生化实验报告--DNA定量测定(二苯胺法)
DNA定量测定(二苯胺法)实验报告
DNA定量测定(二苯胺法)实验报告
实验目的：利用二苯胺法对DNA进行定量测定，获得DNA
的浓度信息。
实验原理：二苯胺法是一种常用的DNA定量测定方法。
其原
理是DNA与二苯胺反应生成发色产物，并在560 nm波长下
具有最大吸收量，通过测定吸光度来计算DNA的浓度。
在实
验中，先将待测的DNA样品与二苯胺溶液反应得到发色产物，然后通过比较其吸光度与已知浓度标准曲线的关系来计算待测样品的DNA浓度。
实验步骤：
1. 准备工作：将工作区域消毒，摆放实验所需仪器器材。
2. 制备标准曲线：依次稀释5 μg/mL的DNA溶液，得到一系
列不同浓度的DNA标准溶液。
将标准溶液与相同体积的二苯
胺溶液混合，反应10分钟。
然后在560 nm波长下测定溶液的吸光度，并绘制标准曲线。
3. 处理待测样品：将待测样品与相同体积的二苯胺溶液混合，反应10分钟。
然后在560 nm波长下测定溶液的吸光度。
4. 计算DNA浓度：根据标准曲线，将待测样品的吸光度值代
入计算公式，得到DNA的浓度。
实验结果：
标准曲线数据：（以吸光度为横坐标，DNA浓度为纵坐标）
吸光度（A） DNA浓度（μg/mL）
0.1 1
0.2 2
0.3 3
0.4 4
0.5 5
待测样品数据：
吸光度（A） = 0.25
根据标准曲线计算得到的DNA浓度为2.5 μg/mL
实验结论：根据二苯胺法对DNA的定量测定结果，待测样品的DNA浓度为2.5 μg/mL。
DNA的定量测定
实验八DNA的定量测定一、实验目的学习和掌握二苯胺法测定DNA含量的方法。
二、原理核酸含量的测定方法包括紫外吸收法、定磷法和分别针对DNA和RNA 的颜色反应方法。
本实验采用针对DNA的二苯胺法测DNA的含量。
在酸性溶液中，DNA与二苯胺共热生成蓝色化合物，该物质在595nm有最大吸收，在40～400μg/mL范围内其峰值与DNA含量成正比。
DNA +三、试剂和器材1. 试剂200μg/mL DNA标准溶液、二苯胺试剂2. 器材可见分光光度计、恒温水浴锅、分析天平四、操作步骤1. 标准曲线的制作取12只试管分成6组，按下表操作。
取2管的平均值，以DNA浓度为横坐标，光密度为纵坐标，绘制标准曲线。
试管0 1 2 3 4 5标准DNA/mL 0 0.4 0.8 1.2 1.6 2.0蒸馏水/mL 2 1.6 1.2 0.8 0.4 04 4 4 4 4 4二苯胺试剂/mL60℃恒温水浴中保温1h，冷却，在595nm波长处比色2. 样品的测定取待测样品2mL，加入二苯胺溶液4mL，摇匀，60℃保温1h，然后在595nm波长出测定光密度值。
根据测得的光密度值，从标准曲线上查得相应的DNA 的ug数，按下式计算待测样品的DNA的含量。
DNA%＝待测样品中测得的DNA的mg数 X 100待测样品液中样品的mg数五、注意事项其他糖及糖的衍生物、芳香醛、蛋白质等都对实验有干扰，测定前应尽可能除去。
六、思考题1、DNA含量测定的方法有哪些？各有何优缺点？2、简述二苯胺法测DNA的基本原理。
实验6 动物肝脏中DNA的提取
实验六：动物肝脏中DNA的提取及定量测定一、实验目的1、学习和掌握用浓盐法从动物组织中提取DNA的原理与技术。
2、了解常见生化组分提取技术。
3、学习和掌握二苯胺法测定DNA含量的原理和方法。
