食品卫生微生物学检验产气荚膜梭菌
产气荚膜梭菌检验(食品微生物学检验)
食品安全国家标准食品微生物学检验产气荚膜梭菌检验1范围本标准规定了食品中产气荚膜梭菌（Clostridium perfringens）的检验方法。
本标准适用于食品中产气荚膜梭菌的检验。
2设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：a）恒温培养箱：36℃±1℃；b）冰箱：2℃～5℃；c）恒温水浴箱：50℃±1℃，46℃±0.5℃；d）天平：感量0.1g；e）均质器；f）显微镜：10×～100×；g）无菌吸管：1mL（具0.01mL刻度）、10mL（具0.1mL刻度）或微量移液器及吸头；h）无菌试管：18mm×180mm；i）无菌培养皿：直径90mm；j）pH计或pH比色管或精密pH试纸；k）厌氧培养装置。
3培养基和试剂3.1胰胨-亚硫酸盐-环丝氨酸（TSC）琼脂：见附录A中A.1。
3.2液体硫乙醇酸盐培养基（FTG）：见附录A中A.2。
3.3缓冲动力-硝酸盐培养基：见附录A中A.3。
3.4乳糖-明胶培养基：见附录A中A.4。
3.5含铁牛乳培养基：见附录A中A.5。
3.60.1%蛋白胨水：见附录A中A.6。
3.7革兰氏染色液：见附录A中A.7。
3.8硝酸盐还原试剂：见附录A中A.8。
3.9缓冲甘油-氯化钠溶液：见附录A中A.9。
4检验程序产气荚膜梭菌检验程序见图1。
图1产气荚膜梭菌检验程序5操作步骤5.1样品制备5.1.1样品采集后应尽快检验，若不能及时检验，可在2℃～5℃保存；如8h 内不能进行检验，应以无菌操作称取25g （mL ）样品加入等量缓冲甘油-氯化钠溶液（液体样品应加双料），并尽快至于-60℃低温冰箱中冷冻保存或加干冰保存。
5.1.2以无菌操作称取25g （mL ）样品放入含有225mL 0.1%蛋白胨水（如为5.1.1中冷冻保存样品，室温解冻后，加入200mL 0.1%蛋白胨水）的均质袋中，在拍击式均质器上连续均质1min ～2min ；或置于盛有225mL0.1%蛋白胨水的均质杯中，8000r/min ～10000r/min 均质1min ～2min ，作为1:10稀释液。
产气荚膜梭菌 国标检测方法
产气荚膜梭菌国标检测方法
《产气荚膜梭菌国标检测方法》
产气荚膜梭菌是一种在自然界中广泛分布的细菌，在土壤、水体和动植物表面等环境中都可能存在，同时也是人和动物的肠道正常菌群。
然而，产气荚膜梭菌也会引起食物中毒，对人体健康造成威胁。
因此，及时、准确地检测产气荚膜梭菌成为了食品安全监管的重要内容之一。
为了规范产气荚膜梭菌的国家标准检测方法，中国国家标准化管理委员会发布了《食品安全国家标准食品微生物检验鲜肉和肉制品、水产品及蛋品中产气荚膜梭菌检验》（GB 4789.9-2016）。
该标准规定了在食品中产气荚膜梭菌的检测方法及技术要求，其内容包括了样品制备、检测方法、结果判读和报告等方面。
在该标准中，样品制备包括了样品采集、致病菌分离培养和纯化等步骤；检测方法主要采用分子生物学技术和培养方法相结合的策略；结果判读则依据标准规定的指标和标准质控程序进行判定；报告部分则要求对检测结果进行详细的描述和解释。
此外，随着检测技术的不断更新和完善，国家标准化管理委员会也会不断修订和完善相关标准，以确保检测方法的准确性和适用性。
同时，食品生产企业也应当严格按照国家标准要求，对生产过程中的食品样品进行产气荚膜梭菌的检测，以保障食品的安全和质量。
总之，《产气荚膜梭菌国标检测方法》作为国家标准的一部分，对食品安全监管起着重要的作用，通过该标准的执行，可以有效避免食品中产气荚膜梭菌的污染，保障食品安全，保护消费者的健康。
食品卫生微生物学检验产气荚膜梭菌培训课件
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三、产气荚膜梭菌的流行病学
在世界各地出现, 但血清型分布不同。 可以引起地区性流行, 也有散发性报道。 中毒最常发生于儿童和老人。 多发生在夏、秋季。
食品卫生微生物学检验产气荚膜梭菌
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
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四、产气荚膜梭菌的检验
设备和材料
冰箱: 0 ℃-4℃。
恒温培养箱: 36℃士1℃
恒温水浴锅: 46℃士1℃
4.71
食品卫生微生物学检验产气荚膜梭菌
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产气荚膜梭菌的检验
活菌计数培养检验程序
食品卫生微生物学检验产气荚膜梭菌
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产气荚膜梭菌的检验
确证试验检验程序
食品卫生微生物学检验产气荚膜梭菌
