五日生化需氧量的测定
五日生化需氧量(BOD5)的测定
五日生化需氧量（BOD 5）的测定1.用BOD 营养盐缓冲剂粉枕包2.选择样品体积。
详见样品容量3.用移液管轻轻搅匀样品。
向第4.向另一个BOD 瓶中加入稀释水。
这瓶就是稀释水空白。
准备稀释水。
详见稀释水准备。
选择。
一个BOD 瓶中加入最小采样量 注：如果最小采样量在3mL 左 的样品。
右，不需稀释直接测溶解氧。
再向另外4个BOD 瓶中加入不当测生活污水或沉降后的污水 同体积的样品。
做好标记，并等溶解氧浓度约为0mg/L 的样记录下每瓶水样的体积。
品时，这一步可以省略。
5.如果测试CBOD ，向每个瓶中6.向每个瓶中倒稀释水至瓶口7.小心地盖上瓶塞防止气泡。
按8.测试每个瓶中最初的溶解氧浓度。
使用电极、仪器或滴定 法。
若使用滴定法则需准备2套BOD 瓶。
记得测量稀释水空白的溶解氧 浓度。
加入2管硝化抑制剂（约 边缘，沿着瓶壁倒入以防产生 住瓶塞并上下颠倒瓶子数次以 0.16g ）。
阻止氮化合物的氧化， 气泡。
混匀液体。
结果是CBOD 。
9.小心地盖上瓶塞防止气泡。
10.在每个BOD 瓶上置一个塑 料盖。
将BOD 瓶置于20（±1）°C 的培养箱内培养5天。
11.5天后测每瓶中剩余溶解氧 12.计算BOD 值。
（详见计算方法——标准方法） 向每个 BOD 瓶内倒入稀释水作的浓度。
每瓶中剩余溶解氧的浓度至少 为水封。
应为1.0mg/L 。
稀释水准备•为了得到最好的结果，使用经过碱性高锰酸盐蒸馏的水。
•不要使用经离子交换柱所得的去离子水。
柱中的树脂(尤其是新柱)有时会释放有需氧量的有机物。
另外，细菌会在柱中滋生污染稀释水。
•在20°C条件下将蒸馏水储存在干净的容器里并放在培养箱中。
向容器中倒入蒸馏水至3/4体积，并摇晃容器使得空气进入水中饱和，或者较松地盖住容器并放置 24 小时或更久，以使氧气溶解。
•使用小型玻璃抽水泵或者气体压缩机使水中的空气饱和。
确保空气是经无菌过滤器过滤的。
五日生化需氧量(BOD5)的测定
五日生化需氧量(BOD5)的测定日生五需化量(氧od5)的测b定、实验目一的掌生活握污或工业水废水日五生需化量氧测的。
定二、实验原理生化氧需是指量在好氧件条下微生，物分解中的水机物有生物化的过程学中消所耗解溶氧的量此生化。
全程进过行时的间很，如在长02下℃养，培完此过成程1需00多。
天目国前外内都采20℃用养培天五为检验作标指，为五称生日需氧量(化od5b。
)分测别样品定培前养的溶解后氧二者之，差即为odb值，以氧5的g/l表示m 。
水样稀用释稀释，水定合确的倍数非适重常。
稀要释数倍大或太太，小五则培天养后余剩的溶解太氧多或太，甚至为少零都，不得能可到的靠果结。
释的稀程应使五天培养度中消耗所溶解的氧大2m于g/l而剩余,溶解氧在1g/l以上。
m此在前提件下，稀条释倍可数估以算，也可依据经验以法来值确定对于不。
含或含少生微的物水，废测在bod定时应进5行接种。
三实、验仪培器箱，大养玻瓶璃1，000m量筒，blo培养瓶d各，规的格(胖、肚刻)度液移管等。
、四实验试剂除测定溶解所需氧试的外，还需剂列下试剂：化钙溶液氯三，氯化溶铁，液酸镁溶硫液，酸盐磷缓冲溶液。
等、实验五骤1.步2.3.稀释的配制水使蒸：水的馏解氧为2溶℃0的时饱和解溶氧在这含有饱，和溶氧蒸解水中馏，每00lm0加入l上述种四液各溶1l。
m测定水的c污odn值或cdr。
值调节水ph值至样中性。
