死活细胞鉴定及细胞活力测定
区别细胞死活的方法
区别细胞死活的方法细胞是生物体的最小单位，它们构成了人体的所有组织和器官，由此可以看出细胞死活对生物体的关键重要性。
细胞死活的评价是定量化和定性分析生物活动的关键环节。
目前，细胞死活评价仍然是仅限于实验室内容易掌握的技能，且受到许多因素的影响，因此区别细胞死活的方法极其重要。
首先，最常用的方法是通过显微镜观察细胞活力。
要辨识细胞死活，必须通过使用显微镜来确定细胞的形状和质地的变化。
死细胞不易发育，通常会呈现出“静止细胞”的特征，这就是细胞脱水由于内部膜蛋白的变化。
而活着的细胞则会有更多的活力，表面有许多触手，破裂的细胞也很常见。
此外，将细胞从直接观察转变为定量测量也是一种有效的方法。
细胞活力可以用流式细胞术和其他定量技术来测量，最常用的是荧光技术，它可以直接定量测定细胞死亡率。
细胞外基质的变化也可以通过吸收法、荧光比色或其它技术来检测，以区分细胞死活。
此外，细胞死活可以通过凋亡因子、抗凋亡抗体以及蛋白质补体来识别。
凋亡因子有细胞膜活性物质（CAMs）和其他多种因子，可以分子识别细胞外胞质中的死细胞，从而激活死细胞的凋亡过程。
抗凋亡抗体可以识别凋亡过程中的蛋白质进而来识别细胞是否已经死亡。
蛋白质补体可以检测细胞形态上的变化，如染色体、线粒体和其它细胞结构的变化，可以用来识别细胞是否死亡。
最后，通过细胞老化技术也可以识别细胞死活。
细胞老化技术是一种新兴的研究方法，它可以测定细胞的老化情况，也可以检测细胞的死亡率。
主要的方法有DNA电泳、分子探针法和基因表达分析，以及其它从细胞老化到细胞死亡早期检测方法。
总而言之，以上是区别细胞死活的常用方法，我们可以通过显微镜观察细胞活力，定量测量细胞活力，通过凋亡因子和抗凋亡抗体，以及蛋白质补体，来识别细胞死活。
此外，还可以通过细胞老化技术等来识别细胞死活。
在此基础上，精确计算细胞死活率，为生物活动的分析提供重要的依据，成为定量和定性分析生物活动的重要环节。
细胞死活鉴定 实验报告
细胞生物学实验报告细胞死活鉴定1.实验目的：观察上次实验培养的小鼠脾细胞，掌握细胞死活鉴定的方法。
2.实验用品：（1）仪器及器材：显微镜、血细胞鉴定板、盖玻片、胶头滴管、试管（2）实验药品：蒸馏水、台盼蓝染液、生理盐水、伊红染液（3）实验材料：小鼠脾细胞3.实验原理：（1）活细胞特征：细胞边缘清晰，细胞透明度高，整体立体感强，核区域明显，细胞质内颗粒物质较少，无空泡。
培养数天后，可观察到正在分裂的细胞。
（2）肉眼观察鉴定细胞死活：正常生长的细胞培养液微微发黄，透明度高；如发现培养液微混，则说明细胞量太大需进行传代培养，或者培养液被污染；如果培养液仍呈现清亮的粉红色，则说明细胞未生长。
（3）细胞凋亡特征过程：首先，细胞膜绒毛消失；然后，细胞收缩，细胞核高度浓缩，边缘化；最后，细胞核片段化，形成凋亡小体。
细胞核片段化时，如果对此类细胞进行DNA电泳，则会发现电泳条带呈梯状分布。
（4）细胞死活鉴定方法①染色排除法：细胞死亡后，细胞膜的通透性变大，染料可以通过细胞膜进入细胞。
因此，死细胞可以被染料染色，而活细胞由于细胞膜的选择透过性而呈无色。
②荧光染色法：活细胞需要进行代谢。
将荧光染料与有机分子结合（如二丙酸酯荧光素），使之易穿膜。
在活细胞中这些物质可被分解为荧光染料和有机分子（二丙酸酯和荧光素），在显微镜下观察，细胞被染色。
