简单测定种子的生活力
种子活力的测定方法
种子活力的测定方法嘿，朋友们！今天咱来聊聊种子活力的测定方法，这可太重要啦！就好像我们要了解一个人是不是活力满满一样，对于种子，我们也得有办法知道它们是不是充满生机呀！你想想看，要是把没活力的种子种下去，那不就白费力气了嘛！就好比让一个病恹恹的人去跑马拉松，那能成吗？所以，学会测定种子活力，那可是相当关键的哦！一般来说，有这么几种常见的方法。
比如说，直观观察法。
咱就直接用眼睛去看呀，看看种子的大小啦、颜色啦、有没有破损啦。
这就像我们看一个人，精神面貌好不好，一眼就能看个大概。
那些饱满、光亮的种子，大概率活力不会差到哪里去。
要是看着就干巴巴、皱皱的，那可得小心咯！还有发芽试验法。
这就像是给种子来一场考试，看它们能不能通过。
把种子放在合适的环境里，看看有多少能发芽。
这就像学校里的考试，能考高分的学生，那肯定是有真本事的呀！如果大部分种子都能顺利发芽，那说明它们活力杠杠的；要是只有寥寥几个发芽，那可就得好好琢磨琢磨了。
还有一种方法是逆境测试法。
啥意思呢？就是给种子来点困难，看看它们能不能扛得住。
比如给它们来点低温啦、高温啦、干旱啦之类的。
这就像让一个人去挑战极限运动，能完成的那肯定是强者呀！如果种子在这些逆境下还能有不错的表现，那这活力绝对是一流的。
再说说活力指数测定法。
这可就有点专业啦，但咱也能搞明白。
就是通过一些指标的计算，来判断种子的活力水平。
就像我们通过各种数据来评估一个人的综合能力一样。
哎呀呀，这些方法都很实用呢！咱可得好好掌握，这样才能选出最有活力的种子，种出茁壮的庄稼、美丽的花朵呀！总之呢，种子活力的测定可不是小事，它关系到我们的种植成果。
就像盖房子得打好地基一样，选对有活力的种子就是成功的第一步。
大家可别小瞧了它哟！以后咱在种东西的时候，都要记得用上这些方法，让我们的种植之路更加顺利，收获满满的喜悦和成果！怎么样，是不是觉得很有意思呀？赶紧去试试吧！原创不易，请尊重原创，谢谢!。
植物生理学 实验6__种子生活力的测定
数据记录与处理
不同方法测定种子生活力统计表 方法 TTC 红墨水 有生活力 无生活力 供试粒数 种子粒数 种子粒数 30 30 有生活力种子 占供试粒数的%
BTB
30
注意事项
沿种胚中央准确切开，同粒TTC/红墨水法各一半 TTC溶液最好现配现用，如需贮藏则应贮于棕色瓶 中，放在阴凉黑暗处，如溶液变红则不可再用。 染色结束后立即进行鉴定，因放久会褪色。
实验六 植物种子生活力的快速测定
实验目的
1. 了解种子生活力快速测定的方法
2. 理解TTC/BTB/染料法测定种子生活力的原理
种子生活力（seed viability）：指种子能够萌发 的潜在能力或种胚具有的生命力。 种子活力（seed vigor）：
实验原理
TTC法
1. 2. 凡有生活力的种子胚部在呼吸作用过程中都有氧化还原反应， 而无生活力的种胚则无此反应。 当TTC溶液渗入种胚的活细胞内，并作为氢受体被NADH或 NADPH还原时，可产生红色的三苯甲腙（TTF），胚便染 成红色。 如种胚死亡便不被染色；如种胚生活力下降，呼吸作用明显 减弱，脱氢酶的活性亦大大下降，染色较浅；故可根据种胚 染色的部位或深浅来鉴定种子的生活力。
2. 取30粒完好的小麦种子，种胚向下插入胶(不软 不硬)；
3. 将培养皿置于35 ℃下培养 1hr，对光观察，如 种胚附近呈现较深黄色晕圈是活种子，否则是 死种子。
TTC/红墨水染色法
