高效液相色谱法检测食品中的苯甲酸、山梨酸、糖精钠pdf
高效液相色谱法测定糕点中苯甲酸.山梨酸.糖精钠含量的研究
高效液相色谱法测定糕点中苯甲酸.山梨酸.糖精钠含量的研究摘要本文对国标法进行改进,建立了用HPLC测定糕点中的苯甲酸、山梨酸、糖精钠的前处理方法。
结果表明,该方法平均回收率均达到92.8%以上,符合试验要求。
关键词HPLC;糕点;苯甲酸;山梨酸;糖精钠;前处理苯甲酸、山梨酸是有机化学防腐剂,可以防止食品腐败变质,延长食品保存期,抑制食品中微生物繁殖;糖精钠是一种人工合成甜味剂,其糖度为蔗糖的500倍,且价格低廉。
上述3种添加剂在食品加工过程中被广泛使用,但过量食用会对人体会产生一定影响,因此对食品中苯甲酸、山梨酸、糖精钠的含量进行检测有重要意义。
目前,国标法(GB/T 5009-2003)[1]使用高效液相色谱法检测苯甲酸、山梨酸、糖精钠只适用于汽水、果汁、配制酒等液体食品,但在实际工作中,经常遇到固体食品(如糕点)需要检测。
由于糕点类食品含有蛋白质、淀粉类大分子,以及油脂,直接进样会堵塞、损伤色谱柱;而采用有机溶剂提取,操作过程繁琐,对操作者健康的损害大。
为此,笔者对国标法进行改进,探讨出针对糕点样品的HPLC前处理方法,进行糕点样品中苯甲酸、山梨酸、糖精钠的含量测定,获得了良好的效果。
1 试验原理糖精钠是易溶于水的盐类,样品中的苯甲酸、山梨酸经氢氧化钠溶液(1.0 mol/L)浸泡后,转化为易溶于水的苯甲酸钠、山梨酸钠,经沉淀蛋白质、过滤等处理后,3种被测组分滞留于水相中与杂质分离,经流动相带进色谱柱后进行分离,以保留时间定性,以峰面积定量。
2 材料与方法2.1 材料2.1.1 仪器1)高效液相色谱仪;2)快速扫描紫外分光检测器;3)超声波清洗器;4)0.45μm微孔滤膜过滤器;5)台式低速大容量离心机;6)样品粉碎机。
2.1.2 试剂1)甲醇,色谱纯;2)0.02 mol/L的乙酸铵溶液;3)1.0 mol/L氢氧化钠溶液;4)6 mol/L盐酸溶液;5)106 g/L的亚铁氰化钾溶液;6)220 g/L的乙酸锌溶液;7)50 g/L饱和硼砂溶液;8)纯水,2次重蒸水。
%81苯甲酸、山梨酸、糖精钠、脱氢乙酸
ｒｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔｓ ｆｏｒ ｗｅｔ ｃｈｅｍｉｃａｌ ａｎａｌｙｓｉｓ，ａｔｏｍｉｃ ａｂ－
删
ｓｏｒｐｔｉｏｎ ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ ａｎｄ ｉｎｄｕｃｔｉｖｅｌｙ ｃｏｕｐｌｅｄ ｐｌａｓｍａ ｍｅｔｈｏｄｓ：ｓ］． ＧＢ／Ｔ １４５０６．２８ １９９３ 硅酸盐岩石化学分析方法
ｘ射线荧光光谱法测定主、次元素量［ｓ］．
Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ａｌｕｍｉｎｉｕ，ｓｉｌｉｃｏｎ，ｉｒｏｎ，ｔｉｔａｎ｛ｕｒｎ ａｎｄ
础
ｐｈｏｓｐｈｏｒｕｓ ｃｏｎｔｅｎｔｓｔ ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ ｄｉｓｐｅｒｓｉｖｅ Ｘ－ｒａｙ ｆｌｕ——
ｏｒｅｓｅｅｎｃｅ Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｉｃ ｍｅｔｈｏｄ［Ｓ］． 袁汉章，刘洋，秦颖．分析化学［Ｊ］，１９９０，１８（５）：４５１
．玉塑墨妻垒堕