二、实验原理核酸和蛋白质在生物体中以核蛋白的形成存在，其中DNA主要存在于细胞核中，RNA 主要存在于核仁及胞质中，在制备核酸时应防止过酸、过碱及其他能引起核酸降解的因素的作用。
全部操作过程应在低温下(4℃)进行，必要时还要加入酶抑制剂。
如柠檬酸、氰化物、砷酸盐、乙二胺四乙酸(EDTA)等可以抑制DNA酶活性，皂土可抑制RNA酶活性，同时SDS 或苯酚等蛋白变性剂也可使核酸降解酶破坏。
动植物的DNA核蛋白能溶于水及高浓度的盐溶液(如1mol/L NaCl)，但在0.14mol/L的盐溶液中溶解度很低，而RNA核蛋白则溶于0.14mol/L盐溶液，可利用不同浓度的氯化钠溶液，将脱氧核糖核蛋白和核糖核蛋白从样品中分别抽提出来。
将抽提得到的脱氧核糖核蛋白用SDS(十二烷基硫酸钠)处理，DNA即与蛋白质分开，可用氯仿-异戊醇将蛋白质沉淀除去，而DNA则溶解于溶液中。
向含有DNA的水相中加入冷乙醇，DNA即呈纤维状沉淀出来。
DNA分子中的脱氧核糖基，在酸性溶液中变成w-羟基-r-酮基戊醛，与二苯胺试剂作用生成蓝色化合物(λmax=595nm)。
DNA(脱氧戊糖基) [H+]HO-CH2-C(=O)-CH2-CH2-CHO 二苯胺蓝色化合物在DNA浓度为20~200μg/ml范围内，吸光度与DNA浓度成正比，可用比色法测定。
三、实验器材猪肝，分光光度计（595nm），比色杯，匀浆器，量筒（50ml、10ml），离心机(5000r/min)，离心管，试管及试管架，移液管（1.0ml、2.0ml、5.0ml），恒温水浴锅四、实验试剂氯化钠，柠檬酸钠，95%乙醇，SDS，氯仿，异戊醇，二苯胺试剂，DNA标准溶液（200μg/m1），二苯胺试剂等。
生化实验报告--DNA定量测定(二苯胺法)
DNA的定量测定-二苯胺法一、实验目的1.学习和掌握用浓盐法从动物肝脏中提取DNA的原理和方法；2.学习和掌握用二苯胺法测定DNA含量的原理和方法。
二、实验原理1．DNA分子中的脱氧核糖基，在酸性溶液中变成ω-羟基-γ-酮基戊醛，与二苯胺试剂作用生成蓝色化合物（λmax=595nm）。
2．在DNA浓度为20-200μg/ml的范围内，吸光度与DNA浓度成正比，可用比色法测定。
三、实验仪器试管移液管7220分光光度计四、实验试剂1、DNA标准液（200ug/ml）：称取10mgDNA钠盐溶于5mol/l氢氧化钠溶液并稀释至100ml。
2、二苯胺试剂：A液：称取纯二苯胺1.50g，溶于100ml冰乙酸，再加浓硫酸1.5ml。
贮于棕色瓶中。
B液：称取1.6ml乙醛溶于100ml蒸馏水中，临用时配制临用时，将20mlA液和0.1mlB液混合即可五、实验验步骤1.标准曲线的绘制加毕，混匀，在60度水浴中保温45分钟，冷却后，在595nm波长下测吸光度，以吸光度对DNA浓度作标准曲线。
2.样品测定吸取DNA样液1.0ml，加入蒸馏水1.0ml，混匀。
然后加入二苯胺溶液4.0ml, 加毕，混匀，在60度水浴中保温45分钟，冷却后，在595nm波长下测吸光度，根据所测得的吸光度对照标准曲线求得DNA的质量。
根据实验数据制得标准曲线如下：由上表可知样液的吸光度y=0.115，则由标准曲线得出DNA样液的浓度x=18.49μg/ml。
故样品中DNA的质量=18.49×6÷1.0=110.94μg七、实验分析1. 测定DNA含量的方法还有哪些原理?荧光法，用Pico Green荧光染料，测定DNA浓度比较灵敏，并且适合测量低浓度和微量DNA，并且受其它杂质的影响不大，缺点要有专门的荧光检测仪器，试剂比较昂贵。