1. 2. 3. 4. 5. 将种子用温水（30℃）浸泡2-6h，使种子充分吸胀； 随机取小麦种子30粒，沿种胚中央准确切开，取其一半 TTC备用，另一半红墨水法备用； 将TTC备用的一半种子浸于5 ml TTC 中，于恒温箱（3035℃）中保温30min； 将红墨水法的另一半种子用5 ml红墨水浸5 min（室温）； 染色结束后要立即进行鉴定，因放久会褪色。倒出TTC / 红墨水，再用清水冲洗种子1-2次，观察种胚被染色的情况。
种子活力测定方法
种子活力测定方法种子活力测定方法是种子品质评价的重要手段之一，其目的是评估种子的发芽力和萌发势。
种子活力与种子内蕴水分、呼吸能力、抗逆性等因素密切相关，是衡量种子质量的重要指标之一。
下面将介绍几种常用的种子活力测定方法。
1. 发芽力测定法发芽力是衡量种子活力的重要指标之一，一般指种子萌发成苗的能力。
发芽力测定是判断种子品质的主要方法之一。
其步骤如下：首先，准备一定数量的种子样品，待测种子数量应根据需要而定，但一般不少于100粒；然后，将种子样品放入适合发芽的培养介质中，如培养皿、培养箱等；接下来，将培养介质放置在适宜的温度条件下，通常在25 - 30之间；观察并记录下种子的发芽情况，一般记录发芽数、发芽率等参数；最后，根据发芽数和发芽率来判断种子的活力水平。
2. 胚乳酸测定法胚乳酸测定法是测定种子活力的一种间接方法。
其原理是在种子老化过程中，胚乳中的淀粉被分解产生酸，通过测定胚乳酸含量来评估种子的活力。
具体步骤如下：首先，准备一定数量的种子样品，通常取100粒；然后，将种子样品粉碎，并用适量的水浸泡片刻，使胚乳酸完全溶解；接下来，取一定体积的溶液，加入胚乳酸试剂；然后，用菲仪或pH计测定胚乳酸的浓度；最后，根据胚乳酸浓度来评估种子的活力水平，通常胚乳酸浓度愈高，表示种子活力愈低。
3. 电导率测定法电导率测定法是一种评估种子活力的简单、快速的方法。
其原理是测定种子浸泡液中的电导率，通过判断电导率的高低来评估种子的活力。
具体步骤如下：首先，取适量的种子样品，用一定体积的水浸泡一段时间，通常为4小时；然后，用电导计测定浸泡液中的电导率；最后，根据电导率高低来判断种子的活力水平，电导率愈高，表示种子活力愈低。
4. 呼吸强度测定法呼吸强度测定法是一种评估种子活力的方法，其原理是通过测定种子的呼吸强度来评估种子的活力。
具体步骤如下：首先，取一定数量的种子样品，并进行表面消毒处理；然后，将种子样品放入呼吸仪中，并测定呼吸强度；最后，根据呼吸强度来评估种子的活力水平，呼吸强度愈高，表示种子活力愈强。
种子生活力快速测定
种子生活力快速测定实验人员：候勇 2012年度国培班果蔬花卉专业试验目的：种子生活力是指种子的发芽潜力，即发芽力，是判断种子质量的重要指标；要了解种子生活力的大小，最可靠的方法是测定种子的发芽率。
种子的发芽率是指在适宜条件下种子发芽的百分数，它是鉴定种子质量的主要依据，在确定播种量以及种子生理研究中具有重要意义。
本实验的目的就是快速测定种子生活力的方法。
实验仪器及材料：1、仪器：电热恒温培养箱、培养皿、烧杯、镊子、单面刀2、试剂：3%TTC溶液、0.1%BTB溶液、1%BTB琼脂凝胶、红墨水5%3、材料：玉米、小麦吸胀种子方法一：红墨水染色法实验原理：红墨水染色法是根据活种子细胞的原生质膜具有选择性吸收物质的透性，而死种子的胚细胞原生质膜则丧失此性质，于是染料进入死细胞而染色。
操作步骤：1、浸种：取不同种子一部分用沸水煮5-10min，作为死种子；一部分用凉水浸泡一昼夜，吸涨备用。
2、染色：取已吸涨种子100粒，玉米种子可在中间阔面将胚纵切为两半将其中一半放入培养皿中，用5%红墨水染色。
3、结果观察：经过5-8min，倒出红墨水，多次用清水清洗后观察胚的颜色，凡是胚部不着色的为生活良好的种子，有略带红色的说明生活力较弱，都染红的说明无生活力。
