烟草花叶病毒检测试纸条操作方法
广东烟区黄瓜花叶病毒胶体金检测试纸条的研制及应用
广东烟区黄瓜花叶病毒胶体金检测试纸条的研制及应用黄瓜花叶病毒是引起黄瓜花叶病的主要病原体，其对黄瓜产生了巨大的危害。
为了快速、准确地检测黄瓜花叶病毒，研究人员开发了胶体金检测试纸条。
本文对广东烟区黄瓜花叶病毒胶体金检测试纸条的研制及应用进行了详细介绍。
一、研制原理胶体金（Colloidal gold）是一种以金簇为核心，通过分散剂在水溶液中制成的深红色胶体，具有良好的稳定性和生物相容性。
利用胶体金对抗体/抗原的特异性结合作用，可以将目标分子与胶体金结合，并在测试纸上形成明显的色带。
该技术有许多优点，如灵敏度高、选择性强、快速简便等。
在黄瓜花叶病毒胶体金检测试纸条的制备过程中，研究人员将病毒抗原与胶体金结合，制成了胶体金-病毒抗原复合物。
测试纸条上涂有针对病毒的单克隆抗体，当样品中存在病毒时，会与胶体金-病毒抗原复合物结合，引起线条的显色反应。
因此，可通过检测测试纸条上的色带数量及颜色等信息，判断是否存在黄瓜花叶病毒。
二、制备方法1. 制备胶体金将含有金离子的水溶液中加入还原剂，如氢氟酸、硼氢化钠等，加热至沸腾，金离子还原成金纳米粒子，通过分散剂稳定。
制备出来的胶体金应为暗红色、透明的胶体稳定液体。
2. 制备胶体金-病毒抗原复合物在制备好的胶体金溶液中加入病毒抗原，混合振荡，经过反应后，胶体金表面会出现病毒抗原。
待复合物形成后，用分散剂稳定。
3. 制备测试纸条将棉纸或滤纸切成适当的大小，使用吸卡器沿长方向均匀吸收抗体分散液，干燥后切成长度适宜的测试纸条。
将测试纸条放入硬塑料盒中，与固定试剂液同封，固化后就是完整的黄瓜花叶病毒胶体金检测试纸条。
三、应用范围在广东烟区，黄瓜花叶病毒胶体金检测试纸条已经得到了广泛的应用。
它可以快速、准确地诊断黄瓜花叶病毒，具有以下特点：1. 快速便捷：整个检测过程只需要10~15分钟，不需要繁琐的仪器操作，可以在农田或实验室条件下进行。
2. 灵敏度高：黄瓜花叶病毒胶体金检测试纸条的灵敏度可以达到10~30 ng/mL，检测范围较广。
广东烟区黄瓜花叶病毒胶体金检测试纸条的研制及应用
广东烟区黄瓜花叶病毒胶体金检测试纸条的研制及应用广东烟区黄瓜花叶病毒是一种常见的植物病毒，对于黄瓜的生长和产量有较大的影响。
研制一种能够快速、准确检测广东烟区黄瓜花叶病毒的方法对于保护黄瓜种植业的发展具有重要意义。
本文将介绍一种基于胶体金技术的检测方法，并讨论其在广东烟区黄瓜花叶病毒检测中的应用。
研制的检测方法主要基于胶体金技术，该技术具有灵敏度高、特异性强、操作简便等优点，可以快速、准确地检测黄瓜花叶病毒。
研究人员从病毒组织中提取病毒核酸，并进行逆转录反应，将RNA转化为cDNA。
接下来，利用特异性引物进行PCR扩增，得到特异性的目标序列。
然后，将胶体金与检测目标序列结合，形成金纳米颗粒探针。
将反应体系滴在纸条上，等待数分钟，通过肉眼即可观察到纸条上是否出现红色线条，来判断样品是否感染病毒。
该检测方法的应用具有诸多优势。
操作简便，不需复杂设备，只需将样品滴于纸条上即可进行检测。
检测时长短，只需数分钟，快速、高效地获得检测结果。
检测结果可视化，通过肉眼就能看到纸条上是否出现红色线条，无需专业设备进行分析。
该方法的灵敏度高、特异性强，能够准确检测黄瓜花叶病毒的存在，为相关农业技术提供重要的支持。
本研究还评估了该检测方法的应用效果。
通过采集不同地区、不同生长阶段的黄瓜植株样品，进行病毒检测。
结果显示，该方法能够快速、准确地检测出黄瓜花叶病毒的感染情况。
进一步分析表明，该方法的灵敏度高，能够在感染病毒的样品中准确检测出红色线条。
该方法的特异性强，对于其他与黄瓜花叶病毒无关的样品不会出现类似结果。
在实际应用中，该方法能够帮助农民及时识别和控制病毒感染，减少黄瓜产量和质量的损失。
基于胶体金技术的广东烟区黄瓜花叶病毒检测方法具有快速、准确、便捷等特点，在农业生产中具有重要意义。
未来，我们将进一步完善该方法的细节，并考虑将其应用于其他植物病毒的检测中，为提高农作物的生产效益作出更大贡献。
一套适合烤烟3种RNA病毒的RT-PCR检测方法
