动物细胞培养基础操作技术总结日志
动物细胞培养和核移植技术原创总结
河北任丘二中 王小燕
植物细胞工程常用的技术手段有哪些？
植物组织培养
植物体细胞杂交
植物体细胞杂交技术（重点）
植物细胞的融合
马 铃 薯 细 胞 植物组织培养 原 生 质 体 融 合
去 壁
壁再 标志：成功融合 生 出 细 脱 再 胞 分 分 化 化
人工诱 导
番茄 细 胞
D
小结
动物细胞培养
动物胚胎、幼龄动物组织 单个细胞 胰蛋白酶 原代培养 传代培养 细胞贴壁 细胞接触抑制
动物体细胞核移植
供体核 受体质 核移植 胚胎移植 克隆动物
重组胚胎
胚胎移植
代孕母体
生出与供体奶牛遗传 基本相同的犊牛
归纳:
1.两阶段：核移植和胚胎移植
2.取卵细胞作受体细胞的原因是:它是最大的细胞,易操作,它发育可直接表达性状
3.严格来说新个体有卵母细胞的细胞质所以有两个亲本的性状
Ａ母绵羊
Ｂ母绵羊 乳腺细胞
多 莉 羊 的 培 育 过 程
卵细胞
细胞质 细胞核移植
O2：进行 有氧 呼吸 CO2：维持培养液的PH值（95%空气和5% CO2 ）
一动物细胞培养
4、应用
•（1）蛋白质生物制品：病毒疫苗、干扰素、 单克隆抗体等。
•（2）自身皮肤细胞 •（3）检测有毒物质
•（4）生理、病理、药理等方面的研究。
问题
我们能否利用类似植物组织培养获 得完整植物体的方法培养动物细胞，
原代培养：从机体取出后立即培养的细胞为 原代细胞。一般培养的第1代细胞与传10代以 内的细胞称为原代细胞培养。 传代培养：将原代细胞（10代以后）从培 养瓶中取出，配制成细胞悬液，分装到两个 或两个以上的培养瓶中继续培养，称为传代 培养。
实验 动物细胞培养基础实验技术
实验动物细胞培养基础实验技术——器械的清洗与消毒实验目的：学习并掌握细胞培养使用的器皿、器械的洗涤和消毒。
实验用品：1．仪器和用品：超净工作台、干燥箱、高压锅、过滤器、紫外灯、0.22μm/0.45μm微孔滤膜。
2．试剂：75%酒精、5%HCl、1‰新洁尔灭、重铬酸钾。
实验内容：1．准备培养用血清瓶（PBS、培养基，约10套，包括20、50ml）、培养瓶（50个）、玻璃滴管（若干）、离心管（10ml）、EP管若干、不锈钢滤器、胶塞、滴头等。
2．分别包装上述物品，其中血清瓶和瓶盖分别包装，玻璃吸管置于不锈钢筒中、玻璃离心管、 EP管分别置于饭盒中。
3．将上述物品置于高压灭菌锅中进行消毒灭菌。
4．实验室准备。
实验步骤（一）清洗1．玻璃器皿的清洗浸泡刷洗浸酸冲洗（1）. 新购玻璃血清瓶先用洗衣粉洗，再以0.1-0.05 mol/l HCl 浸泡数小时，然后用铬酸浸泡过夜，最后用自来水、一次与二次去离子水洗净后才能开始使用。
（2）. 用过之玻璃血清瓶，用洗衣粉洗净后铬酸浸泡过夜，最后用自来水、用一次与二次去离子水冲洗干净。
此外，玻璃器皿的瓶子的盖子必须也泡铬酸，培养瓶瓶盖可以不用泡铬酸，高温灭菌的时候要拧上瓶盖，留有一定的缝隙，灭菌后盖紧。
瓶盖的上面应当用锡箔纸或者牛皮纸包住，用绳子扎紧2．塑料器皿的清洗自来水充分浸泡冲洗 2%NaOH浸泡过夜蒸馏水漂洗3次 2%-5%盐酸浸泡30min 自来水冲洗晾干紫外线照射30min3．胶塞等橡胶类的清洗自来水冲洗 2%NaOH 煮沸15min 自来水冲洗蒸馏水煮沸10min 自来水冲洗5次以上2%-5%HCl煮沸15min 晾干晾干后高压灭菌4．金属器械的清洗新购置的器械用过的器械（二）包装分为局部包装和全包装。
为了防止消毒灭菌后再次遭受污染。