高效液相色谱法测定食品中安赛蜜、苯甲酸、 山梨酸、糖精钠、脱氢乙酸
陈英ｏ ２。谢晓烽２。狄俊伟１
（１．苏州大学化学化工学院，苏州２１５０００；２．苏州市产品质量监督检验所，苏州２１５１２８）
中图分类号：０６５７．７
文献标识码：Ｂ
文章编号：１００１—４０２０（２００７）１０—０８８７ ０２
析方法基本上采用紫外固定波长检测法。虽然各分 析物的最大吸收波长不同，特别是脱氢乙酸有两个 吸收峰（２３４．１０ ｎｍ，２９６．００ ｒｉｍ），见图ｌ。
Ｆｉｇ １
图ｌ脱氢乙酸的紫外光谱图 ＵＶ ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ ｓｐｅｃｔｒｕｍ。ｆ ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｔｅｄ ａｃｅｔｉｃ ａｃｉｄ
８８７·
但考虑到多种物质在２３０ ｆｌｉｒｔ波长附近能都有 吸收，且ＤＨＡ在２３０ ｎｍ波长附近有最大吸收，试 验选取波长为２３０ １３ｙｒｌ。 ２．２流动相流速及比例的选择
高效液相色谱法测定某些食品中糖精钠、苯甲酸、山梨酸等预处理方法的探讨
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高效液相色谱法快速测定饮料中的苯甲酸_山梨酸和糖精钠
第34卷第10期辽宁化工Vol.34,No.10 2005年10月Liaoning Chemical Industry October,2005分析检测高效液相色谱法快速测定饮料中的苯甲酸、山梨酸和糖精钠刘渭萍(辽宁省产品质量监督检验院,辽宁沈阳110004)摘要:将饮料样品定量稀释后,用针筒式水膜过滤器处理后,直接进样,外标法进行液相色谱定性、定量分析。
用此方法进行了不同水平的加标回收率测试,证明方法快捷可靠,非常适用于大量的样品的快速测定。
关键词:食品添加剂;针筒式水膜过滤器;苯甲酸;山梨酸;糖精钠中图分类号:O657.7+2文献标识码:A文章编号:10040935(2005)10045403随着化学添加剂的诞生和发展,人类健康不断受到威胁。
食品添加剂对人体的毒性概括起来有致癌性、致畸性和致突变性[1,2],这些毒性要经过较长时间才能显露出来,即对人体产生潜在的毒害[3,4],这也是人们关心食品添加剂安全性的原因。
近年来我国使用的食品添加剂由20世纪70年代的几十种发展到目前卫生部颁发许可使用的1516种[5,6](截止到1997年7月),食品添加剂的绝对用量虽然只占食品的千分之几到万分之几[7,8],但是随着现代食品工业的发展,食品的种类日益增加,食品添加剂的超量和超范围使用现象十分严重,因此食品添加剂对人类产生了极大的危害,对食品添加剂的检测也越来越受到人们的重视。
1实验部分1.1仪器与试剂(1)Agilent1100液相色谱(二级管阵列检测器)。
(2)甲醇(色谱纯)。
(3)水(石英亚沸二次蒸馏水)。
(4)乙酸铵溶液(0.02mol/L):称取1.54g乙酸铵,加石英亚沸二次蒸馏水溶解至1000mL,经滤膜(0.45L m)过滤。
(5)碳酸氢钠溶液(20g/L):称取2g碳酸氢钠(优级纯),加水至100mL,振摇溶解。
(6)苯甲酸标准储备液:准确称取0.1000g (精确至0.0001g)苯甲酸(色谱纯),加碳酸氢钠溶液(20g/L),加热溶解,移入100mL容量瓶中,加水定容至100mL,苯甲酸含量为1mg/m L。
高效液相色谱法(HPLC)测定饮料中山梨酸和苯甲酸