2021年第2期GUANGXI PLANT PROTECTION2021，Vol.34.No.2一套适合烤烟3种RNA病毒的RT-PCR检测方法祖庆学1，李宏江2，聂忠扬1，于晓飞2，张翼飞1，李昊熙2*（1.贵州省贵阳市烟草公司开阳县分公司贵阳市550300；2.贵州大学烟草学院/贵州省烟草品质研究重点实验室贵阳市550025）摘要：烤烟是贵州省的重要经济作物，但是烟草花叶病毒（TMV）、黄瓜花叶病毒（CMV）和马铃薯Y病毒（PVY）3种RNA病毒在贵州烤烟产区造成巨大损失。
3种病毒引起的症状相似性造成了田间诊断的困难。
针对贵州烟区的样品，开发了一套包含了靶向3种病毒外壳蛋白基因特异性片段的RT-PCR检测方法。
3对引物涵盖的基因片段长度分别为：TMV-120bp，CMV-240bp，PVY-660bp，退火温度均为55˚C。
通过1次PCR反应，就可以根据扩增条带的大小判断病毒的种类，还可以检测复合侵染的样品中2种病毒与3种病毒混合DNA的种类。
该方法非常适合基层检测站点快速和高效地检测大批量烟叶样品，指导后续防控工作的开展。
关键词：烤烟；烟草花叶病毒；黄瓜花叶病毒；马铃薯Y病毒；检测中图分类号：S432.4+1文章标识码：B文章编号：1003-8779（2021）02-0027-05烤烟是贵州省的一种重要经济作物，但是烤烟生产受到多种病虫害的威胁。
烟草花叶病毒（To⁃bacco mosaic virus，TMV）、黄瓜花叶病毒（Cucum⁃ber mosaic virus，CMV）和马铃薯Y病毒（P otato vi⁃rus Y，PVY）3种正义单链核糖核酸（+ssRNA）病毒长期困扰了贵州各个主要烟区[1-4]。
病毒病不仅降低了烤烟产量，还影响了产品的质量和分级，造成了巨大的经济损失[5]。
由于植物病毒的治疗手段非常有限，抗病毒品种的选育和早期染病植株的清除是控制病毒病的主要手段[6]。
3种病毒中，CMV和PVY主要经过蚜虫等介体昆虫进行非持续性传播，而TMV则主要依靠机械摩擦传播，因此，针对性开展的阻断传播的防控手段就不尽相同。
多重烟草病毒胶体金检测试纸条的研制及应用
多重烟草病毒胶体金检测试纸条的研制及应用阮小蕾;邓海滨;王晓宾;李华平【摘要】为建立一种快速、特异、简便的多重烟草病毒检测方法,用胶体金标记和免疫层析技术研制了双重(TMV-CMV、CMV-PVY、TMV-PVY)和三重(TMV-CMV-PVY)病毒试纸条.测试结果表明,三重病毒检测试纸条对目标病毒(TMV、CMV和PVY)的检测具有良好的灵敏性和特异性.检出TMV、CMV和PVY的最低浓度分别在1.02～10.2、1.10～11.0、1.20～12.0 ng/mL之间.对烟草危害严重的TEV、PVA和TSWV均无交叉反应.用三重病毒检测试纸条对苗棚中的烟株进行检测,其结果与RT-PCR检测结果的符合率≥90％.【期刊名称】《烟草科技》【年(卷),期】2018(051)010【总页数】6页(P33-38)【关键词】烟草;病毒;胶体金;检测;试纸条【作者】阮小蕾;邓海滨;王晓宾;李华平【作者单位】华南农业大学农学院广东省微生物信号与作物病害防控重点实验室, 广州市天河五山路483号 510642;广东省烟草南雄科学研究所,广东省韶关市南雄河南工业开发区 512400;中国烟草总公司广东省公司,广州市林和东路128号510610;华南农业大学农学院广东省微生物信号与作物病害防控重点实验室, 广州市天河五山路483号 510642【正文语种】中文【中图分类】S432.41烟草花叶病毒（Tobacco mosaic virus，TMV）、黄瓜花叶病毒（Cucumber mosaic virus，CMV）和马铃薯Y病毒（Potato virus Y，PVY）是危害烟草的主要病毒［1］。
近年来，由于部分地区烟草育苗操作未按技术规程消毒到位，致使苗棚中的病毒病发生严重，移栽后常出现两重或多重病毒复合感染的情况［2-3］，影响了后期烟草的大田生产［4］。
其中，调查2014—2017年广东省烟草苗期病害发生情况时，发现苗棚里的部分烟苗感染了单重或多重病毒。
广东烟区黄瓜花叶病毒胶体金检测试纸条的研制及应用
广东烟区黄瓜花叶病毒胶体金检测试纸条的研制及应用【摘要】本文介绍了广东烟区黄瓜花叶病毒胶体金检测试纸条的研制及应用。
在阐述了研究背景和研究意义。
正文部分分别讨论了病毒检测技术现状、胶体金检测试纸条的原理、研制过程、应用效果以及实验验证。
结论部分总结了技术创新、应用前景和研究成果。
通过本研究，我们深入了解了广东烟区黄瓜花叶病毒的检测方法，为该领域的研究提供了新的思路和方法。
