食品卫生微生物学检验菌落总数检查操作程序
简述菌落总数检测程序
菌落总数检测程序是一项常见的微生物检测方法，其目的是确定样品中存在的微生物数量，以评估食品、饮料、制药和环境等领域的卫生状况。
本文将介绍菌落总数检测程序的步骤、工具和注意事项。
1. 样品采集首先需要从待测样品中采集适量的样品，并保证样品的代表性和均匀性。
在采样过程中需要使用无菌器具，并避免手部接触样品，以避免污染。
2. 样品预处理为了减少菌落总数检测时的误差，需要对样品进行预处理。
不同样品的预处理方式不同，但通常包括以下步骤：（1）对固体样品进行破碎和混合，确保样品的均匀性；（2）对液态样品进行搅拌或振荡，使样品中的微生物均匀分布；（3）对含有大量背景杂质的样品，如土壤和食品等，需要进行稀释处理，以便于后续操作。
3. 制备培养基制备培养基是菌落总数检测中至关重要的一步。
各种微生物需要不同的培养基进行培养，但是通常使用通用培养基，如营养琼脂培养基、普通琼脂培养基等。
在制备培养基时需要注意以下几点：（1）使用高质量的培养基原料和纯水；（2）遵循制备指南，按照正确的比例和顺序添加各种原料；（3）将培养基加热至沸腾，以杀死其中的细菌和孢子。
4. 分装和接种将经过预处理的样品分装到无菌平板上，并将平板放置在无菌工作台上。
然后使用无菌技术将培养基倒在平板上，并将培养基均匀涂抹。
最后使用无菌的匙子或移液器接种样品，或者将样品滴入培养基中，并确保接种均匀。
5. 培养和计数将接种好的平板在恒温培养箱中培养，通常是在30-37℃下进行。
培养时间因不同的微生物而异，但通常是24-72小时。
在培养过程中需要注意以下几点：（1）确保培养箱内的温度和湿度稳定；（2）避免平板受到震动或移动；（3）遵守无菌技术，以避免污染。
在培养结束后，使用计数器对菌落进行计数。
菌落是指可见的单个微生物群体，通常呈圆形或不规则形状，并具有明显的色彩和质地。
每个菌落代表一个微生物单元，因此可以根据菌落数量来评估样品中的微生物总数。
6. 结果分析根据菌落总数检测结果，可以评估样品的微生物质量。
菌落总数测定操作流程
菌落总数测定操作流程一、前期准备。
咱得先把要用的东西都准备好呢。
那都需要啥呢？像培养皿，这可是让菌落安家的小房子，得干净又透亮的。
还有移液管，就像小吸管一样，用来准确吸取各种液体。
再有就是培养基啦，这就好比是菌落的食物，得营养丰富，像牛肉膏蛋白胨培养基就很不错呢。
还有各种消毒用品，像酒精啥的，要把咱们操作的小天地都打扫干净，不能让那些杂菌来捣乱呀。
二、样品采集与处理。
这一步可重要啦。
如果是测食品里的菌落总数，那可得小心地采集样品。
要是固体的食物，比如说一块面包，就从不同的地方取一点，混合到一起。
要是液体的，像牛奶，就得先把它摇一摇，让里面的东西均匀了再取样。
取样之后呢，可能还得稀释，为啥要稀释呢？因为要是菌落太多，长得到处都是，咱可就数不过来了呀。
按照一定的比例，把样品和无菌水混合，就像调果汁一样，调出合适的浓度。
三、接种。
这就像是把小种子种到地里一样。
用咱们之前准备好的移液管，吸取稀释好的样品，小心地滴到培养皿里。
然后呢，再把温热的培养基倒进去，要轻轻地倒，就像给小种子盖被子一样，可不能把它们给冲跑了。
培养基一倒进去，就得赶紧把培养皿晃一晃，让样品和培养基充分混合均匀，这样菌落才能在里面舒舒服服地生长呢。
四、培养。
把接种好的培养皿放到培养箱里。
这个培养箱就像是小温室，要给菌落创造一个合适的生长环境。
温度一般设定在37℃左右，这就像咱们人感觉比较舒服的温度一样。
时间呢，大概是24 - 48小时，在这个时间里，那些小小的菌落就会像小蘑菇一样慢慢地长出来啦。
五、计数。
时间一到，就可以把培养皿拿出来数菌落啦。
这可需要点耐心呢。
拿着小本子和笔，一个一个地数那些小小的菌落点。
有时候菌落会长得密密麻麻的，就像天上的星星一样，可不好数了。
这时候就得小心仔细，别数错了。
如果有连成一片的，那可不能算一个，要按照一定的规则来数呢。
六、结果报告。
数完菌落之后，就可以算出菌落总数啦。
根据咱们之前的稀释倍数，算出每克或者每毫升样品里大概有多少个菌落。
GB 4789.2-94 菌落总数测定
中华人民共和国国家标准食品卫生微生物学检验 GB 4789.2-94菌落总数测定代替 GB 4789.2-84Microbiological examination of food hygiene Detectionof aerobic bacterial count───────────────────────────────────────1 主题内容与适用范围本标准规定了食品中菌落总数的测定方法。