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确证实验
1.革兰氏染色镜检: 产气荚膜梭菌为革兰氏阳性粗大 杆菌，其耐热株可能形成卵形芽孢，位于菌体中央或 近末端，其宽度一般不大于菌体。
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产气荚膜梭菌的检验
菌数计算
根据黑色菌落的计数和确证试验的结果，
计算每克（毫升）食品检样的含菌数。
例如: 10-4稀释液的平板长有黑色菌落100个， 而供做确证试验的10个菌落中有7个被确证为
产气荚膜梭菌，则每克（毫升）食品检样所含
产气荚膜梭菌数为:
100X0.7X104＝7X105
食品卫生微生物学检验产气荚膜梭菌
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Contents
产气荚膜梭菌的生物学性状 产气荚膜梭菌的致病性 产气荚膜梭菌的流行病学 产气荚膜梭菌的检验 产气荚膜梭菌的快速检测方法 产气荚膜梭菌的污染及控制
食品卫生微生物学检验产气荚膜梭菌
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一、产气荚膜梭菌的生物学性状
第十节产气荚膜梭状芽孢杆菌检验ppt课件
Clostridium perfringens
/shouyiweisheng wu/图片资料/产气荚膜梭菌.jpg
2019
www.uni-ulm.de/.../ Diagnostik/Erreger/c_keim.htm -
5
2)培养特性
*不严格的厌氧 *普通营养琼脂上可生长，若加入葡萄糖、血液则生长更好。 *适宜生长温度为37—47℃。 *生长和繁殖速度极快，在适宜条件下8min/代。 *在45℃高温下可进行快速分离纯培养，每培养3—4h 传种1次，较易分离纯化。
第十节 产气荚膜梭菌检验
魏氏梭菌
食品卫生微生物学检验 产气荚膜梭菌检验
Microbiological examination of food hygiene Examination of Clostridium perfringens
2019
-
1
目录
1、概述 2、生物学特性
（菌体形态学特征、 培养特性和抵抗力）
2019 3
2、生物学特性
1)形态与染色
G+( 陈旧培养物阴性菌）无鞭毛可形成荚膜和芽 胞的大杆菌 大小：为(1－2)μm X(2－10)μm 。 芽孢：卵圆形位于菌体中央或近端，直径大于菌体的 直径，有的菌株难形成芽胞。 荚膜：在人和动物活体组织内，或在含血清的培养基 内生长时可形成荚膜。
2019 4 /research/Images/SarkerSlide.jpg / research/micimm/index.php
Clostridium Perfringens Toxin
2019 /.../ agents/AgentsBW_toxins.asp 6 -
肝片肉汤培养： －－大量产气，培养5h-6h变浑浊； 牛奶培养基中生长： －－能够分解乳糖产酸，将酪蛋白凝固 产生大量气体，冲散酪蛋白， 使其成海绵状。 庖肉培养基中培养： －－产生大量气体，肉渣或肉块 略带粉红，但不消化。 普通琼脂平板上培养： －－15h－ 24h形成S型菌落， 在营养不足或琼脂浓度 高的平板上可形成锯齿状带 at 45C ， ClostridiumR perfringens is virtually the only 放射条纹的 型菌落。
2024版食品卫生微生物学检验产气荚膜梭菌ppt教案
食品卫生微生物学检验产气荚膜梭菌ppt教案•引言•产气荚膜梭菌生物学特性•食品卫生微生物学检验方法•产气荚膜梭菌检验流程及操作规范•实验室安全与防护措施•案例分析与实践操作演示引言课程背景与目的背景随着食品工业的发展，食品卫生安全问题日益突出，微生物污染是其中重要的问题之一。
目的通过本课程的学习，使学生掌握食品卫生微生物学检验的基本理论和技能，了解产气荚膜梭菌等常见食源性致病菌的生物学特性和检测方法。
食品卫生微生物学是研究食品中微生物的种类、数量、分布及其对食品质量和安全的影响的学科。
定义研究内容重要意义包括食品中微生物的污染来源、生长繁殖条件、代谢产物及毒素的形成等。
对于保障食品安全、预防食源性疾病的发生具有重要意义。
030201食品卫生微生物学概述产气荚膜梭菌简介生物学特性产气荚膜梭菌是一种革兰氏阳性菌，能形成芽孢，具有厌氧生长的特性。
分布与污染广泛分布于自然界中，常见于土壤、水、动物肠道等环境，也可通过食品加工过程污染食品。
危害产气荚膜梭菌在食品中生长繁殖可产生多种有害代谢产物，如气体、毒素等，导致食品腐败变质，严重时还可引起食物中毒。
产气荚膜梭菌生物学特性形态与结构形态产气荚膜梭菌为革兰氏阳性粗大杆菌，两端钝圆，单个或成双排列，偶见链状。
