双歧杆菌实验操作
双歧杆菌实验操作
双歧杆菌实验操作双歧杆菌（Lactobacillus）是一种常见的革兰氏阳性菌，广泛存在于人体的肠道、口腔、阴道等部位，对人体具有重要的生理功能和健康益处。
在实验室中，通过培养双歧杆菌，我们可以进一步研究它的特性、代谢途径、功能以及应用价值。
以下是一个关于双歧杆菌实验操作的示例，包括菌株的分离、培养、保存和鉴定等步骤。
1.菌株的分离和纯化从人体标本或商业产品中获得含有双歧杆菌的样品，例如：粪便、口腔漱口水、乳制品等。
将样品悬浮于无菌PBS（磷酸盐缓冲溶液）中，并进行10倍序列稀释。
将适量的悬浮液均匀涂布在含有适宜培养温度和营养成分的琼脂平板上。
经过孵育后，从单个菌落中刺取分离得到的单菌株。
2.菌株的培养将分离得到的单菌株接种到含有适宜培养基（如MRS培养基）的液体培养物中。
培养条件包括适宜的温度（通常在30-37℃之间）、PH值和氧气供应等。
静态培养通常在试管中进行，而摇床培养则需提供常规的摇床条件。
3.菌株的保存为了长期保存双歧杆菌菌株，常常采用冷冻保存和干燥保存。
其中，冷冻保存利用甘油或液氮冷冻对菌株进行保藏。
干燥保存是将菌株培养物在适当的保护剂（如蔗糖、蛋白质）的作用下，通过真空或喷雾冻干处理。
冷冻保存要求贮存于低温（-70℃至-80℃）环境中，而干燥保存则可在室温下进行。
4.菌株的鉴定确定菌株是双歧杆菌的一种，需要通过鉴定方法进行确认。
传统的鉴定方法包括菌落形态观察、革兰氏染色、形态学特征、生理和生化试验等。
另外，分子生物学技术也可以用于鉴定双歧杆菌，如PCR扩增特定的双歧杆菌基因片段或测序分析菌株的16SrRNA基因序列。
5.功能研究在鉴定菌株后，可以进一步研究双歧杆菌的功能特性和代谢途径。
例如，可以采用培养基成分和环境参数的调整来研究双歧杆菌的生长条件。
也可以评估双歧杆菌在产生保健益生素、抑制致病菌、增强免疫等方面的功能。
总结：通过以上的实验操作，可以实现对双歧杆菌菌株的分离、培养、保存和鉴定。
食品微生物学检验 双歧杆菌检验
食品安全国家标准食品微生物学检验双歧杆菌检验1 范围本标准规定了食品用双歧杆菌（Bifidobacterium）的鉴定及计数方法。
本标准适用于食品用双歧杆菌纯菌菌种的鉴定及计数。
本标准适用于食品中仅含有单一的双歧杆菌菌种的鉴定；以及食品中仅含有双歧杆菌属的计数，双歧杆菌属可包含一种或多种不同的双歧杆菌菌种。
2 设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：2.1 恒温培养箱：36 ℃±1 ℃。
2.2 冰箱：2 ℃～5 ℃。
2.3 天平：感量0.1 g。
2.4 无菌试管：18 mm×180 mm、15 mm×100 mm。
2.5 无菌吸管：1 mL（具0.01 mL刻度）、10 mL（具0.1 mL刻度）或微量移液器及配套吸头。
2.6 无菌培养皿：直径90 mm。
3 培养基和试剂3.1 双歧杆菌培养基：见附录A.1。
3.2 PYG培养基：见附录A.2。
3.3 甲醇：分析纯。
3.4 三氯甲烷：分析纯。
3.5 冰乙酸：分析纯。
3.6 乳酸：分析纯。
3.7 乙酸标准溶液：吸取分析纯冰乙酸5.7 mL，移入100 mL容量瓶中，加水至刻度，标定方法见附录B.1，此溶液浓度约为1 mol/L。
