微生物鉴定常用的生理生化试验实验报告 (2)
生理性生化实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 了解细菌生理生化反应原理；2. 掌握细菌鉴定中常见的生理生化反应方法；3. 了解生理生化反应在鉴别细菌中的意义。
二、实验原理通过测定微生物校内某些酶类的有无、对某些糖的利用能力、代谢产物的类型等来研究微生物的多样性。
某些细菌产生色氨酸酶，能分解培养基蛋白胨中的色氨酸，产生吲哚，吲哚与对二甲基氨基苯甲醛发生反应，形成红色的玫瑰吲哚，为吲哚反应阳性。
微生物发酵葡萄糖成丙酮酸，2分子丙酮酸缩合脱羧成乙酰甲基甲醇。
乙酰甲基甲醇在碱性条件下与肌酸类物质反应，生成红色物质，为甲基红反应阳性。
三、实验方法1. 吲哚试验：将细菌接种于含有色氨酸的培养基中，加入吲哚试剂，观察颜色变化。
2. 甲基红试验：将细菌接种于含有葡萄糖的培养基中，加入甲基红试剂，观察颜色变化。
四、实验结果1. 吲哚试验：接种了大肠杆菌的试管在加入乙醚和吲哚试剂后，能在乙醚和液体培养基的交界面上产生红色环状物质，大肠杆菌的吲哚试验显阳性。
2. 甲基红试验：大肠杆菌甲基红试验阳性，即大肠杆菌在培养期仍维持酸性pH。
五、实验分析1. 吲哚试验失败原因分析：可能是因为乙醚加量太少，影响实验现象的观察；另一个可能的原因是大肠杆菌菌种有问题。
2. 甲基红试验结果分析：大肠杆菌在培养后仍能维持酸性，而产气杆菌则转化为非酸性末端产物。
六、实验结论1. 通过本实验，我们了解了细菌生理生化反应原理；2. 掌握了细菌鉴定中常见的生理生化反应方法；3. 认识到生理生化反应在鉴别细菌中的意义。
七、实验注意事项1. 实验过程中要严格按照操作规程进行，避免污染；2. 注意观察实验现象，记录实验数据；3. 分析实验结果，找出实验失败的原因。
第2篇一、实验目的1. 了解生理性生化实验的基本原理和方法。
2. 掌握常用的生理性生化指标及其检测方法。
3. 通过实验，学会使用生理性生化检测仪器，提高实验技能。
二、实验原理生理性生化实验是研究生物体内各种生化反应及其代谢过程的重要手段。
生理生化实验报告
微生物实验报告微生物的生理生化实验侯汶青201300140031 组别：周四下午五组同组者：李璇、李倩茜实验完成时间：2014年12月6号一、实验目的1、证明不同微生物对各种有机大分子物质的水解能力不同，从而说明不同微生物有着不同的酶系统。
2、掌握进行微生物大分子物质水解试验的原理和方法。
3、了解糖发酵的原理，掌握通过糖发酵鉴别不同微生物的方法。
4、了解吲哚和甲基红试验的原理以及其在肠道细菌鉴定中的意义和方法。
5、熟习生理生化反应培养基的配制原理和一般方法步骤。
6、巩固无菌实验操作。
二、实验器材1、菌种：枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、变形杆菌、铜绿假单胞菌（大分子水解实验）；大肠杆菌、变形杆菌（糖发酵实验）；大肠杆菌、产气杆菌（吲哚实验）；大肠杆菌、产气杆菌（甲基红实验）；2、培养基：（1）固体淀粉培养基，固体油脂培养基（淀粉和油脂的大分子水解实验）；（2）葡萄糖发酵培养基、乳糖发酵培养基试管每组共5支，而且内装有倒置的德汉氏小管（糖发酵实验）；（3）蛋白胨水培养基（吲哚实验）（4）葡萄糖蛋白胨水培养基（甲基红实验）3、溶液和试剂：卢戈氏碘液，乙醚，吲哚试剂，甲基红试剂，蒸馏水，去离子水、氢氧化钠溶液、中性红试剂、溴甲酚紫乙醇溶液等4、仪器或其他用具：成套培养皿，试管，玻璃棒、酒精灯，烧杯，德汉氏小管，接种环、吸管、滴管、洗耳球、无菌操作台、量筒、试管架等三、实验原理1、微生物的生理生化反应原理：在所有生活细胞中存在的全部生物化学反应称之为代谢。
