GoldView II核酸染料说明书

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关于电泳GoldViewTM 核酸染料安全性问题

关于电泳GoldViewTM 核酸染料安全性问题GoldViewTM 核酸染料——使用说明“注意事项”中有指出：虽然未发现GoldView有致癌作用，但对皮肤、眼睛会有一定的刺激，操作时应戴上手套。

最近看到的资料显示goldview的主要成分含有吖叮橙，吖叮橙是不致癌，但却是强烈致突变的物质。

吖啶橙(Acridine Orange，AO)简介3，6－（二甲胺基）吖啶盐酸盐，分子式C17H19N3 ·HCl ·ZnCl2, 分子量438.12 g/mol,是一种荧光色素，其检测激发滤光片波长488nm,阻断滤光片波长515nm。

它与细胞中DNA 和RNA结合量存在差别，可发出不同颜色的荧光，与DNA结合量少发绿色荧光，与RNA 结合量多发桔黄色或桔红色荧光。

该染料具有膜通透性，能透过细胞膜，使核DNA和RNA 染色。

因此，在荧光显微镜下观察，吖啶橙可透过正常细胞膜，使细胞核呈绿色或黄绿色均匀荧光；而在凋亡细胞中，因染色质固缩或断裂为大小不等的片断，形成凋亡小体。

吖啶橙使其染上致密浓染的黄绿色荧光，或黄绿色碎片颗粒；而坏死细胞黄荧光减弱甚至消失。

吖啶橙AO常与溴化乙啶EB合用双染，因EB只染死细胞使之产生桔黄色荧光，由此可区分出正常细胞、凋亡细胞及坏死细胞.它还可以用作移码突变的诱变剂,能镶嵌于两个相邻的碱基对之间，这样在DNA复制过程中，会使DNA链增加或缺失一个碱基，造成移码突变。

吖啶橙染液有毒，操作时要戴手套，需避光。

goldview的染色效果：有人经过实验对比发现，信号不太灵敏，有些条带检不出来，而EB 胶却清晰可见。

关于GoldViewTM 核酸染料中吖叮橙毒性文献The effective ingredient in GoldView is acridine orange (extremely cheap from Aldrich or Sigma at ~100g/$140!)Acridine orange is a known gel stain since 1970s (“Analysis of single- and double-stranded nucleic acids on polyacrylamide and agarose gels by using glyoxal and acridine orange”. Proc Natl Acad Sci U S A. 1977 Nov;74(11):4835-8.Acridine orange is a highly toxic and known mutagen!Selected list of papers on acridine orange toxicity:Web, RB. Mutat Res. 1984 Jul;137(1):1-6.Wugmeister, M. Yale J Biol Med. 1983 Jan-Feb;56(1):9-13.Martin, SE. Mutat Res. 1981 Jun;82(1):41-6.Ashad, R. Letters in Applied Microbiology 2006, 42:94.因此在电泳实验过程中，小心注意点，做好防护工作！！！。

GreenView凝胶核酸染料10000×水溶液

EB 终结者Red 凝胶核酸染料10,000×DMSO（Nucleic Acid Gel Stain, 10,000×DMSO ）Cat number ：KGM025R For Research Use OnlyStore at 4℃ for six monthsExpire date ：一、试剂盒说明EB 终结者Red 凝胶核酸染料是一种高灵敏度的用于检测琼脂糖凝胶以及丙烯酰胺凝胶中的核酸荧光染料，不论是双链还是单链的DNA 或者RNA ，EB 终结者Red 染料都有很灵敏的染色信号。

使用者可以选择在制备凝胶过程中或者制备完毕之后进行染色。

EB 终结者Red 染料可以匹配300nm 、254nm 或者蓝光紫外透射仪，也可以用于匹配了可见光激发器如488nm 激光器的凝胶成像仪。

本产品是10,000X 的EB 终结者Red 染料浓缩型溶液，用于制胶前染色可以被10,000倍稀释，用于制胶后染色可以5,000倍稀释。

1管10,000X 溶液至少可以用于染色100张迷你胶。

用EB 终结者Red 染色凝胶中的核酸可以用于下游的胶抽提和克隆实验。

EB 终结者Red 染色可以通过酚/氯仿抽提以及乙醇沉淀的方法很高效地从DNA 中去除掉。

EB 终结者Red 光谱特性Excitation (blue) and emission spectra (red) of EB 终结者Red bound to dsDNA in TBE buffer.EB 终结者Red Dye Ex/Em: 535/615 nm, bound to nucleic acid..二、试剂盒组份三、操作说明1、制胶后染色1.1、根据您的实验步骤进行核酸的凝胶电泳。