3.8 乳酸标准溶液：吸取分析纯乳酸8.4 mL，移入100 mL容量瓶中，加水至刻度，标定方法见附录B.1，此溶液浓度约为1 mol/L。
4 检验程序双歧杆菌的检验程序见图1。
图1 双歧杆菌的检验程序5 操作步骤5.1无菌要求：全部操作均应遵循无菌操作程序。
5.2 食品用双歧杆菌纯菌菌种的鉴定及计数5.2.1 鉴定5.2.1.1 接种：半固体或液体菌种直接接种在双歧杆菌琼脂平板。
真空冷冻干燥菌种，先加适量灭菌生理盐水，溶解菌粉，然后接种在双歧杆菌琼脂平板。
平板在36 ℃±1 ℃厌氧培养48 h±2 h。
5.2.1.2 涂片镜检：双歧杆菌为革兰氏染色阳性，不抗酸、无芽孢、无动力，菌体形态多样，呈短杆状、纤细杆状或球形，可形成各种分支或分叉形态。
乳与乳制品微生物检验方法双歧杆菌的检验
乳与乳制品微生物检验方法双歧杆菌的检验YLNB 3.7 1、引用依据：GB/T4789.34-20032、术语和定义双歧杆菌：一群能分解葡萄糖，产生大量乙酸和乳酸，厌氧，不耐酸，不形成芽孢，不运动，细胞呈现多样形态的革兰氏阳性杆菌。
3、仪器及器材3.1培养箱：36±1℃；3.2 恒温水浴：46±1℃；3.3显微镜；3.4厌氧培养箱；3.5离心机；3.6 天平；3.7电炉；3.8吸管；3.9 广口瓶或三角瓶：容量为500ml；3.10 平皿：直径约90mm；3.11 试管；3.12 酒精灯；3.13 灭菌刀或剪子；3.14 灭菌镊子。
4、培养基和试剂4.1 生理盐水；4.2 75%乙醇溶液；4.3 TPY 琼脂培养基；4.4 BL 琼脂培养基；4.5 BBL 琼脂培养基；4.6双歧杆菌生化用基础培养基 ；4.7 PYG 液体培养基；4.8革兰氏染色液；4.9灭菌液体石蜡。
5. 检验程序36±1℃ 72h ±3h37℃ 72 h测定乙酸、乳酸 生化培养观察10天接受PYG 厌氧培养 分纯 厌氧培养 选择2—3个适当稀释度，各取0.1mL 分别涂布于BL,BBL,TPY 培养基 25g （mL ）检样加225mL 灭菌生理盐水，做成几个适当倍数的稀释液 菌中鉴定报菌落计数报告 革兰氏染色，过氧化氢酶试验6、方法6.1以无菌操作将充分混匀的检样25g（ml）放入含有225ml 灭菌生理盐水的灭菌锥形瓶内做成1：10的均匀稀释液。
6.2 用1 ml灭菌吸管吸取1：10稀释液1 ml，沿管壁徐徐注入含有9 ml灭菌生理盐水的试管内，振摇混匀，作成1：100的稀释液。
6.3 另取1 ml灭菌吸管，按上述操作顺序，作10倍递增稀释液，如此每递增一次，即换用1支1ml灭菌吸管。
6.4选取2个～3个以上适宜稀释度，分别在作10倍递增稀释的同时，各取0.1ml分别加入计数培养基平皿，均匀涂布，每个稀释度作两个平皿。
乳与乳制品微生物检验方法双歧杆菌的检验
乳与乳制品微生物检验方法双歧杆菌的检验YLNB 3.7 1、引用依据：GB/T4789.34-20032、术语和定义双歧杆菌：一群能分解葡萄糖，产生大量乙酸和乳酸，厌氧，不耐酸，不形成芽孢，不运动，细胞呈现多样形态的革兰氏阳性杆菌。
3、仪器及器材3.1培养箱：36±1℃；3.2 恒温水浴：46±1℃；3.3显微镜；3.4厌氧培养箱；3.5离心机；3.6 天平；3.7电炉；3.8吸管；3.9 广口瓶或三角瓶：容量为500ml；3.10 平皿：直径约90mm；3.11 试管；3.12 酒精灯；3.13 灭菌刀或剪子；3.14 灭菌镊子。