代谢过程主要是酶促反应过程。
许多细菌产生胞外酶，这些酶从细胞中释放出来，以催化细胞外的化学反应。
各种细菌由于具有不同的酶系统，致使它们能利用不同的底物，或虽然可以利用相同的底物，却产生不同的代谢产物，因此可以利用各种生理生化反应来鉴别细菌。
微生物代谢重要特征之一，就是代谢类型的多样性，因此使得微生物在自然界的物质循环中起着重要的作用，同时也为人类开发利用微生物资源提供更多的机会与途径。
微生物鉴定中常用的生理生化实验
4.硫化氢试验： 硫化氢试验是检测硫化氢的产生，也是用于肠道细菌检查常
用生化试验。 有些细菌能分解含硫的有机物如胱氨酸、半胱氨酸、甲硫氨
三、实验原理
1.蛋白质水解试验：
微生物 对大分子物质如淀粉不能直接利用，必须依靠产生的
胞外酶将大分子物质分解后，才能被微生物吸收利用。
胞外酶主要为水解酶，裂解大分子为较小化合物，使其能被
运输至细胞内。
如淀粉酶水解淀粉为小分子的糊精、双糖和单糖，这过程可
通过观察细菌菌落周围的物质变化来证实。
淀粉遇碘液会产生蓝色，在细菌水 解淀粉的区域，用碘液测定时不再 产生蓝色，表明细菌产生淀粉！
如果试管中淀粉水解了,无论是初步水解还是彻底水解,都会产生还原性糖 （麦芽糖和葡萄糖都是还原性糖）,还原性糖可以与斐林试剂反应,水浴加热后, 出现砖红色沉淀.
2.为什么大肠杆菌在甲基红反应中为阳性,而产气肠杆菌为阴性? 这个试验与伏—普试验最初底物和最终产物有何异同？
大肠杆菌和产气肠杆菌都属于肠道微生物,所有肠道微生物都能够利用葡萄糖作 为其能量来源,但是它们的代谢途径不同,因而所产生的产物不相同。
实验九 微生物鉴定中常用的生理生化实验
一、实验目的
1.证明不同微生物对各种有机大分子物质的水解能力不同，从而说 明不同微生物有着不同的酶系统。 2.掌握进行微生物大分子物质水解实验的原理和方法。 3.了解IMViC与硫化氢反应的原理及其在肠道细菌鉴定中的意义和 方法。
二、实验材料
1.菌种 枯草芽孢杆菌，大肠杆菌，金黄色葡萄球菌，铜绿假单胞菌，普通 变形杆菌，产气肠杆菌。 2.培养基 固体淀粉培养基，明胶培养基试管，尿素琼脂试管，醋酸铅培养基， 葡萄糖蛋白胨水培养基，柠檬酸盐斜面培养基。 3.溶液和试剂 革兰氏染色用卢戈氏碘液，甲基红指示剂。
实验九微生物生理生化实验
• 2CH3COCOOH
CH3COCHOHCH3十2CO2
丙酮酸
乙酰甲基甲醇
• CH3COCHOHCH3
CH3COCOCH3
乙酰甲基甲醇
NaOH 丁二酮（二乙酰）
具体操作：
❖接种及培养方式如同吲哚实验
❖取出塞子， 加10滴VP试剂，振荡混合后， 置沸水浴中保温，5分钟后观察实验结果。 出现红色这位VP试验阳性。
3. 吲哚（indole）试验：（含氮化合物的 分解利用）
色氨酸→吲哚→玫瑰吲哚 ↑
吲哚试剂