结果：活种子%=胚不着色的种子数/供试种子*100 50%=5/10*100方法二：BTB变色法实验原理：活种子进行呼吸作用呼吸空气中的O2，放出CO2。
CO2溶于水成为H2CO3，H2CO3解离为H+和HCO3-，使得种子周围环境的酸度增加。
BTB法通过测定酸度的变化来判断种子活性。
BTB 变色范围为PH6.0—7.6,酸性呈黄色，碱性呈蓝色，中间经过绿色（变色点为PH7.1）。
色泽差异显著，易于观察。
操作步骤：1%BTB染色将吸胀的小麦种子分别整齐地埋于1%BTB琼脂凝胶两个培养皿中，胚向下，间距约1cm。
培养皿置于30C培养箱中培养0.5h，在光亮处下观察，种子附近呈现深黄色晕圈的是活种子，用沸水中杀死的种子分别进行对照。
三种常用检测种子生活力方法比较(1)
三种常用检测种子生活力方法比较(1)随着种子在种植中所占的重要地位，各种检测种子生活力的方法也应运而生。
常用的检测种子生活力的方法有三种，分别是发芽率法、荧光法和电导率法。
本文将对这三种方法进行详细介绍，并进行比较。
一、发芽率法发芽率法是最常用的检测种子生活力的方法之一。
其主要原理是把一定数量的种子在一定的条件下进行发芽，然后通过计算发芽率来推断种子的生活力。
条件包括温度、湿度、光照和通风等，不同的作物和品种有不同的最适条件。
发芽率法检测种子主要有以下几个优点：一是操作简单；二是可大批量检测；三是检测结果真实可靠。
但是同时也存在着一些缺点，如检测时间长、结果受环境因素的影响等。
二、荧光法荧光法是一种新兴的检测种子生活力的方法。
荧光法主要利用了种子的细胞色素氧化酶体系在氧化还原体系下发生反应而使荧光物质荧光素产生荧光。
通过测定产生的荧光的强度来判断种子的生活力。
三、电导率法电导率法是一种利用种子中质量和导电能力的变化来测定种子生活力的方法。
其主要原理是将一定数量的种子放入导电液中，通过测定电导率的变化来判断种子的生活力。
导电液可以是盐水、糖水、电导液等。
三种方法比较从上述的介绍可以看出，每种方法都有其优点和缺点，没有一种方法是完美的。
所以在实际应用中，需要根据具体情况选择合适的方法。
一般来说，发芽率法适用于大批量检测，荧光法适用于单个种子检测，电导率法适用于不同品种间的比较。
除此之外，也可以选择不同的方法相互协作，如发芽率法和荧光法或者电导率法和发芽率法组合使用。
快速测定玉米种子生活力三法
进一步研究玉米种子生活力的影 响因素和作用机制，为农业生产
提供更加科学、准确的依据。
探索更加快速、简便的测定方法 ，提高方法的可操作性和实用性
。
结合现代生物技术，研究玉米种 子生活力与其他性状的关系，为 选种育种提供新的思路和方法。
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盐水漂浮法
该方法操作简便，但结果 受环境温度和种子质量影 响较大，准确性相对较低 。
剥胚染色法
该方法能够较为准确地测 定玉米种子的生活力，但 操作较为繁琐，需要较高 的实验技能。
适用范围比较
碘化钾染色法
适用于所有类型的玉米种子， 特别是对于已经经过处理的玉 米种子，该方法也能够得到较
为准确的结果。
染色法是根据种子胚部是否被染色来判断种子是否具有生 活力。具有生活力的种子胚部在染色液中会被染色，而没 有生活力的种子则不会被染色。
染色法通常使用的染色液为红色染料，如品红、甲基品红 等，因为这些染料能够与活细胞中的蛋白质结合，使其染 色。
染色法操作步骤
1. 将玉米种子放入染色液中浸泡3060分钟，使种子充分染色。
