MMFSCNG食品中栀子黄的测定
高效液相色谱法测定食品中的栀子黄的研究
高效液相色谱法测定食品中的栀子黄的研究
丁艳;孙益民;马芝森;王玉;袁顺香;沈伟丽
【期刊名称】《食品科学》
【年(卷),期】2006(027)002
【摘要】对国家标准(GB/T5009.149-2003)中的高效液相色谱测定食品中栀子黄进行了研究,通过不同溶液中栀子黄色素含量的分析,用吸光度法作对照.结果表明:国标中以栀子苷为对照品,用高效液相色谱法测定食品中的栀子黄色素不够合理.为建立成熟的定性、定量栀子黄色素的方法奠定了基础.
【总页数】4页(P199-202)
【作者】丁艳;孙益民;马芝森;王玉;袁顺香;沈伟丽
【作者单位】安徽师范大学化学与材料科学学院,安徽,芜湖,241000;安徽师范大学化学与材料科学学院,安徽,芜湖,241000;安徽省功能性分子固体实验室,安徽,芜湖,241000;安徽师范大学化学与材料科学学院,安徽,芜湖,241000;安徽师范大学化学与材料科学学院,安徽,芜湖,241000;安徽师范大学化学与材料科学学院,安徽,芜湖,241000;安徽省功能性分子固体实验室,安徽,芜湖,241000
【正文语种】中文
【中图分类】TS207.3
【相关文献】
1.高效液相色谱法测定肉制品中栀子黄色素含量 [J], 周伟娥;凌云;张元;李绍辉;蒋受军;姚美伊;李红娜;郑阳;张峰
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栀子中黄酮类化合物的提取和含量测定
栀子中黄酮类化合物的提取和含量测定付克;王书妍;包玉敏;夏禹【摘要】为了进一步开发和利用我地区丰富的蒙药材资源,研究了栀子中总黄酮的提取条件,以亚硝酸钠—硝酸铝—氢氧化钠为体系,用分光光度法测定总黄酮的含量.结果表明,超声提取的最佳条件是使用70％乙醇、超声提取二次、超声对间30min;总黄酮的含量为3.5mg·g-1,样品的回收率在96.0％～ 101.7％.此结果为栀子药效功能的进一步研究、资源开发和利用提供了科学的依据.【期刊名称】《内蒙古民族大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2012(027)005【总页数】3页(P530-532)【关键词】栀子;黄酮;分光光度法【作者】付克;王书妍;包玉敏;夏禹【作者单位】内蒙古民族大学化学化工学院,内蒙古通辽028043;内蒙古民族大学化学化工学院,内蒙古通辽028043;内蒙古民族大学化学化工学院,内蒙古通辽028043;内蒙古民族大学化学化工学院,内蒙古通辽028043【正文语种】中文【中图分类】TQ461蒙药在医学研究与疾病控制与预防中有着很重要的作用，目前，对蒙药的研究多为利用现代科学手段，如分光光度、气相色谱、液相色谱、核磁共振法等对蒙药中主要化学成分的分析和研究.黄酮类化合物指两个芳环通过三个碳链相互连接而成的天然产物，大多数有色.它具有抑菌消炎、抗氧化、抗衰老、抗癌防癌、抗病毒等功效.栀子（Gardenia jasminoidesEllis.）是茜草科（Rubiaceae）栀子属常绿灌木,又名山栀子、黄栀子、黄枝子等,主产于浙江、福建、江西、湖南、广东.栀子的干燥成熟果实入药称“栀子”,为常用蒙药,其性寒味苦,无毒,主归心、肺、三焦经,具有泻火除烦、清热利尿、凉血解毒等功效.临床广泛用于热病心烦、黄疸尿赤、血淋涩痛、血热吐衄、目赤肿痛、火毒疮疡等〔2〕疾病的治疗.本实验主要对蒙药材栀子中黄酮类化合物的提取和含量的测定进行了研究.1 实验部分1.1 仪器、试剂与实验材料1.1.1 仪器：KQ3200V型超声波清洗器（昆山市超生仪器有限公司），722分光光度计（上海第三分析仪器厂），FA2104N电子天平（上海民桥精密科学仪器有限公司）.1.1.2 试剂：芦丁（中国药品生物制品鉴定所，批号：10080-200306），乙醇、亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠等试剂均为分析纯（A.R.），实验用水为二次石英亚沸蒸馏水.1.1.3 材料：栀子（安国神禾中药材饮片责任有限公司，批号：201006034，产地江西，购于：通辽蒙王医药责任有限公司）.1.2 实验方法1.2.1 标准溶液和标准曲线标准品溶液的配制.