常规HE病理切片制作流程
染色步骤
HE染色是应用最广泛的组织病理学常规染色技术。
㈠染色程序1．石蜡切片HE染色（常规HE染色）（1）二甲苯Ⅰ 5～10min（2）二甲苯Ⅱ 5～10min（3）无水乙醇Ⅰ 1～3min（4）无水乙醇Ⅱ 1～3min（5）95%乙醇Ⅰ 1～3min（6）95%乙醇Ⅱ 1～3min（7）80%乙醇 1min（8）蒸馏水 1min（9）苏木素液染色 5～10min（10）流水洗去苏木素液 1min（11）1%盐酸-乙醇 1～3s（12）稍水洗 1～2s（13）返蓝（用温水或1%氨水等） 5～10s（14）流水冲洗 1～2min（15）蒸馏水洗 1～2min（16）0.5%伊红液染色 1～3min（17）蒸馏水稍洗 1～2s（18）80%乙醇 1～2s（19）95%乙醇Ⅰ 2～3min（20）95%乙醇Ⅱ 2～3min（21）无水乙醇Ⅰ &, nbsp; 3～5min（22）无水乙醇Ⅱ 3～5min（23）石炭酸-二甲苯 3～5min（24）二甲苯Ⅰ 3～5min（25）二甲苯Ⅱ 3～5min（26）二甲苯Ⅲ 3～5min（27）中性树胶封固注：①（12）和（13）项可省去，但（14）的冲水时间需延长至10～15min（细胞核显示更清晰）。
②（23）项可用无水乙醇代替；北方地区可省略。
2．冰冻切片HE染色（1）冰冻切片固定 10～30s（2）稍水洗 1～2s（3）苏木素液染色（60℃） 30～60s（4）流水洗去苏木素液 5～10s（5）1%盐酸-乙醇 &n, bsp; &nbs, p; &nb, sp; 1～3s（6）稍水洗 1～2min（7）返蓝（用温水或1%氨水等） 5～10s（8）流水冲洗 15～30s（9）0.5%伊红液染色 1～2min（10）蒸馏水稍洗 1～2min（11）80%乙醇 1～2min（12）95%乙醇 1～2min（13）无水乙醇Ⅰ 1～2min（14）无水乙醇Ⅱ 1～2min（15）石炭酸-二甲苯 2～3min（16）二甲苯Ⅰ 2～3min（17）二甲苯Ⅱ 2～3min（18）中性树胶封固注：①（7）和（8）项可省去，但（9）的冲水时间需延长至10～15min（细胞核显示更清晰）。
病理切片制作过程及注意事项
病理切片制作过程及注意事项简介病理切片是病理学中非常重要的工具，它能够帮助医生做出准确的诊断。
本文将详细介绍病理切片的制作过程以及需要注意的事项。
制作过程步骤1：组织取材•选择适当的组织进行切片制作；•确保组织样本取材的准确性和代表性。
步骤2：固定组织•使用合适的固定剂固定组织样本，如福尔马林；•确保固定时间和固定剂的浓度符合要求。
步骤3：脱水与清洁•将固定的组织放入酒精溶液中进行脱水处理；•清洁组织以去除固定剂和杂质。
步骤4：组织包埋•将脱水的组织置于熔蜡中进行包埋；•确保组织完全包裹，避免产生气泡。
步骤5：切片制作•使用专用的切片机将包埋的组织切成薄片；•控制切片的厚度和形状，确保质量。
步骤6：染色•使用合适的染色剂对切片进行染色，如血液样本使用血液染色剂；•控制染色时间和染色剂的浓度，确保染色效果。
步骤7：封片•将切片放在载片上，使用专用胶水将其封闭；•确保切片和载片的牢固性。
步骤8：质量控制•检查切片的质量，包括切片厚度、染色效果等；•确保切片符合病理学的要求。
注意事项注意事项1：安全•在病理切片制作过程中，要注意使用个人防护装备，如手套、口罩等；•避免接触有害化学物质，如福尔马林。
