实验七 五日生化需氧量的测定
五日生化需氧量(BOD5)的测定
五日生化需氧量(BOD5)的测定日生五需化量(氧od5)的测b定、实验目一的掌生活握污或工业水废水日五生需化量氧测的。
定二、实验原理生化氧需是指量在好氧件条下微生，物分解中的水机物有生物化的过程学中消所耗解溶氧的量此生化。
全程进过行时的间很，如在长02下℃养，培完此过成程1需00多。
天目国前外内都采20℃用养培天五为检验作标指，为五称生日需氧量(化od5b。
)分测别样品定培前养的溶解后氧二者之，差即为odb值，以氧5的g/l表示m 。
水样稀用释稀释，水定合确的倍数非适重常。
稀要释数倍大或太太，小五则培天养后余剩的溶解太氧多或太，甚至为少零都，不得能可到的靠果结。
释的稀程应使五天培养度中消耗所溶解的氧大2m于g/l而剩余,溶解氧在1g/l以上。
m此在前提件下，稀条释倍可数估以算，也可依据经验以法来值确定对于不。
含或含少生微的物水，废测在bod定时应进5行接种。
三实、验仪培器箱，大养玻瓶璃1，000m量筒，blo培养瓶d各，规的格(胖、肚刻)度液移管等。
、四实验试剂除测定溶解所需氧试的外，还需剂列下试剂：化钙溶液氯三，氯化溶铁，液酸镁溶硫液，酸盐磷缓冲溶液。
等、实验五骤1.步2.3.稀释的配制水使蒸：水的馏解氧为2溶℃0的时饱和解溶氧在这含有饱，和溶氧蒸解水中馏，每00lm0加入l上述种四液各溶1l。
m测定水的c污odn值或cdr。
值调节水ph值至样中性。
样水培液养配制的：()1据根得测的cod值计出算释稀数倍，一般时同3~做4种释稀倍。
数2)(用即吸虹把一些先释水引稀入1000lm量的中(约所需体积的筒1/)，3用再液移管吸所需取水的体积样，加量筒入。
移取中样水3()稀用释水释到所稀需的积体注意（本次：验实稀释的总体积为700m所），小心摇l匀将，配此的好样用虹吸法水入引带号编的2培个瓶养中，至全完充，满好盖盖，水子封。
此为一种稀第释倍的数培液(在养整操作个过程应免产生避气泡。
其)的几种余释稀倍数养液培，亦按法上作操。
五日生化需氧量(BOD5)的测定
五日生化需氧量（BOD 5）的测定1.用BOD 营养盐缓冲剂粉枕包2.选择样品体积。
详见样品容量3.用移液管轻轻搅匀样品。
向第4.向另一个BOD 瓶中加入稀释水。
这瓶就是稀释水空白。
准备稀释水。
详见稀释水准备。
选择。
一个BOD 瓶中加入最小采样量 注：如果最小采样量在3mL 左 的样品。
右，不需稀释直接测溶解氧。
再向另外4个BOD 瓶中加入不当测生活污水或沉降后的污水 同体积的样品。
做好标记，并等溶解氧浓度约为0mg/L 的样记录下每瓶水样的体积。
品时，这一步可以省略。
5.如果测试CBOD ，向每个瓶中6.向每个瓶中倒稀释水至瓶口7.小心地盖上瓶塞防止气泡。
按8.测试每个瓶中最初的溶解氧 浓度。
使用电极、仪器或滴定 法。
若使用滴定法则需准备2套BOD 瓶。
记得测量稀释水空白的溶解氧 浓度。
加入2管硝化抑制剂（约 边缘，沿着瓶壁倒入以防产生 住瓶塞并上下颠倒瓶子数次以 0.16g ）。
阻止氮化合物的氧化， 气泡。
混匀液体。
结果是CBOD 。
9.小心地盖上瓶塞防止气泡。
10.在每个BOD 瓶上置一个塑 料盖。
将BOD 瓶置于20（±1）°C 的培养箱内培养5天。
11.5天后测每瓶中剩余溶解氧 12.计算BOD 值。
（详见计算方法——标准方法） 向每个BOD 瓶内倒入稀释水作的浓度。
每瓶中剩余溶解氧的浓度至少 为水封。
