。
系统误差的消除很难找到一个普遍有效的方法。这是因为造成系统误差的各个因素，没有内在的联系。要克服它们，只能具体问题具体分析。
五、实验室安全知识简介
（一）实验室安全
1. 安全用电2. 水火无情3. 严防中毒
4. 避免伤害5. 生物危害6. 射线伤害
（二）实验室灭火
1. 切断室内所有电源，火源2. 报警3. 导线着火时，切断电源或使用四氯化碳灭火器，不能用水及二氧化碳灭火器，以免触电4. 可燃性液体着火时，可用湿布或沙土覆盖，隔绝空气灭火。不能用水灭火，这样会扩大燃烧面积。5. 金属钠着火时可用砂子覆盖6. 衣服着火切忌奔走，应卧地滚动灭火。
离心的基本原理
相对离心力： 离心力常用地球引力的倍数来表示，因而称为相对离心力 “ RCF ”。或者用数字乘“g”来表示。 相对离心力是指在离心场中，作用于颗粒的离心力相当于地球重力的倍数，单位是重力加速度“g” （980cm/sec2）， 相对离心力RCF可用下式计算： RCF = 1.119×10－5×(rpm)2 r ( rpm — revolutions per minute每分钟转数，r/min )
动物生物化学实验
动 物 生 物 化 学 实 验
实验一 实验室基本知识实验二 氨基酸纸层析实验三 血清蛋白含量测定实验四 影响酶活性的因素实验五 脂质的薄层层析实验六 凝胶层析法基本练习实验七 血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳实验八 动物组织中DNA提取
动物生物化学试验二
实验二电泳技术教学目的与要求：掌握常用的生物化学电泳技术，了解电泳中的注意事项。
教学重点与难点：电泳系统的构建及注意事项。
教学方法与手段：讲授和学生动手操作。
学时安排：2学时教学内容：一、引言生物大分子如蛋白质，核酸，多糖等大多都有阳离子和阴离子基团，称为两性离子。
常以颗粒分散在溶液中，它们的静电荷取决于介质的H+浓度或与其他大分子的相互作用。
在电场中，带电颗粒向阴极或阳极迁移，迁移的方向取决于它们带电的符号，这种迁移现象即所谓电泳。
二、实验目的、任务及原理实验目的：掌握电泳技术方法及注意事项。
实验任务：学会醋酸纤维素薄膜电泳的使用方法。
实验原理：醋酸纤维素薄膜电泳（cellulose acetate membrance electrophoresis）以醋酸纤维薄膜为支持物。
醋酸纤维素素薄膜是由二乙酸纤维素加工制成，具有均一的泡沫结构，厚度仅120um。
醋酸纤维素素薄膜作为是电泳支持体有以下优点：八、、：①电泳后区带界限清晰；②通电时间较短（二十分钟至一小时）；③它对各种蛋白质（包括血清白蛋白，溶菌酶及核糖核酸酶）都几乎完全不吸附，因此无拖尾现象；④对染料也没有吸附。
作为区带电泳的支持物进行蛋白电泳有简便、快速、样品用量少、应用范围广、分离清晰、没有吸附现象等优点。
目前已广泛用于血清蛋白、脂蛋白、血红蛋白、糖蛋白和同功酶的分离以及免疫电泳中。
例如，以醋酸纤维素薄膜为支持物，正常人血清在pH8.6的缓冲体系中电泳1h左右，染色后显示5条区带。
清蛋白泳动最快，其余依次为a 1—，a 2一，P 一,及Y 一球蛋白。
这些区带经洗脱后可用分光光度计法定量，也可直接进行光吸收扫描自动绘出区带吸收峰及相对百分比。
临床医学常利用它们间相对百分比的改变或异常区带的出现作为临床鉴别诊断的依据。
此法由于操作简单、快速、分辨率高及重复性好等优点。
目前，以成为临床生化检验的常规操作之一。
三、实验的拓展(由本实验的完成深化和延伸所学的知识，启发学生利用现有的设备拓展出新的实验内容,培养学生的创新思维和创新能力。