注意事项2：操作规范•按照病理切片制作的标准操作流程进行，确保结果的准确性；•遵守操作规范，减少操作失误的风险。
注意事项3：仪器维护•定期对切片机等相关仪器进行维护保养；•确保仪器的正常工作状态，减少故障的风险。
注意事项4：质量控制•对制作的病理切片进行质量控制，如切片的厚度、染色的均匀性等；•确保制作出的病理切片符合质量要求。
注意事项5：记录保存•对制作的病理切片进行记录，包括样本信息、制作过程、染色方法等；•妥善保存记录，方便后续查阅和追溯。
结论病理切片的制作过程需要经过多个步骤，每个步骤都需要严格操作和控制。
同时，要注意安全、遵守操作规范、定期维护仪器，并进行质量控制和记录保存。
只有这样，才能制作出高质量的病理切片，为病理学的研究和诊断提供可靠的依据。
he染色步骤HE实验步骤
he染色步骤 HE实验步骤动物病理切片小结[样本处理]动物麻醉后，开胸，暴露心脏，头皮针插入左心室尖，打开37?生理盐水输液装置，从右心耳下沿剪开右心房，灌洗至流出的生理盐水无血(20min)，换4%多聚甲醛固定液灌注(约5min)[固定]4%多聚甲醛固定。
[石蜡切片]? 取样从固定中取出待切组织，用手术刀切成2mm厚度的小样，装入脱水小盒中，铅笔标号纸条同放入小盒后流水洗30min，蒸馏水浸洗? 处理Mice:脱水50%乙醇 2-3h170%乙醇 1-2h80%乙醇 1h95%乙醇 2h(1h+1h)100%乙醇 2h(1h+1h)透明二甲苯 35min+35min浸蜡 1h+1h+1h (62?蜡)[HE染色]脱蜡二甲苯? 15min二甲苯? 15min二甲苯:无水乙醇(1:1) 2min无水乙醇? 2min无水乙醇? 2min95%乙醇 2min85%乙醇 2min70%乙醇 2min50%乙醇 2min蒸馏水 5min(如果是DAB染色要抗原修复)HE染色? 苏木素 6-8min (时间可以延长，现在10-30min)? 冲洗 1min(反向将载玻片反向冲洗，注意不要脱片)2? 含1%盐酸的乙醇进行分色(用75%乙醇配)2-3s动作要快? 氨水反蓝 >10min? 伊红 10s? 冲洗固定脱水95%乙醇 2min100%乙醇? 2min100%乙醇? 2min二甲苯? 2min二甲苯? 2min 树胶封片组织浸蜡-常规石蜡切片制作组织经过透明剂的完全透明后，被移放于65?左右熔化的石蜡中，于65?的电热恒温箱中浸渍的过程称为浸蜡。
组织在脱水时，组织中的脂类和类脂等物质在脱水剂的作用下被溶解掉，留下了许多腔隙，许多管腔组织和血管，也有许多腔隙，这些都严重地影响了切片。
组织浸蜡时，由于诱导剂(二甲苯)的作用，石蜡进入到组织的各个角落，并在各个角落中保存下来。
当石蜡包埋后冷却时，这浸入到里3面的石蜡便可起到支撑的作用，而且使组织不致于变形，塌陷等现象，使切片能完整的切出，便于镜下观察。
病理切片制备步骤
病理切片制备步骤全文共四篇示例，供读者参考第一篇示例：病理切片制备是病理学研究的重要步骤，通过对组织样本的切割、染色和观察，可以帮助医生准确诊断疾病。
下面我们来详细介绍病理切片制备的步骤。
一、组织采集和固定1. 组织采集：首先需要采集患者患病组织样本，可以是手术切除标本、活检标本或尸检标本。
2. 组织固定：将组织样本放入10%中性缓冲福尔马林或其他适当的固定液中，固定时间为6-48小时，确保组织细胞结构不变。