-+
具体操作：
（1）以液体接种的方式分别接种枯草杆菌和大肠杆菌 于蛋白胨水培养基中。
（2）接种后置于37℃恒温培养箱，培养7d。以未接种 的作为对照（全班1-2支试管即可）。
（3）观察结果时，在培养液中加入乙醚约1毫升（使呈 明显的乙醚层）。充分振荡，使吲哚溶于乙醚中，静 置片刻，待乙醚浮于培养液上面时，沿管壁慢慢加入 吲哚试剂10滴。如吲哚存在，则乙醚层呈玫瑰红色。
具体操作：
（1）以液体接种的方式分别接种枯草杆菌BS或 大肠杆菌EC于葡萄糖、蔗糖、乳糖商品化发 酵管中。以未接种的作为对照（全班1-2支试 管即可）。
（2）接种后置于37℃恒温培养箱，培养7d。
（3）观察结果时，看各管颜色变化及小管顶部 有无气泡。产酸产气用“⊕”表示；只产酸不 产气用“+” 表示；不产酸也不产气用“-”表 示。
5 . 石蕊牛乳试验：（利用蛋白质酪素的能力）
牛乳的主要成分为乳糖，蔗糖，蛋白质和酪素等成分。 牛乳中加入石蕊作为酸碱指示剂和氧化还原的指示剂 （中性为黄色，酸性为红色，碱性为蓝色，石蕊被还原 时，则部分或全部脱色）。由于各种细菌对牛乳的利用 不同，引起培养基的变化也就不同，主要变化为：
生化反应鉴定实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 了解生化反应在微生物鉴定中的重要性。
2. 掌握常见生化反应的原理和方法。
3. 通过实验，对给定的微生物进行鉴定。
二、实验原理生化反应是指微生物在生长过程中，通过酶的催化作用，将营养物质转化为自身所需的物质，同时产生一些代谢产物。
这些代谢产物可以用来鉴定微生物的种类。
常见的生化反应包括糖发酵试验、吲哚试验、甲基红试验等。
三、实验材料与仪器1. 材料：- 菌种：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、变形杆菌等。
- 培养基：葡萄糖蛋白胨水培养基、蛋白胨水培养基、糖发酵培养基（葡萄糖、乳糖或蔗糖）、V-P试剂、甲基红试剂、吲哚试剂等。
- 试剂：卢戈氏碘液、乙醚、吲哚试剂、甲基红试剂、蒸馏水等。
- 仪器：酒精灯、接种针、培养皿、试管、试管架、烧杯、量筒、德汉氏小管等。
2. 仪器：- 酒精灯- 接种环- 超净工作台- 恒温培养箱- 高压灭菌锅- 试管- 移液枪- 滴管四、实验方法1. 菌种培养：将菌种接种于葡萄糖蛋白胨水培养基，置于恒温培养箱中培养24小时。
2. 糖发酵试验：- 将培养好的菌种接种于糖发酵培养基（葡萄糖、乳糖或蔗糖），置于恒温培养箱中培养24小时。
- 观察培养基颜色变化，记录发酵结果。
3. 吲哚试验：- 将培养好的菌种接种于蛋白胨水培养基，置于恒温培养箱中培养24小时。
- 加入吲哚试剂，观察颜色变化，记录结果。
4. 甲基红试验：- 将培养好的菌种接种于蛋白胨水培养基，置于恒温培养箱中培养24小时。
- 加入甲基红试剂，观察颜色变化，记录结果。
五、实验结果与分析1. 糖发酵试验：- 大肠杆菌：发酵葡萄糖、乳糖，不发酵蔗糖。
- 金黄色葡萄球菌：不发酵葡萄糖、乳糖、蔗糖。
- 枯草芽孢杆菌：不发酵葡萄糖、乳糖、蔗糖。
- 变形杆菌：发酵葡萄糖、乳糖、蔗糖。
2. 吲哚试验：- 大肠杆菌：吲哚试验阳性。
- 金黄色葡萄球菌：吲哚试验阴性。