此种方法中，活细胞被染色，死细胞则呈无色。
（5）血细胞计数板的用法：如果是对比较密的细胞进行计数（如红细胞），则使用中间的中格进行计数，再将所得数值乘以2500，即是每毫升中的细胞数量；如果是对比较稀疏的细胞进行计数（如白细胞），则使用四个角上的大格进行计数，再将所得数值乘以10000，即是每毫升中的细胞数量。
4.实验步骤：（1）台盼蓝染色法：①用生理盐水制成0.4%的台盼蓝溶液备用②取0.5ml细胞悬液放入干净试管中，加一滴染液，混合。
2 mins 后迅速制成临时装片，镜检。
（2）伊红丫染色法①用生理盐水制成0.15%的伊红染液混合② 2 mins 后制片镜检5.实验结果：视野中活细胞呈无色；死细胞呈蓝色，有些可观察到细胞核；还有少量细胞只有边缘部分呈蓝色。
细胞活力鉴定方法有哪些？
细胞活力鉴定方法有哪些？细胞活力=活细胞数/细胞总数×，常用台盼蓝法、MTT法或者CFSE法进行细胞活力检测。
台盼蓝法原理：活细胞不被染色，死细胞被染成蓝色。
方法：500ul细胞悬液加入500ul 0.4%台盼蓝染液，染色2-3分钟；将少许悬液涂于载玻片上，加上盖片，显微镜下取几个视野分别统计死细胞和活细胞数，计算细胞活力。
MTT法原理：活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶可使外源性MTT分解产生水不溶性蓝色结晶状甲瓒颗粒（Formazan）并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。
DMSO溶解甲瓒后，用酶联**检测仪在540nm或720nm波长处测定其吸收值，可间接反映活细胞数量。
可用于生物活性因子的活性检测、大规模的**筛选、细胞毒性试验鉴定等。
方法：将细胞悬浮液以1000-10000个细胞接种到96孔板，每孔体积200ul，培养细胞3-5d（依据实验目的和要求决定培养时间）后，每孔加入MTT溶液（5mg/ml用PBS配制，pH=7.4）20ul，37℃温箱中孵育4h后，小心去上清，加入150ul DMSO溶解后，用酶标仪进行检测。
（市场上售卖的CCK8试剂盒，便是对MTT法的一种优化）。
CFSE法原理：CFSE进入活细胞后，可与胞内蛋白共价结合，水解后释放出绿色荧光。
CFSE随着细胞分裂而平均分配至子代细胞中，而导致荧光强度逐级递减，依据这一特性，可被用于检测细胞增殖活力。
方法：制备细胞悬液后，加入等体积的CFSE工作液（2.5-5uM），于37℃孵育10 min，用10倍体积的预冷的基础培养基（不加血清）立即终止标记10min。
用PBS离心洗涤两次后，用适量的培养液重悬细胞。
培养一段时间后，离心收细胞，用PBS洗两次并重悬后，上流式仪器检测荧光强度的稀释比例。
区别细胞死活的方法
区别细胞死活的方法细胞死活是生物学家研究细胞活力水平和状态的重要指标，对于评估微生物或细胞繁殖能力、细胞对药物作用与耐药性的反应、细胞功能障碍、细胞毒性研究和诊断实验等都有重要的意义。
近年来，借助现代生物技术的发展，人们发展出了一系列检测细胞死活的方法，有效地区分出细胞的生长和死亡状态。
一、细胞膜活性的检测是区别细胞死活的重要方法。
细胞膜的活性是评估细胞活力的重要指标，可以显示细胞死活。
细胞膜活性可以通过测定细胞膜电位、直接检测细胞膜转运系统活性和监测活细胞特异性指标，如细胞凋亡标志物等来确定。