卫生化学实验七高效液相色谱法（HPLC）测定饮料中山梨酸和苯甲酸一、实验目的与要求1、掌握高效液相色谱法测定饮料中苯甲酸和山梨酸的原理和方法2、了解高效液相色谱仪的基本结构和使用方法3、熟悉饮料样品的处理方法2、实验方法与原理苯甲酸和山梨酸广泛用于食品防腐剂，能够引起人的再生障碍性贫血，粒状白细胞缺乏等。
因此国家严格限制其使用量。
在本实验中，样品首先经过超声和加热除去二氧化碳和乙醇，然后过滤注入高效液相色谱仪，经反相C18液相色谱柱分离后，紫外检测器230 nm波长处检测。
以色谱峰的保留时间定性，色谱峰面积在一定范围内与浓度呈线性关系进行定量分析。
3、实验仪器与试剂1、仪器：高效液相色谱仪（Waters，美国）：2487紫外检测器、1525高压输液系统、717进样系统、Waters Breeze色谱工作站；超声震荡仪；100 ml烧杯（1个）； 1 ml和100 μl移液枪；离心管若干个；离心管架；微孔滤膜（0.22 μm）。
2、试剂：（1）甲醇（色谱纯）；醋酸铵溶液（0.02 mol/L，色谱纯）；流动相分别超声脱气（10 min）（2）山梨酸储备溶液(1.0 mg/ml）：准确称取0.2500 g山梨酸，加超纯水定容至250 ml。
（3）苯甲酸储备液（1.0 mg/ml）：准确称取0.2500 g苯甲酸，加超纯水定容至250 ml。
4、实验步骤1、样品处理碳酸饮料（雪碧）：吸取10 ml碳酸溶液超声5 min，然后用微孔滤膜（0.22 μm）过滤，滤液备用。
吸取100 μl滤液于离心管中，并加入900 μl超纯水，混合均匀标记为样品。
2、配制标准溶液（1）取一定量的苯甲酸储备液，经滤膜过滤于离心管中。
吸取滤液50 μl 于另一离心管并加入950 μl超纯水，得到50 μg/ml的苯甲酸标准品，做好标记。
（2）同理得到50 μg/ml的山梨酸标准品，做好标记。
（3）混合标准品配制：分别吸取500 μl过滤后的苯甲酸和山梨酸储备液于离心管中混合均匀，得到500 μg/ml的混合标准品。
高效液相色谱法测定食品中山梨酸
高效液相色谱法测定食品中山梨酸、苯甲酸、糖精钠样品前处理方法探讨高效液相色谱法测定食品中山梨酸、苯甲酸、糖精钠的样品前处理方法。
方法不同样品用不同前处理方法，用二极管阵列管检测品(HPLC-DAD）分析测定，外标法定量。
结果该前处理方法线性关系良好，相对标准偏差分别为山梨酸3.18%、苯甲酸2.74%、糖精钠2.15%，加标回收率均在90%~100%之间。
结论该方法稳定性好、准确可靠、简单快速，适用于食品添加剂的测定。
高效液相色谱法可以同时测定山梨酸、苯甲酸、糖精钠，方便简单快捷。
各类食品的前处理方法方面虽然有了新规定，但是还不够便捷。
因此对部分不同种类的食品前处理方法进行摸索，主要改善是在各类样品处理之前加入适量氢氧化钠，在碱性条件下提取钾盐或者钠盐更为简单，其方法准确可靠，简便快速，便于推广。
并对南充市内3区的市场、超市中部分产品中防腐剂和糖精钠进行检测。
1 材料与方法1.1仪器与试剂1.1.1 仪器戴安U-3000高效液相色谱仪，水浴锅，超声清洗器。
1.1.2 试剂色谱纯甲醇；超纯水；分析纯正己烷；分析纯乙醚；分析纯乙酸铵；0.1mol/L氢氧化钠；10.6％亚铁氰化钾；22％乙酸锌；pH7.2磷酸盐缓冲溶液。
1.0 mg/m1山梨酸、苯甲酸、糖精钠标准溶液(国家标准物质中心)。