应为1.0mg/L 。
稀释水准备•为了得到最好的结果，使用经过碱性高锰酸盐蒸馏的水。
•不要使用经离子交换柱所得的去离子水。
柱中的树脂(尤其是新柱)有时会释放有需氧量的有机物。
另外，细菌会在柱中滋生污染稀释水。
•在20°C条件下将蒸馏水储存在干净的容器里并放在培养箱中。
向容器中倒入蒸馏水至3/4体积，并摇晃容器使得空气进入水中饱和，或者较松地盖住容器并放置 24 小时或更久，以使氧气溶解。
•使用小型玻璃抽水泵或者气体压缩机使水中的空气饱和。
确保空气是经无菌过滤器过滤的。
五日生化需氧量(BOD5)的测定ppt课件
稀释倍数的确定 水样稀释方法
7．一般稀释水制备 8． 接种稀释液制备
学习交流PPT
12
水样预处理
1.水样的pH值若超出6.5-7.5范围时，可用盐酸 或氢氧化钠溶液调节pH近于7，但用量不要超 过水样体积的0.5%。若水样酸度或碱度很高， 可改用高浓度的碱或酸液进行中和。
2.水样中含有铜，铅，锌，镉，铬，砷，氰等 有毒物质时，可使用经驯化的微生物接种液的 稀释水进行稀释，或提高稀释倍数以减少毒物 的浓度。
① 原因 • 对于不含和少含微生物的工业废水,其中
包含酸性废水、碱性废水、高温废水或经 过氧化处理的废水,在测定BOD5时应进行 接种,已引入能分解废水中有机物的微生 物。
• 当废水中存在着难于被一般生活污水的微生 物以正常速度降解的有机物或含有剧毒物质 时，应将驯化后的微生物引入水样中进行接 种。
学习交流PPT
30
② 方法
可选择以下任一方法获得适用的接种液。 • 城市污水,一般采用生活污水,在室温下放置一
昼夜，取上清液用。 • 表层土壤浸出液，取100g花园或植物生长土壤,
加入1L水,混合并静置10min，取上清液用。 • 用含城市污水的河水或湖水,污水处理厂的出
水。 • 当分析含有难降解物质的废水时，在其排污口
将8.5g磷酸二氢钾(KH2PO4)，21.75g磷 磷酸盐 酸氢二钾(K2HPO4)，33.4g七水合磷酸 缓冲液 氢二钠(Na2HPO4·7H2O)和1.7g氯化铵
(NH4Cl)溶于水中，稀释至1000mL。此 溶液的pH应为7.2。
学习交流PPT
10
试剂
名称 氯化钙溶液 氯化铁溶液
(1+5)硫酸溶液
下游3-8km处取水样作为废水的驯化接种液。
五日生化需氧量(BOD5)的测定——压差法
五日生化需氧量（BOD5）的测定——压差法1 适用范围本方法适用于天然水、地表水、生活污水及工业废水中BOD5的测定，其测定范围是(0～1000)mg/L。
2 分析原理将仪器放入培养箱中，并按预先选择的量程范围，量好一定体积的水样倒入培养瓶中，并将培养瓶放在培养箱内仪器上连续搅拌。
培养箱内温度控制在20℃±1℃，水样恒温后进行五日培养。
培养瓶中必须保证足够的溶解氧。
样品中的有机物经过生物氧化作用，转变为氮、碳和硫的氧化物，在这一过程中，从水样中跑出来的为唯一气体二氧化碳被氢氧化钠（或氢氧化钾）吸收。
因此，瓶中空气压力减少量，相当于微生物所消耗的溶解氧量，这样，样品BOD5值与瓶中空气压力减少的程度成正比，通过测量空气压力的变化可以得到BOD5值。
增加或减少所取样品的量可以增加或降低压力减少值。
这样操作者无须繁杂的稀释步骤就能准确测量很宽范围的BOD5值。
3 试剂和仪器3.1 试剂3.1.1 1mol/L的NaOH溶液。
3.1.2 C（1/2H2SO4）＝1mol/L。