测定细胞膜电位能直观反映细胞结构的活力水平，是常用的检测细胞死活的方法。
二、一些结构性指标也可以用来区分细胞死活状态，如细胞形态、细胞大小和细胞质组成。
观察活细胞形态，其细胞体形状各异，并具有活动性。
细胞大小可以根据荧光显微镜和流式细胞仪监测，死细胞体积一般小于活细胞体积。
此外，也可以测定细胞质组成，如细胞培养基中活细胞含量远高于死细胞，因此可以通过分析细胞培养基中的活细胞含量来量化评价活细胞的死活。
三、检测细胞代谢特性也是一种常见的检测细胞死活的方法。
细胞代谢特性是衡量细胞活力水平的重要指标，如细胞的糖异构化、蛋白质组合、酶的活性、细胞的ATP水平等均可以用来衡量活细胞的状态。
此外，细胞细胞因子，如细胞因子及表观遗传物质，如mRNA、miRNA等也可以作为调节和检测细胞死活的指标。
四、测定细胞核和其他细胞指标。
细胞死活状态的检测也可以利用细胞核指标来估算，活细胞的细胞核含有较多的染色质和活性核酸，而死细胞核中染色质明显变性，而其他细胞指标如非细胞物质的含量、活性氧的变化、离子通量的变化和细胞内ATP水平的变化也可以用来检测细胞死活。
总之，细胞死活是决定细胞繁殖及功能性状态的关键因素，细胞死活的检测对研究和诊断生物学研究有重要意义。
现代生物技术为探究细胞死活提供了有效的工具，如细胞膜电位检测、细胞结构检测、细胞代谢特性检测和细胞核等技术可以有效地检测细胞死活。
细胞死活鉴定实验报告
一、实验目的1. 掌握细胞死活鉴定的原理和方法。
2. 学会使用显微镜观察细胞形态和结构，判断细胞的死活。
3. 了解细胞膜通透性在细胞死活鉴定中的作用。
二、实验原理细胞是生物体的基本结构和功能单位，细胞的死活状态对其生物学功能具有重要意义。
细胞膜是细胞的重要结构，具有选择性通透性，能够控制物质进出细胞。
活细胞的细胞膜对物质的选择性通透性较强，而死细胞的细胞膜通透性增加，物质更容易进出细胞。
本实验通过观察细胞对染料的摄取情况，判断细胞的死活。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：活细胞悬液、死细胞悬液、台盼蓝染液、生理盐水、显微镜、载玻片、盖玻片、滴管等。
2. 实验仪器：显微镜、载玻片、盖玻片、滴管、生理盐水、台盼蓝染液等。
四、实验步骤1. 准备载玻片和盖玻片，将载玻片用生理盐水清洗干净，晾干。
2. 分别取活细胞悬液和死细胞悬液各1滴，滴在载玻片上。
3. 分别将活细胞悬液和死细胞悬液各1滴，滴在盖玻片上，使细胞均匀分布。
4. 将载玻片放在显微镜下观察，调整显微镜的焦距，使细胞清晰可见。
5. 将台盼蓝染液滴在盖玻片边缘，用滴管轻轻吸取染液，使染液均匀覆盖在细胞上。
6. 观察细胞对染料的摄取情况，记录活细胞和死细胞的数量。
7. 重复实验，取不同浓度的台盼蓝染液进行实验，观察细胞对染料的摄取情况。
五、实验结果与分析1. 实验结果显示，活细胞对台盼蓝染液的摄取较少，死细胞对染液的摄取较多。
2. 随着台盼蓝染液浓度的增加，细胞对染液的摄取逐渐增多。
3. 分析原因：活细胞的细胞膜具有选择性通透性，对台盼蓝染液的摄取较少；而死细胞的细胞膜通透性增加，对染液的摄取较多。
六、实验结论通过本实验，我们掌握了细胞死活鉴定的原理和方法，了解了细胞膜通透性在细胞死活鉴定中的作用。
实验结果表明，活细胞对台盼蓝染液的摄取较少，而死细胞对染液的摄取较多，这与细胞膜通透性的差异有关。