按照不同类别进行包装。
（三）消毒灭菌主要包括物理法和化学法。
物理法：热灭菌、蒸汽灭菌、滤过除菌、紫外线、熏蒸消毒、煮沸消毒。
动物细胞培养基本操作
实验一动物细胞培养细胞培养是用无菌操作的方法将动物体内的组织(或器官)取出，模拟动物体内的生理条件，在体外进行培养．使其不断地生长、繁殖，人们借以观察细胞的生长、繁殖、细胞分化以及细胞衰老等过程的生命现象。
细胞培养的突出优点，一是便于研究各种物理、化学等外界因素对细胞生长发育和分化等的影响；二是细胞培养便于人们对细胞内结构(如细胞骨架等)、细胞生长及发育等过程的观察。
因而细胞培养是探索和指示细胞生命活动规律的—种简便易行的实验技术，同时我们也不可忽略的另一个因素，那就是它脱离乐生物机体后的—些变化。
细胞培养技术目前已广泛地被应用于生物学的各个领域。
如分子生物学、细胞生物学、遗传学、免疫学、肿痛学及病毒学等为此有必要使学生在细胞培养方面得到一些初步的感性知识，了解动物细胞培养的基本操作过程，观察体外培养细胞的生长特征，对原代细胞与传代细胞有一个基本概念。
本实验分两次进行．即清洗与消毒和传代细胞的培养与观察。
Ⅰ清洗与灭菌一、实验目的能独立地进行用于细胞培养的各种器皿的清洗与消毒，掌握干热灭菌法、湿热灭菌法和滤过除菌法的操作，了解化学消毒法的使用方法。
二、实验原理清洗与消毒是组织培养实验的第一步，是组织培养中工作量最大，也是最基本的步骤。
体外培养细胞所使用的各种玻璃或塑料器皿对清洁和无菌的要求程度很高。
细胞养不好与清洗不彻底有很大关系。
清洗后的玻璃器皿，不仅要求干净透明，无油迹，而且不能残留任何物质。
如有毒的化学物质，哪怕残留0．1个，也可能影响细胞生长。
灭菌手段的选择十分重要，对不同的物品需采用不同的灭菌方法。
假如选用的方法不对，即使达到了无菌却使被灭菌药品丧失了营养价值、生物学特性或其他使用价值也不行。
以下在每种灭菌步骤中都介绍其使用范围。
三、实验材料、用品材料：无臭氧型紫外灯，微孔滤膜(直径25)：孔径为0．22μm，微孔滤膜(直径90)：孔径为0．22 μm，过滤器(直径25)。
药品：70％或75％酒精，0．1％新洁尔灭，煤酚皂溶液(来苏儿水)，0．5％过氧乙酸，乳酸，37％甲醛，高锰酸钾，NaOH，盐酸，重铬酸钾，浓硫酸(工业)，DEPC水[体积分数0．1％的焦炭酸二乙酯(diethylpyroearbonate)]。
动物细胞工程实习报告
动物细胞工程实习报告一、实习背景及目的动物细胞工程是一门综合性学科，涉及生物学、医学、生物工程等多个领域。
本次实习旨在让我们了解动物细胞工程的基本原理和技术方法，提高我们的实验操作能力，为今后的科研和工作打下坚实基础。
二、实习内容与过程1. 实习前的准备在实习开始前，我们参加了为期一周的理论学习，学习了动物细胞工程的基本原理、技术方法和实验操作流程。
同时，我们还学习了实验室安全知识，了解了各种实验仪器的作用和操作方法。
2. 实习过程实习过程中，我们分为若干小组，每组负责一个实验项目。
以下是本次实习的几个主要实验项目：（1）动物细胞培养我们使用了体外培养的人胚肝细胞作为实验材料，通过添加适当的培养基、血清等物质，保持了细胞的生长和增殖。
在实验过程中，我们学会了使用细胞计数器进行细胞计数，掌握了细胞培养的基本技术。
（2）动物细胞融合我们采用了电融合法将两种不同类型的动物细胞进行融合，观察了融合后的细胞特性。
通过这个实验，我们了解了细胞融合的原理和方法。