1.2、以TE 、TBE 或者TAE buffer 稀释EB 终结者Red 10,000X 储液试剂5000倍，成为2X EB 终结者Red 染色液。

1.3、小心地将凝胶转移至聚丙烯容器中，缓缓倒入足量的2X EB 终结者Red 染色液，保证浸没胶体。

琼脂糖电泳中核酸染料Goldview最佳使用方案的建立

琼脂糖电泳中核酸染料Goldview最佳使用方案的建立王燕;彭莉萍;罗镇明【摘要】目的确定琼脂糖凝胶电泳中使用核酸染料Goldview的最佳浓度和方法,尽可能减少实验中Goldview用量,控制其对实验室环境的污染.方法配置含不同浓度Goldview的上样缓冲液,混合不同浓度DNA溶液的琼脂糖凝胶电泳,然后对比预染样品法、前染法及后染法的染色效果.结果实验结果显示上样缓冲液中含0.4％Goldview的预染样品法电泳检测核酸的效果最佳且能检测的核酸样品浓度在16.5ng或以上为最佳.结论核酸染料Goldview在核酸的琼脂糖凝胶电泳中使用的最佳方案为预染样品法,实验中推荐浓度达到普通实验要求,并且最易控制对周围环境的污染.【期刊名称】《遵义医学院学报》【年(卷),期】2012(035)004【总页数】3页(P276-278)【关键词】琼脂糖凝胶电泳;核酸染料;Goldview【作者】王燕;彭莉萍;罗镇明【作者单位】遵义医学院珠海校区生物化学与细胞分子生物学教研室,广东珠海519041;遵义医学院珠海校区生物化学与细胞分子生物学教研室,广东珠海519041;遵义医学院珠海校区生物化学与细胞分子生物学教研室,广东珠海 519041【正文语种】中文【中图分类】Q33目前实验室中所用的核酸染料主要有EB(溴化乙啶)、SYBR Green I和Goldview 等。

作为核酸染料它们对人体都存在一定程度的危害。

EB作为一种常规的核酸染料曾广泛的被应用于琼脂糖凝胶[1]和聚丙烯酰胺凝胶[2]中DNA与RNA的观察和检测，但EB是一种诱变剂，可插入核酸相邻碱基平面之间，引起基因突变，具有中等毒性，对人体有潜在的危害性[3]。

SYBR Green I是近些年新推出的一种荧光核酸染料，因其危害性较低而逐渐成为EB的替代品之一[4]，但ssDNA的检测灵敏度不高，效果不好，应用于DNA凝胶电泳中稳定性不高。

目前琼脂糖凝胶电泳中Goldview已被广泛使用，其染色效果和灵敏度与EB相近，且未证实有致癌性[5]，是EB较理想的替代品。

SYBR Green I 核酸染料使用说明

SYBR Green I核酸染料使用说明货号：SR4110规格：50/100ul保存：-20℃避光保存，有效期至少一年。

产品说明：SYBR Green I染料是一种直接与双链DNA(dsDNA)结合的荧光染料，是荧光定量PCR 最常用的DNA结合染料。

在定量PCR中，SYBR Green I可与双链DNA（dsDNA）非特异性结合后发出荧光，则可以通过检测反应体系中的SYBR Green I荧光强度，达到检测PCR产物扩增量的目的。

游离状态下，SYBR Green I发出微弱的荧光，一旦与dsDNA结合，其荧光增加1000倍，一个反应发出的全部荧光信号与出现的dsDNA量成比例，且会随扩增产物的增加而增加；所以通过检测PCR反应液中的荧光信号强度，可以对目的基因进行准确定量，同时还可以测定扩增的目的DNA片段的熔解温度。

使用说明：使用时，配置PCR反应混合液，将10000×SYBR Green I浓缩液加入到PCR反应体系，使终浓度为0.5×（0.2×到1×之间调整）。

以上操作建议在冰上进行。

注：①反应液配制方法和PCR扩增条件请参照DNA聚合酶使用说明。

②Realtime PCR扩增仪的使用方法，请参照各仪器说明书。

注意事项：使用浓度对荧光PCR结果的影响SYBR Green I的使用浓度是保证荧光定量PCR实验成功非常关键的因素。

如果SYBR Green I的浓度过低会使荧光信号的变化降低，这就意味着低拷贝的样品可能无法检出；而在高浓度时，将会抑制PCR反应，降低PCR反应效率。

所以一般在使用SYBR Green I时应根据实际情况优化使用浓度，反应的终浓度为0.2×到1×之间。

镁离子浓度的影响提高镁离子浓度可以降低SYBR Green I对PCR反应的抑制作用。

我们建议在用SYBR Green I进行荧光PCR反应时，镁离子浓度比无SYBR Green I的普通PCR反应高出0.5～3mM。

GoodViewTM核酸染料使用说明

GoodViewTM核酸染料使用说明概述GoodViewTM是一种可代替溴化乙锭（EB）的新型核酸染料，采用琼脂糖电泳检测DNA时，GoodViewTM与核酸结合后能产生很强的荧光信号，其灵敏度与EB相当，使用方法与之完全相同。

