斐林试剂配制,标定以及还原糖测定
实验四斐林试剂法法测定还原糖含量
实验四斐林试剂法测定果品蔬菜中还原糖含量一、实验目的：掌握园艺产品中糖的测定方法。
二、实验原理利用糖的还原性，与斐林试剂（氧化剂）中的二价铜离子还原为一价铜，进行氧化还原反应，而进行测定。
非还原糖必须转化为还原糖，再进行测定。
斐林试剂中酒石酸钾钠铜是一种氧化剂，反应的终点可用次甲基蓝作指示剂，在碱性、沸腾环境下还原呈无色。
根据斐林试剂完全还原所需的还原糖量，计算出样品还原糖量。
三、试剂与材料1、斐林试剂甲：加水溶解并定容至1000ml；乙：346g酒石酸钾钠+100gNaOH加水溶解并定容至1000ml；2、1%次甲基蓝，1g次甲基蓝加水溶解并定容至100ml，棕色瓶保存；3、%标准葡萄糖，2g 105℃烘干到恒重的葡萄糖加水定容到1000ml；4、碱式滴定管；5、电炉，各种玻璃器皿。
四、操作方法1、斐林试剂标定取甲液5ml加入5ml乙液中，置于250ml三角瓶中，加入水10ml，从滴定管中加入%的标准葡萄糖若干毫升（约23ml）。
（量控制在后滴定时消耗葡萄糖在－。
电炉上加热至沸，并保持微沸2分钟，加2滴1%次甲基蓝溶液，趁沸以每两秒1滴的速度继续滴加葡萄糖标准溶液，用%标准葡萄糖滴定至蓝色消失，有红棕色沉淀，溶液清亮为终点止。
记录耗用的葡萄糖量为V0，必须在1min内完成。
（注意：还原的次甲基蓝易被空气中的氧氧化，恢复成原来的蓝色，所以滴定过程中必须保持溶液成沸腾状态，并且避免滴定时间过长。
）2、样品滴定预备试验同上法取斐林试剂，加10ml样品液，摇匀于电炉上加热至沸，保持微沸2分钟，加2滴1%次甲基蓝，用%葡萄糖滴定至蓝色消失。
记录耗用的葡萄糖量为V1。
3、样品滴定同上法吸取斐林试剂加10ml样品液(预先稀释)，补加（V0-V1）ml水，并从滴定管中预先加入（V1-1）ml %葡萄糖，摇匀至电炉上加热至沸，保持2min微沸，加入2滴1%次甲基蓝，继续用葡萄糖滴定至蓝色消失。
记录消耗的标准葡萄糖体积为V毫升。
斐林试剂鉴定还原糖
斐林试剂鉴定还原糖概述还原糖是一类具有还原性的糖类物质，它们能够将还原剂还原成相应的醇。
斐林试剂是一种常用于鉴定还原糖的试剂，通过与还原糖发生化学反应，产生深红色沉淀来进行鉴定。
本文将介绍斐林试剂的制备方法以及鉴定还原糖的步骤。
斐林试剂的制备方法材料：•斐林试剂A：0.5%苯腈甲醇溶液•斐林试剂B：40%次氯酸钠溶液•斐林试剂C：20%三氯乙酸溶液•斐林试剂D：5%硫酸溶液步骤：1.取0.5克苯腈加入100毫升甲醇中，搅拌溶解得到斐林试剂A。
2.将40克次氯酸钠溶解在100毫升水中，得到斐林试剂B。
3.取20克三氯乙酸加入到100毫升水中，得到斐林试剂C。
4.取5克硫酸加入到100毫升水中，得到斐林试剂D。
5.将制备好的斐林试剂A、斐林试剂B、斐林试剂C、斐林试剂D按照1:1:1:1的体积比例混合，得到斐林试剂。
鉴定还原糖的步骤步骤1：制备样品溶液将待测的还原糖样品加入适量的蒸馏水中，充分溶解得到样品溶液。
步骤2：加入斐林试剂取一定量的样品溶液，加入适量的斐林试剂，充分混合。
步骤3：观察反应结果观察反应体系中是否出现深红色沉淀。
如果出现深红色沉淀，则说明样品中存在还原糖。