3.2 仪器3.2.1 880型数字式BOD5测定仪：附BOD培养瓶8个。
3.2.2 pH计，精度±0.1pH单位。
4 分析步骤4.1 培养箱温度的设置接通培养箱电源，将培养箱上温度开关拨至“设置”位置，调节温度电位器旋钮，使表头显示温度为20℃，再把温度开关拨至“测量”位置（培养温度允许±1℃的差值）。
4.2 水样pH的调节见表4-7（见下页）用C（1/2H2SO4）＝1mol/L的硫酸溶液和1mol/L的NaOH溶液调节待测水样的pH值为6.7～5。
4.3 待测水样量的确定预先估计被测样品的BOD5值范围，选择接近的量程。
如无法估计，可先测定该样品的COD值，然后根据该样品COD值来确定该样品的BOD5值，（通常BOD5值约为该样品COD值的0.8倍左右）。
若样品BOD5值在0mg/L～1000mg/L范围内，则样品不需稀释，若样品有足够的微生物，则样品不需要接种，按表1根据估算的样品BOD5值选择合适的量程，并使用干净的量杯，量取所需体积的水样倒入已清洗干净的培养瓶中。
五日生化需氧量的测定稀释接种法
四、操作步骤
1、水样的采集、存储和预处理 采集水样于适当大小的玻璃瓶中〔依据水质状况而定〕，用玻
璃塞塞紧，且不留气泡。采样后，需在2h内测定；否则， 应在4℃或4℃以下保存，且应在采集后10h内测定。 用1mol/L氢氧化钠溶液或1mol/L盐酸溶液调整pH值接近7。 游离氯大于0.10mg/L的水样，加亚硫酸钠或硫代硫酸钠除去。 确定稀释倍数。
五日生化需氧量的测定
一、目的和要求 了解BOD5测定的意义及稀释与接种法测
BOD5的根本原理。 把握本方法操作技能，如稀释水的制备、
稀释倍数选择、稀释水的校核和溶解 氧的测定等。
二、原理
生化需氧量是指在好氧条件下，微生物分解存在水中的有 机物质的生物化学过程中所需的溶解氧量。
依据参与反响的物质和最终生成的物质，可用以下的反响 式来概括生物化学反响过程：
酶
6C6H12O6+16O2+4NH3 4C5H7O2N+16CO2+28H2O
微生物
有机污染物
CO2+H2O+NH3
O2
微生物分解有机物是一个缓慢的过程，要把可分解 的有机物全局部解掉常需要20d以上的时间，微生物的活 动与温度有关，所以测定生化需氧量时，常以20℃作为 测定的标准温度。一般来说，在第5天消耗的氧量大约是 总需氧量的70%，为便于测定，目前国内外普遍承受 20℃培育5d所需溶解氧含量作为指标，单位以的mg/L表 示，简称BOD5。
葡萄糖-谷氨酸溶液。分别称取150mg葡萄糖和谷氨 酸〔均于130℃烘过1h〕，溶于水中，稀释至 1000mL。
盐酸溶液，0.5mol/L。
氢氧化钠溶液，0.5mol/L。
稀释水。在20L玻璃瓶内参加18L水，掌握水温在 20℃左右，用抽气或无油压缩机通入清洁空气 2~8h，使水中溶解氧饱和或接近饱和〔20℃时溶 解氧大于8mg/L〕。使用前，每升水中参加氯化钙 溶液、三氯化铁溶液、硫酸镁溶液和磷酸盐溶液各 1mL，混合均匀。稀释水pH值应为7.2，其BOD5值 应小于0.2mg/L。
五日生化需氧量的测定分析
2.5.2
抑制硝化作用 水中有机物的生物氧化过程可分为两 个阶段，第一阶段主要是碳氢化合物被氧化， 称为碳化阶段，在20℃下约需20d才能完成， BOD测定的一般是该阶段的耗氧量。第二 阶段是含氮化合物及部分氨氧化为亚硝酸盐 及硝酸盐，称为硝化阶段，在20℃约需 100d 。对一般水样，测定BOD5时的硝化作 用并不显著。但对于生化处理的出水，因其 含有大量的硝化细菌，在测定BOD5时也包 括了部分含氮化合物的需氧量，因此需要加 入硝化抑制剂，抑制硝化作用对BOD5测定 的影响。可在每升稀释水样中加入2ml浓度 为500mg /L的丙烯基硫脲。