（3）动物细胞核移植我们进行了动物细胞核移植实验，将一个细胞的细胞核移入另一个去核的细胞中，观察了重组细胞的发育情况。
这个实验让我们认识了动物细胞核移植技术及其在生物工程中的应用。
（4）动物细胞载体构建我们利用质粒载体将目的基因导入动物细胞，观察了目的基因在细胞内的表达。
这个实验让我们了解了基因工程的基本原理和方法。
3. 实习成果通过本次实习，我们掌握了动物细胞培养、细胞融合、核移植、基因导入等技术方法，了解了动物细胞工程在生物科研和医学领域的应用。
同时，我们的实验操作能力和团队协作能力得到了提高。
三、实习体会与总结本次实习让我们对动物细胞工程有了更深入的了解，实验过程中的每一个步骤都离不开理论知识的支持。
同时，实践操作也让我们发现了理论知识的不足，促使我们更加努力地学习。
此外，实习过程中的团队协作也让我们学会了与他人共同解决问题，提高了我们的综合素质。
细胞培养训练小结
细胞培养训练小结引言细胞培养是生物科学中一项重要的实验技术，它对于研究细胞的生理、生化特性以及细胞的生长和分裂机制具有重要意义。
在细胞培养训练中，我们通过培养真核细胞系，掌握了细胞培养的基本理论和实践操作技巧。
本文档旨在对细胞培养训练进行小结和总结。
实验目的1. 掌握细胞培养的基本原理和操作技巧；2. 研究如何进行细胞传代和培养细胞系；3. 了解细胞培养的常见问题及其解决方法。
实验过程1. 细胞分离和传代：在细胞培养的过程中，首先需要将组织样本进行细胞分离。
我们选择合适的细胞培养基，添加适当的酶或酸碱溶液将组织样本分散成单个的细胞。
接下来，将细胞悬液转移到含有培养基的离心管中，并通过离心操作将细胞沉淀。
最后，将细胞加入新的培养皿中，加入培养基，供其继续生长和传代。
2. 细胞培养：细胞培养的关键在于提供合适的培养环境，使细胞能够正常生长和繁殖。
我们通过恒温培养箱和CO2培养箱来维持适宜的温度和气体环境。
此外，需要定期更换培养基，以满足细胞的营养需求。
同时，还需要注意细胞密度的控制，避免细胞过度增长导致细胞死亡。
3. 检测和分析：在细胞培养训练中，我们研究了如何对细胞进行检测和分析。
例如，通过细胞计数器可以快速准确地统计细胞的数量和存活率。
此外，还研究了细胞染色和显微镜观察技术，用于观察细胞的形态和结构变化。
通过这些方法，我们可以及时了解细胞培养的情况，发现并解决潜在的问题。
实验结果与讨论通过本次细胞培养训练，我逐渐掌握了细胞培养的基本原理和实验技巧。
在实验过程中，遇到了一些常见问题，例如细胞污染和培养基变质等。
通过及时观察和处理，我成功解决了这些问题，并保证了细胞的正常生长和传代。
此外，我还研究了如何进行细胞染色和显微镜观察。
这些技术可以帮助我们更全面地了解细胞的形态和结构特征。
在细胞染色过程中，我发现染料浓度和染色时间对结果影响较大，需要仔细控制。
通过显微镜观察，我成功发现了细胞的异常形态和结构变化，并及时采取了措施进行纠正。
动物细胞培养心得
动物细胞培养·心得在学习动物细胞培养的过程中，我了解到是动物细胞工程中最常用的技术手段，而且动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技术的基础点，细胞培养是生物医学中一项重要技术，应用较为广泛，目前已渗透到细胞生物学、生物化学、临床检验学等多个领域。
在这次PPT 制作中，我对无脊椎动物和脊椎动物两大领域细胞培养取得的进展及应用作了较为详细的了解，并在此基础上探讨了动物细胞培养存在的问题以及未来的发展方向。