4、培养基和试剂4.1 生理盐水；4.2 75%乙醇溶液；4.3 TPY 琼脂培养基；4.4 BL 琼脂培养基；4.5 BBL 琼脂培养基；4.6双歧杆菌生化用基础培养基；4.7 PYG 液体培养基；4.8革兰氏染色液；4.9灭菌液体石蜡。
5. 检验程序36±1℃ 72h±3h37℃ 72 h测定乙酸、乳酸生化培养观察10天接受PYG 厌氧培养分纯厌氧培养选择2—3个适当稀释度，各取0.1mL 分别涂布于BL,BBL,TPY 培养基25g （mL ）检样加225mL 灭菌生理盐水，做成几个适当倍数的稀释液菌中鉴定报菌落计数报告革兰氏染色，过氧化氢酶试验6、方法6.1以无菌操作将充分混匀的检样25g（ml）放入含有225ml 灭菌生理盐水的灭菌锥形瓶内做成1：10的均匀稀释液。
6.2 用1 ml灭菌吸管吸取1：10稀释液 1 ml，沿管壁徐徐注入含有9 ml灭菌生理盐水的试管内，振摇混匀，作成1：100的稀释液。
6.3 另取1 ml灭菌吸管，按上述操作顺序，作10倍递增稀释液，如此每递增一次，即换用1支1ml灭菌吸管。
6.4选取2个～3个以上适宜稀释度，分别在作10倍递增稀释的同时，各取0.1ml分别加入计数培养基平皿，均匀涂布，每个稀释度作两个平皿。
双歧杆菌实验操作
双歧杆菌的分离与鉴定一、实验背景双歧杆菌( Bifidobacterium) 系1899 年巴斯德研究院的Tissier首先在以母乳喂养的婴儿粪便中发现并分离出来[1]。
双歧杆菌是人体肠道内重要的益生菌之一，还具有抗肿瘤、抗衰老、营养等作用。
双歧杆菌为专性厌氧菌，对营养条件要求苛刻，活性保持相对比较困难。
因此，研究一种适宜的分离方法具有现实的意义。
为了丰富双歧杆菌菌种资源及开发双杆菌产品，本实验主要是了进行双歧杆菌分离、纯化、生化鉴定以及PCR检测，进行对双歧杆菌的分离与鉴定。
二、实验步骤（一）材料1、分离源母乳喂养的健康婴儿粪便2、培养基和试剂TPY培养基、生理盐水、革兰染料（结晶紫染色液、卢戈氏碘液、95%乙醇、石碳酸复红液）、厌氧袋（硼氢化钾、柠檬酸、碳酸氢钠）、生化鉴定试剂管（F6PPK 试验、乳糖、葡萄糖、硫化氢、纤维二糖、棉籽糖、山梨醇、淀粉、葡萄糖酸盐、木糖、甘露糖、蔗糖、麦芽糖、海藻糖、蜜二糖、甘露醇、吲哚、硝酸盐还原、明胶液化、阿拉伯糖、过氧化氢、联苯胺）、双蒸水、TaKaRa Taq、10×PCR Buffer(Mg2+Plus)、dNTP Mixture(各2.5mM)、16sRNA 90916 F、16sRNA 90916 R、3、设备PCR仪、紫外分光光度仪、凝胶电泳仪、凝胶成像分析系统、恒温培养箱、厌氧罐、无菌操作台、冰箱、显微镜、接种环等微生物实验室所需的常规设备。
（二）实验内容1、样品的采集与处理（1）用灭菌棉签取母乳喂养的健康婴儿的粪便约l g，放入装有9ml生理盐水的无菌试管中，充分振荡摇匀，做成1∶10 的均匀稀释液。
另取1 mL 灭菌的移液管吸取1∶10 的稀释液注入到灭过菌的含有9 mL生理盐水的试管中，充分振荡摇匀，做成1∶100 的均匀稀释液。
按上述操作顺序，依次做成1×10- 3～1×10- 7 梯度的均匀稀释液。