七、实验讨论1. 实验过程中，需要注意载玻片和盖玻片的清洁，避免杂质对实验结果的影响。
鉴定细胞死活的方法
鉴定细胞死活的方法
鉴定细胞死活的常见方法如下：
1.显微观察：使用倒置显微镜或荧光显微镜观察细胞形态和结构，判断细胞是否出现明显的形态变化或结构改变。
2.染色方法：使用各种染色剂（如乙酰红胶、甲基蓝、孔雀石绿等）对细胞进行染色，观察染色结果来判断细胞的颜色和形态，从而判断细胞的死活。
3.细胞膜渗透性检测：使用荧光染色剂（如PI、DAPI等）通过细胞膜进入细胞内，观察细胞是否发生荧光变化，判断细胞膜的完整性和死亡程度。
4.细胞内酶活性检测：使用特定的酶底物和荧光染料（如细胞色素c、卡尔比蓝等）对细胞内酶活性进行检测，观察是否发生荧光变化，判断细胞内的酶活性和细胞状态。
5.流式细胞术：使用流式细胞术对细胞进行筛选、分离和分析，通过测量细胞形态、大小、颜色等参数，来判断细胞的死亡程度和数量。
6.细胞增殖检测：通过检测细胞的DNA合成、核分裂或细胞周期等指标，来判断细胞生长和增殖的状态，进而推断细胞的死亡或存活。
值得注意的是，不同的细胞类型和实验目的可能需要使用不同的死活检测方法。
鉴定细胞活性的实验方法
能发生质壁分 离的 ， 表示这些细胞
是活的 ； 不能发 生质壁分离 的， 表示这些 细胞是死 的。
有的碎屑的一端 ， 在染液 中涂抹几 下 ， 上盖玻 片。 放 盖
②观察 线粒体 ： 在高 倍显微镜 下观察经过 染色 的的人
染色 １ ２ ｒ ｎ ０～ ０ ｉ 后倾 出溶液 ， 自来水 反复冲洗种子 ， ａ 用
３ １ 原理 健 那绿染液 是专一性染线 粒体 的活 细胞 ．
染料 ， 它可穿过 活细胞 膜进入 细胞 内。线粒 体 中细胞 色素氧化酶能 够使 染料 保持 氧化状 态 （ 即有 色状 态 ）
则部分活细胞也会着色 ， 会干扰计 数。
３ 健 那 绿 染 色 法
４ ３ 实验 步骤 ．
①先将待测 种子用水浸泡 ３— ｈ 待 ４，
充分 吸胀后取 出一部 分种子 ， 水 中煮 沸 ３～ ｍｉ， 在沸 ５ ｎ
作为死种子。②取 浸好 的新种 子、 陈种子 和死 种子各
５ ， ０粒 如为小 麦和 玉米 ， 则用 单面 刀 片沿胚 部 中线纵 切成两半 ， 中一半 用于测 定。③ 将备好 的种子 分别 其 放在培养皿 内 ， 加入红墨水溶液 ， 以浸没种子 为度。④
２３ 实验步骤 ①制备酵母菌细胞悬液 。②染 色 ： ． 取
９ Ｌ酵母菌细胞 悬液 移入 试管 中 ， １ Ｌ０ ４ 台盼 ｍ 加 ｍ ． ％
蓝溶液 ， 混匀 ， 然后用吸管滴 加到血球计数板上 的盖玻
４ ２ 仪 器药品及材料 ① 红墨水溶 液的配制 ： ． 取市售
红墨水稀释 ２ 倍 （ 份红墨水加 ｌ ０ １ ９份 自来 水 ） 作为染
０ ３／ Ｌ 糖 溶 液 。 ．ｇ ｍ 蔗
死活细胞鉴定及细胞活力测定
死活细胞测定及细胞活力测定【实验原理】（一）染色法是常用的细胞死活鉴定方法，简便，易于操作。
实验是利用了死活细胞在生理机能和性质上的差异来进行的。
死活细胞在生理机能和性质上的差异主要体现在：（1）死活细胞细胞膜通透性的差异：活细胞的细胞膜是一种选择性膜，对细胞起保护和屏障作用，只允许物质选择性的通过；而细胞死亡之后，细胞膜受损，通透性增加。
（2）死活细胞在代谢上的差异：由于活细胞中新陈代谢的作用，使细胞内具有较强的还原能力，而死细胞或代谢缓慢的老细胞，则因它们的无还原能力或还原能力极弱。