- 枯草芽孢杆菌：吲哚试验阴性。
- 变形杆菌：吲哚试验阳性。
微生实验报告 2012.12.实验十二、细菌常用生理生化反应实验结果观察测定
微生实验报告姓名：王晶晖专业年级：2011级生物技术学号：040312011032实验十二细菌常用生理生化反应实验结果观察一、结果观察1、葡萄糖发酵实验直接观察试管：试管变黄者为葡萄糖发酵阳性菌，不变者为阴性菌。
2、V. P. 反应和甲基红试验:将培养好的液体培养基分装于两个干净的小试管中,在一管中滴入2-3滴甲基红试剂, 溶液变红的为甲基红阳性菌,不变的为甲基红阴性菌. 在另一管中加入V. P. 试剂,在37℃保温15分钟, 变红者为阳性菌,不变者为阴性菌。
3、吲哚实验在培养好的液体培养基中加入1厘米高的乙醚,振荡,静置分层,加入2-4滴吲哚试剂,在掖面交界出现红色者为吲哚反应阳性菌,不变者为阴性菌。
4、硝酸盐还原实验在点滴板上滴入革里斯试剂A液和B液，如过溶液变红说明有亚硝酸盐，为硝酸盐还原阳性菌，如果不变色需要再倒出部分培养基在另外的小孔中再滴如耳苯胺试剂，如果变蓝，说明此菌为阴性菌；如果不变色，说明此菌为硝酸盐还原强阳性菌。
5、柠檬酸盐实验直接观察斜面，斜面变兰色者为柠檬酸盐利用阳性菌，不变者为阴性菌。
6、明胶水解向培养好的明胶培养基中加入酸性氯化汞或三氯乙酸溶液，并铺满平板，菌落周围出现透明圈的菌为明胶水解阳性菌，没有透明圈的菌为阴性菌。
7、淀粉水解实验向培养好的淀粉培养基平板上加入碘液，并铺满平板，菌落周围出现透明圈的菌为淀粉水解阳性菌，没有透明圈的菌为阴性菌。
8、硫化氢产生实验直接观察培养好的培养基，出现黑色沉淀者为阳性菌，不变者为阴性菌。
二、实验结果1、葡萄糖发酵实验阳性：大肠杆菌（半固体培养基变黄，左图）阴性：恶臭假单胞菌（保持紫色不变，右图）2、V. P. 反应和甲基红试验：（1）V．P．实验阳性：大肠杆菌（加入40%的KOH溶液10～20滴，再加入等量的α-萘酚溶液，放入37℃恒温箱中保温15～30分钟，培养液出现红色，右图）阴性：产气杆菌（同上操作，培养基不变色，左图）（2）甲基红试验阳性：产气杆菌（加入 M．R．试剂3-4滴后变红，左图）阴性：大肠杆菌（加入 M．R．试剂3-4滴后不变色，右图）3、吲哚实验阳性：大肠杆菌（乙醚层呈现玫瑰红色，右图）阴性：产气杆菌（左图）4、硝酸盐还原实验阳性：大肠杆菌（滴入革里斯试剂后变红，左下图）阴性：恶臭假单胞菌（滴入二苯胺试剂后变蓝，右上图）5、柠檬酸盐利用实验阳性：产气杆菌（溴麝香草酚蓝的斜面呈蓝色，右图）阴性：大肠杆菌（斜面培养基不变色，左图）6、明胶水解实验阴性：大肠杆菌（菌落周围没有出现透明圈，上图）7、淀粉水解实验阳性：枯草杆菌（加入碘液，菌落周围出现透明圈，下图）阴性：大肠杆菌（菌落周围没有出现透明圈，上图）8、产硫化氢实验阳性：变形杆菌（出现黑色沉淀，左图）阴性：大肠杆菌（未出现黑色沉淀，右图）思考题1、你的实验结果与实验预期是否相同？如果不同试分析原因。
细菌鉴定中常用的生理生化反应实验报告
细菌鉴定中常用的生理生化反应实验报告一、引言在微生物学中，鉴定细菌的方法有很多种，其中生理生化反应实验是最常用的一种方法之一。
生理生化反应实验可以通过观察细菌对不同物质的代谢情况来确定其种类和特性。