样水培液养配制的：()1据根得测的cod值计出算释稀数倍，一般时同3~做4种释稀倍。
数2)(用即吸虹把一些先释水引稀入1000lm量的中(约所需体积的筒1/)，3用再液移管吸所需取水的体积样，加量筒入。
移取中样水3()稀用释水释到所稀需的积体注意（本次：验实稀释的总体积为700m所），小心摇l匀将，配此的好样用虹吸法水入引带号编的2培个瓶养中，至全完充，满好盖盖，水子封。
此为一种稀第释倍的数培液(在养整操作个过程应免产生避气泡。
其)的几种余释稀倍数养液培，亦按法上作操。
五日生化需氧量的测定
实验七五日生化需氧量的测定生化需氧量(BOD)是指在规定的条件下，微生物分解水中某些可氧化物质(主要是有机物)的生物化学过程中消耗溶解氧的量，用以间接表示水中可被微生物降解的有机类物质的含量，是反映有机物污染的重要类别指标之一。
测定BOD 的方法有稀释接种法、微生物传感器法、活性污泥曝气降解法、库仑滴定法、测压法等。
本实验采用稀释接种法测定污水的BOD。
该方法也称五天培养法(BOD5)，即取一定量水样或稀释水样，在20℃±1℃培养五天，分别测定水样培养前、后的溶解氧，二者之差为BOD5值，以氧的mg/L表示，其相关内容参阅教材第二章第五节。
一、实验目的和要求1．掌握用稀释接种法测定BOD5的基本原理和操作技能。
2．复习第二章第五节中的相关内容，提出为保证测定准确度，应当控制好哪些条件。
二、仪器1．恒温培养箱。
2．5～20L细口玻璃瓶。
3．1000～2000mL量筒。
4．玻璃搅拌棒：棒长应比所用量筒高度长200mm，棒的底端固定一个直径比量筒直径略小，并有几个小孔的硬橡胶板。
5．溶解氧瓶：200～300mL，带有磨口玻璃塞，并具有供水封用的钟形口。
6．虹吸管：供分取水样和添加稀释水用。
三、试剂1．磷酸盐缓冲溶液：将8.58磷酸二氢钾(KH2PO4)，2. 75g磷酸氢二钾(K 2HPO4)，33.4g磷酸氢二钠(Na2HPO4·7H2O)和1.7g氯化铵(NH4C1)溶于水中，稀释至1000mL。
此溶液的pH 应为7.2。
2．硫酸镁溶液：将22.5g硫酸镁(MgSO4·7H2O)溶于水中，稀释至1000mL。
3．氯化钙溶液；将27.5g无水氯化钙溶于水，稀释至1000mL。
4，氯化铁溶液；将0.25g氯化铁(FeCl3·6H2O)溶于水，稀释至1000mL。
5．盐酸溶液(0.5mol/L)：将40mL(ρ=1.18g/mL)盐酸溶于水，稀释至1000mL。
6．氢氧化钠溶液(0.5mol/L)：将20g氢氧化钠溶于水，稀释至1000mL。
实验五日生化需氧量的测定
1、记录与计算 a. 将每种水样测定结果及时记录在表1中。 b. 按下式计算五日生化需氧量
BOD 5 ( D1 D2 ) ( D3 D4 ) f1 f2
式中：BOD5－五日生化需氧量mg/L； D1 －样品在培养前的溶解氧mg/L； D2－样品 在培养后的溶解氧mg/L； D3－稀释水在培 养前的溶解氧mg/L；D －稀释水在培养后的 V4 V 溶解，mg/L； f1= V V ，f2= V V ，其中 V3为稀释水的体积（mL），V4为水样的体积 （mL）。
2．试剂 氯化钙溶液（27.5g/L）：溶解27.5gCaCl2于水中 稀释至1L。 三氯化铁溶液（0.25g/L）：溶解 0.25gFeCl3· 6H2O于水中，稀释至1L。 硫酸镁溶液（22.5g/L）：溶液 22.5MgSO4· 7H2O于水中，稀释至1L。 磷酸盐缓冲溶液（pH=7.2）：溶解8.5g KH2PO4, 21.75g K2HPO4, 33.4g Na2HPO4· 7H2O和 1.7g NH4Cl于约500mL水中，稀释至1L。 测定DO和CODMn所需试剂。