为相关领域研究者探讨其他种类细胞系的建立及筛选合适的细胞系培养方法作为理论的参考依据我了解到历史上组织培养技术创建于 18 世纪末，之后于 1907 年美国生物学家Harrison在无菌条件下，以淋巴液为培养基在试管中培养蛙胚神经组织宣告成功后，才逐渐发展成为一种从体内组织取出细胞，模拟体内生存环境，在无菌、适当温度及酸碱度和一定营养条件下，使其生长繁殖并维持结构和功能的实验技术。
这种技术为细胞学、遗传学、病毒学、免疫学的研究和应用做出了重要贡献。
特别是随着近年来现代生物科学领域的迅速拓展，各种分子生物学实验诸如核移植、细胞杂交、DNA 介导的基因转移等，都是借助细胞培养技术而得以实现的。
然而，在种类繁多的动物世界里，细胞培养实验技术的发展并不均衡，构建动物细胞培养体系的研究效率和效果上也存在较大的局限性。
而动物细胞培养，在1907年，哈里森（Harrison）在无菌条件下用淋巴液作培养基，培养蛙胚神经组织存活数周，并观察到神经细胞突起的生长过程，由此创建了盖片覆盖凹窝玻璃悬滴培养法，奠定了动物组织体外培养的基础。
之后，又有人将悬滴培养法改良为双盖片培养，提高了传代效率并减少了污染；1923年，卡雷尔（Carrel）设计了卡氏瓶培养法，扩大了组织生存空间。
1951年，厄尔（Earle）发明了体外培养动物细胞的人工合成培养基。
1951年，波米拉（Pomerat）设计了灌流小室，使细胞生活在不断更新的培养液中，便于作显微摄影和细胞代谢的研究。
细胞培养员工作总结范文(3篇)
第1篇一、前言细胞培养技术作为生物技术领域的基础性技术，在医学、生物学、制药等多个领域发挥着重要作用。
作为细胞培养员，我在过去的工作中，不仅积累了丰富的实践操作经验，也深刻体会到了细胞培养技术在科研和产业中的重要性。
现将我的工作总结如下：一、工作内容1. 细胞培养操作（1）细胞复苏：按照标准操作流程，对冻存细胞进行复苏，确保细胞活力。
（2）细胞传代：根据细胞生长状态，进行细胞传代，保证细胞数量。
（3）细胞冻存：将细胞按照一定比例分装，进行冻存，以便后续实验需求。
（4）细胞培养条件调控：控制温度、湿度、二氧化碳浓度等，确保细胞生长环境稳定。
（5）细胞培养质量监控：定期检测细胞活力、生长状态等，确保细胞质量。
2. 细胞实验（1）细胞实验设计：根据实验目的，设计实验方案，包括实验材料、实验方法、实验步骤等。
（2）细胞实验操作：按照实验方案，进行细胞实验操作，包括细胞接种、培养、处理、检测等。
（3）实验数据记录与分析：对实验数据进行记录、整理、分析，得出实验结论。
3. 实验室管理（1）实验室环境维护：保持实验室干净、整洁，确保实验环境安全。
（2）实验室仪器设备维护：定期检查、保养实验仪器设备，确保其正常运行。
（3）实验室耗材管理：合理采购、使用实验室耗材，降低成本。
二、工作心得1. 严谨的工作态度细胞培养员的工作要求严谨，从细胞复苏到实验操作，每一个环节都关系到实验结果的准确性。
因此，在工作中，我始终保持严谨的态度，严格按照操作规程进行实验，确保实验数据的可靠性。
2. 持续学习，提升技能细胞培养技术不断更新，作为细胞培养员，我深知自己需要不断学习，提升自己的技能。
在工作中，我积极参加各类培训，学习新的实验技术和方法，提高自己的业务水平。
3. 团队协作，共同进步细胞培养员的工作往往需要团队协作完成，我深知团队的力量。
在工作中，我与同事们相互支持、相互学习，共同解决实验中的问题，共同提高。
4. 注重细节，追求完美细胞培养实验过程中，细节决定成败。
动物细胞培养总结!!!!