2. 实验中加入乙醛的目的?甲醛引起DNA的断裂损伤,DNA在酸性条件下加热，在反应液中加入少量乙醛,可以提高反应灵敏度.。
生物化学实验课讲义
实验一二苯胺法测定DNA含量【实验目的】1．掌握721型分光光度计的工作原理及操作方法。
2．掌握二苯胺法测DNA含量的原理和方法。
【实验原理】DNA酸解后生成嘧啶核苷酸、嘌呤、磷酸和脱氧核糖。
脱氧核糖在酸性环境中脱水生成ω-羟基-γ-酮基戊醛，它与二苯胺试剂反应生成蓝色化合物，在595nm处有最大吸收。
样品中DNA浓度50～500μg/mL范围内，光密度与DNA的浓度成正比，可用比色法测定。
【实验仪器与试剂】1．仪器(1)试管、吸量管、容量瓶、试管架(2)721分光光度计(3)恒温水浴锅(4)分析天平2．试剂(1)DNA标准溶液：取DNA钠盐(经定磷确定其纯度)用5mmol/LNaOH配成200µg／mL的溶液。
(2)二苯胺试剂：称取纯二苯胺（如不纯，需在70％乙醇中重结晶2次）1g溶于100mL冰醋酸(A．R)中，再加入10mL过氯酸(A．R，60％以上)，混匀待用。
临用前加入1mL1.6％乙醛溶液，所配得试剂应为无色，贮于棕色瓶中。
(3)1.6％乙醛：取47％乙醛3．4mL，加重蒸水定容至100mL(保存于冰箱中，一周内使用)。
(4)DNA样液：将DNA干燥粗制品以5mmol/LNaOH溶液配制成100µg／mL的溶液。
【实验操作】1．标准曲线的制作：取14支试管，分为2组（管号为：0～6，0´～6´）按下表操作。
以DNA含量为横坐标，光吸收值为纵坐标，绘制标准曲线。
2．样品的测定：取2支试管（7号和7´号）各加入2mL样品液(内含DNA应在标准曲线的可测范围之内)，按下表操作。
表1DNA含量的测定【计算】根据测得的光密度值，从标准曲线上查DNA的含量，按下式计算制品中DNA的百分含量：实验二酵母RNA的提取与鉴定【实验目的】掌握RNA的提取及鉴定核酸组分的方法【实验原理】酵母中RNA含量较高。
RNA可溶于碱性溶液，在碱提取液中加入酸性乙醇溶液可以使解聚的核糖核酸沉淀，由此即得到RNA的粗制品。
二苯胺的使用
⼆苯胺的使⽤DNA的鉴定 本实验中鉴定DNA的⽅法为⼆苯胺法(配⽅见下述的“药品配制”)。
⼆苯胺法的原理是:DNA中嘌呤核苷酸上的脱氧核糖遇酸⽣成ω-羟基-γ酮基戊醛,它再和⼆苯胺作⽤⽽显现蓝⾊(溶液呈浅蓝⾊)。
鉴定时溶液蓝⾊的深浅,与溶液中DNA含量的多少有关。
⼆苯胺试剂的配制A液： 15 g⼆苯胺溶于100 mL 冰醋酸中,再加15 mL浓硫酸,⽤棕⾊瓶保存。
如冰醋酸呈结晶状态,则需加温后待其熔化,再使⽤。
B液： ⼄醛的体积分数为0.2%的溶液。
配制： 将0.1 mL B液加⼊到10 mL A液中,现配现⽤。
DNA粗提取与鉴定的另⼀种⽅法1.材料⽤具新鲜菜花(或蒜黄、菠菜)。
塑料烧杯,量筒,玻璃棒,尼龙纱布,陶瓷研钵,试管,试管架,试管夹,漏⽃,酒精灯,⽯棉⽹,三⾓架,⽕柴,⼑⽚,天平。
研磨液,体积分数为95%的酒精溶液,⼆苯胺试剂,蒸馏⽔。
2.⽅法步骤(1)DNA的粗提取 ①准备材料 将新鲜菜花和体积分数为95%的酒精溶液放⼊冰箱冷冻室,⾄少24 h。
②取材 称取30 g菜花,去梗取花,切碎。