由高锰酸盐指数与一定的系数的乘积 求得的稀释倍数
高锰酸盐指数（mg/L）
＜5 5-10
系数
0.2 0.3
高锰酸盐指数（mg/L）
10-20 ＞20
系数
0.4、0.6 0.5、0.7、1.0
对地表水稀释倍数的确定，也同样如此。比如， 高锰酸盐指数的浓度为5-10mg/L之间时，我们可 以在系数0.2-0.3之间，再增加0.22，0.25，0.28等 几个系数。
2. 稀释接种法测定BOD5时需注意的问题
2.1 样品的采集及保存 采集样品时应充满并密封于瓶中，在0-4℃ 条件下进行保存，一般应在6h内进行分析。 若需要远距离转运，在任何情况下，贮存时 间不应超过24h。 2.2 时间的影响 样品中的BOD5浓度易随时间的变化而变化， 样品储存时间、测定过程时间和培养时间均 会对测定结果产生影响。这就要求我们在进 行BOD5的测定时需要严格控制培养时间和 样品储存时间。
上清液的接种量，按水样的性质确定。 啤酒厂： 接种量一般以7-8ml/L水为宜。 印染废水：上清液2ml/L,再加入7ml/L驯化接种液。 葡萄糖谷氨酸标准溶液：接种量一般以2-3ml/L水 为宜。
化验室测定水质五日生化需氧量操作规程
化验室测定水质五日生化需氧量操作规程一、实验目的测定水样的五日生化需氧量（BOD5），了解水样的有机物污染程度。
二、实验原理五日生化需氧量（BOD5）是指一定温度下，在条件适宜的细菌作用下，有机物被生物氧化所需的氧量。
实验中，将水样与添加细菌的琼脂糖培养液混合并置于恒温器内，五天后再测定混合液中的溶解氧浓度，根据溶解氧浓度差计算得到水样的BOD5值。
三、实验仪器和试剂1.恒温器：可控制温度为20±1℃。
2.恒温水浴槽：用于调节实验所需恒定温度。
3.溶解氧电极：用于测量水样中溶解氧浓度。
4.密封玻璃瓶：容量为300mL，用于混合水样和琼脂糖培养液。
5.搅拌器：用于溶解氧的均匀分布。
6.pH计：用于测量水样的酸碱度。
7.琼脂糖培养液：配制培养细菌的营养液。
四、实验步骤1.准备实验设备并调节恒定温度为20±1℃。
2.选取适当的密封玻璃瓶，并清洗干净。
3.取300mL水样并过滤，以去除不溶物。
4.在过滤的水样中测量初始溶解氧浓度，并记录。
5.在密封玻璃瓶中加入200mL过滤的水样和100mL琼脂糖培养液。
6.用搅拌器均匀混合水样和琼脂糖培养液。
7.将密封玻璃瓶置于恒温器内，保持20±1℃的温度。
8.在五天后取出密封玻璃瓶，使用溶解氧电极测量溶解氧浓度。
9.计算BOD5值：BOD5=初始溶解氧浓度-五天后溶解氧浓度。
五、实验注意事项1.实验环境应保持清洁，避免外界有机物污染。
2.水样和琼脂糖培养液的配制要准确，避免对实验结果产生干扰。
3.实验过程中应严格控制温度，以确保实验条件一致。
4.混合水样和琼脂糖培养液时要充分搅拌，确保溶解氧均匀分布。
5.溶解氧电极的使用要准确、标定和校准，以获得准确的溶解氧浓度值。
6.实验过程中应注意个人安全，避免接触有害物质。
六、实验结果记录和分析1.记录水样的初始溶解氧浓度和五天后的溶解氧浓度。
2.计算水样的BOD5值，并用于分析水样的有机物污染情况。
五日生化需氧量的测定稀释接种法课件
菌种误差