步骤4：对照实验同时进行对照实验，不加入还原糖样品，其他步骤与待测样品相同，用以确认实验结果的准确性。
注意事项1.使用斐林试剂时需注意安全，避免接触皮肤和眼睛，避免吸入其蒸气。
2.实验器材应干净无杂质，以免干扰实验结果。
3.实验过程需严格按照步骤操作，避免误差的发生。
结论斐林试剂是一种常用的鉴定还原糖的试剂，通过与还原糖发生化学反应，产生深红色沉淀来进行鉴定。
制备斐林试剂需将斐林试剂A、斐林试剂B、斐林试剂C、斐林试剂D按照1:1:1:1的体积比例混合。
通过对样品溶液加入斐林试剂并观察是否产生深红色沉淀，可以判断样品中是否存在还原糖。
实验过程中需注意安全，并且进行对照实验以确保结果的准确性。
还原糖的检验方法和具体步骤
还原糖的检验方法和具体步骤如下：
1. 检验方法：使用班氏试剂或斐林试剂检测还原糖。
首先观察试剂的颜色变化，然后加入待测样品，将试管放入水浴加热的烧杯中。
2. 具体步骤：
（1）在试管中加入2ml待测样品溶液。
（2）向试管中加入5滴班氏试剂或斐林试剂。
（3）将试管放入水浴加热的烧杯中，观察颜色变化。
如果试管中出现砖红色沉淀或蓝色沉淀，则说明待测样品中含有还原糖。
这是因为班氏试剂或斐林试剂主要用于检测还原性糖，如葡萄糖，而葡萄糖在加热条件下会与组织中的蛋白质生成砖红色沉淀。
此外，斐林试剂还可以与醛基反应生成蓝色沉淀。
需要注意的是，检测还原糖需要待测样品中的还原糖与试剂发生反应，因此需要确保待测样品溶液是新鲜的、未被污染的。
此外，检测过程中需要控制好温度、时间等条件，以确保实验结果的准确性。
还原糖的测定实验报告
1. 了解还原糖的性质和鉴定方法。
2. 掌握使用斐林试剂检测还原糖的原理和操作步骤。
3. 学习通过比色法计算还原糖的含量。
二、实验原理还原糖是指含有游离醛基或酮基的糖类，它们能够还原斐林试剂中的Cu²⁺离子为Cu⁺离子，生成砖红色的Cu₂O沉淀。
斐林试剂由斐林A液（含CuSO₄的碱性溶液）和斐林B液（含NaOH的碱性溶液）组成，两种试剂混合后，Cu²⁺离子与还原糖反应生成Cu₂O沉淀。
三、实验材料与试剂1. 试剂：- 斐林A液：称取硫酸铜（CuSO₄·5H₂O）0.1g，溶于100mL水中，加入5mL浓NaOH溶液。
- 斐林B液：称取NaOH 2g，溶于100mL水中。
- 标准葡萄糖溶液：准确称取葡萄糖1.0000g，溶于1000mL水中，配制成1mg/mL的标准溶液。
- 样品溶液：取一定量的待测样品，用蒸馏水溶解并定容至一定体积。
2. 仪器：- 烧杯- 试管- 滴定管- 移液管- 移液器- 恒温水浴锅- 移液管1. 准备标准溶液：准确移取1mL标准葡萄糖溶液，加入9mL蒸馏水，配制成0.1mg/mL的标准溶液。
2. 配制斐林试剂：将斐林A液和斐林B液等体积混合，立即使用。
3. 取一支试管，加入2mL样品溶液。
4. 加入2mL斐林试剂，混合均匀。
5. 将试管放入恒温水浴锅中，加热至沸腾，保持沸腾状态5分钟。
6. 取出试管，观察沉淀颜色。
7. 重复步骤3-6，制作标准曲线。
8. 根据标准曲线，计算样品溶液中还原糖的含量。
五、实验结果与分析1. 标准曲线的制作：以标准葡萄糖溶液浓度为横坐标，沉淀颜色深浅为纵坐标，绘制标准曲线。