（2）分别取1×10- 1~1×10- 7 梯度的均匀稀释液在TPY培养基平板上进行划线分离（预实验），37℃厌氧培养24~48h观察哪几个梯度的双歧杆菌分离的比较好，然后进行试验。
实验方案(双歧杆菌的分离)
1双歧杆菌的分离1.1样品取出生后20天母乳喂养健康婴儿粪便。
1.2培养基根据目前的双歧杆菌选择性培养基，以及X-Gal在这方面的应用。
选择使用NPNL培养基，在其基础上添加X-Gal。
1.2.1缓冲蛋白胨水溶液（BP）成份：蛋白胨10gA磷酸氢二钠2g葡萄糖5g 磷酸二氢钾2g氯化钠5g 蒸馏水1000ml制法：精确称取各种试剂，加人到1000ml的蒸馏水中，加热溶化后分装于250ml的三角瓶中，每瓶90ml，121°C，杀菌15min后置4°C的冰箱中备用。
1.2.2选择性改良NPNL培养基（苏世彦）成份：酵母膏5g淀粉0.5g蛋白胨10g L-半胱氨酸0.5g胰蛋白胨5g溶液A10ml大豆蛋白胨5g溶液B5ml葡萄糖10g溶液C50ml乳糖3g琼脂A15g吐温801g pH7.2牛肝提取液150ml制法：将各成分准确量取后，分别加热溶化，混合摇匀后分装，121C杀菌10min，备用。
溶液A：K2HPO4 10g、KH2PO4 10g 溶于蒸馏水100ml。
溶液B：FeSO ・7H O 0.2g、MgSO ・7H O 4g、MnSO ・4H O4 2 8^42$ 4 20.135g、NaCl 0.2g 溶于蒸馏水100ml。
溶液C：丙酸钠30g、硫酸巴龙霉素400mg、硫酸新霉素200mg、NaCl 6g溶于蒸馏水1000ml。
1.2.3 NPNL培养基（孙雪）培养基成分及用量：牛肉浸汁粉（oxoid）3g，蛋白胨10g，胰蛋白酶5g，植胨3g,酵母浸出汁5g,肝浸出汁150ml，葡萄糖10g，可溶性淀粉0.5g，溶液A 10ml,溶液B 5ml,吐温80 1g,盐酸半胱氨酸0.5g, 琼脂15g，蒸馏水815ml, X-Gal（5-漠-4-氯-3』引噪-。
-D-半乳糖苷）60mg。
pH 7.2, 121 °C, 15min 高压灭菌。
溶液A：K2HPO4 25g, KH2PO4 25g，蒸馏水250ml。
双歧杆菌实验操作
双歧杆菌实验操作双歧杆菌是一种对人体有益的细菌，它能帮助消化、增强免疫系统以及维持身体健康。
为了了解双歧杆菌的生长和培养条件，进行了以下实验操作。
实验名称：双歧杆菌的培养和生长条件研究实验目的：探究双歧杆菌的最佳生长和培养条件，为后续研究提供基础。
实验材料：1.LB琼脂平板和培养基2.双歧杆菌培养液3.双歧杆菌菌株4.灭菌剂5.培养皿6.培养瓶7.石棉网8.无菌吸管9.无菌培养箱实验步骤：1.准备工作a.所有实验器材要进行高温高压灭菌处理，确保无菌条件。
b.双歧杆菌菌株从冻存物中取出，置于LB琼脂平板上，37℃恒温培养箱中培养过夜。
c.同时准备LB琼脂平板，在培养箱中恒温保持。
2.建立原始菌种a.从培养过夜的LB琼脂平板上选取一个单独的菌落，用无菌吸管轻轻吸取，均匀涂布于另一个LB琼脂平板表面。
b.将新的LB琼脂平板颠倒放置于培养箱中，37℃恒温培养24小时。
c.检查平板上是否有单独的菌落，若有则进行后续实验。
3.建立培养液a.准备LB培养基，加入适量的琼脂，煮沸溶解后静置至37℃。