二、脱水和包埋1. 脱水：将固定的组织样本置于不同浓度的乙醇溶液中，逐渐去除水分。
2. 渗透：将脱水的组织样本放入蜡渗透剂中，使组织透明并与蜡充分渗透，以便进行切片。
3. 包埋：将渗透后的组织样本置于熔融的石蜡中，使组织固定在石蜡块中，以便进行切片。
三、切片和染色1. 切片：用旋转式切片机将石蜡包埋的组织块切割成厚度为3-5微米的切片。
2. 染色：将切片放入不同的染色剂中，如血液学染色、组织学染色、免疫组化染色等，以便观察组织结构和细胞形态。
四、封片和观察1. 封片：将染色后的切片放入显微镜玻璃片上，加入透明封闭剂，覆盖玻璃片，制成玻璃切片。
2. 观察：用光学显微镜观察切片，根据细胞形态和染色结果判断组织结构的变化，帮助医生做出疾病诊断。
以上就是病理切片制备的详细步骤，每一步都需要仔细操作和精心处理，以确保获得准确的组织切片和可靠的诊断结果。
希望以上内容对您有所帮助，如果有任何疑问，请随时向专业医学工作者咨询。
【2000字】第二篇示例：病理切片制备是一项关键的医学实验技朧，用于观察疾病组织的形态结构和病变情况。
正确的切片制备步骤对于准确诊断和治疗具有至关重要的意义。
本文将详细介绍病理切片制备的步骤及注意事项。
1. 采集标本：需要从患者身上采集组织标本。
这通常由有经验的医生或技术人员完成，确保采集到的标本完整、无损伤，并配有详细的临床信息。
2. 杀灭固定组织：采集到组织标本后，需要立即将其置入适当的固定液中进行固定。
常规HE制片的制作
苏木素-伊红染色（HE）切片制作HE制片是病理实验室最基本的方法，是各种制片技术最基础的部分。
它包括组织固定、脱水、透明、包埋、切片、漂片、烤片、脱蜡、染色、脱水、透明和封固等程序。
HE染色是既基本又是十分重要的工作。
HE染色的好坏直接影响病理医生的正确诊断，而HE染色质量好坏与HE制片的每一步骤关系都十分密切。
任一步骤出问题都会直接影响最终的染色结果。
现将方法介绍如下：（一）组织处理(全封闭自动组织脱水机处理程序)：（1）福尔马林Ⅰ：30min（2）福尔马林Ⅱ：30min（3）70%乙醇：30min（4）85%乙醇：30min（5）95%乙醇：1h（6）95%乙醇：1h（7）无水乙醇Ⅰ：1.5h（8）无水乙醇Ⅱ：1.5h（9）二甲苯Ⅰ：30min（10）二甲苯Ⅱ：45min（11）石蜡Ⅰ：30min（12）石蜡Ⅱ：30min（13）石蜡Ⅲ：1h（14）石蜡Ⅳ：1h程序中除二甲苯外余试剂处理中均加温至37摄氏度并加压。
石蜡选用熔点为58摄氏度的硬蜡。
组织包埋：包埋时将60℃的石蜡倒入纸盒内，然后用小镊子将各组织块按一定的顺序排列好，使切面朝下。
（二）切片切片厚约4~8μm，通常厚约4μm，细胞小而密的组织如淋巴结，可以切3μm，而细胞疏的组织，如脑组织可切5-8μm。
将切片在45℃左右水浴中展开，展开程度以组织完全摊平为准。
切片至65-75℃烘箱中烤片10min，一般时间越长效果越好，以切片紧贴于载玻片上呈半透明状为佳。
常规组织块捞片1-2张，胃肠镜小组织以3×3排列共捞9个。