本报告将介绍细菌鉴定中常用的生理生化反应实验。
二、目的本报告旨在介绍常用的生理生化反应实验，包括试剂、操作步骤、结果解释等内容，以帮助读者更好地了解和掌握这些实验。
三、材料与方法1. 大肠杆菌（Escherichia coli）和金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）培养基；2. 硝酸盐还原试剂；3. 糖类试剂：葡萄糖、果糖、半乳糖；4. 氨基酸试剂：天冬氨酸、赖氨酸；5. 酶试剂：淀粉酶、蛋白酶；6. 无水硫酸铜溶液。
四、实验步骤及结果解释1. 硝酸盐还原试验步骤：（1）取一支细菌液体培养物，加入硝酸盐还原试剂；（2）观察液体颜色变化。
结果解释：若液体变为红色，则表示细菌能够还原硝酸盐为亚硝酸盐，是亚硝化菌。
若无颜色变化，则表示细菌不能还原硝酸盐。
2. 糖类代谢试验步骤：（1）取三个试管，分别加入葡萄糖、果糖、半乳糖；（2）加入相同量的细菌液体培养物；（3）观察试管内气泡产生情况。
结果解释：若在葡萄糖试管内产生了气泡，则表示该细菌能够利用葡萄糖进行发酵代谢；若在果糖或半乳糖试管内产生了气泡，则表示该细菌能够利用果糖或半乳糖进行发酵代谢。
3. 氨基酸代谢试验步骤：（1）取两个试管，分别加入天冬氨酸和赖氨酸；（2）加入相同量的细菌液体培养物；（3）观察试管内气泡产生情况。
结果解释：若在天冬氨酸试管内产生了气泡，则表示该细菌能够利用天冬氨酸进行代谢；若在赖氨酸试管内产生了气泡，则表示该细菌能够利用赖氨酸进行代谢。
4. 酶代谢试验步骤：（1）取两个试管，分别加入淀粉和蛋白质；（2）加入相同量的细菌液体培养物；（3）观察试管内颜色变化情况。
结果解释：若在淀粉试管内出现了透明带，则表示该细菌能够分泌淀粉酶；若在蛋白质试管内出现了变色，则表示该细菌能够分泌蛋白酶。
细菌鉴定中常用的生理生化反应实验报告
细菌鉴定中常用的生理生化反应实验报告细菌鉴定是微生物学中的一个重要分支，它是通过对细菌的形态、生理生化反应、生长特性等方面进行分析，来确定细菌种类的过程。
在细菌鉴定中，生理生化反应实验是一种常用的方法，它可以通过观察细菌在不同条件下的生长情况，来确定细菌的种类。
本文将介绍几种常用的生理生化反应实验。
1. 氧气需求实验氧气需求实验是一种常用的生理生化反应实验，它可以用来确定细菌的氧气需求量。
在这个实验中，我们需要将细菌接种到含有不同氧气浓度的培养基中，然后观察细菌的生长情况。
如果细菌只能在氧气充足的条件下生长，那么它就是一种需氧菌；如果细菌只能在氧气缺乏的条件下生长，那么它就是一种厌氧菌；如果细菌既能在氧气充足的条件下生长，也能在氧气缺乏的条件下生长，那么它就是一种兼性厌氧菌。
2. 糖类发酵实验糖类发酵实验是一种常用的生理生化反应实验，它可以用来确定细菌对不同糖类的发酵能力。
在这个实验中，我们需要将细菌接种到含有不同糖类的培养基中，然后观察培养基的酸碱度变化。
如果培养基的酸碱度发生了变化，那么说明细菌对这种糖类进行了发酵。
通过这个实验，我们可以确定细菌对哪些糖类具有发酵能力，从而进一步确定细菌的种类。
3. 氧化还原实验氧化还原实验是一种常用的生理生化反应实验，它可以用来确定细菌的氧化还原能力。
在这个实验中，我们需要将细菌接种到含有不同氧化还原剂的培养基中，然后观察培养基的颜色变化。