b.预测双歧杆菌菌株的生长曲线，选择合适的培养液和培养时间。
c.将适量的培养液倒入无菌培养瓶中，盖上无菌瓶盖，并用石棉网覆盖。
4.培养和生长a.在培养液中加入适量的双歧杆菌菌株，以达到适合培养的细菌浓度。
b.将培养瓶置于37℃恒温培养箱中。
c.每天监测双歧杆菌的生长情况，记录菌株的数量和培养液的浑浊度。
5.结果分析a.观察双歧杆菌的生长情况，包括生长速度、最适生长温度和最适培养液pH值。
b.对实验数据进行统计分析，绘制生长曲线和生长速率图。
c.比较不同因素对双歧杆菌生长的影响，并得出结论。
实验注意事项：1.所有实验用具和培养基要进行高温高压灭菌处理。
2.在操作过程中要保持无菌环境，避免外界细菌的污染。
3.严格遵守实验室安全规范，避免接触到有害物质。
4.在实验过程中要定期检查和记录双歧杆菌的生长情况，以便后续分析和对比。
双歧杆菌的培养
双歧杆菌的培养和分离双歧杆菌是专性厌氧菌，对氧气非常敏感，因此，双歧杆菌的分离、培养及活菌计数的关键是提供无氧和低氧化还原电势的培养环境。
双歧杆菌的最适生长温度37℃~41℃，最低生长温度25℃~28℃，最高43℃~45℃。
初始最适pH 6.5~7.0，在pH4.5~5.0或pH 8.0~8.5不生长。
其细胞呈现多样形态，有短杆较规则形、纤细杆状具有尖细末端形、球形、长杆弯曲形、分枝或分叉形、棍棒状或匙形。
单个或链状、V形、栅栏状排列，或聚集成星状。
革兰氏阳性，不抗酸，不形成芽孢，不运动。
双歧杆菌的菌落光滑、凸圆、边缘完整、乳脂至白色、闪光并具有柔软的质地。
双歧杆菌是人体内的正常生理性细菌，定殖于肠道内，是肠道的优势菌群，占婴儿消化道菌丛的92%。
该菌与人体终生相伴，其数量的多少与人体健康密切相关，是目前公认的一类对机体健康有促进作用的代表性有益菌。
该菌可以在肠粘膜表面形成一个生理性屏障，从而抵御伤寒沙门氏菌、致泻性大肠杆菌，痢疾致贺氏菌等病原菌的侵袭，保持机体肠道内正常的微生态平衡；能激活巨噬细胞的活性，增强机体细胞的免疫力；能合成B族维生素、烟酸和叶酸等多种维生素；能控制内毒素血症和防治便秘，预防贫血和佝偻病；可降低亚硝胺等致癌物前体的形成，有防癌和抗癌作用；能拮抗自由基、羟自由基及脂质过氧化，具有抗衰老功能。
双歧杆菌的培养方法很多，如厌氧箱法、厌氧袋法、厌氧罐法。
本实验介绍的是一种简便的试管培养法——亨盖特厌氧滚管技术该技术的优点是：预还原培养基制好后，可随时取用进行试验；任何时间观察或检查试管内的菌都不会干扰厌氧条件。
近年来兴起的一种新的RAPD等分子生物学技术对双歧杆菌进行基因指纹图谱的构建，分析不同双歧杆菌种间存在的同源性和多态性；RAPD技术也可用于双歧杆菌菌种鉴定及分型。
一般来讲，我们都应用适合鉴定所有厌氧菌的方法，主要包括双歧杆菌特定酶的检测、乙酸、乳酸等有机酸的测定、糖发酵试验和其他相关指标等。
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双歧杆菌的分离与鉴定
一、实验背景
双歧杆菌( Bifidobacterium) 系1899 年巴斯德研究院的Tissier首先在以母乳喂养的婴儿粪便中发现并分离出来[1]。
双歧杆菌是人体肠道内重要的益生菌之一，还具有抗肿瘤、抗衰老、营养等作用。
双歧杆菌为专性厌氧菌，对营养条件要求苛刻，活性保持相对比较困难。
