死活细胞的鉴定方法[1]
细胞死活鉴定实验报告

一、实验目的1. 掌握细胞死活鉴定的原理和方法。
2. 学会使用显微镜观察细胞形态和结构,判断细胞的死活。
3. 了解细胞膜通透性在细胞死活鉴定中的作用。
二、实验原理细胞是生物体的基本结构和功能单位,细胞的死活状态对其生物学功能具有重要意义。
细胞膜是细胞的重要结构,具有选择性通透性,能够控制物质进出细胞。
活细胞的细胞膜对物质的选择性通透性较强,而死细胞的细胞膜通透性增加,物质更容易进出细胞。
本实验通过观察细胞对染料的摄取情况,判断细胞的死活。
三、实验材料与仪器1. 实验材料:活细胞悬液、死细胞悬液、台盼蓝染液、生理盐水、显微镜、载玻片、盖玻片、滴管等。
2. 实验仪器:显微镜、载玻片、盖玻片、滴管、生理盐水、台盼蓝染液等。
四、实验步骤1. 准备载玻片和盖玻片,将载玻片用生理盐水清洗干净,晾干。
2. 分别取活细胞悬液和死细胞悬液各1滴,滴在载玻片上。
3. 分别将活细胞悬液和死细胞悬液各1滴,滴在盖玻片上,使细胞均匀分布。
4. 将载玻片放在显微镜下观察,调整显微镜的焦距,使细胞清晰可见。
5. 将台盼蓝染液滴在盖玻片边缘,用滴管轻轻吸取染液,使染液均匀覆盖在细胞上。
6. 观察细胞对染料的摄取情况,记录活细胞和死细胞的数量。
7. 重复实验,取不同浓度的台盼蓝染液进行实验,观察细胞对染料的摄取情况。
五、实验结果与分析1. 实验结果显示,活细胞对台盼蓝染液的摄取较少,死细胞对染液的摄取较多。
2. 随着台盼蓝染液浓度的增加,细胞对染液的摄取逐渐增多。
3. 分析原因:活细胞的细胞膜具有选择性通透性,对台盼蓝染液的摄取较少;而死细胞的细胞膜通透性增加,对染液的摄取较多。
六、实验结论通过本实验,我们掌握了细胞死活鉴定的原理和方法,了解了细胞膜通透性在细胞死活鉴定中的作用。
实验结果表明,活细胞对台盼蓝染液的摄取较少,而死细胞对染液的摄取较多,这与细胞膜通透性的差异有关。
七、实验讨论1. 实验过程中,需要注意载玻片和盖玻片的清洁,避免杂质对实验结果的影响。
高中判断细胞死活的方法

高中判断细胞死活的方法1、细胞活染色法是判断细胞死活的最常用的方法。
细胞活染色是利用细胞内的染料色素向细胞的细胞膜渗透,从而判断细胞的活性,根据细胞的染色状态可以分析出细胞存活与否的情况。
活细胞可以将染料色素向细胞膜渗透内,释放着色素,从而使整个细胞呈现深色;死亡细胞不能将染料色素渗入细胞膜内,整个细胞只有简单的荧光。
2、细胞凝固染色法也是判断细胞死活的一种方法。
凝固染色法分为偏光显微镜和免疫染色两种方法。
偏光显微镜利用偏光显微镜来分析死亡细胞,活细胞细胞膜会很完整,上面有凝固,而死亡细胞细胞膜会出现破坏,凝固状态比较差;免疫染色法是通过特殊抗体将活细胞与死亡细胞区分开来,根据活细胞与死亡细胞的染色状态可以判断细胞死活情况。
二、细胞死活相关试剂1、细胞活染色的试剂:培养基、染料色素、抗体,这些试剂都可以用来判断细胞死活情况。
2、凝固染色的试剂:偏光显微镜试剂包含:偏光显微镜、抗体和染料;免疫染色的试剂包含:抗体和染料。
三、实验操作1、细胞活染色实验操作:(1)将细胞样本用培养基取出,然后放入低温室,调节温度到4℃;(2)根据细胞类型,将染料色素和抗体按比例混合;(3)将混合物和细胞样本放入封闭状态的容器中,搅拌均匀;(4)将容器放置于25℃恒温环境,等待细胞染色;(5)观察染色状态,分析细胞的活性,根据染色状态判断细胞存活与否的情况。