接种的菌种可能存在误差，如菌种不 纯或活性不足等，需要对菌种进行纯 化和活性验证。
减小误差的方法
校准仪器
对实验中所使用的仪器进行校 准和验证，可以减小仪器误差 。
控制环境
对实验环境中的温度、光照、 湿度等环境因素进行控制，可 以减小环境误差。
重复实验
通过重复实验可以减小随机误 差和偶然误差，提高实验结果 的准确性。
稀释接种法广泛应用于水环境监 测、废水处理等领域，可以用于 测定水样中的生物量、评估水处
理效果等。
接种物浓度选择
01
接种物浓度对测定结果的影响
接种物浓度过低会导致测定结果偏低，过高则会导致测定结果偏高，因
此选择适宜的接种物浓度是准确测定五日生化需氧量的关键。
02 03
接种物浓度的选择方法
选择适宜的接种物浓度可以通过实验的方法确定，如设置不同的接种物 浓度梯度，测定对应的五日生化需氧量值，从而确定最佳的接种物浓度 。
蒸馏水或去离子水，用于稀释接种和培养基制备。
接种菌种
适合的微生物菌种，用于消耗水样中的溶解氧。
实验步骤
1. 准备稀释接种管
将接种环和接种针清洁干净，然后放入恒温水浴中加热灭 菌。每个接种管中加入适量的灭菌培养基，并用灭菌的接 种针将菌种接种到培养基中。
2. 稀释样品
将待测水样进行适当的稀释，以便在接种管中得到适合的 接种量。
规范操作
严格遵守操作规程，确保每个 步骤都准确无误，可以减小操 作误差。
菌种纯化
对菌种进行纯化处理，确保菌 种的纯度和活性，可以减小菌 种误差。
五日生化需氧量的测定-稀释接 种法课件
目录
• 引言 • 稀释接种法原理 • 实验材料和步骤 • 结果分析 • 注意事项和误差分析
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
实验七五日生化需氧量的测定
生化需氧量(BOD)是指在规定的条件下，微生物分解水中某些可氧化物质(主要是有机物)的生物化学过程中消耗溶解氧的量，用以间接表示水中可被微生物降解的有机类物质的含量，是反映有机物污染的重要类别指标之一。
测定BOD 的方法有稀释接种法、微生物传感器法、活性污泥曝气降解法、库仑滴定法、测压法等。
本实验采用稀释接种法测定污水的BOD。
该方法也称五天培养法(BOD5)，即取一定量水样或稀释水样，在20℃±1℃培养五天，分别测定水样培养前、后的溶解氧，二者之差为BOD5值，以氧的mg/L表示，其相关内容参阅教材第二章第五节。
一、实验目的和要求
1．掌握用稀释接种法测定BOD5的基本原理和操作技能。
2．复习第二章第五节中的相关内容，提出为保证测定准确度，应当控制好哪些条件。
二、仪器
1．恒温培养箱。
2．5～20L细口玻璃瓶。
3．1000～2000mL量筒。
4．玻璃搅拌棒：棒长应比所用量筒高度长200mm，棒的底端固定一个直径比量筒直径略小，并有几个小孔的硬橡胶板。
5．溶解氧瓶：200～300mL，带有磨口玻璃塞，并具有供水封用的钟形口。
6．虹吸管：供分取水样和添加稀释水用。
三、试剂
1．磷酸盐缓冲溶液：将8.58磷酸二氢钾(KH2PO4)，2. 75g磷酸氢二钾(K 2HPO4)，33.4g
磷酸氢二钠(Na2HPO4·7H2O)和1.7g氯化铵(NH4C1)溶于水中，稀释至1000mL。
此溶液的pH 应为7.2。
2．硫酸镁溶液：将22.5g硫酸镁(MgSO4·7H2O)溶于水中，稀释至1000mL。
3．氯化钙溶液；将27.5g无水氯化钙溶于水，稀释至1000mL。