（三）染色步骤：（1）环保液脱蜡5min（2）环保液脱蜡5min（3）无水乙醇2min（4）95%乙醇2min（5）85%乙醇2min（6）流水冲洗切片10min（7）抖干切片水分入苏木素10min（8）流水稍洗（9）2%盐酸乙醇分化10-30秒，根据组织不同选择不同的分化时间（10）流水返蓝15min或稀氨水返蓝30秒（11）流水稍洗（12）入伊红20-60秒（13）流水稍洗（14）75%乙醇脱水兼分色数秒（15）85%乙醇脱水兼分色数秒（16）95%乙醇脱水5min（17）无水乙醇脱水5min（18）无水乙醇脱水5min（19）等量乙醇环保液脱水5min（20）环保液二甲苯3min（21）环保液二甲苯5min（22）中性树胶封片（四）对HE切片的质量要求：（1）切片完整、贴片恰当；（2）切片较薄和均匀；（3）无皱折；（4）无刀痕；（5）染色清晰、核浆分明、透明度好；（6）无固缩、龟裂、污染；（7）封胶适当、玻片清洁；（8）标签号码清楚，字体端正。
制作优质HE病理组织切片的要素-精品文档
制作优质HE病理组织切片的要素病理组织石蜡制片技术是病理诊断的基础，制片质量的好坏是指导医师作出准确诊断的重要保证。
常规石蜡制片一般经过取材、固定、脱水、透明、浸蜡、包埋、切片、染色、封片等一系列的步骤，一个步骤做不好都会影响组织切片的质量。
本文就我们科在日常工作中各步骤可出现的问题总结出一些经验和体会，现介绍如下。
1 材料1.1 各类病理组织标本1.2 仪器 SHANDON-Thermo全封闭式组织处理机、包埋机、切片机。
1.3 试剂 10%福尔马林、AAF固定液、梯度酒精、二甲苯、石蜡(58~60℃)、苏木素、伊红2 方法2.1 取材临床医师切取标本后，应尽快将标本置于10%福尔马林液内固定，固定液量为4~5倍于标本体积，也可达到15~20倍。
对较大的标本应切开固定，切开厚度为1 cm左右，为保存标本的原有大体形态，切开时最好不要完全断开。
固定时间应视标本大小而定，小标本应不少于4 h，大标本应不少于8 h。
取材组织面积为2 cm×1.5 cm，厚度不超过0.3 cm，骨组织或钙化组织需先经10%硝酸水溶液脱钙至针刺入无阻力感后再取材。
2.2 脱水标本放入全封闭式组织处理机后，AAF固定液1 h→80%酒精30 min→90%酒精30 min→95%酒精Ⅰ1 h→95%酒精Ⅱ1 h→无水乙醇Ⅰ1 h→无水乙醇Ⅱ1 h→无水乙醇Ⅲ1.5 h→二甲苯Ⅰ30 min→二甲苯Ⅱ1 h→石蜡Ⅰ30 min→石蜡Ⅱ30 min→石蜡Ⅲ1 h→石蜡Ⅳ1.5 h。
2.3 包埋将脱水后的组织按不同要求用石蜡(58℃~60℃)进行包埋。
2.4 切片将冷却的蜡块放于切片机上切片，厚度一般为3~4 μm。
2.5 染色石蜡切片脱蜡至水→放入苏木素工作液内染色1~5 min→自来水洗1 min→1%盐酸酒精分化10 s→自来水洗1 min→稀氨水(1%)反蓝20 s→自来水洗1 min→95%酒精10 s→乙醇性伊红液1~3 min→85%酒精1 min→90%酒精1 min→95%酒精Ⅰ1 min→95%酒精Ⅱ1 min→100%酒精Ⅰ1 min→100%酒精Ⅱ1 min→二甲苯透明，电风筒吹干后，用中性树胶封片。
组织病理切片制作流程(完整版)
组织病理切片的制作流程1．取材组织取材的方法是制作切片的一个重要程序，根据教学、科研及外检的具体要求取自人体（外科手术切除标本、活检标本、尸检标本）或动物，并确定取材的部位和方法。
取材者需要掌握解剖学、组织学、病理学的基本理论知识，还要掌握实际操作技术，每个组织器官的取材都有一定的部位和方法，不能任意切取组织作为制片材料，不然，无法达到教学、科研和临床诊断的目的，具体要求如下：(1)材料新鲜：取材组织愈新鲜愈好，人体组织一般在离体后，动物组织在处死后迅速固定，以保证原有的形态学结构。