2. 样品溶液中还原糖含量的计算：根据样品溶液的浓度和沉淀颜色深浅，在标准曲线上找到对应的还原糖含量。
六、实验讨论1. 实验过程中，斐林试剂需现配现用，以免Cu²⁺离子被还原成Cu⁺离子，影响实验结果。
2. 样品溶液的浓度应控制在一定范围内，以免沉淀颜色过深，影响准确度。
斐林试剂配制,标定以及还原糖测定
斐林试剂配制，标定以及还原糖测定糊精溶液中还原糖含量测定(DE值测定)A斐林试剂(碱性酒石酸铜溶液)的制备1)斐林试剂甲液称取69.28g的硫酸铜(CSO.5HO)溶于水中并稀释至1000ml，静置48h，用滤纸过U42滤2)斐林实际乙液分别称取酒石酸钾钠346g和氢氧化钠100g，溶于水中并稀释至1000ml，静置48h，用滤纸过滤B斐林试剂标定精确称取已在105?下干燥至恒重的分析纯葡萄糖0.8g，用蒸馏水稀释，移入250ml容量瓶并稀释至刻度，摇匀。
用移液管分别吸取斐林试剂甲，乙液各5ml和蒸馏水20ml于150ml锥形瓶中(预备数份)，于电炉上煮沸，用上述葡萄糖溶液(置于25ml滴定管中)滴定至蓝色消失时，加入1%的亚甲基蓝指示剂两滴，继续用糖液滴定至蓝色刚好消失。
此操作在1min内完成。
再重复操作第二次标定过程，取两次葡萄糖溶液消耗体积的平均值(允许误差不大于0.1ml)，按下式计算斐林试剂常数(10ml斐林试剂相当于葡萄糖的质量)。
R=WG/V式中R——10ml斐林试剂相当于葡萄糖的质量，g;W——葡萄糖溶液消耗的体积，mlG——葡萄糖的质量，gV——葡萄糖定容体积，250mlC测定步骤称取糊精溶液(液化)15g，移入250ml容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度。
用移液管分别吸取斐林试剂甲，乙液各5ml和蒸馏水20ml于150ml锥形瓶中。
其余步骤同斐林试剂标定法，即以样品稀释液代替葡萄糖溶液滴定斐林试剂。
计算还原糖含量按下式计算还原糖(%)=100RV/WG式中R——10ml斐林试剂相当于葡萄糖的质量，g;W——葡萄糖溶液消耗的体积，ml;G——样品质量，g;V——葡萄糖定容体积，250ml。
实验四--斐林试剂法法测定还原糖含量(1)
实验四斐林试剂法测定果品蔬菜中还原糖含量一、实验目的：掌握园艺产品中糖的测定方法。
二、实验原理利用糖的还原性，与斐林试剂（氧化剂）中的二价铜离子还原为一价铜，进行氧化还原反应，而进行测定。
非还原糖必须转化为还原糖，再进行测定。
斐林试剂中酒石酸钾钠铜是一种氧化剂，反应的终点可用次甲基蓝作指示剂，在碱性、沸腾环境下还原呈无色。
根据斐林试剂完全还原所需的还原糖量，计算出样品还原糖量。
三、试剂与材料1、斐林试剂甲：69.3g CuSO4.5H2O加水溶解并定容至1000ml；乙：346g酒石酸钾钠+100gNaOH加水溶解并定容至1000ml；2、1%次甲基蓝，1g次甲基蓝加水溶解并定容至100ml，棕色瓶保存；3、0.2%标准葡萄糖，2g 105℃烘干到恒重的葡萄糖加水定容到1000ml；4、碱式滴定管；5、电炉，各种玻璃器皿。
四、操作方法1、斐林试剂标定取甲液5ml加入5ml乙液中，置于250ml三角瓶中，加入水10ml，从滴定管中加入0.2%的标准葡萄糖若干毫升（约23ml）。
（量控制在后滴定时消耗葡萄糖在0.5－1.0ml)。