该胶体金检测试纸条具有简单、快速、准确的特点，有望在农业生产中得到广泛应用，为病毒监测和防控提供有效的技术支持。
通过本文的研究，我们对于广东烟区黄瓜花叶病毒的检测及防治有了更深入的认识，对相关工作的开展具有积极的推动作用。
【关键词】广东烟区、黄瓜花叶病毒、胶体金检测试纸条、研制、应用、病毒检测技术、胶体金原理、研制过程、应用效果、实验验证、技术创新、应用前景、研究总结。
1. 引言1.1 研究背景病毒是一种具有较小的RNA或DNA基因组的微生物，它们可以感染动植物、人类等生物，并对宿主造成严重的疾病。
植物病毒不仅会导致农作物减产和质量下降，还会对生态环境产生不良影响。
在种植业中，病毒检测技术的发展对于及时发现和控制病毒性疾病至关重要。
广东烟区是我国重要的烟叶生产基地之一，烟叶在生长过程中容易受到多种病毒的侵害，其中黄瓜花叶病毒（CMV）是一种常见的病毒。
传统的病毒检测方法通常需要复杂的实验条件和昂贵的设备，限制了其在田间的应用。
研发一种简便、灵敏、准确的病毒检测技术对于广东烟区烟叶生产具有重要意义。
本文将介绍一种基于胶体金检测试纸条的病毒检测技术，在研究背景中探讨该技术的意义和应用前景。
1.2 研究意义黄瓜是我国重要的经济作物之一，但在种植过程中常常会受到黄瓜花叶病毒的侵害，导致产量下降、质量下降甚至全株死亡。
及早发现并有效防控病毒对黄瓜产业具有重要意义。
当前，病毒检测技术在黄瓜病毒防治中扮演着重要角色，但传统的检测方法存在着操作步骤繁琐、耗时长、专业水平要求较高等问题。
广东烟区黄瓜花叶病毒胶体金检测试纸条的研制及应用
广东烟区黄瓜花叶病毒胶体金检测试纸条的研制及应用作者：邓海滨阮小蕾来源：《现代农业科技》2020年第08期摘要; ; 为建立一种在生产应用中快速简便的CMV检测方法，应用胶体金标记技术和免疫层析原理，研制出一种针对广东烟区黄瓜花叶病毒病的快速检测试纸条。
检测结果表明，该试纸条检测病毒的灵敏度为1 g/103 mL。
对烟草上危害严重的其他4种病毒均无特异性反应。
用试纸条对育苗棚烟株进行随机检测，结果与RT-PCR检测结果相符率为90%。
关键词; ; 胶体金试纸条;黄瓜花叶病毒;广东烟区中图分类号; ; S435.72; ; ; ; 文献标识码; ; A文章编号; ;1007-5739（2020）08-0099-03; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ;开放科学（资源服务）标识码（OSID）Abstract; ; In order to establish a rapid，specific and simple method for detection of cucumber mosaic virus，using colloid gold labeling technique and immunochromatography principle，rapid test strip for CMV in Guangdong tobacco area were developed.The test results showed that the sensitivity of the test strip to virus detection was 1 g/103 mL.None of the other 4 viruses，which were seriously harmful to tobacco，had specific reaction.The test strip was used to test the tobacco seedlings of the seedling shed randomly，and the result was 90% in accordance with the results of RT-PCR.Key words; ; colloid gold strip;CMV;Guangdong tobacco area黄瓜花叶病毒（cucumber mosaic virus，CMV）属于雀麦花叶病毒科（Bormoviridae）黄瓜花叶病毒属（Cuucmovirus）[1]。
广东烟区黄瓜花叶病毒胶体金检测试纸条的研制及应用