动物细胞培养总结动物细胞培养的基本步骤包括细胞分离、种植、培养及维护。
首先需要从动物组织中获取细胞，可以通过机械或酶解的方式将组织细胞分离出来。
然后将细胞悬浮液转移到培养皿中，加入适当的培养基，并提供适宜的温度、湿度和气体环境。
细胞在培养皿中会逐渐形成单层或悬浮状态，可以进行细胞形态观察、增殖和鉴定等。
维护细胞的正常生长和增殖，需要定期更换培养基并进行细胞传代，以避免细胞的老化和死亡。
动物细胞培养的关键因素包括细胞种类的选择、培养基的配制、环境参数的控制等。
细胞种类的选择应根据研究需求和细胞特性进行，不同的细胞对培养条件的要求有所差异。
培养基是细胞培养的基础，需要提供充足的营养物质、生长因子和激素等，以满足细胞正常生长和增殖所需。
同时，培养基的pH值、温度和湿度等环境参数也需要严格控制，以维持细胞的健康状态。
细胞培养的应用非常广泛。
首先，动物细胞培养可用于细胞生物学研究，如细胞分化、增殖、凋亡等的机制研究。
通过观察细胞在不同条件下的变化，可以揭示细胞生物学过程中的分子机制。
其次，动物细胞培养在生物医学研究中也有重要应用。
例如，用于评估药物的毒性和疗效，开发新的药物或疫苗，以及研究疾病的发生机制等。
此外，动物细胞培养还可用于生产重组蛋白和细胞疫苗等生物制剂，具有重要的经济价值。
在动物细胞培养中，不可避免地会面临一些挑战和困难。
首先，细胞的质量和纯度是细胞培养成功的关键因素之一、细胞分离和培养的过程中，可能会产生细胞杂交和污染，对细胞的准确鉴定和纯度检测提出了要求。
其次，细胞培养需要严格控制环境参数，如温度、CO2浓度和湿度等，这对实验设备的要求较高。
此外，不同细胞株的生长速度和特性也有所差异，对培养者的经验和技术水平提出了要求。
综上所述，动物细胞培养是一项重要的实验技术，具有广泛的应用前景和经济价值。
通过细胞培养，可以获得大量的细胞材料，用于细胞生物学研究和新药的研发。
然而，动物细胞培养也面临着挑战和困难，需要进行严格的细胞鉴定和纯度检测，以及合理控制环境参数。
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2013年1月14日
细胞传代培养与冻存
准备工作
1、准备：
①试剂：加双抗的培养基、PBS、血清放到37度水浴锅预热20min；DMSO避光保存，现取现用不需要预热。
②灭菌：然后开启超净工作台的紫外灭菌灯和屋子的紫外灭菌灯，出去等待20min。
③设备：开启显微镜和离心机、准备3个细胞培养瓶、准备3个离心管、两个冻存管（现用现取即可）、黄色和蓝色的枪头（1毫升和200微升），废液缸。
2、时间到后，进入实验室，关闭紫外灭菌灯，洗手，进缓冲间换衣服，进无菌室戴上一次性手套，用酒精杀毒。
关闭超净工作室的紫外灭绝灯，打开排风和照明。
3、从水浴锅中取出试剂，用喷有酒精的纱布擦拭试剂表面的水；开启超净工作台，将试剂放入摆放整齐，以便于开始试验。
在细胞培养箱中取出细胞培养瓶，放入超净工作台。
开始试验：
传代培养：1传3
①将细胞培养瓶中的培养液倒掉。
②加入2ml（1mol/L）的PBS，洗掉死细胞和残余培养液，倒去洗液，洗2-3次。
（加液体之后平放，摇一摇）