3
4
3
4
3
4
4．BOD2（二日生化需氧量）的测定与BOD5一 样，只是培养温度为30℃，培养时间为二天。 BOD2与BOD5之间换算有一关系式：
BOD
20 5
1.171 BOD
30 2
（二）CODMn的测定
方法原理： 在碱性加热条件下，用已知量并且是过量的 高锰酸钾，氧化海水中的需氧物质，然后在硫酸 酸性条件下，用碘化钾还原过量的高锰酸钾和二 氧化锰，所生成的游离碘用硫代硫酸钠标准溶液 滴定。
(3)
对特定海区水流流速是可测值，因此可并入 常数项，即令K1=k1/V，则（3）式可改写成：
五日生化需氧量的测定
实验七五日生化需氧量的测定生化需氧量(BOD)是指在规定的条件下，微生物分解水中某些可氧化物质(主要是有机物)的生物化学过程中消耗溶解氧的量，用以间接表示水中可被微生物降解的有机类物质的含量，是反映有机物污染的重要类别指标之一。
测定BOD 的方法有稀释接种法、微生物传感器法、活性污泥曝气降解法、库仑滴定法、测压法等。
本实验采用稀释接种法测定污水的BOD。
该方法也称五天培养法(BOD5)，即取一定量水样或稀释水样，在20℃±1℃培养五天，分别测定水样培养前、后的溶解氧，二者之差为BOD5值，以氧的mg/L表示，其相关容参阅教材第二章第五节。
一、实验目的和要求1．掌握用稀释接种法测定BOD5的基本原理和操作技能。
2．复习第二章第五节中的相关容，提出为保证测定准确度，应当控制好哪些条件。
二、仪器1．恒温培养箱。
2．5～20L细口玻璃瓶。
3．1000～2000mL量筒。
4．玻璃搅拌棒：棒长应比所用量筒高度长200mm，棒的底端固定一个直径比量筒直径略小，并有几个小孔的硬橡胶板。
5．溶解氧瓶：200～300mL，带有磨口玻璃塞，并具有供水封用的钟形口。
6．虹吸管：供分取水样和添加稀释水用。
三、试剂1．磷酸盐缓冲溶液：将8.58磷酸二氢钾(KH2PO4)，2. 75g磷酸氢二钾(K2HPO4)，33.4g磷酸氢二钠(Na2HPO4·7H2O)和1.7g氯化铵(NH4C1)溶于水中，稀释至1000mL。
此溶液的pH 应为7.2。
2．硫酸镁溶液：将22.5g硫酸镁(MgSO4·7H2O)溶于水中，稀释至1000mL。
3．氯化钙溶液；将27.5g无水氯化钙溶于水，稀释至1000mL。
4，氯化铁溶液；将0.25g氯化铁(FeCl3·6H2O)溶于水，稀释至1000mL。
5．盐酸溶液(0.5mol/L)：将40mL(ρ=1.18g/mL)盐酸溶于水，稀释至1000mL。
6．氢氧化钠溶液(0.5mol/L)：将20g氢氧化钠溶于水，稀释至1000mL。
五日生化需氧量的测定分析
2.5.2
抑制硝化作用 水中有机物的生物氧化过程可分为两 个阶段，第一阶段主要是碳氢化合物被氧化， 称为碳化阶段，在20℃下约需20d才能完成， BOD测定的一般是该阶段的耗氧量。第二 阶段是含氮化合物及部分氨氧化为亚硝酸盐 及硝酸盐，称为硝化阶段，在20℃约需 100d 。对一般水样，测定BOD5时的硝化作 用并不显著。但对于生化处理的出水，因其 含有大量的硝化细菌，在测定BOD5时也包 括了部分含氮化合物的需氧量，因此需要加 入硝化抑制剂，抑制硝化作用对BOD5测定 的影响。可在每升稀释水样中加入2ml浓度 为500mg /L的丙烯基硫脲。