准确称取芦丁标准品25.00 mg于小烧杯中，加入少量80%乙醇，超声溶解，定容至100 mL容量瓶中，摇匀，得芦丁标准溶液，浓度为0.25 mg.mL-1.标准曲线的绘制.准确称取芦丁标准品溶液0.00、0.40、0.80、1.20、1.60、2.00、2.40 mL分别置于7支10 mL的比色管中，用水稀释至2.40 mL，各加入5%亚硝酸钠0.40 mL,放置6 min，加10%硝酸铝0.40 mL，混匀，放置6 min，加4.3%氢氧化钠4.00 mL，最后用水稀释至刻度，混匀，放置15 min.以试剂空白为参比，在508 nm处测定吸光值（A），以A为纵坐标，浓度C为横坐标绘制标准曲线【4】，得回归方程：A=-0.01587+1.0434C（mg/10mL），r=0.9993.1.2.2 黄酮类化合物的提取和测定方法样品制备.取栀子粉碎，80℃烘干1 h，将4.9982 g干燥后的栀子放于100 mL锥形瓶中，加入70%乙醇30 mL，浸泡24 h，超声提取〔5〕、过滤，用相同方法处理滤渣，合并滤液，滤液用该浓度的乙醇定容于100 mL容量瓶，得到黄酮化合物的提取液，待测.图1 标准曲线Figure 1 Standard curve测定方法.吸取提取液适量于10mL比色管中，加水至2.40mL，加入5%亚硝酸钠0.40mL,放置6min，加10%硝酸铝0.40mL混匀，放置6min，加4.3%氢氧化钠4.00mL,最后用水稀释至刻度，混匀，放置15min.以试剂空白为参比，在510nm 处测定.吸光度值（A）带入回归方程，计算黄酮含量〔6〕.1.2.3 回收率的测定方法吸取提取液适量于10mL比色管，加芦丁标准液0.50mL，按1.2.2.2步骤操作，得吸光度值，根据下列公式计算回收率：2 结果讨论2.1 提取条件的选择（单因素试验）黄酮类化合物用水浸提，提取物杂质多，后处理较麻烦.甲醇、丙醇等作为提取剂，虽然效果不错，但二者有毒.乙醇浸提的选择性好，渗透性强，浸出率高本实验选用一定浓度的乙醇为提取剂.2.1.1 乙醇浓度对黄酮提取率的影响.在5.0000g样品中，分别用60%、70%、80%的乙醇，按1.2.2.1操作，提取40min，提取2次，测其吸光度值（A），结果见表1.表1乙醇的浓度对黄酮提取率的影响Table1 The effect of the ethanol concentration on the extraction rate of flavonoids乙醇浓度/%60 70 80提取次数/次2 2 2黄酮含量/mg 18.60 19.46 19.30从表1中得出，用70%的乙醇提取，黄酮的总提取率最高.2.1.2 超声辅助提取次数对黄酮提取率的影响.按2.1.1操作，提取1-3次，结果见表2.表2 超声辅助提取次数对黄酮提取率的影响Table 2 The effect of Ultrasound-assisted extraction times on the extraction rate of flavonoids乙醇浓度/%70 70 70提取次数/次1 2 3黄酮含量/mg 17.35 19.58 19.40从表1、2中得出，用70%乙醇，提取2次总黄酮的提取率高.2.1.3 超声辅助提取时间对黄酮提取率的影响.按2.1.1操作，取样品2份，分别用70%乙醇30mL浸泡.提取时间分别为20min、30min、60min，结果见表3.表3 超声辅助提取时间对黄酮提取率的影响Table3 The effect of Ultrasound-assisted extraction time on the extraction rate of flavonoids黄酮含量/mg 17.28 19.86 19.80提取时间/min 20 30 60提取次数/次2 2 2从表1、2、3得出，用70%乙醇，超声提取2次，时间为30min，栀子中黄酮提取率最高.2.2 样品测定结果2.2.1 吸收波长的选择.取一定体积芦丁标准液，在波长为450～600nm之间，每隔10nm测定吸光度，得波长为510nm吸光度最大，因此最佳吸收波长为510nm.2.2.2 黄酮的含量.