(2)组织块的大小：所取组织块较理想的体积为2.0cm×2.0cm×0.3cm，以使固定液能迅速而均匀地渗入组织内部，但根据制片材料和目的不同，组织块的较理想体积也不同，如制作病理外检、科研切片，其组织块可以薄取0.1～0.2cm即可，这样可以缩短固定脱水透明的时间，若制作教学切片厚取0.3 ～0.5cm，这样可以同一蜡块制作出较多的教学切片。
(3)勿挤压组织块: 切取组织块用的刀剪要锋利，切割时不可来回锉动。
夹取组织时切勿过紧，以免因挤压而使组织、细胞变形。
(4)规范取材部位: 要准确地按解剖部位取材，病理标本取材按照各病变部位、性质的不同，根据要求规范化取材。
(5)选好组织块的切面:根据各器官的组织结构，决定其切面的走向。
纵切或横切往往是显示组织形态结构的关键，如长管状器官以横切为好。
(6)保持材料的清洁:组织块上如有血液、污物、粘液、食物、粪便等，可用水冲洗干净后再放入固定液中。
(7)保持组织的原有形态:新鲜组织固定后，或多或少会产生收缩现象，有时甚至完全变形。
为此可将组织展平，以尽可能维持原形。
2．固定(1)小块组织固定法：这是最常用的方法，从人体或动物体取下的小块组织，须立即置入液态固定剂中进行固定，通常，标本与固定液的比例为1:4～20，但组织块不宜过大过厚，否则固定液不能迅速渗透。
故取组织块的大小一般为2.0cm×2.0cm×0.3cm。
He染色切片制作（各动物、全过程、操作要点、注意事项）
He染色切片制作（各动物、全过程、操作要点、注意事项）石蜡切片制备基本步骤一、准备工作（一）洗涤实验所需器皿：（玻璃器皿的清洗）1、用洗衣粉将玻璃器皿表里擦洗干净反复洗刷2、将器皿在自来水下冲洗干净3、将器皿倒扣在铺有吸水纸或纱布的桌子上控干注：一般情况下，经以上步骤后，用蒸馏水洗过1~3次即可烘干备用，如果做特殊染色还需浸泡在酸性清洁液内12~24小时，再经自来水彻底冲洗，再用蒸馏水过洗1~3次烘干备用。
（二）配制：硫酸洗液的配制清洁液（洗液）的配制：成分强酸液次强酸液弱酸液浓硫酸（ml） 1000 200 100重铬酸钾（mg） 63 120 100蒸馏水（ml） 200 200 1000重铬酸钾1200g蒸馏水 2000ml将2000ml浓硫酸缓缓倒入上述溶液中，边倒边用木棒轻轻搅拌（三）载玻片与盖玻片的处理1. 将所需载玻片与盖玻片清洗后，放入硫酸重铬酸钾溶液中浸泡24小时2. 流水冲洗，再用蒸馏水冲洗3遍3. 95%~100%酒精浸泡24小时，用绸布擦干备用注：在将载玻片与盖玻片放入清洁液中时，要一片片地投入，使其不致重叠。
二、常用液体的配制（一）缓冲溶液：1．磷酸盐缓冲液A液：0.1mol/L磷酸二氢钠B液：0.1mol/L磷酸氢二钠A液与B液按比例混合调整到所需的PH值（3：7≈PH7.0）2．枸椽酸缓冲溶液A液：0.1mol/L枸椽酸B液：0.1mol/L枸椽酸钠A液与B液按比例混合调整到所需的PH值（6.2：42.8≈PH6.2）（二）固定剂：1．甲醛：10%甲醛福尔马林 100ml蒸馏水 900ml注：实际甲醛含量只有3.6~4.0%但习惯上都将其视为10%。
2．10％中性福尔马林钙固定液甲醛液 10ml蒸馏水 90ml加碳酸钙至过饱和(以容器底部碳酸钙沉淀1~2cm厚为适度)充分振荡混合后，放置24小时取上清液使用。
3．4%多聚甲醛：8%多聚甲醛多聚甲醛8g蒸馏水 100ml加温至60℃左右，不时搅拌，成为乳白色溶液。