由高锰酸盐指数与一定的系数的乘积 求得的稀释倍数
高锰酸盐指数（mg/L）
＜5 5-10
系数
0.2 0.3
高锰酸盐指数（mg/L）
10-20 ＞20
系数
0.4、0.6 0.5、0.7、1.0
对地表水稀释倍数的确定，也同样如此。比如， 高锰酸盐指数的浓度为5-10mg/L之间时，我们可 以在系数0.2-0.3之间，再增加0.22，0.25，0.28等 几个系数。
2. 稀释接种法测定BOD5时需注意的问题
2.1 样品的采集及保存 采集样品时应充满并密封于瓶中，在0-4℃ 条件下进行保存，一般应在6h内进行分析。 若需要远距离转运，在任何情况下，贮存时 间不应超过24h。 2.2 时间的影响 样品中的BOD5浓度易随时间的变化而变化， 样品储存时间、测定过程时间和培养时间均 会对测定结果产生影响。这就要求我们在进 行BOD5的测定时需要严格控制培养时间和 样品储存时间。
上清液的接种量，按水样的性质确定。 啤酒厂： 接种量一般以7-8ml/L水为宜。 印染废水：上清液2ml/L,再加入7ml/L驯化接种液。 葡萄糖谷氨酸标准溶液：接种量一般以2-3ml/L水 为宜。
化验室测定水质五日生化需氧量操作规程
化验室测定水质五日生化需氧量操作规程一、实验目的测定水样的五日生化需氧量（BOD5），了解水样的有机物污染程度。
二、实验原理五日生化需氧量（BOD5）是指一定温度下，在条件适宜的细菌作用下，有机物被生物氧化所需的氧量。
实验中，将水样与添加细菌的琼脂糖培养液混合并置于恒温器内，五天后再测定混合液中的溶解氧浓度，根据溶解氧浓度差计算得到水样的BOD5值。
三、实验仪器和试剂1.恒温器：可控制温度为20±1℃。
2.恒温水浴槽：用于调节实验所需恒定温度。
3.溶解氧电极：用于测量水样中溶解氧浓度。
4.密封玻璃瓶：容量为300mL，用于混合水样和琼脂糖培养液。
5.搅拌器：用于溶解氧的均匀分布。
6.pH计：用于测量水样的酸碱度。
7.琼脂糖培养液：配制培养细菌的营养液。
四、实验步骤1.准备实验设备并调节恒定温度为20±1℃。
2.选取适当的密封玻璃瓶，并清洗干净。
3.取300mL水样并过滤，以去除不溶物。
4.在过滤的水样中测量初始溶解氧浓度，并记录。
5.在密封玻璃瓶中加入200mL过滤的水样和100mL琼脂糖培养液。
6.用搅拌器均匀混合水样和琼脂糖培养液。
7.将密封玻璃瓶置于恒温器内，保持20±1℃的温度。
8.在五天后取出密封玻璃瓶，使用溶解氧电极测量溶解氧浓度。
9.计算BOD5值：BOD5=初始溶解氧浓度-五天后溶解氧浓度。
五、实验注意事项1.实验环境应保持清洁，避免外界有机物污染。
2.水样和琼脂糖培养液的配制要准确，避免对实验结果产生干扰。
3.实验过程中应严格控制温度，以确保实验条件一致。
4.混合水样和琼脂糖培养液时要充分搅拌，确保溶解氧均匀分布。
5.溶解氧电极的使用要准确、标定和校准，以获得准确的溶解氧浓度值。
6.实验过程中应注意个人安全，避免接触有害物质。
六、实验结果记录和分析1.记录水样的初始溶解氧浓度和五天后的溶解氧浓度。
2.计算水样的BOD5值，并用于分析水样的有机物污染情况。
五日生化需氧量(BOD5)的测定
• 在已知两个容积相同（其差<1mL）的溶解氧 瓶内，用虹吸法加入部分稀释水（或接种稀 释水）；
• 再加入根据瓶容积和稀释比例计算出的水样 量；
• 然后用稀释水（或接种稀释水）使之刚好充 满后加塞。
• 注意不要将气泡留在瓶内。