取待测液3.00mL按1.2.2.2操作，结果见表4.表4 样品中总黄酮含量Table4 Total flavonoid content in the sample?2.2.3 回收率测定.为研究方法的可靠性，进行了加标回收试验，结果见表5.表5 样品回收率Table 5 Sample recovery?3 结论3.1 提取条件的选择超声提取栀子中黄酮类化合物的最佳条件为用70%乙醇为溶剂、超声提取2次、超声时间为30min.3.2 栀子黄酮类化合物的含量栀子中含有黄酮类化合物，总黄酮的含量为3.5mg/g.回收率为96.0%～101.7%. 参考文献【相关文献】〔1〕荣国斌编著.高等有机化学基础（修订本）〔M〕.上海：华东理工大学出版社，2001. 〔2〕孟祥乐,李红伟,李颜，等.栀子化学成分及其药理作用研究进展〔J〕.中国新药杂志，2011，20（11）：959-967.〔3〕李文芳,胡立明,陈才水,等.甘薯地上部分黄酮类化合物含量的变化〔J〕.天然产物研究与开发,2006，18（2）：304-307.〔4〕兰昌云，吴虹霁，陈媛,等.超声法提取槐花中总黄酮的最佳工艺研究〔J〕.天然产物研究与开发，2005，17（1）：55-58.〔5〕杨小凤,章志刚,余云,等.果皮中总黄酮的提取及含量的测定〔J〕.光谱实验室，2006，23（4）：810-814.。
液相色谱法测定酱油中栀子黄的含量
液相色谱法测定酱油中栀子黄的含量作者：***来源：《食品安全导刊》2024年第07期作者简介：黄锦波（1988—），男，广东信宜人，本科，助理工程师。
研究方向：食品、化妆品与药品领域的理化分析与功效。
摘要：目的：建立液相色谱法测定酱油中栀子黄含量的方法。
方法：以栀子黄的表征成分（藏花素与藏花酸）为目标物，以Hypersil BDS C18柱为分离柱，以甲醇与1%乙酸水为流动相，梯度洗脱，检测波长为435 nm，外标法定量。
结果：藏花素与藏花酸的色谱峰峰形良好，在各自的线性范围内线性关系良好，相关系数（R2）均大于0.999；回收率在90.52%～103.03%，相对标准偏差在0.5%～4.5%，方法检出限分别为2.13 mg·kg-1、5.57 mg·kg-1。
结论：该方法前处理过程较为简单，结果重现性好、灵敏度高，回收率符合要求，适用于酱油中栀子黄含量的测定。
关键词：液相色谱法；酱油；栀子黄；藏花素；藏花酸Determination of Gardenia Yellow in Soy Sauce byLiquid ChromatographyHUANG Jinbo（Guangzhou Golden Assessment Testing Institute Co.， Ltd.， Guangzhou 510000， China）Abstract： Objective： To establish a liquid chromatography method for the determination of gardenia yellow content in soy sauce. Method： The characterization components of gardenia yellow （crocin and crocetin） were used as the target substances， Hypersil BDS C18 column was used as the separation column， methanol and 1% acetic acid water were used as mobile phases， the detection wavelength was 435 nm， and the quantification method was externally standardized. Result： The chromatographic peaks of crocin and crocetin were well shaped， and the linear relationship （R2） was more than 0.999， the recovery rate was 90.52% to 