电炉上加热至沸，并保持微沸2分钟，加2滴1%次甲基蓝溶液，趁沸以每两秒1滴的速度继续滴加葡萄糖标准溶液，用0.2%标准葡萄糖滴定至蓝色消失，有红棕色沉淀，溶液清亮为终点止。
记录耗用的葡萄糖量为V0，必须在1min内完成。
（注意：还原的次甲基蓝易被空气中的氧氧化，恢复成原来的蓝色，所以滴定过程中必须保持溶液成沸腾状态，并且避免滴定时间过长。
）2、样品滴定预备试验同上法取斐林试剂，加10ml样品液，摇匀于电炉上加热至沸，保持微沸2分钟，加2滴1%次甲基蓝，用0.2%葡萄糖滴定至蓝色消失。
记录耗用的葡萄糖量为V1。
3、样品滴定同上法吸取斐林试剂加10ml样品液(预先稀释)，补加（V0-V1）ml水，并从滴定管中预先加入（V1-1）ml 0.2%葡萄糖，摇匀至电炉上加热至沸，保持2min微沸，加入2滴1%次甲基蓝，继续用葡萄糖滴定至蓝色消失。
还原糖测定
还原糖含量的测定（斐林试剂法）一、实验目的：学习用斐林试剂测还原糖的方法，二、实验原理：斐林试剂由甲、乙液组成，甲液为硫酸铜溶液，乙液为氢氧化钠与酒石酸钾钠溶液。
平时甲、乙溶液分开贮存，测定时才等体积混合，混合后，硫酸铜与氢氧化钠反应，生成氢氧化铜沉淀：2Na0H十CuS04——→Cu（OH）2↓十Na2SO4氢氧化铜因能与酒石酸钾钠反应形成络合物而使沉淀溶解。
酒石酸钾钠铜络合物中的二价铜是一个氧化剂，在氧化醛糖和酮糖（合称总还原糖）的同时，自身被还原成一价的红色氧化亚铜沉淀：反应终点用次甲基蓝来指示。
三、实验器材与试剂：电炉，滴定管等(1)斐林溶液甲液：称取30g结晶硫酸铜(CuS04·5H20)，0.1g次甲基蓝，定容于1000mL水中，如有不溶物须过滤。
乙液：称取100g酒石酸钾钠，108g NaOH，定容1000mL水中，若有沉淀过滤即可。
(2)0.1％标准葡萄糖液：精确称取于105℃烘至恒重的分析纯葡萄糖 1.000g，用水溶解后，定容至1000mL。
四、实验步骤1. 空白滴定准确吸取斐林甲、乙液各5mL，放入250mL锥形瓶中，加水约15mL，并从滴定管加入约20mL 0.1％标准葡萄糖溶液，严格控制不要摇晃三角瓶，将锥形瓶置电炉上加热煮沸，并准确沸腾30s，在沸腾状态下，以每两秒1滴的速度滴入0.1％标准葡萄糖溶液，至溶液刚由蓝色退去，生成砖红色沉淀为止。
后滴定操作应在1分钟内完成，整个煮沸时间应控制在3分钟之内。
记下总耗糖量V0。
2. 预滴定稀释：将样品除气后，进行适当稀释，以期用15~50mL（最好20~30mL）稀释液使滴定完成。
一般将发酵液稀释100倍（吸取1mL发酵液定容到100mL容量瓶）。
准确吸取斐林甲、乙液各5mL，放入250mL锥形瓶中，加水约15mL，吸取稀释样液1mL，放入锥形瓶中，并从滴定管加入约18mL 0.1％标准葡萄糖溶液，其他与空白滴定基本相同，最后在1分钟内滴定完成。
菲林试剂
斐林试剂法测定还原糖的含量
一、实验原理
还原糖可以将二价铜离子还原成为一价铜。
反应终点可以由次甲基蓝指示，根据一定量的菲林试剂完全还原所需的还原糖量，可以计算加入样品中还原糖的含量。
二、实验器材
①菲林试剂
甲液：称取15.0g硫酸铜（CuSO4·5H2O）,0.05克四甲基蓝，用水溶解并稀释到1000ml.