2、凝固染色实验操作:(1)准备偏光显微镜和免疫染色所需的试剂;(2)取出细胞样本,利用偏光显微镜对细胞进行检测,观察细胞膜的凝固状态;(3)将免疫染色试剂混合,混合物和细胞样本放入封闭状态的容器中,搅拌均匀;(4)将容器放置于25℃恒温环境,等待细胞染色;(5)观察染色状态,分析细胞的活性,根据染色状态判断细胞存活与否的情况。
四、细胞死活判断的重要性为了判断细胞死活,需要使用活染色和凝固染色方法,以准确地判断细胞的活性、数量以及存活情况。
细胞死活的判断很重要,因为它可以帮助我们研究细胞的生命周期,认识生物的机理,从而探索生物的发展规律,发现新的生物科学,为生命科学及其应用提供有价值的研究和发现。
鉴定细胞死活的方法

鉴定细胞死活的方法
鉴定细胞死活的常见方法如下:
1.显微观察:使用倒置显微镜或荧光显微镜观察细胞形态和结构,判断细胞是否出现明显的形态变化或结构改变。
2.染色方法:使用各种染色剂(如乙酰红胶、甲基蓝、孔雀石绿等)对细胞进行染色,观察染色结果来判断细胞的颜色和形态,从而判断细胞的死活。
3.细胞膜渗透性检测:使用荧光染色剂(如PI、DAPI等)通过细胞膜进入细胞内,观察细胞是否发生荧光变化,判断细胞膜的完整性和死亡程度。
4.细胞内酶活性检测:使用特定的酶底物和荧光染料(如细胞色素c、卡尔比蓝等)对细胞内酶活性进行检测,观察是否发生荧光变化,判断细胞内的酶活性和细胞状态。
5.流式细胞术:使用流式细胞术对细胞进行筛选、分离和分析,通过测量细胞形态、大小、颜色等参数,来判断细胞的死亡程度和数量。
6.细胞增殖检测:通过检测细胞的DNA合成、核分裂或细胞周期等指标,来判断细胞生长和增殖的状态,进而推断细胞的死亡或存活。
值得注意的是,不同的细胞类型和实验目的可能需要使用不同的死活检测方法。
死活细胞的鉴别

(一)、死活细胞的鉴别生活细胞近似无色透明,用普通光镜无法观察其形态,需用相差显微镜来观察。
染色排除法:组织培养中检查死活细胞最常用的是“染色排除法”这类方法简单但不甚严格,它只能判断细胞的代谢死亡,不反映细胞能否增殖。
由于未经过固定、专门染色,所以看不到死活细胞的形态差别。
所用染料的分类:一般的生物染料不能穿过活细胞膜只有细胞被固定或细胞膜被破坏,染料才能进入细胞膜。
第一类:死细胞着色,使死细胞着色的大部分是酸性染料。
它们不容易穿透活细胞的质膜,进入胞内,但却能渗透死亡的细胞,使之着色。
如①台盼兰(Trypan blue):0.5-1%的台盼兰,pH7.0-7.2,每毫升细胞悬液加0.1ml 染液,2 分钟后镜检,活细胞没有染上,死细胞全部被染成蓝色。
②苯胺兰(Aniline’ black):0.05%的苯胺黑以1:10 的量与细胞悬液混匀,1-2 分钟后,死细胞被染成黑色。
③伊红Y:细胞悬液与细胞悬液混喝,2 分钟后死细胞被染成桃红色。
等。
第二类:活细胞着色,多为碱性染料,如中性红、健那绿、亚甲蓝、甲苯胺蓝等。
它们是一些无毒或毒性很小的染料,由于电性吸引而堆积在细胞中某一特定的结构上从而显色,即它们解离后带正电,其中有的染料可与胞内某些结构专一性的结合。
①1%结晶紫染色生理1%结晶紫盐水与细胞悬液1:2 混合,立即镜检,或细胞被染成蓝紫色,而死细胞不着色。
属于活细胞染料。
活细胞染料无毒,无物理、化学变化,基本上不影响细胞的生命活动。
②用呀啶橙染色可以鉴别出细胞固定前的死活状态。