103.03%， the relative standard deviation was 0.5% to 4.5%， and the detection limits of the method were 2.13 mg·kg-1 and 5.57 mg·kg-1， respectively. Conclusion： The pretreatment process of this method is relatively simple， the results are reproducible， the sensitivity is high， and the recovery rate meets the requirements， which is suitable for the determination of gardenia yellow content in soy sauce.Keywords： liquid chromatography; soy sauce; gardenia yellow; crocin; crocetin醬油是以黄豆为原料，经发酵等工艺制作而成，是我国历史悠久的传统美食[1]。
高效液相色谱法测定食品中栀子黄
图８添加值与平均值对比图
６结论 ６．１保证定性的准确性和可靠性
定性的准确是检验结果准确与否的关键，作为检验机构， 应将检测结果的定性问题放到一个新的高度考虑。本次质控 工作给定了检测项目的范围，因此在定性问题上比较容易。 ６．２溶液浓度的准确
标准物质直接关系到最终数据的准确与否，应该加强对 操作人员基本功的训练，保证标准溶液浓度配制的准确性，对 于在其他单位购置的标准溶液应注意其单位的信誉度。本次 质控工作统一发放了标准品，在定量问题上各单位应不存在 大的差别。 ６．３加强对检验人员基本功的培养
栀子黄（Ｃａｐｅ ｊａｓｍｉｎｅ ｙｅｌｌｏｗ。俗称黄栀子），由栀子果实、 香椿属植物的花、毛蕊花属植物的花、藏红花的花等制取的一 种食用天然黄色素。主要成分为藏花酸和藏花素。其黄色素 为糖苷ｄ一藏花素，属于类胡萝卜素系中藏花酸（Ｃ加Ｈ甜０４）的 二龙胆糖脂。ａ一藏花素水解为藏花酸和葡萄糖。Ｏｔ一藏花素 为红棕色针状晶体，微臭，熔点１８０℃，易溶于热水，成为橙色 溶液，微溶于无水乙醇、乙醚及其他有机溶剂，不溶于油脂。本 文研究运用了高效液相色谱法测定食品中的藏花酸和藏花素 的含量，由其含量之和计算样品中栀子黄含量，本方法色谱峰 分离效果好，具有良好的稳定性和重现性，具有方便、快捷、灵 敏度高的特点。
至１０ ｍｌ，相当于Ｏ，２０，４０，６０，８０，１００ ０ｓ／ｎ［１ｌ，作为标准系列应
［作者简介］李永利（１９７２一）。男，学士，主管技师，主要从事卫 生理化检验工作。
用液。 １．２．２色谱条件色谱柱ＺＯＲＢＡＸ ＮＨ２ ４．６×１５０ ｍｍ；柱温： ２５℃；流动相：乙腈：水（８０：２０）；流速：０．８０ ｍｌ／ｍｉｎ；进样量： １０山；紫外检测器：４３０ ｎｍ。 １．２．３样品制备处理称取５．００ ｇ粉碎样品于三角烧瓶中， 加２０ ｍｌ水溶解，水浴加热回流３０ ｍｉｎ，放冷，定容至刻度，过 ０．４５¨脚微孔滤膜上机测定。 １．２．４样品测定取已制备好的试样１０ ｍ，于标准溶液测定 相同的色谱条件下进行分析测定，保留时间定性，峰面积定 量。
食品安全国家标准 食品中栀子黄的测定(编制说明)
《食品安全国家标准食品中栀子黄的测定》（征求意见稿）编制说明一、标准起草的基本情况（包括简要的起草过程、主要起草单位、起草人等）本标准对《食品安全国家标准食品中栀子黄的测定（GB/T5009.149-2003）》进行了修订，使修订后的标准满足目前GB 2760-2011对栀子黄的使用量要求。
主要起草单位为中国检验检疫科学研究院，起草人为凌云、孙利、邢仕歌、姚美伊、雍炜、储晓刚、张峰。
标准起草小组查阅大量标准、文献资料，开展了实验条件优化、方法线性范围、检出限、灵敏度、准确度、重现性等技术内容的确定研究。
二、标准的重要内容及主要修改情况标准规定了食品中栀子黄的高效液相色谱测定方法。
原有标准中第一法，高效液相色谱法，用栀子苷的含量来表征栀子黄，与GB 7912-2010《食品添加剂栀子黄》中规定栀子黄的主要成分为藏花酸和藏花素，栀子苷为杂质成分，相悖；第二法薄层色谱为定性方法，亦不能满足GB 2760的使用量要求。