如果培养基的颜色发生了变化，那么说明细菌对这种氧化还原剂具有反应能力。
通过这个实验，我们可以确定细菌的氧化还原能力，从而进一步确定细菌的种类。
4. 酶活性实验酶活性实验是一种常用的生理生化反应实验，它可以用来确定细菌的酶活性。
在这个实验中，我们需要将细菌接种到含有不同底物的培养基中，然后观察底物的变化情况。
如果底物发生了变化，那么说明细菌对这种底物具有酶活性。
通过这个实验，我们可以确定细菌的酶活性，从而进一步确定细菌的种类。
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山东大学实验报告2017年1２月４日______＿＿＿_________＿__＿_＿___科目:微生物学实验题目:微生物鉴定常用的生理生化试验姓名:丁志康一、目的要求１、证明不同微生物对各种有机大分子的水解能力不同,从而说明不同微生物有着不同的酶系统。
2、掌握进行微生物大分子水解试验的原理与方法。
3、了解糖发酵的原理与在肠道细菌鉴定中的重要作用。
4、掌握通过糖发酵鉴别不同微生物的方法。
５、了解IMVｉC反应的原理及其在肠道细菌鉴定中的意义与方法。
二、基本原理1、生物对大分子的淀粉、蛋白质与脂肪不能直接利用,必须靠产生的胞外酶将大分子物质分解才能被微生物吸收利用。
胞外酶只要为水解酶,通过加水裂解大的物质为较小的化合物,使其能被运输至细胞内。
如淀粉酶水解淀粉为小分子的糊精、双糖与单糖;脂肪酶水解脂肪为甘油与脂肪酸;蛋白酶水解蛋白质为氨基酸等。
这些过程均可通过观察细菌菌落周围的物质变化来证实;淀粉遇碘液会产生蓝色,但细菌水解淀粉的区域,用碘测定不在产生蓝色,表明细菌产生淀粉酶。
脂肪水解后产生脂肪酸可改变培养基的ｐＨ,使pH降低,加入培养基的中性红指示剂会使培养基从淡红色变成深红色,说明胞外存在着脂肪酶。
2、糖发酵试验就是常用的鉴别微生物的生化反应,在肠道细菌的鉴定上尤为重要。
绝大多数细菌都能利用糖类作为碳源与能源,但就是它们在分解糖类物质的能力上有很大的差异。
有些细菌能分解某种糖产生有机酸(如乳糖、醋酸、丙酸等)与气体(如氢气、甲烷、二氧化碳的等);有些细菌只产酸不产气。
例如大肠杆菌能分解乳糖与葡萄糖产酸并产气;伤寒杆菌分解葡萄糖产酸不产气,不能分解乳糖;普通变形杆菌分解葡萄糖产酸产气,不能分解乳糖。
发酵培养基含有蛋白胨,指示剂(溴甲酚紫),倒置的德汉氏小管与不同的糖类。
当发酵产酸时,溴甲酚紫指示剂可由紫色(pH6、8)变为黄色(pＨ５、2)。
气体的产生可由倒置的德汉氏小管中有无气泡来证明。
３、IMViC反应就是吲哚试验、甲基红试验、伏-普试验与柠檬酸试验4个试验的首字母缩写。
这四个实验主要就是用来快速鉴别大肠杆菌与产气杆菌,多用于水的细菌检查。
(1)吲哚试验:某些细菌有色氨酸酶,能分解蛋白胨中的色氨酸形成吲哚(靛基质),吲哚能与对二甲基氨基苯甲醛作用生成玫瑰吲哚而呈红色。
(2)甲基红试验:某些细菌在糖代谢过程中,分解葡萄糖产生丙酮酸,丙酮酸进一步被分解成为甲酸、乙酸、琥珀酸等,使培养基pH下降至４.5以下,加入甲基红指示剂可呈红色。
如细菌分解葡萄糖产酸量少,或产生的酸进一步转化为其她物质(如醇、醛、酮、气体与水),培养基pH 在5、4以上,加入甲基红指示剂呈橘黄色。