丫啶橙是一种与DNA 和RNA 都能结合的荧光染料,在兰光或紫外光激发下,DNA 可激发出530nm 的荧光发射峰,RNA 可激发出640nm 的荧光发射峰,它与双链DNA 的结合方式是潜入双链之间,而与单链DNA 和RNA 则由静电吸引堆积在磷酸根上。
在蓝光的激发下,细胞核发亮绿色荧光,核仁和胞质RNA质发生变形,其核呈暗绿色,胞质整个呈暗绿色。
区分活细胞和死细胞的方法

区分活细胞和死细胞的方法同学们,今天咱们来研究一下怎么区分活细胞和死细胞,这可有意思啦!有一种简单直接的方法,那就是观察细胞的形态。
活细胞通常看起来饱满、有光泽,就像充满活力的小朋友,精神头十足。
而死细胞呢,往往会变得干瘪、皱缩,就像泄了气的皮球。
比如说,我们观察洋葱表皮细胞,如果细胞看起来圆润、透明,那很可能是活的;要是变得皱巴巴、颜色暗淡,那可能就是死了。
还有一种方法是看细胞能不能进行新陈代谢。
活细胞就像一个小工厂,不停地进行着各种化学反应,吸收营养物质,排出废物。
我们可以通过检测细胞对某些物质的吸收或者产生来判断它是不是活着。
比如,给细胞提供一些有颜色的染料,如果活细胞能吸收这些染料,就说明它在进行新陈代谢。
再来说说细胞膜的通透性。
活细胞的细胞膜就像一个聪明的保安,只允许对细胞有用的物质进来,没用的或者有害的就挡在外面。
而死细胞的细胞膜就失去了这种控制能力,什么东西都能随便进出。
我们可以用一些特殊的染料或者试剂来检测细胞膜的通透性,从而判断细胞的生死。
细胞的繁殖能力也是一个重要的指标。
活细胞能够分裂、生长,不断产生新的细胞。
如果我们在显微镜下观察到细胞正在进行分裂,那它肯定是活的。
而死细胞可没有这种本事。
还有一种有趣的方法是台盼蓝染色法。
台盼蓝这种染料一般进不了活细胞,但能进入死细胞,让死细胞染上蓝色。
所以,我们把细胞和台盼蓝染料放在一起,如果细胞被染成蓝色,那就是死细胞;没被染色的就是活细胞。
在观察培养的细胞时,我们用台盼蓝染色,发现大部分细胞没有被染色,只有少数细胞变蓝了,那就说明大部分细胞是活的,少数细胞已经死亡。
通过这些方法,我们就能比较准确地区分活细胞和死细胞啦。
这对于我们研究细胞的生命活动、疾病的发生机制,还有药物的效果等等都非常重要。
想象一下,如果医生不知道怎么区分病变组织中的活细胞和死细胞,就很难制定出有效的治疗方案。
所以,学会区分它们,能帮助我们更好地了解生命的奥秘,解决很多实际的问题呢!。
死活细胞的鉴定方法

活细胞的鉴定在生物学与医学上具有很重要的意义。
细胞培养过程中要随时记录细胞的生长情况,需要经常测定细胞的存活率;在肿瘤细胞的研究中,为了检验各种药物对肿瘤细胞的杀伤力,也需要测定肿瘤细胞的存活率。
在临床医学中死活细胞的鉴定也有很大的应用,例如为了检测某一男子的生育能力,测定精子细胞的存活力就是比较常用的办法。
死活细胞的鉴定方法有很多种,常用的有染色法与仪器分析法。
染色法就是常用的细胞死活鉴定方法,简便,易于操作。
但就是通过直接的形态观察来鉴别细胞死活,实验结果很容易受操作者的主观因素的影响,存在一定的误差,所以,在实际操作中也常采用一些仪器来进行精确的批量检测。
不同的死活细胞鉴定方法有各自不同具体的反应机理,但无论采用何种办法,都就是利用了死活细胞在生理机能与性质上的差异。
常用的方法包括染色法与仪器分析法。
1 染色法染色法分化学染色法与荧光染色法,根据染色机理的不同,染料或使死细胞着色,或使活细胞着色。