在紫外透射光下双链DNA呈现绿色荧光，而单链DNA呈红色荧光。

通过Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠睾丸精母细胞染色体畸变试验，致突变性结果均为阴性；而溴化乙锭（EB）是一种强致癌剂。

因此用Goodview代替EB不失为一种明智的选择。

使用方法 1. 将100ml琼脂糖凝胶溶液（浓度一般为0.8%～2%）在微波炉中融化。

2. 加入5μl GoodView，轻轻摇匀，避免产生气泡。

3. 冷却至不烫手时倒胶，待琼脂糖凝胶完全凝固后上样电泳。

4. 电泳完毕在紫外灯下观察。

若使用数码相机照像记录，则关闭相机的闪光灯，放在自动档即可；若使用凝胶成像系统照相，通过调节光圈、曝光时间，选择合适的滤光片，可得到成像清晰、背景较低的照片。

保存：室温保存2年注意事项 1. 胶厚度不宜超过0.5cm，胶太厚会影响检测的灵敏度。

2. 加入GoodView的琼脂糖凝胶反复融化可能会对核酸检测的灵敏度产生一定影响，但不明显。

3. 通过凝胶电泳回收DNA片段时，建议使用GoodView染色，在自然光下切割DNA条带，避免紫外线与EB对目的DNA产生的损伤，可明显提高克隆、转化、转录等分子生物学下游操作的效率。

4、未发现GoodView有致癌作用，但对皮肤、眼睛会有一定的刺激，操作时应戴上手套。

GoodView和EB灵敏度检测对比 1. GoodViewTM核酸染料检测检测模板：5～70ng λDNA（将λDNA稀释成不同浓度进行检测）。

GoldViewTM核酸染料用量：100ml琼脂糖胶溶液（浓度1%）微波炉中融化后加入5μl GoodViewTM染料2. EB核酸染料的检测检测模板：5～70ng λDNA（将λDNA 稀释成不同浓度进行检测）。

核酸染色剂SYBR—Gold染色特性分析

ｗａｓｍｕｃｈｍｏｒｅｓｅｎｓｉｔｉｖｅｔｈａｎＥＢｔＯｄｅｔｅｃｔｄｏｕｂｌｅｓｔｒａｎｄＤＮＡ．ＢｕｔｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎａｎｄｔｈｅｍｏｂｉｌｉｔｙｏｆＤＮＡ
ｕｓｅｄｐｏｓｔｓｔａｉｎｉｎｇａｎｄｐｒｅｓｔａｉｎｉｎｇｔＯｄｙｅｄｏｕｂｌｅｓｔｒａｎｄＤＮＡｉｎａｇａｒｏｓｅｇｅｌｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ．ＴｈｅｓａｍｅｗａｙｉｓｕｓｅｄｔｏｓｔａｉｎＤＮＡｗｉｔｈＥＢａｓａｃｏｎｔｒｏ１．Ａｎｄｗｅａｎａｌｙｓｅｄｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｂｙｔｈｅｇｅｌｉｍａｇｉｎｇｓｙｓｔｅｍ．ＲｅｓｕｌｔｓＷｅｆｏｕｎｄＳＹＢＲ— Ｇｏｌｄ
中图分类号：Ｒ３９２．３文献标识码：Ａ
ＴｈｅＣｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆＳＹＢＲＧｏｌｄｎｕｃｌｅｉｃａｃｉｄｄｙｅＪＩＮＬｅｉ．（ＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｃｅｎｔｅｒｆｏｒＭｅｄｉｃａｌＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙａｎｄ
ＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙＴｅａｃｈｉｎｇ．ＸｕｚｈｏｕＭｅｄｉｃａｌＣｏｌｌｅｇｅ，Ｘｕｚｈｏｕ，Ｊｉａｎｇｓｕ２２１００２，Ｃｈｉｎａ）

SYBR Green Ⅰ 核酸染料(10000×)使用说明

SYBR GreenⅠ核酸染料（10000×）使用说明货号：SY1020规格：50/100ul保存：-20℃避光保存，有效期12个月。

产品简介：采用琼脂糖电泳或聚丙烯酰胺电泳方法检测双链DNA时，SYBR GreenⅠ是最灵敏的荧光染料，当其结合到核酸上时，会产生很强的荧光及高量子产额，DNA/SYBR GreenⅠ复合物的量子产额均为0.8。