本试验常与V-P试验一起使用,因为前者呈阳性的细菌,后者通常为阴性。
(3)伏-普(二乙酰)试验:某些细菌能发生如下转换:葡萄糖→丙酮酸(脱羧)→乙酰甲基甲醇→2,3—丁烯二醇,在有碱存在时氧化成二乙酰,后者与胨中的胍基化合物起作用产生粉红色的化合物。
本试验目的在于测定细菌产生乙酰甲基甲醇的能力。
(4)柠檬酸试验:当细菌利用铵盐作为唯一氮源,并利用柠檬酸盐作为唯一碳源时,若细菌能利用这些盐作为氮源与碳源而生长,则能利用柠檬酸钠产生碳酸盐,从而与利用铵盐产生的氨反应,形成NH４OＨ,使培养基呈碱性,使指示剂溴麝香草酚蓝(BTＢ)由淡绿转为深蓝。
三、器材1.菌种:枯草芽孢杆菌,大肠杆菌,产气杆菌,铜绿假单胞菌,普通变形杆菌,金黄色葡萄球菌。
2、培养基:固体淀粉培养基,蛋白胨水培养基,葡萄糖蛋白胨水培养基,葡萄糖发酵培养基,乳糖发酵培养基。
3.溶液或试剂:革兰氏染色用卢戈氏碘液,甲基红试剂,V、P、试剂,吲哚试剂。
4、仪器或其她用具:无菌平板,无菌试管,接种环,接种针,试管架,酒精灯,小玻璃管。
四、操作步骤（一）淀粉水解试验(1)将固体淀粉培养基融化后冷却至5０℃左右,无菌操作制成平板。
(２)用记号笔在平板底部划成四部分。
(３)将枯草芽孢杆菌,大肠杆菌,金黄色葡萄球菌,铜绿假单细胞菌分别在不同的部分点点接种,在平板的反面分别在四部分写上菌名。
(4)将平板倒置在3７℃温箱中培养24ｈ。
(5)观察各种细菌的生长情况,将平板打开盖子,滴入少量卢戈氏碘液于平皿中,轻轻旋转平板,使碘液均匀铺满整个平板。
如菌苔周围出现无色透明圈,说明淀粉已被水解,为阳性。
透明圈的大小可初步判断该菌水解淀粉酶能力的强弱,即产生胞外淀粉酶活力的高低。
（二）糖发酵试验1、用记号笔在各试管外壁上分别标明发酵培养基名称与所接种的细菌菌名。
２.取葡萄糖发酵培养基试管3支,同样分别接入大肠杆菌,普通变形杆菌,第三支不接种,作为对照。
ﻫ在接种后,轻缓摇动试管,使其均匀,防止倒置的小管进入气泡。
3、将接种过与作为对照的６支试管均置3７℃培养24~48ｈ。
４、观察各试管颜色变化及德汉氏小管中有无气泡。
（三）IＭＶiC试验（1）接种与培养用接种环分别取一些大肠杆菌与产气杆菌的菌种,接入五只葡萄糖蛋白胨水培养基中以及三只蛋白胨水培养基中,分别贴上标签注明培养基名称以及菌种名称,放入３７℃培养基中培养４8ｈ。
（2）结果观察1、吲哚试验:于培养48小时后的蛋白胨水培养基中滴入３～4滴乙醚,摇动数次,静置一分钟,待乙醚上升后,沿试管壁徐徐加入２滴吲哚试剂。
在乙醚与培养物之间产生红色环状物为阳性。
2、甲基红试验:培养48小时后,向一只葡萄糖蛋白胨水培养基内加入甲基红试剂２滴,培养基变为红色者为阳性,变为黄色者为阴性。
(注意甲基红不要假的太多,以免出现假阳性。
)3、伏-普试验:培养48小时后,向另外两只葡萄糖蛋白胨水培养基内加入5~10滴40％ＫOH,然后加入等量的5%的α-萘酚试剂,用力震荡,再放入37℃恒温箱中保温15~３0分钟,以加快反应速度,若培养物呈现红色则为阳性。
五、实验结果（一）淀粉水解试验(左上为枯草芽孢杆菌;左下为产气杆菌;右上为大肠杆菌;右下为铜绿色假单胞菌)(＊因为金黄色葡萄球菌菌量剩余少,所以实验中菌余用量大的产气杆菌替代)观察结果如下: 观察菌种枯草芽孢杆菌大肠杆菌铜绿色假单胞菌产气杆菌淀粉水解效果＋＋+ ++ ++（二）糖发酵试验实验结果如图所示:左边三支试管分别就是乳糖发酵培养基接种大肠杆菌、变形杆菌、空白对照。