乙液：称取50.0g酒石酸钾钠，75g的氢氧化钠，4.0g的亚铁氰化钾，用水溶解并稀释到1000ml。
② 0.10%标准葡萄糖溶液：精密称取1.000g经95~105℃烘干的无水葡萄糖，用少量水溶解，移入1000ml容量瓶中，加入5ml盐酸，用水稀释到刻度，摇匀。
③滴定管、电炉、锥形瓶等。
三、实验步骤
1．样品溶液的配备
称取样品—mg，稀释后在100ml容量瓶定容。
2.菲林试剂的标定
准确吸取菲林甲乙液各5.00ml，置入150ml的锥形瓶，加水10ml，从滴定管中预先加入约10ml 0.1%的标准葡萄糖液，（用量控制在后滴定消耗0.10%标准葡萄糖1ml以内），摇匀，电炉上加热使其在2min内沸腾。
沸腾状态下以每2s/滴的速度滴入标准葡萄糖溶液，至蓝色刚好消失为终点，记录前后总共消耗的标准葡萄糖溶液的总体积Vo。
同法平行操作三份，取接近的两次体积的平均值。
3.预备实验
准确吸取菲林甲乙液各5.00ml，置入150ml的锥形瓶，加水10ml，加玻璃珠3粒。
电炉上加热使其在2min内沸腾，准备沸腾30s，趁沸以先快后慢的速度从滴定管中滴加样品液(需始终保持溶液的沸腾状态)待溶液蓝色变浅时，以每2s/滴的速度滴入样品，至蓝色刚好消失为终点，记录消耗溶液的体积V1。
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斐林试剂配制，标定以及还原糖测定糊精溶液中还原糖含量测定(DE值测定)
A斐林试剂(碱性酒石酸铜溶液)的制备
1)斐林试剂甲液
称取69.28g的硫酸铜(CSO.5HO)溶于水中并稀释至1000ml，静置48h，用滤纸过U42
滤
2)斐林实际乙液
分别称取酒石酸钾钠346g和氢氧化钠100g，溶于水中并稀释至1000ml，静置48h，用滤纸过滤
B斐林试剂标定
精确称取已在105?下干燥至恒重的分析纯葡萄糖0.8g，用蒸馏水稀释，移入250ml容量瓶并稀释至刻度，摇匀。
用移液管分别吸取斐林试剂甲，乙液各5ml和蒸馏水20ml于150ml锥形瓶中(预备数份)，于电炉上煮沸，用上述葡萄糖溶液(置于25ml滴定管中)滴定至蓝色消失时，加入1%的亚甲基蓝指示剂两滴，继续用糖液滴定至蓝色刚好消失。
此操作在1min内完成。
再重复操作第二次标定过程，取两次葡萄糖溶液消耗体积的平均值(允许误差不大于0.1ml)，按下式计算斐林试剂常数(10ml斐林试剂相当于葡萄糖的质量)。
R=WG/V
式中R——10ml斐林试剂相当于葡萄糖的质量，g;
W——葡萄糖溶液消耗的体积，ml
G——葡萄糖的质量，g
V——葡萄糖定容体积，250ml
C测定步骤
称取糊精溶液(液化)15g，移入250ml容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度。
用移液管分别吸取斐林试剂甲，乙液各5ml和蒸馏水20ml于150ml锥形瓶中。
其余步骤同斐林试剂标定法，即以样品稀释液代替葡萄糖溶液滴定斐林试剂。
计算
还原糖含量按下式计算
还原糖(%)=100RV/WG
式中R——10ml斐林试剂相当于葡萄糖的质量，g;
W——葡萄糖溶液消耗的体积，ml;
G——样品质量，g;
V——葡萄糖定容体积，250ml。