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• 制作优良的病理切片是以充分的固定为前 提的。
• 常规的固定方法是用10％的中性福尔马林 ，固定时间一般为24h，原则上组织与固定 液的最佳比例是1:10，组织的厚度≤ 3mm
• 组织脱水：
• 乙醇是最常用的脱水剂，可以硬化组织，有明显收缩 作用。为了避免组织过度的收缩，脱水过程应从低浓 度向高浓度过渡，在无水乙醇中的时间不应过长，防 止组织过度硬化。
• 脱水 切片染色后通过各级乙醇脱水，浓度应从低到高， ，低浓度的乙醇对伊红有分化作用，在高浓度的乙醇中时 间应相应延长，否则切片会有雾化的现象，在显微镜下组 织结构模糊不清。
HE染色的质量标准： 染色核质分明，红蓝适度，透明洁净，封裱美 观
谢 谢！
14.伊红染色15~30s
15.95%乙醇Ⅰ30s 16.95%乙醇Ⅱ30s 17.95%乙醇Ⅲ30s 18.无水乙醇Ⅰ1min 19.无水乙醇Ⅱ1min 20.无水乙醇Ⅲ1min 21.二甲苯Ⅰ（可加苯酚）1min 22.二甲苯Ⅱ1min 23.二甲苯Ⅲ1min 24.中性树胶封片
• 染色中注意事项：
处理步骤
1. 75%乙醇 2. 85%乙醇 3. 95%乙醇 4. 无水乙醇Ⅰ、Ⅱ
处理时间（min）
60 90 90 各60
• 组织的透明：
• 二甲苯是常用的透明剂，对组织收缩性强，易使组织 变脆变硬，因此时间不宜过长。其既与乙醇混合，又 能溶解石蜡，可以达到使石蜡浸入组织的目的，折射 指数接近组织蛋白折光指数，使组织细胞变透亮。
• 脱蜡 组织切片脱蜡应彻底，主要取决于二甲苯的温度和 时间，需要根据环境条件的不用做出相应的改变，脱蜡不 净是影响染色不良的重要原因之一。
• 染色 石蜡切片经水后放入Harris苏木精染色，在新配的染 液中只需染1min分钟左右，根据染片的多少逐步延长染色 时间。苏木素的染色属于一种过染法，胞核胞质都会被染 色，但细胞核中的带负电荷的染色质与带正电荷的苏木精 结合的更为牢固，因此当用盐酸酒精进行分化，改变组织 蛋白质的PH值，使胞质的苏木精被洗脱下来，所以分化 的程度决定了染色的好坏，需要严格控制分化的时间。
• 通常使用56~60 ℃石蜡
• 熔点高的石蜡会使蜡块硬度更高，不易于 切片，但能使切片更薄；反之熔点低的石 蜡使得蜡块硬度较低，易于切片，但切片 较厚。
• 切片： • 要求切片完整，厚度4~6 μm，厚薄均匀，
无褶皱无刀痕。
• 烤片： • 一般在60 ℃左右烤箱内烤30min即可。
• 染色：
1.二甲苯Ⅰ5min 2.二甲苯Ⅱ5min 3.二甲苯Ⅲ5min 4.无水乙醇1min 5.95%乙醇Ⅰ1min 6.95%乙醇Ⅱ1min 7.75%乙醇1min 8.水洗1min 9.苏木精染色1~5min 10.水洗1min 11.1%盐酸酒精分化5~8s 12.水洗5min返蓝 13.95%乙醇1min
处
• 浸蜡：
• 置换出组织中的透明剂，使石蜡浸入组织 ，便于之后的包埋工作。
处理步骤 56~58℃石蜡Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ
处理时间（min） 各90
• 组织的包埋：
• 组织经过上述一系列的浸透剂浸透，用包 埋剂（石蜡）包起的过程。主要目的是给 予组织一个承载介质，使其达到一定的硬 度，利于切片。