③研磨 将碎菜花放⼊研钵中,倒⼊10 mL研磨液,充分研磨10 min 。
④过滤 在漏⽃中垫上尼龙纱布,将菜花研磨液滤⼊烧杯中(有条件的学校可将滤液倒⼊塑料离⼼管中进⾏离⼼,⽤1000r/min的旋转频率,离⼼25 min,取上清液放⼊烧杯中)。
在4 ℃冰箱中放置⼏分后,再取上清液。
⑤加冷酒精 将⼀倍体积的上清液倒⼊两倍体积的体积分数为95%的冷酒精溶液中,并⽤玻璃棒缓缓地轻轻搅拌溶液(玻璃棒不要直插烧杯底部)。
沉淀35 min后,可见⽩⾊的DNA絮状物出现。
⽤玻璃棒缓缓旋转,絮状物会缠在玻璃棒上。
(2)DNA的鉴定 ①配制⼆苯胺试剂 取0.1 mL B液,滴⼊到10 mL A液中,混匀。
②鉴定 取4 mL DNA提取液放⼊试管中,加⼊4 mL ⼆苯胺试剂,混匀后观察溶液颜⾊(不变蓝)。
⽤沸⽔浴(100 ℃)加热10 min 。
二苯胺试剂鉴定DNA
资料范本本资料为word版本，可以直接编辑和打印，感谢您的下载二苯胺试剂鉴定DNA地点：__________________时间：__________________说明：本资料适用于约定双方经过谈判，协商而共同承认，共同遵守的责任与义务，仅供参考，文档可直接下载或修改，不需要的部分可直接删除，使用时请详细阅读内容二苯胺试剂:鉴定DNA。
二苯胺试剂的配制A液:1.5 g二苯胺溶于100 mL 冰醋酸中,再加15 mL浓硫酸,用棕色瓶保存。
如冰醋酸呈结晶状态,则需加温后待其熔化,再使用。
B液:乙醛的体积分数为0.2%的溶液。
配制:将0.1 mL B液加入到10 mL A液中,现配现用。
DNA的粗提取与鉴定实验原理1. DNA在NaCl溶液中的溶解度，是随着NaCl的浓度的变化而改变的。
当NaCl的物质的量浓度为0.14 mol／L时,DNA的溶解度最低。
利用这一原理，可以使溶解在NaCl溶液中的DNA析出。
2.DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些物质则可以溶于酒精溶液。
利用这一原理，可以进一步提取出含杂质较少的DNA。
3.DNA遇二苯胺（沸水浴）会染成蓝色，因此，二苯胺可以作为鉴定DNA 的试剂。
注意事项1.步骤3析出含DNA的黏稠物中，蒸馏水要沿烧杯内壁缓缓加入，不能一次快速倒入。
2.实验中有多个步骤都要用玻璃棒进行搅拌，但是在不同的步骤中玻璃棒的用法不同。
实验用具鸡血细胞液（5～10 mL）；体积分数为95％的冷酒精，蒸馏水，质量浓度为0.1 g／mL的柠檬酸钠溶液，物质的量浓度分别为2 mol／L和0．015 mol ／L的NaCl溶液，二苯胺试剂；烧杯（100 mL，1个， 50 mL， 500 mL，各2个），漏斗，试管（20 mL，2个），玻璃棒，滴管，量筒（100 mL，1个），纱布，镊子，滤纸，铁架台，铁环，三角架，酒精灯，石棉网，载玻片，试管夹。
实验原理：1.析出溶解在NaC1溶液中的DNA。
二苯胺鉴别dna的原理
二苯胺鉴别dna的原理二苯胺（o-Phenylenediamine，简称OPD）是一种常用的试剂，可用于鉴别和检测DNA。
其原理主要涉及化学反应和染色反应。
下面详细解释。
DNA是生物体内一个重要的遗传物质，其构成基本单元为核苷酸，由磷酸、五碳糖（脱氧核糖或核糖）和氮碱基（腺嘌呤、鸟嘌呤、胸腺嘧啶、胞嘧啶）组成。
DNA具有独特的化学结构和物理特性，因此可以通过特殊的染色和鉴别方法来检测它的存在。