直接稀释法实验步骤
根据 CODcr 值确 定稀 释倍 数
(NH4Cl)溶于水中，稀释至1000mL。此 溶液的pH应为7.2。
试剂
名称 氯化钙溶液 氯化铁溶液
(1+5)硫酸溶液
配制方法及浓度 将27.5g无水氯化钙溶于水， 稀释至1000mL。
将0.25g六水合氯化铁 （Fe3Cl ·6H2O）溶于水，稀 释至1000mL。
实验步骤
1. 水样预处理 2. 不稀释水样的测定 3．需经稀释水样的测定 4. 溶解氧(DO)的测定 5. BOD5测定结果计算 6. 硫代硫酸钠溶液标定 7．一般稀释水制备 8． 接种稀释液制备
调整 被测 水样 的pH
直接 稀释 法采 集稀 释水 2瓶
1瓶测溶解氧 1瓶放入培养箱
溶解氧(DO)的测定(碘量法)
• 用溶解氧瓶虹吸法采集2瓶空白水样；
• 用溶解氧瓶虹吸法采集2瓶被测水样， 分别测定当天的溶解氧和培养5天后的 溶解氧。
溶解氧的固定
虹吸法采集 水样转移到 溶解氧瓶
将移液管插
入液面下加 入1ml硫酸锰 溶液
0.02500mol/L。
试剂
名称
配制方法及浓度
氢氧化 将20g氢氧化钠溶于水,稀释至 钠溶液 1000 mL,浓度为0.5mol/L。
硫酸镁 将22.5g七水合硫酸镁(MgSO4.7H2O)溶 溶液 于水中，稀释至1000mL。
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三、仪器与试剂
恒温培养箱[（20+1）℃]。 20L细口玻璃瓶。 1000～2000mL量筒。 特制搅拌棒，在玻璃下端安装一个2mm厚，大小
硫酸镁溶液。称取22.5g硫酸镁（MgSO4·7H2O）,溶 于水中，稀释至1000mL。
磷酸盐溶液。称取8.5g磷酸二氢钾（KH2PO4）、 21.75g磷酸氢二钾（K2HPO4）、33.4g磷酸氢二钠 （NaHPO4·7H2O）和1.7g氯化氨（NH4Cl），溶于约 500mL水中，稀释至1000mL并混合均匀，此缓冲溶 液的pH应为7.2。
水体发生生物化学过程必须具备：
水体中存在能降解有机物的好氧微生物。对易降解的有 机物，如碳水化合物、脂肪酸、油脂等，一般微生物均 能将其降解，如硝基或硫酸取代芳烃等则必须进行生 物菌种驯化。
有足够的溶解氧。为此，实验用的稀释水要充分曝气以 达到氧的饱和或接近饱和。稀释还可以降低水中有机污 染物的浓度，使整个分解过程在有足够的溶解氧的条件 下进行。
用同样方法配置另两份稀释比水样。
3、对照样的配置 另取两个有编号的碘量瓶加入稀释水或接种稀释
水作为空白。
4、培养 将各稀释比的水样，稀释水（或接种稀释水）空
白各取一瓶放入20+1℃的培养箱内培养5d，培养 过程中需每天添加封口水。
5、溶解氧的测定 参见实验 “水中溶解氧的测定”。
用碘量法测定未经培养的各份稀释比的水样和空白 水样中的剩余溶解氧。
用同样方法测定经培养5d后，各份稀释水样和溶解 水样中的剩余溶解氧。
五、数据处理
根据公式计算BOD5，并以表格形式表示测定数据和结果。
BOD5（以O2计）（mg/L）=
[(D1-D2)-(B1-B2)]×
f1 f2
式中：
D1—稀释水样培养前的溶解氧量，mg/L；
D2—稀释水样培养5d后剩余溶解氧量，mg/L；
B1—稀释水（或接种稀释水）培养前的溶解氧量，mg/L；
四、实验步骤
1、水样的采集、存储和预处理 采集水样于适当大小的玻璃瓶中（根据水质情况而定），