死活细胞在生理机能与性质上的差异主要包括:死活细胞细胞膜通透性的差异:活细胞的细胞膜就是一种选择性膜,对细胞起保护与屏障作用,只允许物质选择性的通过;而细胞死亡之后,细胞膜受损,通透性增加。
常用的以台盼蓝鉴别细胞死活的方法就就是利用了这一性质。
台盼蓝,又称锥蓝,就是一种阴离子型染料,不能透过完整的细胞膜。
所以经台盼蓝染色后只能使死细胞着色,而活细胞不被着色。
甲基蓝有类似的染色机理。
植物细胞的质壁分离也可鉴定死活。
死活细胞在代谢上的差异:就是采用美蓝染料鉴定酵母细胞死活的依据。
美蓝就是一种无毒染料,氧化型为蓝色,还原型为无色。
由于活细胞中新陈代谢的作用,使细胞内具有较强的还原能力,能使美蓝从蓝色的氧化性变为无色的还原型,因此美蓝染色后活的酵母细胞无色;而死细胞或代谢缓慢的老细胞,则因它们的无还原能力或还原能力极弱,使美蓝处于氧化态,从而被染成蓝色或淡蓝色。
荧光素双醋酸酯(FDA)就是一种常用的培养动植物细胞以及植物细胞原生质体的生活力鉴定染料,其染色机理也利用了死活细胞在代谢上的差异:FDA本身不产生荧光,也无极性,能自由渗透出入完整的细胞膜。
死活细胞鉴定

生物探究活动——鉴定植物细胞的死活【实验目的】学习用质壁分离法和用活体染色法鉴定细胞死活【实验原理】活细胞的原生质层具有选择透过性;而死细胞则为全透性。
选择透过性是质壁分离的先决条件。
因此能发生质壁分离的细胞就表示是活的,不能发生质壁分离的细胞则说明是死的。
死活细胞间不仅通透性不同,而pH值等情况也不同,它们对某些染料的反应明显不同。
某些染料能在活细胞的细胞液中积累,但不能染活的原生质;另一方面,这些染料可使死细胞的结构染色,但不积累于液泡。
所以可根据某些染料活体染色的情况来鉴定细胞死活。
【实验材料和用具】洋葱及其它植物材料、酒精灯、显微镜、刀片、镊子、载玻片、盖玻片、1M蔗糖溶液、0.01%中性红溶液等。
【实验步骤】1、用质壁分离的方法鉴定细胞的死活。
撕洋葱表皮细胞滴加1M蔗糖溶液,在显微镜下观察。
细胞很快发生质壁分离,这就是细胞活着的证据。
另把制取的同样制片,用冷冻、加热、干燥、酒精浸泡等方法将它们的细胞杀死,然后取代上述活材料,做质壁分离实验,结果看到已死的细胞不能发生质壁分离现象。
用尿素、硝酸钾、氯化钙溶液等来代替蔗糖溶液,能快速鉴定细胞的死活。
2、用活体染色的方法的鉴定细胞的死活。
取洋葱或其它材料,用镊子撕下表皮(如表皮不易撕下,也可在水中用锋利的刀片轻轻刮去多余部分),或用刀片做成切片若干,将表皮或切片浸入中性红溶液中,放置5-10分钟最后用清水浸洗后置于载玻片上,加盖玻片,在显微镜下观察。
活细胞的液泡内染成红色至紫色,原生质不染色,死细胞常呈橙红色,原生质和细胞核被染色。
撕破的细胞,只剩细胞壁时,呈淡红色或淡紫色。
为进一步鉴别细胞的死活,可把玻片上的水溶液吸去,滴一滴1M蔗糖溶液,便可观察到活细胞能发生质壁分离,死细胞及只剩细胞壁的空细胞都有没有这种现象。
可用加热、冷冻或其它方法杀死植物组织,然后用上面所述方法进行处理,比较与活组织有何不同。
注:1台盼蓝,又称锥蓝,是一种阴离子型染料,不能透过完整的细胞膜。
死活细胞的鉴定方法

活细胞的鉴定在生物学和医学上具有很重要的意义。
细胞培养过程中要随时记录细胞的生长情况,需要经常测定细胞的存活率;在肿瘤细胞的研究中,为了检验各种药物对肿瘤细胞的杀伤力,也需要测定肿瘤细胞的存活率。