本标准适用于食品中菌落总数的测定。
2 术语菌落总数是指食品检样经过处理,在一定条件下培养后(如培基成分、培养温度和时间、pH、需氧性质等),所得1mL(g)检样中所含菌落的总数。
本方法规定的培养条件下所得结果,只包括一群在营养琼脂上生长发育的嗜中温性需氧的菌落总数。
菌落总数主要作为判定食品被污染程度的标志,也可以应用这一方法观察细菌在食品中繁殖的动态,以便对被检样品进行卫生学评价时提供依据。
3 引用标准GB 4789.28 食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂4 设备和材料4.1 温箱：36±1℃。
4.2 冰箱：0～4℃。
4.3 恒温水浴：46±1℃。
4.4 天平。
4.5 电炉。
4.6 吸管。
4.7 广口瓶或三角瓶：容量为500mL。
4.8 玻璃珠：直径约5mm。
4.9 平皿：直径为90mm。
4.10 试管。
4.11 放大镜。
4.12 菌落计数器。
4.13 酒精灯。
4.14 均质器或乳钵。
4.15 试管架。
4.16 灭菌刀或剪子。
4.17 灭菌镊子。
5 培养基和试剂5.1 营养琼脂培养基：按GB 4789.28中4.7规定。
5.2 磷酸盐缓冲稀释液：按GB 4789.28中3.22规定。
5.3 生理盐水。
5.4 75％乙醇。
6 检验程序菌落总数的检验程序如下。
┌─────┐│检样│└─────┘↓┌─────────────┐│做成几个适当倍数的稀释液│└─────────────┘↓┌──────────────┐│选择2～3个适宜稀释度││各以1mL分别加入灭菌平皿内│└──────────────┘↓┌─────────────┐│每皿内加入适量营养琼脂│└─────────────┘36±1℃↓48±2h┌─────┐│菌落计数│└─────┘↓┌──────┐│报告│└──────┘7 操作步骤7.1 检样稀释及培养7.1.1 以无菌操作,将检样25g(或mL)剪碎放于含有225mL灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内(瓶内预置适当数量的玻璃珠)或灭菌乳钵内,经充分振摇或研磨做成1∶10的均匀稀释液。
食品化验菌落总数的实验步骤
食品化验菌落总数的实验步骤1、样品的稀释固体和半固体样品：称取 25 g 样品置盛有 225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内,8000 r/min～10000 r/min 均质 1 min～2 min,或放入盛有 225 mL 稀释液的无菌均质袋中,用拍击式均质器拍打 1 min～2 min,制成 1:10 的样品匀液.液体样品：以无菌吸管吸取 25 mL 样品置盛有 225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中,充分混匀,制成 1:10 的样品匀液.2、用 1 mL 无菌吸管或微量移液器吸取 1:10 样品匀液1 mL,沿管壁缓慢注于盛有 9 mL 稀释液的无菌试管中（留意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面）,振摇试管或换用 1 支无菌吸管反复吹打使其混合匀称,制成 1:100 的样品匀液.3、制备 10 倍系列稀释样品匀液.每递增稀释一次,换用 1 次1 mL 无菌吸管或吸头.4、依据对样品污染状况的估量,选择 2 3 个相宜稀释度的样品匀液（液体样品可包括原液）,在进行 10 倍递增稀释时,吸取 1 mL 样品匀液于无菌平皿内,每个稀释度做两个平皿.同时,分别吸取 1 mL 空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白对比.5、准时将 15 mL～20 mL 冷却至46 ℃的平板计数琼脂培育基（可放置于46 1 ℃℃恒温水浴箱中保温）倾注平皿,并转动平皿使其混合匀称.6、培育 :待琼脂凝固后,将平板翻转,36 1 ℃℃培育48 h2 h.水产品 30 1 ℃℃培育 72 h3 h.