用玻璃塞塞紧，且不留气泡。采样后，需在2h内测定；否 则，应在4℃或4℃以下保存，且应在采集后10h内测定。 用1mol/L氢氧化钠溶液或1mol/L盐酸溶液调节pH值接近7。 游离氯大于0.10mg/L的水样，加亚硫酸钠或硫代硫酸钠除 去[见注意事项1]。 确定稀释倍数[见注意事项2]。
接种稀释水。取适量生活污水于20℃放置24~36h， 上层清液即为接种液，每升稀释水中加入1~3mL 接 种液即为接种稀释水。接种稀释水pH值应为7.2，其 BOD5值以在0.3～1.0mg/L之间为宜，接种稀释水配 制后应立即使用。对某些特殊工业废水最好加入专门 培养驯化过的菌种。
其他溶液。与碘量法测定溶解氧实验相同的硫酸锰溶 液、碱性碘化钾溶液、（1+5）硫酸、0.025mol硫代 硫酸钠标准溶液和1%的淀粉溶液（详见实验四“水 中溶解氧的测定”）。
实验六 五日生化需氧量的测定——BOD5
一、目的和要求
了解BOD5测定的意义及稀释与接种法测BOD5的 基本原理。
掌握本方法操作技能，如稀释水的制备、稀释倍 数选择、稀释水的校核和溶解氧的测定等。
二、原理
生化需氧量是指在好氧条件下，微生物分解存在水中的有 机物质的生物化学过程中所需的溶解氧量。
2、水样的稀释
根据确定的稀释倍数，用虹吸法把一定量的污水引入 1000mL量筒中，再沿壁慢慢加入所需稀释水（接种 稀释水），用特制搅拌棒在水面以下慢慢搅匀（不应 产生气泡），然后沿瓶壁慢慢倾入两个预先编号、体 积相同的(250mL)的碘量瓶中，直到充满后溢出少许 为止。盖严并水封，注意瓶内不有气泡。
和量筒相匹配的有孔橡皮片。 250~300mL碘量瓶，带有磨口玻璃塞并具有供水
封用的钟形口。 虹吸管，供分取水样和添加稀释水用。
氯化钙溶液。称取27.5g无水氯化钙，溶于水中，稀 释至1000mL。
三氯化铁溶液。称取0.25g三氯化铁（FeCl3·6H2O）， 溶于水中，稀释至1000mL。
葡萄糖-谷氨酸溶液。分别称取150mg葡萄糖和谷 氨酸（均于130℃烘过1h），溶于水中，稀释至 1000mL。
盐酸溶液，0.5mol/L。
氢氧化钠溶液，0.5mol/L。
稀释水。在20L玻璃瓶内加入18L水，控制水温在 20℃左右，用抽气或无油压缩机通入清洁空气 2~8h，使水中溶解氧饱和或接近饱和（20℃时溶 解氧大于8mg/L）。使用前，每升水中加入氯化钙 溶液、三氯化铁溶液、硫酸镁溶液和磷酸盐溶液各 1mL，混合均匀。稀释水pH值应为7.2，其BOD5值 应小于0.2mg/L。
根据参加反应的物质和最终生成的物质，可用下列的反应 式来概括生物化学反应过程：
酶
6C6H12O6+16O2+4NH3 微生物
4C5H7O2N+16CO2+28H2O
有机污染物
CO2+H2O+NH3 O2
微生物分解有机物是一个缓慢的过程，要把可分解 的有机物全部分解掉常需要20d以上的时间，微生物的活 动与温度有关，所以测定生化需氧量时，常以20℃作为 测定的标准温度。一般来说，在第5天消耗的氧量大约是 总需氧量的70%，为便于测定，目前国内外普遍采用 20℃培养5d所需溶解氧含量作为指标，单位以的mg/L表 示，简称BOD5。
有微生物生长所需的营养物质。本实验加入了一定量的 无机营养物物质，如磷盐酸、钙盐、镁盐和铁盐等。
稀释法测定BOD5是将水样经过适当稀释后，使其中含 有足够的溶解氧供微生物5d生化需氧的要求，将此水样 分成两份。一份测定培养前的溶解氧；另一份放入20℃ 恒温箱内培养5d后测定溶解氧，两者的差值即为BOD5。