在临床医学中死活细胞的鉴定也有很大的应用,例如为了检测某一男子的生育能力,测定精子细胞的存活力是比较常用的办法。
死活细胞的鉴定方法有很多种,常用的有染色法和仪器分析法。
染色法是常用的细胞死活鉴定方法,简便,易于操作。
但是通过直接的形态观察来鉴别细胞死活,实验结果很容易受操作者的主观因素的影响,存在一定的误差,所以, 在实际操作中也常采用一些仪器来进行精确的批量检测。
不同的死活细胞鉴定方法有各自不同具体的反应机理,但无论采用何种办法,都是利用了死活细胞在生理机能和性质上的差异。
常用的方法包括染色法和仪器分析法。
1染色法染色法分化学染色法和荧光染色法,根据染色机理的不同,染料或使死细胞着色,或使活细胞着色。
死活细胞在生理机能和性质上的差异主要包括:死活细胞细胞膜通透性的差异:活细胞的细胞膜是一种选择性膜,对细胞起保护和屏障作用,只允许物质选择性的通过;而细胞死亡之后,细胞膜受损,通透性增加。
常用的以台盼蓝鉴别细胞死活的方法就是利用了这一性质。
台盼蓝, 又称锥蓝,是一种阴离子型染料,不能透过完整的细胞膜。
所以经台盼蓝染色后只能使死细胞着色,而活细胞不被着色。
甲基蓝有类似的染色机理。
植物细胞的质壁分离也可鉴定死活。
死活细胞在代谢上的差异:是采用美蓝染料鉴定酵母细胞死活的依据。
美蓝是一种无毒染料,氧化型为蓝色,还原型为无色。
由于活细胞中新陈代谢的作用,使细胞内具有较强的还原能力,能使美蓝从蓝色的氧化性变为无色的还原型,因此美蓝染色后活的酵母细胞无色;而死细胞或代谢缓慢的老细胞,则因它们的无还原能力或还原能力极弱,使美蓝处于氧化态,从而被染成蓝色或淡蓝色。
荧光素双醋酸酯(FDA是一种常用的培养动植物细胞以及植物细胞原生质体FDA本的生活力鉴定染料,其染色机理也利用了死活细胞在代谢上的差异:身不产生荧光,也无极性,能自由渗透出入完整的细胞膜。
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死活细胞的鉴定方法
活细胞的鉴定在生物学和医学上具有很重要的意义.细胞培养过程中要随时记录细胞的生长情况,需要经常测定细胞的存活率;在肿瘤细胞的研究中,为了检验各种药物对肿瘤细胞的杀伤力,也需要测定肿瘤细胞的存活率。
在临床医学中死活细胞的鉴定也有很大的应用,例如为了检测某一男子的生育能力,测定精子细胞的存活力是比较常用的办法.
死活细胞的鉴定方法有很多种,常用的有染色法和仪器分析法。
染色法是常用的细胞死活鉴定方法,简便,易于操作。
但是通过直接的形态观察来鉴别细胞死活,实验结果很容易受操作者的主观因素的影响,存在一定的误差,所以,在实际操作中也常采用一些仪器来进行精确的批量检测.
不同的死活细胞鉴定方法有各自不同具体的反应机理,但无论采用何种办法,都是利用了死活细胞在生理机能和性质上的差异。
常用的方法包括染色法和仪器分析法。
1 染色法
染色法分化学染色法和荧光染色法,根据染色机理的不同,染料或使死细胞着色,或使活细胞着色。
死活细胞在生理机能和性质上的差异主要包括:
死活细胞细胞膜通透性的差异:活细胞的细胞膜是一种选择性膜,对细胞起保护和屏障作用,只允许物质选择性的通过;而细胞死亡之后,细胞膜受损,通透性增加。
常用的以台盼蓝鉴别细胞死活的方法就是利用了这一性质.台盼蓝,又称锥蓝,是一种阴离子型染料,不能透过完整的细胞膜。
所以经台盼蓝染色后只能使死细胞着色,而活细胞不被着色。
甲基蓝有类似的染色机理。
植物细胞的质壁分离也可鉴定死活....感谢聆听...