假如样品中可能含有在琼脂培育基表面充满生长的菌落时,可在凝固后的琼脂表面掩盖一薄层琼脂培育基（约 4 mL）,凝固后翻转平板,条件进行培育.7、菌落计数可用肉眼观看,必要时用放大镜或菌落计数器,记录稀释倍数和相应的菌落数量.菌落计数以落形成单位（colony-forming units,CFU）表示.8、选取菌落数在 30 CFU～300 CFU之间、无扩散菌落生长的平板计数菌落总数.低于 30 CFU的平板记录详细菌落数,大于 300 CFU的可记录为多不行计.每个稀释度的菌落数应采纳两个平板的平均数.9、其中一个平板有较大片状菌落生长时,则不宜采纳,而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数；若片状菌落不到平板的一半,而其余一半中菌落分布又很匀称,即可计算半个平板后乘以代表一个平板菌落数.10、当平板上消失菌落间无明显界线的链状生长时,则将每条单链作为一个菌落计数.。
菌落总数操作手册
菌落总数操作手册
一、概述
菌落总数是指在一定条件下生长的细菌菌落数，用于评估食品或环境的卫生质量。
本操作手册将详细介绍如何进行菌落总数检测，以确保实验结果的准确性和可靠性。
二、实验材料
1. 培养基：平板计数琼脂（PCA）
2. 试剂：无菌生理盐水
3. 器具：无菌棉签、无菌培养皿、无菌移液管（1mL）、天平、pH计、恒温培养箱、计时器、灭菌锅
三、实验步骤
1. 样品采集：使用无菌棉签采集适量样品，并放入无菌容器中。
对于液体样品，直接使用无菌移液管取样；对于固体或半固体样品，需将样品研磨或搅拌均匀后取样。
2. 样品稀释：将采集的样品进行稀释，使细菌能更好地在培养基上生长。
根据样品性质和预计菌落数，选择适当的稀释倍数。
一般采用10倍稀释法。
3. 制备平板：将PCA培养基加热融化后，冷却至45℃左右，倒入无菌培养皿中，每皿约15mL。
4. 接种样品：将稀释后的样品取1mL加入已制备好的平板中，用无菌玻璃棒均匀涂布在培养基上。
5. 培养：将培养皿倒置放入恒温培养箱中，在37℃下培养24-48小时。
6. 计数：计数平板上的菌落数，并记录结果。
根据实验要求，计算出样品中的菌落总数。
7. 结果报告：根据实验数据，撰写实验报告并向上级汇报检测结果。
四、注意事项
1. 实验前应保证所有器具和试剂的无菌状态，避免交叉污染。
2. 实验过程中要保持清洁卫生，避免人为误差。
菌落总数检验操作规程
菌落总数检验操作规程一、实验室准备工作1.准备培养基：根据实验需求选择适当的培养基，如营养琼脂培养基、大肠埃希氏菌选择性培养基等。
注意培养基的成分和质量。
2.准备培养基平板：测量合适的培养基量并加入培养皿中，使用无菌技术将培养基均匀倒入培养皿，标明编号和日期。
二、样品处理1.准备样品：如食品样品，需要将样品称重并加入适当的生理盐水中，用搅拌器或均质仪进行均匀悬浮。
2.稀释样品：根据实验需要，对样品进行系列稀释。
取适量的悬浮样品，依次加入尺量瓶中的生理盐水，振摇均匀。
三、接种培养1.无菌操作：在无菌工作台内进行操作，穿戴好无菌手套，将培养皿放入工作台上，注意防止污染。
2.接种样品：使用无菌移液器，取适量的稀释样品均匀滴入培养皿上。
3.均匀涂布：使用无菌匀涂棒，将样品在培养皿上均匀涂抹，注意避免混入外来微生物。
四、培养条件1.始菌箱：将接种后的培养皿置于始菌箱中，设定适当的温度和湿度（如37℃，24小时）。
2.孵化箱：将始菌箱中的培养皿转移到恒温培养箱中适当孵育时间，保持适宜温度及湿度。
五、菌落计数1.观察菌落：取出培养好的菌落总数平板，放在均匀光源下观察菌落的形态、颜色、大小等特征，标记异常菌落。
2.计数菌落：使用计数器或显微镜对菌落进行计数，记录结果，并用公式计算菌落总数。
每个菌落总数平板至少计数两遍，计算平均值。
六、数据分析与结果判定1.数据分析：对不同样品的检测结果进行归类整理，统计菌落总数的分布情况。
2.结果判定：根据相应的标准或规定，比较样品的检测结果与标准要求，判定样品是否合格。
七、清洗和消毒1.清洗：将培养皿彻底清洗干净，清除残留的培养基和菌落。
2.消毒：将使用过的器材进行高温高压消毒或化学消毒，确保无菌环境。
以上就是菌落总数检验操作规程的简要示例，实验过程中需严格遵守无菌操作规范，并根据具体实验要求进行相应的调整。
在实验过程中，及时记录实验数据，注意安全操作。
实验完成后，对结果进行统计分析和归档保存。
简述菌落总数检测程序
简述菌落总数检测程序
菌落总数检测程序是用来确定食品、水、空气等样品中微生物