4. 加水浸泡
将称好的样品加入一定量的蒸馏水中 ，浸泡一定时间，一般以24小时为 宜。
5. 测定电导率
将浸泡后的样品用镊子取出，用滤纸 吸干表面水分，放入电导仪中测定其 电导率。
6. 数据记录
记录每个样品的电导率和对应的测量 值。
7. 数据处理
根据测定的电导率值，利用标准曲线 或公式计算出玉米种子的生活力。
电导率测定法是一种快速、简便、可靠的玉米种子生活力快速测定方法。
电导率测定法操作步骤
01
02
03
1. 仪器准备
准备好电导仪、烧杯、称 量纸、镊子等仪器和试剂 。
种子生活力测定方法
种子生活力测定方法
种子生活力是指种子在适宜条件下发芽和生长的能力，是种子质量的重要指标
之一。
种子生活力的好坏直接影响着作物的产量和品质。
因此，科学准确地测试种子的生活力是农业生产中非常重要的工作。
种子生活力的测定方法有很多种，其中常用的包括种子萌发率测定法、种子发
芽指数测定法、种子活力指数测定法等。
首先，种子萌发率测定法是通过将一定数量的种子放置在适宜的温湿度条件下
观察其发芽情况来测定种子的生活力。
这种方法简单易行，能够快速地获得种子的生活力信息，因此在实际生产中得到了广泛应用。
其次，种子发芽指数测定法是通过统计一定数量的种子在一定时间内发芽的数
量来测定种子的生活力。
这种方法能够更加客观地反映种子的生活力情况，但需要较长时间来进行实验，因此在实际生产中使用较少。
最后，种子活力指数测定法是通过将种子在一定温湿度条件下培养一段时间后，测定其发芽率和发芽势来综合评价种子的生活力。
这种方法能够较为全面地评价种子的生活力，但操作复杂，需要较长时间来完成实验。
综上所述，种子生活力的测定方法各有优缺点，农业生产中应根据实际情况选
择合适的方法进行测试。
只有通过科学准确地测定种子的生活力，才能保证种子的质量，提高作物产量，为农业生产做出更大的贡献。
测种子生活力的方法
测种子生活力的方法种子生活力是指种子在适宜的环境条件下能够发芽和生长的能力。
测定种子生活力的方法有多种，下面将介绍几种常用的方法。
1. 观察种子外观种子外观可以直观地反映种子的生活力。
健康的种子应该具有充实的种皮，颜色鲜亮，表面光滑。
如果种子外观变得干燥、褐色或者有裂纹，那么可能是种子生活力下降的表现。
2. 浸泡法将一定数量的种子放入水中浸泡，观察浸泡后的变化。
健康的种子通常会吸水膨胀，并迅速沉入水底。
如果种子浸泡后浮在水面上，可能是种子生活力较低的表现。
3. 发芽率测定法这是一种常用的测定种子生活力的方法。
将一定数量的种子放入适宜的培养基中，提供适宜的温度、湿度和光照条件，观察一段时间内种子的发芽情况。
通过统计发芽的种子数量，可以计算出种子的发芽率，从而判断种子的生活力。
4. 离体培养法将种子表皮剥离，将胚乳或胚轴放入培养基中进行培养，观察胚乳或胚轴的发育情况。
这种方法可以排除种皮对发芽的影响，更准确地评估种子的生活力。
5. 高温处理法将种子置于高温环境中，观察种子的耐热性。
一些种子具有较强的耐热性，可以在高温环境下正常发芽和生长，而一些种子则对高温敏感，会导致种子生活力下降。
6. 高盐处理法将种子置于含有一定浓度盐溶液中，观察种子的耐盐性。
一些种子具有较强的耐盐性，可以在高盐环境中正常发芽和生长，而一些种子则对高盐敏感，会导致种子生活力下降。
7. 高湿处理法将种子置于高湿环境中，观察种子的抗霉性。
一些种子具有较强的抗霉性，可以在高湿环境中正常发芽和生长，而一些种子则对高湿敏感，容易受到霉菌的侵害，会导致种子生活力下降。