4，氯化铁溶液；将0.25g氯化铁(FeCl3·6H2O)溶于水，稀释至1000mL。
5．盐酸溶液(0.5mol/L)：将40mL(ρ=1.18g/mL)盐酸溶于水，稀释至1000mL。
6．氢氧化钠溶液(0.5mol/L)：将20g氢氧化钠溶于水，稀释至1000mL。
7．亚硫酸钠溶液(1/2Na2SO3＝0.025mol/L)；将1.575g亚硫酸钠溶于水，稀释至1000mL。
此溶液不稳定，需每天配制。
8．葡萄糖-谷氨酸标准溶液；将葡萄糖(C6H12O6)和谷氨酸(HOOC-CH2-CH2-CHNH2-COOH)在103℃干燥lh后，各称取150mg溶于水中，移入1000mL容量瓶内并稀释至标线，混合均匀。
此标准溶液临用前配制。
9．稀释水：在5～20L玻璃瓶内装入一定量的水，控制水温在20℃左右。
然后用无油空气压缩机或薄膜泵，将此水曝气2～8h，使水中的溶解氧接近于饱和，也可以鼓入适量纯氧。
瓶口盖以两层经洗涤晾干的纱布，置于20℃培养箱中放置数小时，使水中溶解氧含量达8mg/L左右。
临用前于每升水中加入氯化钙溶液、氯化铁溶液、硫酸镁溶液、磷酸盐缓冲溶液各1mL，并混合均匀。
稀释水的pH值应为7.2，其BOD5应小于0.2mg/L。
10．接种液：可选用以下任一方法获得适用的接种液。
(1) 城市污水，一般采用生活污水，在室温下放置一昼夜，取上层清液供用。
(2) 表层土壤浸出液，取100g花园土壤或植物生长土壤，加入1L水，混合并静置10min，取上清溶液供用。
(3) 用含城市污水的河水或湖水。
(4) 污水处理厂的出水。
(5) 当分析含有难于降解物质的废水时，在排污口下游3～8km处取水样做为废水的驯化接种液。
如无此种水源，可取中和或经适当稀释后的废水进行连续曝气，每天加入少量该种废水，同时加入适量表层土壤或生活污水，使能适应该种废水的微生物大量繁殖。
当水中出现大量絮状物，或检查其化学需氧量的降低值出现突变时，表明适用的微生物已进行繁殖，可用做接种液。
一般驯化过程需要3～8天。
11．接种稀释水；取适量接种液，加于稀释水中，混匀。
每升稀释水中接种液加入量为：生活污水1～10mL；表层土壤浸出液为20～30mL；河水、湖水为10～100mL。
接种稀释水的pH值应为7.2，BOD5值以在0.3～1.0mg/L 之间为宜。
接种稀释水配制后应立即使用。
四、测定步骤
1．水样的预处理
(1) 水样的pH值若超出6.5～7.5范围时，可用盐酸或氢氧化钠稀溶液调节至近于7，但用量不要超过水样体积的0.5%。
若水样的酸度或碱度很高，可改用高浓度的碱或酸液进行中和。
(2) 水样中含有铜、铅、锌、镉、铬、砷、氰等有毒物质时，可使用经驯化的微生物接种液的稀释水进行稀释，或提高稀释倍数，降低毒物的浓度。
(3) 含有少量游离氯的水样，一般放置1～2h，游离氯即可消失。
对于游离氯在短时间不能消散的水样，可加入亚硫酸钠溶液，以除去之。
其加入量的计算方法是：取中和好的水样100mL，加入1+1乙酸10 mL，10％(m/V)碘化钾溶液l mL，混匀。
以淀粉溶液为指示剂，用亚硫酸钠标准溶液滴定游离碘。
根据亚硫酸钠标准溶液消耗的体积及其浓度，计算水样中所需加亚硫酸钠溶液的量。
(4) 从水温较低的水域或富营养化的湖泊采集的水样，可遇到含有过饱和溶解氧，此时应将水样迅速升温至20℃左右，充分振摇，以赶出过饱和的溶解氧。
从水温较高的水域废水排放口取得的水样，则应迅速使其冷却至20℃左右，并充分振摇，使与空气中氧分压接近平衡。