结构菌体有荚膜，无芽孢，在体内可形成卵圆形芽孢，芽孢位于菌体中央或近端，芽孢直径不大于菌体。
生长条件与培养基生长条件产气荚膜梭菌为厌氧菌，生长适宜温度为37℃，pH值为7.0～7.5。
培养基在血平板上菌落较大、灰白色、不透明，边缘呈锯齿状，多数菌株有双层溶血环，内环是θ毒素的作用，而外环不完全溶血是a 毒素所致。
生理生化特性代谢产气荚膜梭菌能分解肌肉和结缔组织中的糖，产生大量气体，导致组织严重气肿，继而影响血液供应，造成组织大面积坏死。
生化反应产气荚膜梭菌可发酵葡萄糖、麦芽糖、乳糖及蔗糖，产酸产气；不发酵甘露醇、卫矛醇和侧金盏花醇；液化明胶，产生H2S，吲哚和动力。
产气荚膜梭菌检验作业指导书
品有限公司生效日期：2014.01.01页码：第1页，共2页1 目的规定矿泉水产气荚膜梭菌的检验方法，保证按标准化操作。
2 适用范围适用于产气荚膜梭菌检测。
3 术语产气荚膜梭菌：是继沙门氏菌、葡萄球菌后引起食物中毒的又一重要的病原菌。
属于革兰氏阳性粗大梭菌，芽孢呈卵圆形，肉汤培养时芽孢少见，须在无糖培养基中才能生成芽孢。
无鞭毛，不运动，属于专性厌氧菌。
4 职责质检员负责按作业指导书进行检验。
5 流程图无6 作业内容6.1 检验方法原理微孔滤膜是一种微孔径的过滤膜（通常孔径为0.22µm、0.45µm，滤膜直径为47mm），滤膜能滤过大量水样，并将水中含有的细菌截留在滤膜上，然后将滤膜贴在选择性培养基上，经培养后，直接计数滤膜上的典型微生物菌落数，算出一定体积水样中含有的微生物菌落总数。
6.2 实验器材、培养基及试剂6.2.1 实验器材不锈钢过滤器装置、滤膜（直径47mm，微孔径0.22µm）、抽滤设备、无齿镊子、显微镜（10×～100×）、量筒、培养皿、灭菌锥形瓶、恒温培养箱（36±1℃）、恒温水浴锅（46±1℃）、酒精灯、冰箱（0～8℃）、厌氧培养装置、超净工作台。
6.2.2培养基及试剂庖肉培养基、庖肉牛肉粒、亚硫酸盐-多粘菌素-磺胺嘧啶琼脂（SPS）、液体硫乙醇酸盐培养基（FT）、动力硝酸盐培养基（A法）、含铁牛奶培养基、卵黄琼脂培养基、1g/L蛋白胨水、硝酸盐还原试剂（甲）、(乙)液、亚硫酸盐-多粘菌素-磺胺嘧啶琼脂配套试剂、革兰氏染色液6.3操作步骤6.3.1推测性检验6.3.1.1水样过滤：在100级的洁净工作台进行过滤操作。
6.3.1.2用无菌镊子夹取灭菌滤膜边缘部分，将粗糙面向上，贴放在已灭菌的滤床上，固定好品有限公司生效日期：2014.01.01页码：第2页，共2页滤器，将50mL水样或稀释液通过孔径0.22µm的滤膜过滤。
产气荚膜梭菌检验标准操作程序
产气荚膜梭菌检验标准操作程序As the development of science and technology advances, the testing standards and procedures for Clostridium difficile (C. diff) have become more refined and rigorous. 随着科学技术的进步，产气荚膜梭菌(C. diff)的检测标准和程序变得越来越精细和严格。
When it comes to the detection of C. diff, it is essential to follow standardized operating procedures to ensure accurate and reliable results. 检测C. diff时，遵循标准化的操作程序至关重要，以确保结果准确可靠。
One of the critical steps in the testing process is sample collection. Proper sample collection is crucial for obtaining accurate results. 检测过程中一个关键的步骤是样品采集。
正确的样品采集对于获得准确的结果至关重要。
In addition to sample collection, sample transportation and storage are also vital aspects of the testing procedure. Proper transportation and storage conditions help preserve the integrity of the sample and prevent contamination or degradation. 除了样品采集外，样品的运输和储存也是检测过程中至关重要的方面。
GB产气荚膜梭菌检测
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《GB 4789.13—2012 食品微生物学检验 产气荚膜梭菌 检验 》