因此，本标准选用栀子黄中主要呈色成分——藏花素和藏花酸，代替原标准中栀子苷作为定量依据，建立了食品中栀子黄测定的高效液相色谱法，同时删除了第二法。
同时扩大了标准的使用范围，满足GB 2760的法规要求。
检测波长的优化：对藏花素和藏花酸进行二极管阵列检测器的全波长扫描，结果显示藏花素和藏花酸分别在420-450nm有最大吸收，因此选择440nm为检测波长。
色谱柱的选择：根据现有标准和文献资料，分离栀子黄主要采用反相C18色谱柱，课题组对3种色谱柱进行了比较：SUPELCOSILTM C18、Symmetry C18、Extend-C18 3种色谱柱对栀子黄均有良好的分离效果。
流动相的选择：根据标准和相关文献报道，分离栀子黄流动相大多采用甲醇-水体系、乙腈-水体系，实验考察了甲醇-水体系、乙腈-水体系、乙腈-乙酸水体系。
结果证明，甲醇-水体系与乙腈-水体系作为栀子黄的流动相都能实现良好的分离，没有明显差别。
浅识天然色素栀子黄
浅识天然色素栀子黄
栀子黄是一种天然色素。
栀子黄色素是从栀子果实中提取的一种类胡萝卜素色素，主要成分是藏花素和藏花酸，安全性高，具有一定的营养价值。
藏花素和藏花酸是天然存在的类胡萝卜素，是栀子果实中主要的着色物质。
藏花素是自然界存在的水溶性类胡萝卜素，它的分子由藏花酸和两个双糖组成，有着类胡萝卜素抗氧化、淬灭自由基等作用特点。
藏花酸在抗氧化等方面有很好的作用。
栀子黄在中的应用
栀子黄可用于多种，使用范围很广。
虽然栀子黄是一种天然色素，但并不代表可以随意使用，在《食品安全国家标准食品添加剂使用标准》（GB 2760-2014）中规定了栀子黄在食品中的使用范围和使用限量，允许使用量根据产品类型最低可添加0.3克/千克，如蜜饯、糖果、膨化食品等；最高为1.5克/千克，如人造黄油、腌渍的蔬菜、饼干等。
栀子黄的检测
关于栀子黄的检测，目前一般采用《食品安全国家标准食品中栀子黄的测定》（GB 5009.149-2016）。
该标准的原理是将试样用甲醇超声提取后，通过C18反相色谱柱分离，用高效液相色谱/可见光检测器于440纳米下检测栀子黄的主要显色成分藏花素和藏花酸，以保留时间定性，外标法定量。
本方法适用于冰淇淋、蜜饯、腌菜、干杏仁、巧克力、糕点、熟肉、酱油、果汁、配制酒、果冻、薯片的测定。
司仿—栀子黄色素的提取、纯化和测定
题目：生化分离工程实验姓名：司仿学号：100820042学院：生物科学与工程学院专业：发酵工程年级：2010指导教师：剑锋2010年12月12日一、实验目的1.了解栀子油活性成分的CO2超临界脱除和有机溶剂脱除工艺的异同点。
2.了解栀子黄色素的乙醇提取和水提取工艺的异同点。
3.掌握栀子黄色素成分的分离纯化原理。
4.掌握栀子黄色素成分的含量测定方法。
5.了解栀子黄色素成分的稳定性测定方法。
二、实验基础栀子黄色素是从栀子果实中提取的自然界唯一存在的水溶性类胡萝卜素类天然色素，主要成分是藏花素和藏花酸，成品中还可能存有熊果酸等三帖酸成分、栀子苷和绿原酸。
粗加工的栀子黄色素往往因为在保藏或使用过程发生褪色或绿变，其主要原因是色素量栀子苷和绿原酸的存在，实践证明，如果能够把色素的OD238/440比值降低到0.4以下，即能够较好的解决这一问题。
栀子黄色素在欧美、日本等发达国家颇受欢迎，国际需求量以年均10%的速度在增长。
2000年日本的需求量为320 t，在日本天然色素市场中排位第4，栀子黄色素（A238/A440≤ 0.40）的售价为4500日元/kg。
本实验通过对高色价栀子黄色素的提取工艺与其稳定性进行系统研究，旨在培养学生的实验设计和解决实际难题的能力。
为开发利用天然色素新资源--栀子植物提供参考依据。
三、实验材料和仪器1 材料与方法1.1 材料与仪器栀子鲜果购自省福鼎市医药公司。
藏花素标准品（纯度99%），美国Sigma公司。
栀子黄色素标准品（色价E1%1cm = 258.33/mg，A238/A440≤ 0.38，A320/A440≤ 0.12），大学中药现代化工程研究室通过层析方式制备。