死活细胞在代谢上的差异:是采用美蓝染料鉴定酵母细胞死活的依据。
美蓝是一种无毒染料,氧化型为蓝色,还原型为无色.由于活细胞中新陈代谢的作用,使细胞内具有较强的还原能力,能使美蓝从蓝色的氧化性变为无色的还原型,因此美蓝染色后活的酵母细胞无色;而死细胞或代谢缓慢的老细胞,则因它们的无还原能力或还原能力极弱,使美蓝处于氧化态,从而被染成蓝色或淡蓝色。
...感谢聆听...
荧光素双醋酸酯(FDA)是一种常用的培养动植物细胞以及植物细胞原生质体的生活力鉴定染料,其染色
机理也利用了死活细胞在代谢上的差异:FDA本身不产
生荧光,也无极性,能自由渗透出入完整的细胞膜。
当FDA进入活细胞后,被细胞内的脂酶分解,生成有极性的、能产生荧光的物质——荧光素,该物质不能自由透过活
的细胞膜,积累在细胞膜内,因而使有活力的细胞产生绿色荧光;而无活力的细胞因不能使FDA分解,而无法产生荧光....感谢聆听...
除此之外,还有一些细胞器的专有染料。
如液泡系的专有染料中性红。
中性红是一种低毒性染料,可以使活细胞液泡着红色,而细胞质和细胞核不被着色;死细
胞的液泡不被着色或浅染,染料弥散于整个细胞中,细胞核和细胞质被染成红色.有时侯为了增加染色效果可以
将两种染料结合使用,如甲基蓝-中性红混合染色法....感谢聆听...
2 仪器分析法
可采用微电极技术(利用死活细胞膜两侧电位的
差异)、全自动分析细胞记数仪和流式细胞仪等,可对
细胞的死活进行精确的批量检测。
德国INNOVATIS出产的全自动Cedex细胞存活
率/细胞计数仪/细胞分析仪是世界上第一台高分辨率、
高清晰度扫描(专利)细胞分析仪,具有全自动台盼蓝染色、显微CCD成象、CEDEX工作站软件,可用于制药、医学、发酵、免疫、病理、毒性测试、生物技术等学科的研究开发和工业生产过程中的细胞计数和分析。
自动
分析结果,检测分析数据输出(11项):总细胞数目,总细胞浓度(cells/mL);活细胞数目,活细胞浓度 (ce lls/mL);死细胞数目,死细胞浓度 (cells/mL) ;细胞存活率(%) ;细胞的平均圆度 (compactness) ;细胞的平均直径 (um);细胞团比例(Aggregat
e Rate);细胞直径分布图(Diameter Histogram);细胞团分布图(Aggregate Histogram);细胞圆度分布图 (Compactness Histogram) ;细胞生长
时间曲线(Cultivation Time Chart)。
...感
谢聆听...
流式细胞仪法用来判断细胞死活的常用荧光探
针有二大类:一类是能透过活的细胞膜进入细胞内而发
出荧光的物质,例如FDA可被活细胞持留而发出黄绿色
荧光,若细胞有损伤则会从细胞中流失,观察不到荧光。
另一类是不能透过活细胞膜,但能对固定的细胞及膜有
破损的细胞的核进行染色,例如碘化丙啶(PI,Propi diumiodide )和溴化乙锭( EB,Ethidium bromide )就是常用的第二类荧光探针。
碘化丙啶(PI)
不能穿透细胞膜,对于具有完整细胞膜的正常细胞或凋亡细胞不能染色.而对于坏死细胞,其细胞膜的完整性丧失,碘化丙啶(PI)可以染色坏死细胞。
目前常用的一种细胞凋亡与坏死检测试剂盒则含有Hoechst 33342和碘化丙啶(Propidium Iodide,PI)两种荧光染料。
细胞发生凋亡时,染色质会固缩,Hoechst 33342可以穿透细胞膜,染色后凋亡细胞荧光会比正常细胞明显增强。
上述两种染料双染后,使用流式细胞仪或荧光显微镜检测时,正常细胞为弱红色荧光+弱蓝色荧光,凋亡细胞为弱红色荧光+强蓝色荧光,坏死细胞为强红色荧光+强蓝色荧光。
...感谢聆听...
此外,还可以用植物细胞的质壁分离试验来对植物细胞的死活进行见证,还可以通过观察细胞质的流动性进行细胞的死活鉴定。
...谢阅...。