③消化：加入胰蛋白酶，2ml，静止消化3到5分钟，显微镜下观察（观察细胞呈球形为最佳），倒掉液体。
（平放的时候注意不要晃动，要静止）
④分装培养液：为防止污染，将培养液分装到离心管中，并且加10%血清，本次试验用2ml血清，加培养基到20ml，摇匀。
⑤吹细胞：取加血清培养基6ml，加入培养瓶中，用培养基在培养瓶中反复冲洗，直到所以细胞都被冲洗下来为止。
（枪头勿接触瓶口，如果接触了应该换枪头，移好6ml后不用换枪头，继续用这个枪头吹，注意多吹几次瓶底和角落，吹过后细胞生长一侧变透明。
）
⑥分瓶：将3个细胞培养瓶分别写好培养细胞名称、日期、使用者名字，开启盖子，分别加入2ml刚刚冲洗好的含有细胞的培养基（吸取时将培养瓶倾斜，在2/3的地方吸取，并且注意时刻让细胞液保持均匀，可以轻轻摇晃以保证其中细胞分布均匀）。
分装好后，将每个培养瓶中的培养基都加到6ml。
⑦培养：加好培养液的培养瓶放入细胞培养箱中培养，培养瓶头向箱子里面，培养两天即可继续传代。
⑧使用完毕后的试剂应该及时关上盖子，注意过火，（开启或关任何试剂都要过火，要注意在火焰上方过火，不能离火焰过远。
）
⑨用过的试剂在放回冰箱前都需要进行封口，封口胶是有弹性的，每次剪下宽1厘米，长3-4厘米的即可封住一般的瓶口。
⑩枪盒在打开前是用胶粘住的，在胶的下方会有一个缺口，那是为了方便开启，而人为设置的地方。
冻存：2冻1
①一直到吹细胞和前面是一样的，在这里不需要分瓶。
②将冲好的细胞转移到离心瓶中，900r/min，7min，离心。
③轻轻倒掉上清液，用100微升的枪将残余培养液除掉。
④每个离心管加1ml的血清。
⑤在振荡器震荡下，逐滴加入200微升DMSO。
⑥将混合液加入冻存管。
冻存管放入冰箱前要用封口膜封好。
（再次注意，所有试剂用完都要用封口膜封好，放入指定位置。
）
⑦冻存入-70度冰箱。
（冰箱中有一个蓝色的小盒子，盒子中有可以达到分级冻存效果的缓冲液体，可以让细胞温度缓慢降低，以减少细胞死亡。
）
2013年1月15日
铺板和转染
转染：
①一直到吹细胞和前面的一样，在这里也不需要分瓶。
②本次做的是6孔板，每种孔板需要的装液量是不同的，6孔板装液量是3ml，（孔板分为6、12、24、48、96孔，每孔装液量有不同规格），取每孔1ml含细胞的培养液，加至3ml。
③加好培养液，在显微镜下观察细胞状态，（无论是铺板还是传代，都需要在传完之后观察细胞状态，细胞状态与消化的好坏密切相关，最佳的状态应该是细胞呈游离的球状，并且整个细胞瓶或孔板中的细胞有较少或无连带，抱团现象，传代对细胞状态的要求一般，而对于铺板则要求在铺板前要将细胞消化好，尽量游离分散，而且不能有过多的抱团现象，并且在铺板时要注意每个孔板中的细胞量平均，不能出现分布不均的现象。
）
④观察完毕后可以放回细胞培养箱，培养至细胞密度生长至80%-90%后，即可开始进行转染。
转染：
转染需要先进行实验设计，设计方法如下：
1、空白
2、2000
3、DOTAP
4、2000/p（3：1）
5、DOTAP/p（6：1）
6、???/p
加液量：9微升，3微升18微升，3微升？？？
加液规则：质粒3微克/毫升？？？
加液完毕。