栀子苷、绿原酸和熊果酸标准品（批号分别为0749-200410、0753-200212和0742-200415，纯度均≥99%），中国药品生物制品检定所。
乙醇、盐酸、硫酸、氢氧化钠、过氧化氢等，均为分析纯，购自西陇化工厂。
高效液相色谱法测定食品中的栀子黄的研究
１．２．３ 色谱条件 ＨｙｐｅｒＣｌｏｎｅ ＯＤＳ Ｃ １８ 色谱柱（２５０ × ４．６０ｍｍ ，
５ｍｉｃｒｏｎ） ，流动相为甲醇—水（体积比为 ３５：６５），流速 ０．８ｍｌ／ｍｉｎ ，检测波长 ２４０ｎｍ，进样量 ２０μｌ。
０．８0.8
b
０．６0.6
吸光度
０．４0.4
a
０．２0.2
０．０0.0
200
300
400
500
600
２００
３００
４００
５００
６００
波长（ｎｍ）
ａ ：未加苷样品；ｂ ：加苷样品
Fig.3
图 ３ 栀子黄溶液紫外 － 可见吸收光谱 Ultraviolet-visible spectrum of gardenia yellow pigment
２．Ａｎｈｕｉ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｓｏｌｉｄｓ， Ｗｕｈｕ ２４１０００， Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ ：Ａ ｈｉｇｈ ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｆｏｒ ｔｈｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｇａｒｄｅｎｉａ ｙｅｌｌｏｗ ｐｉｇｍｅｎｔ ａｃｃｏｒｄｉｎｇ ｔｏ ｔｈｅ ｓｔａｎｄａｒｄ （ＧＢ／Ｔ５００９．１４９－２００３） ｗａｓ ｓｔｕｄｉｅｄ． Ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔｓ ｏｆ ｇａｒｄｅｎｉａ ｙｅｌｌｏｗ ｐｉｇｍｅｎｔ ｗｅｒｅ ａｎａｌｙｚｅｄ ａｎｄ ｃｏｍｐａｒｅｄ ｂｙ ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｙ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｉｔ ｗａｓ ｎｏｔ ｒｅａｓｏｎａｂｌｅ ｔｏ ａｓｓａｙ ｔｈｅ ｇａｒｄｅｎｉａ ｙｅｌｌｏｗ ｐｉｇｍｅｎｔ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｓｔａｎｄａｒｄ ｃｏｎｔｒｏｌ ｉｎ ｆｏｏｄ ｂｙ ｈｉｇｈ ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ． Ａｌｌ ｔｈｅｓｅ ｏｔｈｅｒ ｗｏｒｋｓ ｃｏｕｌｄ ｅｓｔａｂｌｉｓｈ ａ ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ ｆｏｒ ａ ｂｅｔｔｅｒ ｑｕａｌｉｔａｔｉｖｅ ａｎｄ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｍｅｔｈｏｄ ｏｆ ｇａｒｄｅｎｉａ ｙｅｌｌｏｗ ｐｉｇｍｅｎｔ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ｈｉｇｈ ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ（ＨＰＬＣ ）；ｇａｒｄｅｎｉａ ｙｅｌｌｏｗ ｐｉｇｍｅｎｔ；ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｙ；ｅｘａｍｉｎａ－ ｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄ 中图分类号：ＴＳ２０７．３ 文献标识码： Ａ 文章编号：１００２－６６３０（２００６）０２－０１９９－０４
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MM_FS_CNG_0314食品栀子黄高效液相色谱法薄层色谱法
MM_FS_CNG_0314
食品中栀子黄的测定
1.适用范围