2．水样的测定
(1) 不经稀释水样的测定；溶解氧含量较高、有机物含量较少的地面水，可不经稀释，而直接以虹吸法将约20℃的混匀水样转移至两个溶解氧瓶内，转移过程中应注意不使其产生气泡。
以同样的操作使两个溶解氧瓶充满水样后溢出少许，加塞水封。
瓶不应有气泡。
立即测定其中一瓶溶解氧。
将另一瓶放入培养箱中，在20±1℃培养5d后。
测其溶解氧。
(2) 需经稀释水样的测定：根据实践经验，稀释倍数用下述方法计算：地表水由测得的高锰酸盐指数乘以适当的系数求得(见下表)。
工业废水可由重铬酸钾法测得的COD值确定，通常需作三个稀释比，即使用稀释水时，由COD值分别乘以系数0.075、0.15、0.225，即获得三个稀释倍数；使用接种稀释水时，则分别乘以0.075、0.15和0.25，获得三个稀释倍数。
COD cr值可在测定水样COD过程中，加热回流至60min时，用由校核试验的邻苯二甲酸氢钾溶液按COD测定相同步骤制备的标准色列进行估测。
稀释倍数确定后按下法之一测定水样。
①一般稀释法：按照选定的稀释比例，用虹吸法沿筒壁先引入部分稀释水(或接种稀释水)于1000mL量筒中，加入需要量的均匀水样，再引入稀释水(或接种稀释水)至800mL，用带胶板的玻璃棒小心上下搅匀。
搅拌时勿使搅棒的胶板露出水面，防止产生气泡。
按不经稀释水样的测定步骤，进行装瓶，测定当天溶解氧和培养5d后的溶解氧含量。
另取两个溶解氧瓶，用虹吸法装满稀释水(或接种稀释水)作为空白，分别测定5d前、后的溶解氧含量。
②直接稀释法：直接稀释法是在溶解氧瓶内直接稀释。
在已知两个容积相同(其差小于lmL)的溶解氧瓶内，用虹吸法加入部分稀释水(或接种稀释水)，再加入根据瓶容积和稀释比例计算出的水样量，然后引入稀释水(或接种稀释水)至刚好充满，加塞，勿留气泡于瓶内。
其余操作与上述稀释法相同。
在BOD5测定中，一般采用叠氮化钠修正法测定溶解氧。
如遇干扰物质，应根据具体情况采用其他测定法。
3．BOD5计算
不经稀释直接培养的水样：
BOD5(mg/L)=c1-c2
式中：c l—水样在培养前的溶解氧浓度(mg/L)；
c2—水样经5d培养后，剩余溶解氧浓度(mg/L)。
经稀释后培养的水样：
式中：B1—稀释水(或接种稀释水)在培养前的溶解氧浓度(mg/L)；
B2—稀释水(或接种稀释水)在培养后的溶解氧浓度(mg/L)；
—稀释水(或接种稀释水)在培养液中所占比例；
—水样在培养液中所占比例。
五、注意事项
1．水中有机物的生物氧化过程分为碳化阶段和硝化阶段，测定一般水样的BOD5时，硝化阶段不明显或根本不发生，但对于生物处理池的出水，因其中含有大量硝化细菌，因此，在测定BOD5时也包括了部分含氮化合物的需氧量。
对于这种水样，如只需测定有机物的需氧量，应加入硝化抑制剂，如丙稀基硫脲(ATU，C4H8N2S)等。
2．在两个或三个稀释比的样品中，凡消耗溶解氧大于2mg/L和剩余溶解氧大于lmg/L都有效，计算结果时，应取平均值。
3．为检查稀释水和接种液的质量，以及化验人员的操作技术，可将20mL 葡萄糖-谷氨酸标准溶液用接种稀释水稀释至1000mL，测其BOD5，其结果应在180～230mg/L之间。
否则，应检查接种液、稀释水或操作技术是否存在问题。
六、结果处理
1．以表格形式列出稀释水样和稀释水(或接种稀释水样)在培养前后实测溶解氧数据，计算水样BOD5值。
2．根据实际控制实验条件和操作情况，分析影响测定准确度的因素。