总数的一种常见检测方法。
其主要步骤包括样品制备、稀释、接种、培养和计数等。
首先，样品制备阶段包括将样品称取并加入适当的稀释液中进
行均匀搅拌或震荡，以确保样品中的微生物能够充分分散。
接下来是稀释阶段，将样品进行系列稀释，以便于后续的菌落
计数。
通常采用10倍稀释法，即取1ml样品加入9ml稀释液，得到的新溶液再取1ml加入9ml稀释液，以此类推。
然后进行接种阶段，将适量稀释后的样品溶液分别接种到含有
适当培养基的琼脂平板上，并通过灭菌的技术将样品均匀涂布在琼
脂平板表面。
接着是培养阶段，将接种好的琼脂平板置于恒温培养箱中，让
微生物在适宜的温度下进行生长，通常培养时间为24-48小时。
最后是计数阶段，通过肉眼或者计数仪器对琼脂平板上形成的
菌落进行计数，得出菌落总数。
通常，只有直径在1-2mm之间、形态典型的菌落才会被计数。
总的来说，菌落总数检测程序通过样品制备、稀释、接种、培养和计数等步骤，能够对样品中的微生物总数进行评估，为食品、水、空气等领域的卫生安全提供重要的参考依据。
食品中微生物检测操作规程
微生物检测操作规范1范围本标准规定了食品中菌落总数的测定方法本标准适用于食品生产线微生物控制及验证计划。
本标准适用于食品产品菌落总数、大肠菌群检测。
2 规范性引用标准GB 4789.1-2016《食品安全国家标准食品微生物学检验总则》。
GB/T 4789.3-2003《食品安全国家标准食品微生物学检验大肠菌群计数》。
GB 4789.2-2016《食品安全国家标准食品微生物学检验菌落总数测定》。
4 设备和材料恒温培养箱：36℃±1℃。
恒温水浴箱：46℃±1℃。
天平：感量为0.1g。
无菌吸管：1ml（具有0.01ml刻度）、10ml（具有0.1ml刻度）。
无菌培养皿：直径90mm。
无菌锥形瓶：容量500ml；或225ml塑料稀释瓶（带内垫，可高温灭菌）。
灭菌试管：16mm×160mm；或10ml-20ml无菌管。
显微镜：10×-100×4 培养基和试剂平板计数琼脂培养基：GB 4789.2-2016 附录A.1。
无菌生理盐水：GB 4789.2-2016 附录A.3。
乳糖胆盐发酵管：按GB/T 4789.3-2003中4.9规定。
伊红美蓝琼脂平板：按GB/T 4789.3-2003中4.25规定。
乳糖发酵管：按GB/T 4789.3-2003中2.2规定。
EC肉汤：按GB/T 4789.28-2003中4.11规定。
格兰仕染色液：按GB/T 4789.3-2003中4.9规定。
5菌落总数检验程序实验前准备移液管、三角瓶、试管包扎、灭菌移液管：洗净烘干后在吸管粗头顶端约0.5cm处，塞上一小段棉花，后用4-5cm宽的报纸或牛皮纸将其以下图所示包扎好。
三角瓶包扎图例将包扎后的器具放入灭菌锅，121℃ 15min灭菌。
a.样品处理面饼样品经粉碎机粉碎后，称取25g粉碎样加入装有225ml无菌生理盐水的稀释瓶内，充分振摇，做成1:10的均匀稀释液。
注意：①实验前无菌室提前30min打开紫外灯进行消毒，进入无菌室前洗手消毒，开始试验、样品处理前使用装有75%酒精的喷壶进行手部消毒。
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菌落总数检查操作程序
1 实验前准备
1.1 稀释水、刻度吸管、平皿
稀释水：瓶装PH值7.0无菌生理盐水，塞上胶塞，按高压蒸气灭菌操作程序，121℃湿热灭菌30分钟。
取0.2ml、1ml、5ml、10ml刻度吸管、平皿置于金属容器中，140℃干热灭菌2小时。
1.1.1 培养基准备：
平板计数琼脂培养基
以上实验所需干粉培养基均由中检所提供，分别按说明加适量水加热溶解后，塞上胶塞，湿热灭菌30分钟备用。
1.1.2 无菌衣
将无菌衣、头罩、口罩、乳胶手套叠好，置于无菌衣袋中，湿热灭菌30分钟。
1.2 无菌室及操作台的准备
用0.1%的新洁尔灭溶液或75%乙醇溶液将操作台，天花板，墙壁，地面擦洗一遍，同时将操作台用0.1%新洁尔灭溶液或75%乙醇溶液擦洗一遍。
将实验所需物品通过传递窗移入无菌室，打开空气净化系统，打开紫外灯，杀菌0.5-1个小时。
2 实验操作
2.1 进入无菌室更衣间，用0.1%新洁尔灭溶液或75%乙醇溶液消毒手及腕部至少一分钟，戴上头罩、口罩，穿好无菌衣及无菌手套后，进入无菌室，开始实验操作。
菌落总数操作程序
选择2-3个适宜稀释度的样品匀液，各取1ml分别放入无菌皿内