测种子生活力的方法有很多种，可以通过观察种子外观、浸泡法、发芽率测定法、离体培养法、高温处理法、高盐处理法和高湿处理法等方法来评估种子的生活力。
选择合适的方法进行测定，可以帮助我们了解种子的质量，为种子的储存、选育和利用提供科学依据。
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8种子生活力测定Z—1概述种子生活力（Seed viability）是指种子发芽的潜在能力。
种子生活力测定在农业生产上具有重要的意义：①测定休眠种子的生活力。
许多植物种子因存在休眠，暂时不能萌发，因此发芽率很低，尤其是新收获的和野生性较强的种子，必须进行生活力测定，才能了解种子的发芽潜力，以便合理利用种子。
播种前对发芽率低而生活力高的种子，应进行适当处理。
种子检验时，若发芽试验末期有新鲜不发芽种子或硬实种子，也应接着进行生活力测定，以正确评定种子品质。
②快速预测种子的发芽力。
休眠种子可借助于各种处理措施打破休眠，然后进行发芽试验，但所需时间较长。
而种子贸易中，有时因时间紧迫，不可能采用标准发芽试验来测定发芽力，因为发芽试验所需时间更长，如小麦需8d，水稻需14d，某些蔬菜和牧草种子需2～3周，而多数林木种子则需要更长的时间。
在这种情况下，可用生物化学速测法测定种子生活力作为参考。
种子生活力测定方法有10多种，根据其测定原理可大致分为4类：①生物化学法，如四唑测定法、溴麝香草酚蓝法、甲烯蓝法、中性红法和二硝基苯法等。
②组织化学法，如靛蓝染色法、红墨水染色法和软x射线造影法等。
③荧光分析法。
④离体胚测定法。
本节主要介绍四唑测定法、离体胚测定法、染料染色法和软x射线造影法。
Z—2生活力测定方法一、测定原理有生活力的种子，其活细胞原生质膜具有选择透性，当种子浸入染料后，染料大分子不能进入活细胞内，所以胚部等活组织不能被染料染色，而死的种胚细胞因原生质膜丧失选择吸收能力，故可被染料染色。
二、测定方法（一）染色法1．靛蓝染色法此法适用于豆类、谷类、棉花、瓜类和林木等大粒种子的生活力测定。
所用试剂为靛蓝（或称靛蓝洋红），分子式为C18H8O2N2（SO5Na）2，系蓝色粉剂，能缓慢溶于水。
测定方法如下：(l) 种子预处理：将种子浸人30℃水中，水稻、向日葵、蓖麻、花生和棉籽等种子须先去壳再浸种，浸种时间因种子不同而异，小麦、大麦、大豆、豌豆和向日葵等为3h，燕麦、芝麻等4h，油菜、花生、棉籽等6 h，蓖麻、红麻、大麻等7 h、黍8 h、水稻12 h、玉米20 h将充分吸胀的种子(100粒2次重复），沿胚中线纵切（如禾谷类）或剥去种皮（如双子叶种子），以备染色用。
(2) 靛蓝染色：将处理好的种子置于培养皿或小烧杯内，加入靛蓝溶液淹没种子，纵切种子，用0.1％溶液，剥去种皮种子用0.2％溶液。
染色时间禾谷类为15min，油菜、芝麻、红麻和大麻等30 min，大豆、亚麻、向日葵、蓖麻、花生和棉籽等60 min 豌豆18 0 min（3）观察鉴定：取出染色后的种子，用清水冲洗后立即进行观察鉴定。
凡种胚不染色或染成浅蓝色的、胚根尖端或少部分子叶染色的，为有生活力种子；凡种胚全部染成蓝色的，或胚根、胚轴、胚芽、子叶等大部分染成蓝色的，为无生活力种子。
2.红墨水染色法其测定原理、种子预处理方法以及染色时间等与靛蓝染色法基本相同，只是所染成的颜色不同，死胚染成红色，活种子胚不染色。
测定时用刚开瓶的红墨水，加水稀释后使用，红墨水与水的比例：小麦、玉米、大豆和棉花等为1：60，大麦以1：120为宜。
到达规定染色时间后取出种子，用清水冲洗并立即观察鉴定。
（二）其他方法四唑测定法（一）四唑测定法概述1．发展简史四唑测定法于1942年由德国kon教授发明，二战期间传入美国。