因此，研究一种适宜的分离方法具有现实的意义。
为了丰富双歧杆菌菌种资源及开发双杆菌产品，本实验主要是了进行双歧杆菌分离、纯化、生化鉴定以及PCR检测，进行对双歧杆菌的分离与鉴定。
二、实验步骤
（一）材料
1、分离源
母乳喂养的健康婴儿粪便
2、培养基和试剂
TPY培养基、生理盐水、革兰染料（结晶紫染色液、卢戈氏碘液、95%乙醇、石碳酸复红液）、厌氧袋（硼氢化钾、柠檬酸、碳酸氢钠）、生化鉴定试剂管（F6PPK 试验、乳糖、葡萄糖、硫化氢、纤维二糖、棉籽糖、山梨醇、淀粉、葡萄糖酸盐、木糖、甘露糖、蔗糖、麦芽糖、海藻糖、蜜二糖、甘露醇、吲哚、硝酸盐还原、明胶液化、阿拉伯糖、过氧化氢、联苯胺）、双蒸水、TaKaRa Taq、10×PCR Buffer(Mg2+Plus)、dNTP Mixture(各2.5mM)、16sRNA 90916 F、16sRNA 90916 R、3、设备
PCR仪、紫外分光光度仪、凝胶电泳仪、凝胶成像分析系统、恒温培养箱、厌氧罐、无菌操作台、冰箱、显微镜、接种环等微生物实验室所需的常规设备。
（二）实验内容
1、样品的采集与处理
（1）用灭菌棉签取母乳喂养的健康婴儿的粪便约l g，放入装有9ml生理盐水的无菌试管中，充分振荡摇匀，做成1∶10 的均匀稀释液。
另取1 mL 灭菌的移液管吸取1∶10 的稀释液注入到灭过菌的含有9 mL生理盐水的试管中，充分振荡摇匀，做成1∶100 的均匀稀释液。
按上述操作顺序，依次做成1×10- 3～1×10- 7 梯度的均匀稀释液。
（2）分别取1×10- 1~1×10- 7 梯度的均匀稀释液在TPY培养基平板上进行划线分离（预实验），37℃厌氧培养24~48h观察哪几个梯度的双歧杆菌分离的比较好，然后进行试验。
（例如1×10- 5~1×10- 7 )
3、分离培养
用接种环取a、b、c三种梯度的稀释液中的双歧杆菌进行TPY培养基平板划线分
离，每个梯度的稀释液划2块平皿，并做空白对照。
37℃厌氧培养24~48h。
4、革兰染色和镜检
双歧杆菌经24~48h 培养后多数形成直径为0.5 ~ 1mm、凸起、边缘整齐、乳白色或灰白色不透明的菌落，菌体宽约0.5μm，长度在1~6μm 之间，有弯曲和分叉现象，形成双歧杆菌特有的“V”或“Y”结构[1]。
挑选平板上菌落较小、光滑、凸圆、边缘整齐、白色或乳白色不透明、质地柔软的特征菌落[2]，取菌落的一半进行涂片，然后进行革兰氏染色，如果挑选的菌落是革兰氏阳性、显微镜下具有双歧杆菌形态特征，如菌体形状不太规则，呈弧形、两端大小不一、V 形或Y 形的菌落，那么取菌落的另一半进行划线平板分离培养，再革兰染色和镜检。
重复上述实验2~3次，直至出现分离出纯净的单个菌落。
5、生化鉴定
取分离纯化的双歧杆菌菌落，分别接种在以上几种生化鉴定试剂管内，并用液态石蜡油封口，观察其反应结果。
6、PCR法检测
从步骤4中分离出来的纯净单菌落进行大面积的一区划线，37℃厌氧培养24~48h。
取培养好的双歧杆菌接种到装有双蒸水的离心管中，摇匀，离心5 000 r/min,5 min, 弃上清, 用双蒸水重悬后同上离心, 双蒸水再次重悬, 煮沸15 min, 离心12 000 r/min, 5 min，取上清,即DNA。