广东烟区黄瓜花叶病毒胶体金检测试纸条的研制及应用随着人们对食品安全的关注度不断提高，农产品的检测需求也变得越来越重要。
其中，病毒是导致农业产品损失的重要原因之一，因此在病毒检测方面的研究也愈加受到关注。
本文主要介绍了一种基于胶体金技术的黄瓜花叶病毒检测方法，其具有灵敏、快速、简单、便携等优点，且能够检测到田间样品中的黄瓜花叶病毒。
一、研制方法1. 材料（1）黄瓜花叶病毒抗体；（3）胶体金颗粒；（4）棉签；（5）玻片；（6）磁性棒。
2. 操作步骤（1）制备抗原将黄瓜花叶病毒感染过的植物组织磨碎，加入0.1mol/L的磷酸缓冲液，离心沉淀，收集上清液，即为抗原。
（2）制备胶体金标记将胶体金颗粒和黄瓜花叶病毒抗体混合，在加入一定浓度的NaCl和Tween-20后，振荡混合，旋离沉淀，最后用0.1mol/L的磷酸缓冲液悬浮，制备成胶体金标记。
（3）制备试纸条在玻片上贴上2mm宽的双面胶，将左右两侧各切下一条0.5cm宽的滤纸，中间用悬浮液渗透纸条。
（4）检测操作将棉签蘸取待检测田间样品汁液，加入0.1mol/L的磷酸缓冲液，旋离沉淀，加入胶体金标记，振荡反应，使用磁性棒吸附胶体金-抗原-抗体复合物到试纸条上，等待5-10分钟后，观察试纸上是否出现红色。
二、检测结果本方法将样品检测视为阳性和阴性两种情况，阳性样品可得到红色反应，阴性样品则无反应。
检测结果还与病毒的浓度相关，病毒浓度越高，反应色越深。
此外，在不同病毒感染程度下，本方法的检测灵敏度达到了10ng/mL。
三、应用展望本方法的研制为病毒检测提供了一种新的选择。
相比于传统的检测方法（如ELISA法、PCR法等），该方法具有操作简单、检测时间快、灵敏度高、使用便携等优点，且克服了传统方法需要复杂的设备和技术的缺陷。
因此，胶体金检测试纸条在田间样品检测中具有广泛的应用前景。
同时，本研究对于胶体金检测技术的发展也具有一定的借鉴意义，可为其他病毒检测方法提供参考。
试纸的正确使用方法
试纸的正确使用方法
1. 首先，将试纸从包装中取出，注意不要弄湿试纸。
2. 然后，将试纸的一端或指示区域放入待测液体中，确保所有液体完全覆盖试纸上的指示区域。
3. 接下来，根据试纸的使用说明，等待一定时间，通常为数秒或数分钟。
4. 在等待时间结束后，将试纸从液体中取出，轻轻晃动试纸以使多余的液体滴落。
5. 最后，将试纸放在水平的表面上，并根据试纸的指示区域上的颜色变化来解读结果。
参考试纸的使用说明，可能需要将试纸与一个颜色比较图或仪器上的指示器进行比较，以确定结果。
6. 使用后，正确处理试纸和液体，如将试纸丢弃到指定的容器中，避免交叉污染和环境污染。
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烟草花叶病毒（TMV）检测试纸条
产品编号：ISK54700
（请仔细阅读英文说明书M175，中文说明书仅供参考）
1.用途
检测试纸条是用于快速筛查作物是否含有病原菌的方法，无需任何仪器设备，只需要SEB1样品提取缓冲液。
可用于大田和温室，几分钟就获得结果。
检测试纸条要密封储存在4℃，用前都回温到室温，检测适温15~35℃。
效期一年。
2.试剂盒内组分
--检测试纸条
--SEB1样品提取袋
--说明书
3.检测步骤
●样品准备
1）采集样品，大约6cm2面积（~0.15g），推荐选取植株上有病症的部分。
注意：采集每个样品时都使用干净的刀具，如果要重复使用刀具要用10%
漂白剂消毒后再使用。
2）沿着样品提取袋顶部的标签剪开，注意不要把里面的缓冲液洒出。
3）把样品放到样品提取袋底部。
4）用笔或钝器轻轻摩擦研磨样品袋。
根据样品种类，当液体显出浅棕色或绿色
时说明样品提取充分。
●样品检测
5）把试纸条垂直插入样品袋无网格的一侧，请不要触摸试纸条防护。
注意试纸条
的“sample”一端向下，浸入液体中不超过试纸条绿标签的四分之一或者到
标记的白线处。
6）质控线(C)一般会在3~5分钟内出现。
测试线(T)至少要5分钟出现，含量低
的样品适当延长反应时间，最长的反应时间为30分钟。
在这段时间里最好
将试纸条从样品提取液中取出。
结果分析
测试线(T)显现，说明样品为阳性（Positive）。
测试线(T)不显现，说明样品为阴性(Negative)。
如果质控线没有出现，那么检测结果是不可靠的。
如果想永久保存检测结果，可以剪下试纸条绿色的部分，并将试纸条夹在吸水纸中。