实验十植物染色体标本的制备和观察优秀课件
【全版】实验植物减数分裂染色体制备华南农业大学推荐PPT
终变期形成四体链或四体环
➢易位的细胞学特征： 粗线期四价体； 终变期四体环或四体链
➢易位的遗传效应： 位置效应；假连锁；癌基因活化； 性染色体异常
二、实验原理
2 染色体结构变异的诱发： ➢辐射诱变：电离辐射和非电离辐射
x-射线 γ射线 中子 ➢化学诱变
三、实验材料、器具及试剂
➢ 实验材料：经60Co-γ射线处理的水葱 花
染色体结构变异
一、实验目的
了解和鉴别各种染色体结构变异在减数 分裂过程中的细胞学特征。
二、实验原理
1 染色体结构变异主要有缺失、重复、倒 位和易位四种。其发生过程一般是在染 色体断裂后重接时发生差错的结果。
缺失
缺失
缺失环
重复
重复
增加一段染色体
➢缺失、重复的细胞学特征： 粗线期或偶线期环或瘤
易位
易位
三、实验材料、器具及试剂
1 染色体结构变异主要有缺失、重复、倒位和易位四种。
断片接到非同源染色体上
致死，拟显性;位置效应，表型异常
其发生过程一般是在染色体断裂后重接时发生差错的结果。
盖1 染上色盖体玻结片构，变镜异检主观要察有后缺期失染、色重体复桥、、断倒断位片片和和接易微位核到四。种非。同源染色体上
x-射线 γ射线 中子
断片接到非同源染色体上
相互易位染色体在减数分裂粗线期形成十字联会
相互 易位
B
十字联会 A
C
D
（十字联会照片）
十字联会形成的18种类型配子，受精后只有一种正常类型
（AB, CD)；一种为易位携带者(AD, BC)。其他均含有不平
衡染色体。
果蝇第1条染色体16区A段重复，红色小眼数量显著减少 果蝇第1条染色体16区A段重复，红色小眼数量显著减少 缺失、重复的细胞学特征： 三、实验材料、器具及试剂 1 染色体结构变异主要有缺失、重复、倒位和易位四种。 缺失、重复的遗传效应： 缺失、重复的遗传效应： 断片接到非同源染色体上 了解和鉴别各种染色体结构变异在减数分裂过程中的细胞学特征。 1 染色体结构变异主要有缺失、重复、倒位和易位四种。 缺失、重复的细胞学特征： 断片接到非同源染色体上 缺失、重复的遗传效应：
植物染色体制片
实验结果
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实验报告
❖ 在制片的过程中有哪些需要注意的问题？ ❖ 为什么在压片前需要先经过酸水解？ ❖ 植物染色体制备和动物染色体制备的相同
点和主要区别。
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植物根尖染色体标本的制备
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Hale Waihona Puke 目的要求❖ 掌握植物染色体标本的制备技术
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实验原理
❖ 制备植物细胞的染色体标本，在取材上必 须选择细胞分裂较旺盛，而且取材较方便 的组织作为实验材料。如植物的根尖。
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实验用品
1、器材：显微镜、水浴锅、载玻片、盖玻片、 镊子、刀片、烧杯等。
2、试剂： 0.1%秋水仙素；Carnoy固定液；1mol/L HCL；
改良苯酚品红 3、实验材料： 洋葱根尖
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预处理：切取长约5mm的植物根尖，浸入 0.1%秋水仙素中，室温下处理3~6小时
将根尖放入1mol/L的盐酸中，60℃水浴， 恒温条件下解离10~15min。
解离后倒出HCl，水洗2次，每次3~5min。将 材料直接浸入改良苯酚品红中，盖上盖玻片。
用镊子或铅笔轻轻敲打，使根尖细胞分散开。
植物减数分裂染色体制备PPT幻灯片
粗线期：配对后的染色体逐渐缩短变粗，同源 染色体内的非姊妹染色单体间开始发生交换。
双线期：染色体缩得更短更粗，其基本数目可 辩。同源染色体开始排斥，由于交换的结果， 出现交叉结。可清楚地观察到交叉现象。
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终变期：染色体缩到最短最粗，核仁核膜仍清 晰可见。此期是染色体计数的极好时期。
实验四 植物减数分裂染色体制备 及观察
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实验目的
1.了解高等植物减数分裂过程及染色体的 动态变化。
2. 掌握制备植物细胞减数分裂玻片标本的 技术和方法。
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减数分裂的特点
减数分裂是一种特殊方式的细胞分裂，仅在配 子形成过程中发生。