配置PCR扩增体系：10×PCR Buffer(Mg2+Plus)15μl、TaKaRa Taq0.75μl、dNTP Mixture(各2.5mM)12μl、16sRNA 90916 F3μl、16sRNA 90916 R3μl、双蒸水111.75 μl，各成分依次加入到灭菌2 ml 离心管中（超净台内操作），离心10s.同时以装有49ul体系、1ul双蒸水无菌离心管作为阴性对照。
将配制好的PCR体系放置于PCR仪中进行扩增。
PCR 循环参数及扩增条件: 94 ℃预变性5 min, 30 个循环( 94℃ 30s, 53℃ 30s, 72 ℃ 90s) , 72℃延伸8 min。
将5 ul的6×Loading Buffer 和1ul的PCR产物充分混合均匀，注入到凝胶孔中，同时在注入4 ul 1 kb marker。
电泳30 min，置于全自动凝胶成像分析系统下，观察处理得到的条带。
三、实验结果
双歧杆菌特征
样品稀释
度菌
数
菌落特征个体特征颜色边缘大小透明度高度形状革兰染色
1×10- 5（a）1×10- 5（b）1×10- 6（a）1×10- 6（b）
双歧杆菌生化鉴定结果
菌种 项目 1×10- 5（a ） 1×10- 5（b ） 1×10- 6（a ） 1×10- 6（b ） 1×10- 7（a ） 1×10- 7（b ） 对照组
阿拉伯糖 乳糖 纤维二糖 棉籽糖 山梨醇 淀粉 葡萄糖酸盐 木糖 甘露糖 蔗糖 麦芽糖 海藻糖 蜜二糖 甘露醇 吲哚 硝酸盐还原 明胶液化 硫化氢 过氧化氢 联苯胺 F6PPK
文献：
[ 1] James A, et al. Bifido bo uteria [ J] . Bacter olo gical River s, 1973, 48: 136～142 [ 2] 王建业,王永坤,朱国强.猪源双歧杆菌筛选及生物特性参数测定[J].扬州大学学报(自然科学版),2000,3(3):23-27
1×10- 7（a ） 1×10- 7（b ） 对照组
[ 3]文钰，杨汝德，猪源双歧杆菌的分离纯化及初步鉴定[J].现代食品科技
[ 4]Wei G,Pan L,Du H, et al.ERIC-PCR fingerprinting-based community DNA hybridization to pinpoint genome-specific fragmenta as molecular markera to identify and track populations common to healthy human guts.J Microbiol,2004,59(1):91-108.
[5]Satokari R M.Vaughan E E,Akkermans A,et al.Bifidobacterial diversity in human feces detected by genus-specific PCR and denaturing gradient gel eletrophoresis.Appl Environ Microbiol,2001,67(2):504-513.
[6]胡晓红, 彭惠民, 刘昕, 黄正根, 袁科,PCR 及Real- time PCR 评价细菌DNA 提取方法[J].重庆医科大学学报2008年第33卷第2期。