IST A于195 0年成立四唑测定技术委员会，1953年首次将四唑测定列入国际种子检验规程。
1974年，ISTA 四唑测定技术委员会主席美国，为发展和推进四唑测定技术的标准化，主持编写《四唑测定手册》，其后经过多次ISTA会议讨论修改，于I984年正式公布发行。
该手册汇集了世界上最先进实用的种子四唑测定技术，以及650多个属和种的农作物、蔬菜、林木、牧草、药材和花卉种子的具体测定技术，堪称最具权威性的四唑测定参考。
种子生活力四唑测定技术经过不断研究和完善，目前已在全世界广泛应用。
2．特点四唑测定具有原理可靠、简便快速、结果准确、不受休眠限制以及成本低廉等特点。
该法比按细胞膜选择透比不同的染色方法更为可靠，所击仪器设备和物品较少，程序比较简单，一般2 4 h之内即能获得测定结果，不论是休眠种子还是非休眠种子均适用。
因此，该法是世界公认的最有效的种子生活力测定方法。
3．适用范围根据国际种子检验规程规定，四唑测定适用于下列范围：(1）测定休眠种子、收获后需马上播种的种子以及发芽缓慢的种子的发芽潜力。
（2）测定发芽试验末期末发芽种子的生活力，特别是怀疑有休眠时。
(3) 测定种子收获或加工过程中的种子损伤（如热伤、机械损伤、化学伤害等）原因。
（4）解决发芽试验中遇到的问题，查明不正常幼苗产生的原因和杀菌剂、种子包衣等处理的伤害。
(5)查明种子贮藏期间劣变衰老程度，按染色图形分级，评定种子活力水平。
(6)调种时时间紧迫，快速测定种子生活力。
（二）四唑测定法的原理有生活力的种子活细胞在呼吸过程中都会发生氧化还原反应。
四唑溶液作为一种无色的指示剂，被种子活组织吸收后，参与活细胞的还原反应，从脱氢酶接受氢离子，在活细胞里产生红色、稳定、不扩散、不溶于水的三苯基甲替。
化学反应式如下：依据四唑染成的颜色和部位，即可区分种子红色的有生活力部分和无色的死亡部分。
一般来说，单子叶植物种子的胚和糊粉层、双子叶植物种子的胚和部分双子叶植物的胚乳、裸子植物种子的胚和配子体等属于活组织，含有脱氢酶，四唑渗入后能染成红色，而种皮和禾谷类胚乳等为死组织，不能染色。
除完全染色的有生活力种子和完全不染色的无生活力种子外，还可能出现一些部分染色的种子。
判断种子有无生活力，主要看胚和（或）胚乳（或配子体）不染色坏死组织的部位及面积大小，而不一定在于颜色的深浅，颜色的差异主要是将健全的、衰弱的和死亡的组织区别出来，根据上述原理．鉴定种子胚的死亡部分，还可以查明种子死亡的原因。
四唑染色是一酶促反应．因此反应不仅受酶活性的影响，还受底物浓度、反应温度、p H等因素的影响。
该酶促反应的适宜pH为6. 1～7，高于者低于此pH反应不能正常进行，也就无法测定种子活力的高低。
因此．对于游离酸含量高的四唑试剂应当用缓冲液配制。
反应速率随温度的不同而变化．温度每升高10℃反应速率提高1倍，譬如20℃'时需要反应时间4h，30℃则需要2 h，但反应最高温度不能超过45℃，染色时底物的浓度要一致，一般染色部位切开的种子，测定时四唑溶液的质量浓度为0.1％～0.2％，染色部位完整的种子，质量浓度为1%～2%。
种子预措时．采用的方法应根据种子的化学组成和种子结构确定。
（三）四唑测定法应用的化学试剂1 四唑四盐类有多种，最常用的是2,3,5一氯化（或溴化）三苯基四氮唑，英文名为2 ,3 , 5 - triphenyl tetralium chloride (or bromide) TTC(TTB)或TZ.分子式为C 19H15N4Cl，相对分子量334.8亦称红四唑，为白色或淡黄色粉剂，溶点243℃，当达到约2 45℃就会分解，易溶于水，有微毒，试剂在光下会被还原成粉红色，因此需用棕色瓶盛装，且瓶外要裹一层黑纸。