二苯胺作为一种有机化合物，具有极好的还原性。
当其与乙醛反应时，形成可见切的氧化产物，从而在DNA鉴别中起到重要作用。
具体原理如下：首先，需要提取待测样品中的DNA。
一般来说，可以通过加入一种缓冲液使细胞膜溶解并释放DNA。
接着，利用离心等方法去除细胞碎片和其他有机物。
提取得到的纯化DNA溶液中，加入二苯胺溶液。
此时，二苯胺会与乙醛反应生成化合物A。
这个反应的机理是二苯胺被氧化成为二苯亚胺离子，与乙醛生成戊二酚偶合物。
化合物A是一种无色化合物。
为了能够观察到该化合物的产生，还需加入过氧化氢（H2O2）。
H2O2的存在下，化合物A会被氧化为可见光的产物B。
产物B为棕色沉淀物，沉积在提取的DNA溶液中。
通过这种染色反应，能够明确地判断待测样品中是否含有DNA。
这种鉴别DNA的实验步骤相对简单，可靠性较高。
其灵敏度可达微克级别，甚至克级别的DNA也能检测到。
此外，这一方法所需试剂的成本较低，操作简便，适合于大量样品的快速鉴别。
需要注意的是，二苯胺法只是一种基本的DNA鉴别方法。
随着科学技术的不断发展，出现了更为先进和灵敏的DNA分析方法，如PCR（聚合酶链式反应），电泳等。
这些方法在法医学、生物学等领域都有广泛的应用。
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DNA的定量测定-二苯胺法
一、实验目的
1.学习和掌握用浓盐法从动物肝脏中提取DNA的原理和方法；
2.学习和掌握用二苯胺法测定DNA含量的原理和方法。
二、实验原理
1．DNA分子中的脱氧核糖基，在酸性溶液中变成ω-羟基-γ-酮基戊醛，与二苯胺试剂作用生成蓝色化合物（λmax=595nm）。
2．在DNA浓度为20-200μg/ml的范围内，吸光度与DNA浓度成正比，可用比色法测定。
三、实验仪器
试管
移液管
7220分光光度计
四、实验试剂
1、DNA标准液（200ug/ml）：称取10mgDNA钠盐溶于5mol/l氢氧化钠溶液并稀释至100ml。
2、二苯胺试剂：
A液：称取纯二苯胺1.50g，溶于100ml冰乙酸，再加浓硫酸1.5ml。
贮于棕色瓶中。
B液：称取1.6ml乙醛溶于100ml蒸馏水中，临用时配制
临用时，将20mlA液和0.1mlB液混合即可
五、实验验步骤
1.标准曲线的绘制
加毕，混匀，在60度水浴中保温45分钟，冷却后，在595nm波长下测吸光度，以吸光度对DNA浓度作标准曲线。
2.样品测定
吸取DNA样液1.0ml，加入蒸馏水1.0ml，混匀。
然后加入二苯胺溶液4.0ml, 加毕，混匀，在60度水浴中保温45分钟，冷却后，在595nm波长下测吸光度，根据所测得的吸光度对照标准曲线求得DNA的质量。
根据实验数据制得标准曲线如下：
由上表可知样液的吸光度y=0.115，则由标准曲线得出DNA样液的浓度x=18.49μg/ml。
故样品中DNA的质量=18.49×6÷1.0=110.94μg
七、实验分析
1. 测定DNA含量的方法还有哪些原理?
荧光法，用Pico Green荧光染料，测定DNA浓度比较灵敏，并且适合测量低浓度和微量DNA，并且受其它杂质的影响不大，缺点要有专门的荧光检测仪器，试剂比较昂贵。
2. 实验中加入乙醛的目的?
甲醛引起DNA的断裂损伤,DNA在酸性条件下加热，在反应液中加入少量乙醛,可以提高反应灵敏度.。