右边三支试管分别就是葡萄糖发酵培养基接种大肠杆菌、变形杆菌、空白对照。
观察结果如下:菌种大肠杆菌普通变形杆菌对照葡萄糖+ + ＋- - - 乳糖＋+ - －- -(三) ＩMViC试验(图一)(图二) (图三)1、图一中左一为大肠杆菌,左二为产气杆菌,左三为对照。
2、图二中左一为产气杆菌(浅橙色),右一为大肠杆菌(淡紫红色),中间为对照(浅黄色)。
３、图三中左为大肠杆菌,右为产气杆菌。
观察结果汇总如下: 观察者:菌种吲哚试验甲基红试验V、Ｐ、试验大肠杆菌+ + －产气杆菌- - +对照－－－(+表示阳性,-表示阴性)甲基红试验中产气杆菌所在试管呈淡橙色,比对照组颜色略深,但远比大肠杆菌浅,记作阴性。
六、思考题(1)您怎么样解释淀粉酶就是胞外酶而非胞内酶?答:淀粉酶就是大分子物质,无法通过跨膜运输进入胞内,所以消化淀粉的酶应当就是由细胞分泌进入外界环境中,在胞外对淀粉进行水解,之后细胞再将消化处理后的小分子物质运输进胞内进行利用。
(2)不利用碘液,您怎样证明淀粉水解的存在？答:淀粉就是葡萄糖的多聚体,在被淀粉酶水解过程中极有可能水解产生葡萄糖,而葡萄糖又就是还原性糖,故可以尝试通过检测还原性糖的方式(如斐林试剂)来验证就是否有淀粉酶存在。
(3)假如某种微生物可以有氧代谢葡萄糖,发酵试验应该出现什么结果?答:试管中培养基变为黄色,小玻璃管中出现气泡。
(4)讨论IＭViC试验在医学检验上的意义。
答:IMViC试验可以非常快捷地鉴别出待测细菌的一些信息,从而可以结合伯杰氏手册对待测菌进行初步的鉴定,再结合革兰氏染色有时甚至可以做到对待测菌进行定科或定属的研究,这十分有利于细菌导致的传染病的临床治疗。
此外,IＭVｉＣ试验还可以快速地鉴别出大肠杆菌与产气肠杆菌,这两种菌广泛存在于自然界,常被作为水源粪便污染的标志,所以IMViＣ试验也可广泛应用于饮用水的检测之中。
七、附实验中所用培养基配方1、淀粉培养基蛋白胨10gNａＣｌ5ｇ牛肉膏5ｇ可溶性淀粉２g琼脂15~2０ｇ蒸馏水1０00mL１２1℃灭菌20min。
２、蛋白胨水培养基蛋白胨10ｇNaCl 5ｇ蒸馏水1000mLpＨ７、6１21℃灭菌２0min。
３、葡萄糖蛋白胨水培养基蛋白胨 5g葡萄糖5ｇ磷酸氢二钾2g蒸馏水１０00ｍL将上述各成分溶于１000ｍL水中,调pH 7、0~7.２,过滤。
分装试管,每管10mL,１2１℃灭菌30mｉn。
4、糖发酵培养基蛋白胨水培养基 10００mL1、6%溴甲酚紫乙醇溶液 1～2ｍＬpH 7、6另配２0％糖溶液(葡萄糖以及乳糖)各１０ｍL。
制法:1、将上述含指示剂的蛋白胨水培养基(pH=7、６)分装于试管中,在每管内放一倒置的小玻璃管(Durhamｔｕｂe),使充满培养基。
2、将已分装好的蛋白胨水与20%的各种糖溶液分别灭菌,蛋白胨水１2１℃灭菌２０ｍiｎ;糖溶液112℃灭菌30mｉn。
3、灭菌后,每管以无菌操作分别加入20%的无菌糖溶液0、5mＬ(按照每1０mL培养基中加入２0%的糖溶液０、５mL,则成１%的浓度)。
配置用的试管必须洗干净,避免结果混乱。