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《GB 4789.13—2012 食品微生物学检验 产气荚膜梭 菌检验 》解决方案
用途 样品制备 GB中的名称 1%蛋白胨水 OXOID的英文名称 Peptone Bacteriological OXOID的中文名称 细菌学蛋白胨 OXOID货号 LP0037B
计数培养
Perfringens Agar 胰胨-亚硫酸盐-环丝 Base (TSC/SFP) 氨酸（TSC）琼脂 Perfringens（TSC） Supplement 液体硫乙醇酸盐培养 Thioglycollate Medium 基（FT）
产气荚膜梭菌 CM0587B TSC/SFP 琼脂基础 产气荚膜梭菌TSC 添 SR0088E 加剂 硫乙醇酸盐培养基 CM0173B CM0173T
GB 产气荚膜梭菌检测
产气荚膜梭菌（Clostridium perfringens）
• 产气荚膜梭菌（Clostridium perfringens）是革兰氏阳性杆状厌氧 菌，因能分解肌肉和结缔组织中的糖 类而产出大量气体以及可以在体内能 形成荚膜而得名。 • 严格厌氧，对营养要求不高，厌氧培 养中生长繁殖极快。 • 此菌多以芽胞形式广泛分布于土壤、 人及动物肠道中。引起食物中毒的食 品大多是畜禽肉类和鱼类食物，牛奶 也可因污染而引起中毒。
确认试验
革兰氏染色液
Gram Stain Kit
革兰氏染色液套装
R400804ຫໍສະໝຸດ 结果观察• 培养：
典型的产气荚膜梭菌在TSC琼脂平板上为黑色菌落。
• 确证实验：
从单个平板上任选5个（小于5个全选）黑色菌落，分别接种 到FTG培养基，36℃±1℃培养18h～24h 用上述培养液涂片，革兰氏染色镜检并观察其纯度。产气荚 膜梭菌为革兰氏阳性粗短的杆菌，有时可见芽孢体。 含铁牛乳培养基：暴烈发酵 缓冲动力-硝酸盐培养基：产气荚膜梭菌无动力，能将硝酸盐 还原为亚硝酸盐。 乳糖-明胶培养基：产气荚膜梭菌能发酵乳糖，使明胶液化。
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观察接种点的变化。产气英膜梭菌产生卵磷脂酶，分
解卵黄中的卵磷脂，接种点的底部及周围形成乳白色
的混浊带。
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产气荚膜梭菌的检验
菌数计算 根据黑色菌落的计数和确证试验的结果，
计算每克（毫升）食品检样的含菌数。
例如：10-4稀释液的平板长有黑色菌落100个， 而供做确证试验的10个菌落中有7个被确证为
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产气荚膜梭菌纯培养的镜下形态 医电学镜ppt 下的产气荚膜梭菌（C.perfringens）5
产气荚膜梭菌的生物学性状
2.培养特性 生长活跃，代谢迅速。 血琼脂平板：双层溶血环（靶形溶血）
内环完全溶血 外环不完全溶血 含铁牛奶培养基： “汹涌发酵” （stormy fermentation）
2.食物中毒 食入被大量细菌污染的食物（肉类） 临床表现：剧烈腹绞痛、腹泻；可自愈
3.坏死性肠炎
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三、产气荚膜梭菌的流行病学
在世界各地出现，但血清型分布不同。 可以引起地区性流行，也有散发性报道。 中毒最常发生于儿童和老人。 多发生在夏、秋季。
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四、产气荚膜梭菌的检验
设备和材料
冰箱：0 ℃-4℃。 恒温培养箱：36℃士1℃ 恒温水浴锅：46℃士1℃ 显微镜：10×～100 × 均质器或灭菌乳钵
厌氧培养装置：常温催化除氧式或碱性焦性没石子酸除氧式
灭菌吸管：1mL（具0.01mL刻度），10mL（具0.1mL刻度） 灭菌试管：16mmX160mm 灭菌平皿：直径90mm 灭菌锥形瓶：500mL
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产气荚膜梭菌的检验
培养基和试剂
1.疱肉培养基：GB/T4789.28-2003中4.67 2.亚硫酸盐一多粘菌素一磺胺嘧啶琼脂(SPS) ：
GB/T4789.28--2003中4.69 3.液体硫乙醇酸盐培养基(FT) ： GB/T4789.28-2003中4.70 4.动力一硝酸盐培养基：GB/T4789.28-2003中4.72 5.含铁牛奶培养基：GB/T4789.28-2003中4.71 6.卵黄琼脂培养基：GB/T4789.28-2003中4.68 7. 0.1％蛋白陈水：GB/T4789.28-2003中4.85 8.硝酸盐还原试剂：GB/T4789.28-2003中3.17 9.革兰氏染色液：GB/T4789.28-2003中2.2