减数分裂的特点是：连续进行两次分裂，而染 色体只复制一次，结果形成4个子核，每个子 核只含单倍体的染色体，即染色体数减少一半， 所以叫做减少分裂。另外一个特点是前期特别 长，而且形态和行为变化复杂，包括同源染色 体的配对、交换与分离等。
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后期I 二价体的两个同源染色体分 开（没有着丝点的分开）， 由纺锤丝拉向两极，染色体 又变成了染色丝。
末期I 同源染色体分别到达细胞两 级，染色体变成了染色质状， 核膜、核仁重新出现，形成 两个子核，每个子核染色体 数目减半为n，同时细胞质分 开形成两个子细胞，叫二分 体。
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第二次减数分裂（减数分裂 I I， 染色体不复制）
4． 大葱花序
待3、4月份，大葱花序长到枣一样大时，颜色呈绿色（转 黄时已晚），采摘花序固定，制片时，取1个小花，挑出 花药，用醋酸洋红染色法压片观察。
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2. 制片
取1-3枚花药放在洁净的载玻片上，用清洁刀片压 在花药上向一端抹去，涂成薄层，然后滴1滴1% 醋酸洋红染色液（或苏木精染色液），也可在花 药上滴上染色液。
植物细胞染色体标本的制备-上课
2.盐藻（Dunaliella salina）观察
• 一种海洋单细胞藻类，属于绿藻门，是一 种单细胞真核藻类，具有鞭毛。
观察运动，不用盖盖玻片，并在 10倍物镜下观察。
3. 其他植物永久切片的观察
实验材料与试剂
试剂： 1g/L 秋水仙素（sigma) 解离液：1mol/L的盐酸。 卡诺固定液：按甲醇:冰醋酸以3:1(体积分数)
配制，现用现配。 改良石炭酸品红染液
实验流程
水培大蒜，使其长出根大约1-1.5cm即可用于实验。
预处理： 1g/L 秋水仙素 3h
固定：卡诺固定液 4 ℃ 30 min
报告要求
• 请务必标明姓名，实验时间，学号。
• 报告格式：为六部分
➢ 实验目的（5分） ➢ 实验原理（10分） ➢ 实验材料和试剂（5分） ➢ 实验步骤（15分） ➢ 实验结果（30分）：详细描述结果并附图。 ➢ 实验讨论（35分）：对实验的分析、讨论和总结。 备注：不遵照此格式扣分。
实验要求
染色体标本制备技术的应用
• 核型（karyotype） ：亲缘鉴定，染色体变 异分析，杂种分析，疾病诊断等
染色体标本制备技术的发展 显带技术
染色人体涂染
急性骨髓白血病 10、11号染色体间易位
实验材料与试剂
实验材料：市售大蒜。 仪器及用具：显微镜，冰箱，恒温水浴锅，载玻
片，盖玻片，剪刀，镊子，滤纸等
已完成
压片、敲片
染色：10 min
解离：1 M HCl 60 ℃ 10min
洗涤
观察
结果记录
要充分
实验操作
染色前去掉分生区以后部分，保留根尖0.3 cm即可。
4. 成熟区 3. 伸长区； 2. 分生区； 1. 根冠；
植物染色体标本制备
用Hcl是使得用作制片的组织材料，细胞疏散而解离，有利于压片。
实验9、植物染色体标本制备及核型分析目前，国内外常用的植物染色体制片技术可以分为两种，即压片技术和去壁低渗技术。
Belling(1921)提出植物染色体压片技术后，压片已成为植物染色体研究中最广泛应用的常规技术；但是由于植物细胞有坚实的细胞壁，染色体很难象动物染色体那样平整地贴在载玻片上，Omura 和Kurata(1978)把植物原生质体技术应用到水稻染色体研究之中，用纤维素酶、果胶酶和0.075mol.L-1氯化钾处理取得了一定的进展，陈瑞阳等人（1979、1982）提出了植物染色体标本制备的酶解去壁低渗技术，并在多种植物上得到广泛应用，成为当今植物染色体研究中的重要方法。
压片技术和去壁低渗技术在取材和预处理要求及其操作都是相同的，即两者的材料基础条件是相同的，但它们所采用的染色体分散方法是不同的。
压片法是以人工外加机械压力使染色体分散，而去壁低渗法是用酶分解细胞壁，低渗液使细胞膜吸胀、水表面张力使染色体分开。
两种技术各有其优缺点，前者操作快速简便、省材省时，后者染色体易于展开、且真实不变形，尤其是对成熟细胞多的植物组织，如芽、愈伤组织等材料有独到效果，本实验主要介绍去壁低渗染色体制片技术。
一、实验目的1、掌握植物根尖、茎尖及叶片去壁低渗染色体制片技术，通过3周开放性实验教学，进行植物染色体制片技能训练；2、掌握植物染色体显微照象技术及组型分析技术，通过大量的制片观察，能获得图象清晰、完整、高度分散的染色体典型制片；通过显微摄影，获得某植物染色体自然核型图，并能用国内外通用的植物核型分析标准，确定该植物染色体模型图、核式公式及类型；3、掌握植物有丝分裂制片技术，通过大量的制片观察，能比较快速准确地判断细胞有丝分裂前、中、后、末期的染色体图象，并对其典型制片照像，收集核型分析及有丝分裂过程观察的染色体制片素材；4、结合实验，对某一新资源植物进行染色体组型分析，获得该物种染色体组型公式、类型、核型图及核型模式图。