同样．配好的四唑溶液也应装入棕色瓶里，存放在暗处，种子染色也需在暗处和弱光处进行。
1996版《国际种子检验规程》规定，正常使用四唑溶液质量浓度为1．0％，但有些情况下，可使用较低或较高的浓度。
GB/T3543.7一1995规定，四唑染色通常使用质量浓度为0.1％～1.0%的四唑溶液，一般来说，切开胚的种子可用0．1～0．5％的四唑溶液；整个胚、整粒种子或斜切、横切或穿刺的种子需用1．0的四唑溶液。
四唑溶液的pH要求在6.5～7.5范围之内，若溶液的pH不在此范围时，建议采用磷酸缓冲液来配制。
其配制方法为称取1 g四唑粉剂溶解于100 ml磷酸缓冲液中，即配成1. 0%（或0.1%）的四唑溶液。
当用酸度计测定时，若四唑溶液的pH达不到要求，则可用NaOH或NaHCO3稀溶液加以调节。
配好的四唑溶液应保存在棕色瓶中，一般有效期为几个月，如存放在冰箱，则有效期更长。
已用过的四唑溶液不能再用。
2．磷酸缓冲液为保证配制的四唑溶液pH在6.5 ～7.5范围内，通常采用磷酸缓冲液来溶解粉剂。
磷酸缓冲液的配制方法有两种，(1) ISTA规程法：先准备两种溶液。
溶液I——在1000ml蒸馏水中溶解9.078g KH2PO4。
溶液——在1 000ml蒸馏水中溶解9.472 g Na2HPO4或11.876 g Na2HPO4·2H2 O然后取溶液I 2份和溶液I I 3份混合即成。
（2）AOSA规程法：在1000ml蒸馏水中溶解5.45 g N aH2PO4和3.79 g Na2H PO4。
3．乳酸苯酚透明液用于染色后的小粒豆类和牧草种子，使种皮、稃壳或胚乳变得透明，以便清楚地观察鉴定。
其配法为：20ml乳酸+20ml苯酚+40ml甘油＋20ml蒸馏水。
4．过氧化氢溶液用于某些牧草种子（如黑麦草、早熟禾、羊茅和鸭茅等）的预湿浸种，以加快吸胀和酶的活化。
一般应用0.3%H2O溶液。
5．杀菌剂和抗生素用微量的杀真菌剂和（或）抗生素加入四溶液或染色样品中，以延缓衰弱种子的劣变进程。
可应用0.5%青毒素等抗生素6.胶液硬化剂有些种子浸种后，种皮表面出现胶黏物质而变得非常光滑．难以进行样品准备，可用AIK(SO4)212H2O, K2SO4,A12(SO4)3等硬化剂处理。
如将种子浸在1％～2%AIK(SO4)2·12H2O溶液中5min,可有效地减少胶黏物质。
（四）四唑测定法的程序参照1996版《国际种子检验规程》的规定．介绍四测定法的程序：1.试验样品从净度分析后并经充分混合的净种子中，随机数取100粒种子，4次重复。
如果是测定发芽试验末期休眠种子的生活力，则单用发芽试验末期所发现的休眠种子。
2.染色前的种子准备(1)种子的预湿：预湿是四唑测定的必要步骤。
因为吸胀种子一般比干种子不易破碎并且比较容易切开或刺穿。
此外，预湿使活组织酶系统活化，可提高染色的均匀度、深度、鉴定的可靠性和正确性。
有些种子在预湿前还要进行预措处理，以利吸胀，如水稻种子需脱去秤壳，豆科硬实种子需刺破种皮等，但须注意，预措不能损伤种子内部胚的主要构造。
如果利用较高或较低温度进行预湿，则相应调整预湿时间，并将所采用的时间和温度填报在种子检验证书上。
预湿方法有以下两种：①缓慢预湿：按发芽试验所用的方法，将种子放在纸上或纸间吸湿。
该法适用于那些直接浸在水中容易破裂和损伤的种子，以及已经劣变的种子或过分干燥的种子。
有些种子，缓慢预湿达不到充分吸胀，有必要进一步在水中浸一段时间。
②水浸预湿：将种子完全浸在水中，让其达到充分吸胀。