本方法适用于饮料、酒、糕点中栀子黄的测定。
第一法.高效液相色谱法
2.原理概要
样品中栀子黄经提取净化后，用高效液相色谱法测定，以保留时间定性、峰高定量，栀子甙是栀子黄的主要成分，为对照品。
3.主要试剂和仪器
.主要试剂
甲醇；
石油醚：60～90℃；
乙酸乙酯；
三氯甲烷；
姜黄色素；
栀子甙；
栀子甙标准溶液：称取栀子甙标准品，用甲醇溶解，并用甲醇稀释至100mL 混匀，即得μg／mL栀子甙；
栀子甙标准使用液：分别吸取栀子甙标准溶液0，，，，于10mL容量瓶中，加甲醇定容至10mL，即得0，，，，μg／mL的栀子甙标准系列溶液。
.仪器
小型粉碎机；
恒温水浴；
高效液相色谱系统：Water'sm501泵，U6K进样器，岛津RF-535；
荧光检测器，Bluechip／PC计算机和Baseline 810色谱控制程序。
4.过程简述
.样品处理
饮料：将样品温热，搅拌除去二氧化碳或超声脱气，摇匀后，通过微孔滤膜μm过滤，滤液备作HPLC分析用。
酒：样品通过微孔滤膜过滤，滤液备作HPLC分析用。
糕点：称取10g样品放入100mL的圆底烧瓶中，用50mL石油醚加热回流30min，置室温。
砂芯漏斗过滤，用石油醚洗涤残渣5次，洗液并入滤液中，减压浓缩石油醚提取液，残渣放入通风橱至无石油醚味。
用甲醇提取3～5次，每次30mL，直至提取液无栀子黄颜色，用砂芯漏斗过滤，滤液通过微孔滤膜过滤，滤液贮于冰箱备用。
.测定
HPLC参考条件
150mm×
色谱柱：粒度5μm ODSc
18
流动相：甲醇∶水（35∶65）
流速：／min
波长：240nm
标准曲线
在本实验条件下，分别注入栀子甙标准使用液0，2，4，6，8μL，进行HPLC 分析，然后以峰高对栀子甙浓度作标准曲线。
样品测定
在实验条件下，注入5μL“”项下的样品处理液，进行HPLC分析，取其峰与标准比较，测得样品中栀子甙含量。
5.结果计算
.计算
按式（1）计算。
X＝
A×V
(1)
m×1000
式中：X——样品中栀子黄色素的含量，g／kg；
A——进样液中栀子甙的含量，μg；
V——样品制备液体积，mL；
m——样品质量，g。
.本标准的检测限、回收率、精密度。
本方法栀子甙的检测限为μg／mL，栀子黄色素浓度在～／kg范围内，饮料、酒、蛋糕回收率分别为％，92％，％。
相对标准差（）％：，，。
第二法.薄层色谱法
6.原理概要
样品中栀子黄色素用有机溶剂提取，并经过纯化处理，去除干扰物质，浓缩点样展开后，在UV254nm灯下呈黑色斑点，与标准比较进行定性，及概略定量。
7.主要试剂和仪器
.主要试剂
甲醇；
乙醇；
乙酸乙酯；
丙酮；
甲酸；
三氯甲烷；
硅胶GF254：薄层色谱用；
展开剂：乙酸乙酯∶丙酮∶甲醇∶水（5∶5∶1∶1）；
展开剂：三氯甲烷∶甲醇（6∶3）。
.仪器
全玻璃浓缩器；
薄层板涂布器；
玻璃板，4cm×20cm，20cm×20cm；
层析缸；
UV254nm荧光灯；
微量注射器。
8.过程简述
.样品处理：将酒、饮料、蛋糕样品处理后，进行TLC检识。
见.展开结果。
酒：取样品100mL，减压浓缩至无酒味，然后用乙酸乙酯萃取，每次30mL，萃取3～5次，至无栀子黄颜色为止，合并萃取液，减压浓缩至无乙酸乙酯味。
约剩20mL为止，此液留作薄层分析用。
饮料：取样品100mL，用乙酸乙酯萃取，每次50mL，萃取3～5次，至无栀子黄颜色为止。
合并萃取液，减压浓缩至无乙酸乙酯味，约剩20mL，此液留作薄层分析用。
蛋糕：称取已粉碎均匀的样品，加海沙少许，混匀，用热风吹干样品（用手摸已干燥即可），加入50mL石油醚搅拌，放置片刻，弃去石油醚，如此反复处理三次，以除去脂肪，吹干后研细，放入索式提取器，用甲醇提取色素，直到无栀子黄色素为止，直至色素全部提完，置水浴浓缩至约5mL，此液留作薄层层析用。
.测定
点样：取市售硅胶GF254荧光板，离板底边2cm处点样品提取液μL，板的右边点2μL栀子黄色素标准溶液。
展开：将点样项已点好样和标准板，用，展开剂展开，待栀子黄色素明显分
值为和。
而姜黄色素为和。
样品开后取出，晾干，与标准斑点比较，栀子黄R
f
与标品的斑点的R
值一致，则证明样品中的色素为栀子黄色素。
f
9.来源：
GB／T 17335—1998。