常见的细胞染料有：中性红（细胞器的专有染料）、台盼蓝、甲基蓝、美蓝、荧光素双醋酸酯（FDA）等。
①中性红染色：常用染料之一，是细胞器的专有染料。
利用细胞膜的通透性差异，用来染原生动物和显示动植物组织中活细胞的内含物等。
中性红无毒，常做活体染色的染料。
②台盼蓝染色：当细胞损伤或死亡时，台盼蓝可穿透变性的细胞膜，与解体的DNA 结合，使其着色。
而活细胞能阻止染料进入细胞内。
故可以鉴别死细胞与活细胞。
严格来说，台盼蓝染色检测的是细胞膜的完整性，通常认为细胞膜丧失完整性，即可认为细胞已经死亡。
通过显微镜很容易就能识别出死亡的被台盼蓝染色的细胞，并可使用细胞计数器进行计数。
③美蓝染色法：美蓝是一种无毒性染料，它的氧化型是蓝色的，而还原型是无色的，用它来对活细胞进行染色，由于细胞中新陈代谢的作用，使细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝从蓝色的氧化型变为无色的还原型，所以活细胞无色，而对于死细胞或代谢缓慢的老细胞，则因它们无此还原能力或还原能力极弱，而被美蓝染成蓝色或淡蓝色。
因此，用美蓝水浸片不仅可观察酵母的形态，还可以区分死、活细胞.④甲基蓝染色法：甲基蓝染色与台盼蓝类似的染色机理。
（二）植物细胞质壁分离法及活体染色测定细胞死活（1）质壁分离法：成长的植物细胞一般具有中央液泡，在中央液泡和细胞壁之间为细胞质的薄层及其内外膜——液泡膜和质膜。
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死活细胞测定及细胞活力测定
【实验原理】
（一）染色法是常用的细胞死活鉴定方法，简便，易于操作。
实验是利用了死活细胞在生理机能和性质上的差异来进行的。
死活细胞在生理机能和性质上的差异主要体现在：
（1）死活细胞细胞膜通透性的差异：活细胞的细胞膜是一种选择性膜，对细胞起保护和屏障作用，只允许物质选择性的通过；而细胞死亡之后，细胞膜受损，通透性增加。
（2）死活细胞在代谢上的差异：由于活细胞中新陈代谢的作用，使细胞内具有较强的还原
能力，而死细胞或代谢缓慢的老细胞，则因它们的无还原能力或还原能力极弱。
常见的细胞染料有：中性红（细胞器的专有染料）、台盼蓝、甲基蓝、美蓝、荧光素双醋酸
酯（FDA等。
①中性红染色：常用染料之一，是细胞器的专有染料。
利用细胞膜的通透性差异，用来染
原生动物和显示动植物组织中活细胞的内含物等。
中性红无毒，常做活体染色的染料。
②台盼蓝染色：当细胞损伤或死亡时，台盼蓝可穿透变性的细胞膜，与解体的DNA 结合，
使其着色。
而活细胞能阻止染料进入细胞内。
故可以鉴别死细胞与活细胞。
严格来说，台盼蓝染色检测的是细胞膜的完整性，通常认为细胞膜丧失完整性，即可认为细胞已经死亡。
通过显微镜很容易就能识别出死亡的被台盼蓝染色的细胞，并可使用细胞计数器进行计数。
③美蓝染色法：美蓝是一种无毒性染料，它的氧化型是蓝色的，而还原型是无色的，用它来对活细
胞进行染色，由于细胞中新陈代谢的作用，使细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝从蓝色的氧化型变为无色的还原型，所以活细胞无色，而对于死细胞或代谢缓慢的老细胞，则因它们无此还原能力或还原能力极弱，而被美蓝染成蓝色或淡蓝色。
因此，用美蓝水浸片不仅可观察酵母的形态，还可以区分死、活细胞.