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六、产气荚膜梭菌的污染及控制
掌握产气荚膜梭菌血清型在我国地区流行的 分布以及在不同动物的感染致病情况是采取预 防控制措施的前提。
防治原则 及时清创，破坏和消除厌氧微环境 食物加热彻底
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多种外毒素、肠毒素； 侵袭性酶：卵磷脂酶、纤维蛋白酶、透明质
酸酶和胶原酶等。
分成A、B、C、D、E5个毒素型。 A型主要引起气性坏疽和食物中毒。C型则
引起坏死性肠炎。
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9所致疾病Fra bibliotek1.气性坏疽 致病条件与破伤风梭菌相同
潜伏期短，发病迅速，病情险恶，死亡率高。 以组织坏死、气肿和全身中毒为特征。
产气荚膜梭菌，则每克（毫升）食品检样所含 产气荚膜梭菌数为：
100X0.7X104＝7X105
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五、产气荚膜梭菌快速检测方法
随着产气荚膜梭菌分子生物学研究的深入， 该菌的毒素基因相继被克隆测序，在此基础上 出现了许多鉴定菌型和判断致病性的方法。
缩短了时间，能够较快得到结果，操作简单 比如PCR、LAMP等。
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确证实验
3.取生长旺盛的FT培养液1mL接种于含铁牛乳培养基， 46℃水浴中培养2h，观察有无“暴烈发酵”现象， 5h内不发酵者为阴性。产气荚膜梭菌发酵乳糖，凝固 酪蛋白并大量产气，呈“暴烈发酵”现象，但培养基 不变黑。
4.用接种环取FT培养液点种于卵黄琼脂平板（每张平
板至少可接种10点），于36℃士1℃厌氧培养24h，
食品卫生微生物学检验 产气荚膜梭菌检验
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1
Introduction
产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)又称魏
氏梭菌(C．welchii)，为厌氧芽孢杆菌属成员。
广泛存在于自然界的水源、土壤及人和动物肠 道之中。
条件致病菌，主要引起人的食物中毒、气性坏 疽和动物猝死症等疾病。毒性作用较肉毒梭菌 和破伤风梭菌要弱， 但产生毒素种类繁多。
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血琼脂平板上的菌落形态
含铁牛奶中的产气荚膜梭菌
疱肉培养基中的产气荚膜梭菌
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产气荚膜梭菌的生物学性状
3.生化特性 能发酵多种糖类，如葡萄糖、麦芽糖、蔗糖和
乳糖，产酸产气； 不发酵甘露糖或水杨酸。 能液化明胶，产生硫化氢，不能消化已凝固的
蛋白质和血清。
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二、产气荚膜梭菌的致病性
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Contents
产气荚膜梭菌的生物学性状 产气荚膜梭菌的致病性 产气荚膜梭菌的流行病学 产气荚膜梭菌的检验 产气荚膜梭菌的快速检测方法 产气荚膜梭菌的污染及控制
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一、产气荚膜梭菌的生物学性状
1.形态与染色
革兰氏阳性粗大杆菌，专性厌氧。 无鞭毛，体内有明显荚膜。 芽孢椭圆形，不大于菌体，位于次极端。 单独或成双排列，有时也呈短链排列。
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13
产气荚膜梭菌的检验
活菌计数培养检验程序
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14
产气荚膜梭菌的检验
确证试验检验程序
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确证实验
1.革兰氏染色镜检：产气荚膜梭菌为革兰氏阳性粗大 杆菌，其耐热株可能形成卵形芽孢，位于菌体中央或 近末端，其宽度一般不大于菌体。
2.动力-硝酸盐还原实验
用接种环（针）穿刺接种动力一硝酸盐培养基，于 36℃士1℃培养24h，观察接种线的生长情况，判断 有无动力。然后，滴加甲萘胺液和对氨基苯磺酸液各 0.5mL，观察硝酸盐是否被还原。产气荚膜梭菌无动 力，能将硝酸盐还原为亚硝酸盐。