2.2 供试液的稀释及操作
2.2. 1 固体：取供试品25g，加无菌生理盐水225ml，溶解混匀，作为1：10的供试液。
2.2.2 液体：取供试品25 ml，加无菌生理盐水225ml，溶解混匀，作为1：10的供试液。
2.2.3 用1ml无菌吸管或微量移液器吸取1：10样品匀液1 ml，沿管壁缓慢注于盛有9
ml稀释液的无菌试管中，振摇试管或换用1支无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成1：100的样品匀液。
2.2.4 按以上操作程序，制备10倍系列稀释样品匀液。
每递增稀释一次，换用1次1 ml 无菌吸管或吸头。
2.2.5 根据对样品污染状况的估计，选择2-3个适宜稀释度的样品匀液（液体样品可包括原液），在进行10倍递增稀释时，吸取1 ml样品匀液于无菌平皿内，每个稀释度做两个平皿。
同时，分别吸取1 ml空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照。
2.2.6 及时交15-20 ml冷却至46的平析计数琼脂培养基倾注平皿，并转动平皿使其混合均匀。
2.2.7 待琼脂凝固后，将平板翻转，36℃±1℃培养48±2小时。
如果样品中可能含有在琼脂培养表面弥漫生长的菌落时，可在凝固后的琼脂覆盖一薄层琼脂培养基，凝固后翻转平板培养。
2.3 菌落计数
2.3.1 做平板菌落计数时，可用肉眼观察。
必要时用放大镜或菌落计数器，记录稀释倍数和相应的菌落数量。
2.4 菌落计数的报告
2.4.1 平板菌落数的选择
选取菌落数在30-300CFU之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。
低于30CFU 的平板记录具体菌落数，大于300CFU的可记录为多不可计。
每个稀释度的菌落数应采用两个平板的平均数；其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片
状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数；若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘2，代表一个平板菌落数。
平板内出现菌落间无明显界线的链状生长时，则应将每条单链作为一个菌落计数。
2.4.2 菌落总数的计算方法
2.4.2.1 若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内，计算两个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释度，作为每g(ml)样品中菌落总数结果。
2.4.2.2 若有两个连续稀释度的平均菌落数在适宜计数范围内时，按以下公式计算：
ΣC
N =
（n1＋0.1n2）d
式中：
N——样品中菌落数；
ΣC——平板（含适宜范围菌落数的平板）菌落数之和；
n1——第一稀释度（低稀释度）平板个数；
n2——第二稀释度（高稀释度）平板个数；
d——稀释因子（第一稀释度）
2.4.2.3若所有稀释度的平板上菌落数均大于300CFU，则对稀释度最高的平板进行计数，其他平板可记录为多不可计，结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算。
2.4.2.4 若所有稀释度的平板菌落数均小于30CFU，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数计算。
2.4.2.5 若所有稀释度（包括液体样品原液）平板均无菌落生长，则以小于1乘以最低稀释倍数计算。
2.4.2.6若所有稀释度的平板菌落数均不在30-300CFU之间，其中一部分小于30CFU 或大于300CFU，则以最接近30CFU或300CFU的平均菌落数乘以稀释倍数计算。
2.4.3 菌落数的报告
菌落数小于100CFU时，按“四舍五入”原则修约，以整数报告；菌落数大于或等于100时，第3位数字采用“四舍五入”原则修约后，取前2位数字，后面用0代替位
数；也可用10的指数形式来表示，按“四舍五入”原则修约后，采用两位有效数字；若所有平板上为蔓延菌落而无法计数，则报告菌落蔓延；若空白对照上有菌落生长，则此次检测结果无效。
称重取样以CFU/g为单位报告，体积取样以CFU/ml为单位报告。