由于与核酸结合后能产生很强的信号，背景极低，并且对核酸的亲和力高，因此SYBR染料可在低浓度条件下使用。

SYBR GreenⅠ的最低检出限：20pg DNA(254nm);60pg DNA(300nm紫外透射)；此外，SYBR GreenⅠ还可以用于检测寡核苷酸(1-2ng,300nm紫外透射)，比EB灵敏20至100倍。

SYBR GreenⅠ用于电泳检测DNA时，既可预染，也可电泳后再进行染色。

SYBR Green Ⅰ用于琼脂糖电泳检测DNA后，可直接将DNA转移至膜上，进行后续核酸印迹杂交反应。

此外，SYBR GreenⅠ与DNA的结合对多种常用的限制性内切酶活性无抑制作用，可直接进行消化或连接。

使用说明：该产品使用方法同EB.点染法：用于琼脂糖凝胶电泳：取原液1ul加入TE缓冲液或灭菌双蒸水1ml，再加入6×DNA Loading buffer上样缓冲液1ml混匀，(此时溶液为1：2000稀释，即为工作液)电泳时取1-2ul工作液和5ul电泳样品混匀后静置5min后直接上样。

胶染法：常规配置琼脂糖凝胶100ml，加热至融化，待温度将至50-70℃（感觉不烫手）加入该原液10ul。

待胶凝固后即可电泳，电泳结束后即可在紫外照射下观察。

注意事项：1.SYBR GreenⅠ应避光存放，原液保存于-20℃；建议分装冻存，短期可以4℃保存。

2.胶染法灵敏度较高，须将商品化的DNA marker稀释5-10倍后使用。

3.在预染色方法中，电泳时间不要超过2小时，否则SYBR GreenⅠ会从DNA上分离出来，会产生弥散状条带。

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GoldView II核酸染料说明书
货号：G8142
规格：0.5ml(5000×)
保存：-20℃，短期4℃保存。

注意：本产品属于微量核酸检测试剂，使用时请严格按照说明书操作。

第一次使用前请融化后离心再开封。

产品简介：
GoldView II是一种可代替溴化乙锭（EB）的新型花青类核酸染料，采用琼脂糖电泳检测DNA时，GoldView II与核酸结合后能产生很强的荧光信号，其灵敏度比EB强5-10倍，使用方法与之完全相同。

GoldView II 与核酸结合后，最大吸收峰为497nm，另外，其在254nm处也有一强吸收峰，发射波长为520nm，在紫外透射光下双链DNA呈现绿色荧光，而且也可用于染RNA。

通过Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠睾丸精母细胞染色体畸变试验，致突变性结果均为阴性；而溴化乙锭（EB）是一种强致癌剂。

因此用Goldview II代替EB不失为一种明智的选择。

本产品为DMSO溶解,低温时为固体状态,温度到达20℃以上即可融化。

使用方法:
胶染：
由于GoldView II敏感度比EB高数倍，使用时，请将商品化的Marker用1×DNA Loading Buffer作5-10倍的稀释，上样1-10µl,以得到较好的结果(通常稀释10倍后上样5ul)。

对于待检测样品，通常仅需1-2µl即可。

如果浓度较高，也须作一定倍数稀释，否则会造成条带不整，影响迁移速率。

凝胶回收请选择点染方法。

1.将50ml琼脂糖凝胶溶液（浓度一般为0.8%~2%）在微波炉中融化。

2.冷却至不烫手时加入10-15µl GoldView II(不能少于10ul)，轻轻摇匀，避免产生气泡。

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3.倒胶，待琼脂糖凝胶完全凝固后上样电泳。

4.电泳完毕在紫外灯下观察。

若使用数码相机照像记录，则关闭相机的闪光灯，放在自动档即可；若使用凝胶成像系统照相，通过调节光圈、曝光时间，选择合适的滤光片，可得到成像清晰的照片。

点染：
染色效果不如胶染方法，但成本更低，同时适用于凝胶回收。

1.常规方法制备不含任何染料的琼脂糖凝胶。

2.用3×Loading Buffer将本产品稀释500-1000倍，现用现配。

3.取稀释后的染料2µl与5µl样本混匀后上样即可。

泡染:
1.常规方法制备不含任何染料的琼脂糖凝胶。

2.上样,电泳后将胶放入经TAE稀释2000倍的染料中浸泡30分钟即可
注意事项:
1.胶厚度不宜超过0.5cm，胶太厚会影响检测的灵敏度。

2.虽然未发现GoldView II有致癌作用，但其由DMSO溶解，对皮肤、眼睛会有一定的刺激，操作时应戴上手套。

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