④甲基蓝染色法：甲基蓝染色与台盼蓝类似的染色机理。
（二）植物细胞质壁分离法及活体染色测定细胞死活
（1 ）质壁分离法：成长的植物细胞一般具有中央液泡，在中央液泡和细胞壁之间为细胞质的薄层及其内外膜——液泡膜和质膜。
液泡中的胞液具有一定的溶质势（或称渗透势），而活的原生质特别是液泡膜和质膜则具有半透性。
所以，当细胞与外界溶液接触时，便与外液构成渗透系统，并可能发生水分的移动。
若外液的水势低于胞液的溶质势，则水分外渗的结果可使原生质随着液泡一起收缩而脱离细胞壁，发生质壁分离，质壁分离的细胞与水或水势较高的溶液接触时，可重新吸水而是质壁分离复原。
（2 ）活体染色法：活体染色是利用某种对植物无害的染料稀溶液对活细胞进行染色技术。
中性红是常用的染料之一，它是一种弱碱性pH6.4〜8.0之间（由红变黄），在中性或微碱性环境中，植物的活细胞能大量吸收中性红并向液泡中排泌，由于液泡在一般情况下呈酸性反应，因此，进入液泡的中性红便解离出大量阳离子而呈现桃红色。
在这种情况下，原生质和细胞壁一般不着色。
死细胞由于原生质变性凝固，胞液不能维持在液泡内，因此，用中性红染色后，不产生液泡着色现象，相反，中性红的阳离子却与带有一定负电荷的原生质及细胞核结合，而使原生质与细胞核染色。
【实验步
1、试剂的配置：
①台盼蓝：4%台盼蓝母液：称取4g台盼蓝，加少量蒸馏水研磨，加双蒸水至100ml，用滤纸
过滤，4度保存。
使用时。
用PBS稀释至0.4%。
②中性红：先配成1%中性红水溶液（1克中性红溶于100毫升蒸馏水中）。
取这种溶液1毫升，用
0.6%生理盐水（或蒸馏水）稀释到50毫升，即成0.02%中性红水溶液，贮存在棕色瓶里，放在黑暗
处。
③美蓝：取0.5克美蓝，溶于30毫升95%酉精中，加100毫升0.01%氢氧化钾溶液，保存在棕色瓶
内。
此溶液能染细胞核，还用来染细菌、血和神经组织等。
④甲基蓝：取1克甲基蓝，溶于29毫升70%酒精中，加入70毫升蒸馏水，即成1辦基蓝染液。
2、染色操作步骤：略
3、细胞活力测定：染色过的细胞材料，放在显微镜下观察。
凡未染或染色及浅的细胞
是有活力的，而染色深的细胞是无活力的死细胞。
4、按公式计算出细胞活力。
细胞活力（% =未染色的细胞数/观察的细胞总数X 100%
【注意事项】
1.台盼蓝对人体有毒
2.对细胞进行染色时，时间不宜过长。
否则，部分活细胞也会着色，会干扰计数。