植物细胞染色体标本的制作ppt课件
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有丝分裂
中期 是观察染色体 的最好时期
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2. 1 核型分析技术的应用
核型分析技术的应用 物种细胞内染色体数目、形态、长度等信
息的总和根据实验的观察和测量绘制成的 模式图称为核型（karyotype）。
2.实验原理
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核型的应用
核型分析在物种亲缘鉴定，染色体变异分 析，杂种分析，细胞分裂过程分析，孤雌 生殖等研究中均有重要的作用。
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实验内容
压片法观察大蒜、洋葱根尖染色体标本。 观察男人和女人染色体、洋葱根尖有丝分
裂永久切片标本。
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催芽
4. 实验步骤
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4. 实验步骤
取材，预处理。 取大蒜或洋葱0.5~1 cm的根尖。 1 g/L 秋水仙胺处理3~4 h。
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4. 实验步骤
固定：卡诺固定液卡诺固定液4 ℃下固定 30 min后，用蒸馏水洗净。
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实验目的 实验原理 实验材料 实验步骤 注意事项 实验讨论
主要内容
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1.实验目的
（1）掌握常规压片技术制作植物染色体标 本的一般方法。
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1.实验目的
（2）了解显微镜下常规显色的植物细胞染 色体的形态特点，熟练掌握显微镜的使用。
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1.实的应用。
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伸长区
分生区
根尖生长点
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切取0.3cm左右的根尖
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6. 压片
4. 实验步骤
盖片 敲片
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压片
4. 实验步骤
植物染色体标本的制备与观察 实验报告
实验七植物染色体标本的制备与观察一、实验目的
学习植物染色体标本的制备技术，掌握染色体的技术方法，了解染色体的生物学意义。
二、实验用品
Carnoy固定液、0.1%秋水仙素溶液、1mol/HCL、Schiff溶液、亚硫酸水溶液（漂洗液）、混合酶液（纤维素酶、果胶酶各1%-2%）、Carbor fuchsin(卡宝品红)染液配方1、配方2
三、实验方法
1.取材：将大蒜培养，待胚根长达1-2cm时。
窃取0.5cm
长的根尖部分。
2.预处理：将切下的根尖浸入0.1%秋水仙素液中，室温下
处理3-4h
3.固定：取出根尖，投入Carnoy 液固定2-24h,换入70%
酒精，暂时保存
4.水解：把根尖投入预热的58-60℃1mol/HCL中，恒温下
水解14-15min.
5.染色：用配方2染5-10min
6.用蒸馏水西区多余染液
7.酶解:酶解20min左右
8.洗涤：用蒸馏水洗涤，除去残留酶液后加45%醋酸。
9.压片：将根尖置于载玻片上，滴半滴45%醋酸，盖上盖
玻片，压片
10.镜检
四、实验结果及分析
这是用大蒜根尖所制的玻片观察到的，只能看到被染色的核，但未能清晰观察搭配中期分裂相中染色体的排列。
分析实验失败原因如下：
1.处理时间不对，处理时细胞未处于分裂
中期
2.所用试剂配的有问题，导致最终只能看
到核被染色，但看不到中期染色体的清晰排布。
植物细胞染色体标本的制作与观察
普通生物学实验课须知1.新生进实验室之前要认真阅读实验室基本知识。
2.每次进入实验室的时间为以课表为准，提前10分钟进入实验室。
3.应严格按照实验平台上预约时间进入实验室进行实验，不来者，视为旷课。
如因特殊情况请假，需在实验开始前至少三天向指导教师说明，在选课平台系统中取消原预约时间，重新预约，一次不做实验或一次不交报告，即按不及格论处。
4.预习实验内容和有关知识，写好预习报告（手写）,前四部分内容（一、实验目的，二、实验原理，三、实验器材与试剂，四、实验步骤与操作方法），无预习报告者扣10分。
5. 实验过程中应认真操作，仔细观察实验现象，做好原始记录(三个实验需要用相机或手机拍照，DNA指纹图谱实验需用U盘拷贝实验结果，请自备拍照工具和U盘)。
6. 预习、课堂操作、课堂纪律、善后处理、实验报告是评分的依据。
7. 实验完毕，要将自己使用的仪器刷洗干净，药品按序恢复原位，台面擦净，把自己做实验的一套东西找齐，经指导老师检查合格并签字后方可离开。
8. 值日生要认真清扫地面、水槽、台面，检查水、电、门窗是否关好。
9. 实验讲义：实验预约系统中可以下载，也可到生命科学与技术学院网站下载。
10. 实验报告模板见附件，需注明姓名、学号、组号、做实验具体时间。
植物细胞染色体标本的制作与观察上课地点：化学楼120 上课时间：选课时任课教师：陈丽杰办公地点：生化楼215 电话：课程要求：预习实验内容，掌握实验目的及原理、仪器和试剂、实验步骤；手写完成预习报告（实验名称、实验目的、实验原理、实验器材与试剂、实验方法与步骤），课堂检查预习报告情况。
实验注意事项：1、实验台上物品按实验室管理老师要求摆放整齐；2、实验废物按实验室管理老师要求收集；3、实验结束后，经老师检查后方可离开。
实验纪律：1、按时上课2、穿实验服（白大衣）3、不许吃东西，课堂严禁大声喧哗4、手机静音实验成绩：预习报告： 20分实验操作： 40分报告内容：结果和讨论 40分植物细胞染色体标本的制作与观察1. 实验背景与原理染色体的研究在生物进化、发育、遗传和变异中都有十分重要的作用。
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四 实验方法（去壁低渗法制备染色体标本 ）
8． 洗涤 倒去酶液，用蒸馏水慢慢冲洗2次， 然后加入45%醋酸。
9 压片 吸取材料，置于载玻片， 盖上盖玻 片，然后在盖玻片上放上一滤纸，用铅笔上 的橡皮头轻轻敲打盖片，使细胞和染色体分 散。
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五 注意事项
四 实验方法（去壁法制备染色体标本 ）
1．取材 将蚕豆种子放在25℃温箱中发芽， 待根长到1～2cm时使用。
2．前处理 根尖用0.1%秋水仙素溶液处 理3～4小时。
3．固定 用水洗净处理过的根尖，经甲醇/ 冰醋酸（3∶1）固定2-24小时，换入70% 酒精保存。
四 实验方法（去壁法制备染色体标本 ）
三 实验仪器、材料和试剂
1 仪器、用具：培养箱、显微镜等 2 材料：蚕豆种子 3 试剂：
⑴ 秋水仙素 ⑵ 磷酸缓冲液 ⑶ 甲醇、冰醋酸 ⑷ 改良苯酚品红染色液 ⑸ 混合酶液
三 实验仪器、材料和试剂
3 试剂： ⑹ 70%、85%、95%乙醇 ⑺ 1mol/L HCL
四 实验方法（压片法制备染色体标本 ）
1 取材 把蚕豆种子预先浸泡6小时，然后转入 垫有湿润滤纸的培养皿中，置25℃温箱中发芽 ，幼根长至1～2cm左右，于上午13～14时剪 下根尖0.5cm。
2 预处理 将剪下的根尖置0.02%秋水仙素溶 液中，浸泡处理4小时。
3 固定 用水洗净处理过的根尖，经甲醇-冰醋 酸（3∶1）固定6～24小时，再经95%、85% 酒精各半小时，最后转入70%酒精中，4℃保 存备用。
实验十植物染色体标本的制备和 观察
二 实验原理
常规压片法仍是当今观察植物染色体常用的方法，其 程序包括取材、预处理、固定、解离、染色和压片等 步骤。但压片法的不足之处是染色体很难分散开，染 色体容易变形和断裂。
去壁低渗法是借助纤维素酶和果胶酶将细胞间的果胶 质和组成细胞壁的α-纤维素、半纤维素溶解掉，使植 物细胞只有质膜，然后按哺乳类动物染色体标本制备 的方法——低渗、火焰干燥法制备植物染色体标本。
前处理的浓度和时间以及酶解的时间直接 影响染色体标本制备的质量。
四 实验方法（压片法制备染色体标本 ）
4 解离 取出根尖，用蒸馏水洗净，放入1N HCl 中60℃解离 8～10min，再用蒸馏水洗净。
5 染色 改良苯酚品红染色液染色5～10min 。 6 压片 把根尖放在载玻片上，切取分生区部分
，加一滴染液，用镊子捣碎，盖上盖玻片，然 后在盖玻片上放上一滤纸，用铅笔上的橡皮头 轻轻敲打盖片，使细胞和染色体分散。 7 镜检。
4．水解 取出根尖，用蒸馏水洗净，放入1N HCl中60℃解离 14～15min，再用蒸馏水洗净
5 染色 改良苯酚品红染色液染色5-10min。 6 漂洗 漂洗液换洗2-3次，每次1-2min。 7 酶解 切取着色深的分生区放到小杯中，
加入混合酶液（2.5%纤维素酶+2.5%果胶 酶），25℃下酶解2～4小时。