1.1.3 色谱条件色谱柱：Agela-Cl8柱(250 mm×4.6mm×5um)；柱温：30℃；紫外检测波长：230 nm；流动相：甲醇：0.02 mol/L乙酸铵(5:95)；流速：1.0mL/min；进样体积：10μL 。
1.2 前处理方法汽水、果汁、风味饮料类液体样品取样10.0 g于50ml容量瓶中，加入20～30ml纯水后超声脱气10 min，用1+1氨水调pH=7，稀释至刻度，经0.45μm滤膜过滤后上机。
[1，2]配制酒、葡萄酒、果酒类称取10.00g样品，放入小烧杯中，水浴加热出去乙醇，用氨水（1+1）调pH约7，加水定容至50.0ml，经0.45μm滤膜过滤后上机。
高效液相色谱法测定食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的方法验证
066苯甲酸、山梨酸、糖精钠是常用的食品添加剂，也是衡量食品卫生质量的重要指标。
苯甲酸、山梨酸具有防腐保鲜的作用，糖精钠是合成甜味剂，甜度比蔗糖甜300－500倍。
GB2760－2016《食品安全国家标准 食品添加剂使用标准》对这三者的添加范围和限量都有明确的规定，超范围或者超限量使用都是违法的。
GB5009.28－2016《食品安全国家标准 食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定》对其检测方法做了规定，有高效液相色谱法和高效气相色谱法，其中高效液相色谱法为第一法仲裁法被广泛应用。
国标方法在使用前要进行方法验证，核查实验室能否满足检测方法的要求。
本研究针对高效液相色谱法测定食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的适用性、线性、检出限、定量限、加标回收率等进行了一一验证，均能够满足检测方法的要求。
一、仪器与试剂1.仪器。
高效液相色谱仪（紫外检测器，Y001），岛津LC－20AT；电子分析天平（Y033），BSA623S－CW，d ＝0.001g。
2.试剂。
苯甲酸钠标准品（唯一性标识3422003，纯度100.0％），北京坛墨质检科技有限公司；山梨酸标准品（唯一性标识3192003，纯度99.9％），北京坛墨质检科技有限公司；糖精钠标准品（唯一性标识3212005，纯度99.5％），北京坛墨质检科技有限公司；甲醇（色谱级），Aigma－Aldrich；乙酸铵（色谱级），aladdin；亚铁氰化钾、乙酸锌（分析纯），天津市天力化学试剂有限公司；实验室用水为自制超纯水。
二、实验与方法1.色谱条件。
（1）色谱柱：Diamonsil Plus 5um C 18，250×4.6mm；检测波长230nm；进样量10uL。
（2）流动相：甲醇＋乙酸铵溶液（0.02mol/L）＝5＋95；流速1mL/min。
高效液相色谱法测定食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的方法验证2.样品前处理。
准确称取约2g（精确到0.001g）试样于50mL具塞离心管中，加水约25mL，涡旋混匀，于50℃水浴超声20min。
高效液相色谱法HPLC测定饮料中山梨酸和苯甲酸
卫生化学实验七高效液相色谱法HPLC测定饮料中山梨酸和苯甲酸一、实验目的与要求1、掌握高效液相色谱法测定饮料中苯甲酸和山梨酸的原理和方法2、了解高效液相色谱仪的基本结构和使用方法3、熟悉饮料样品的处理方法二、实验方法与原理苯甲酸和山梨酸广泛用于食品防腐剂,能够引起人的再生障碍性贫血,粒状白细胞缺乏等;因此国家严格限制其使用量;在本实验中,样品首先经过超声和加热除去二氧化碳和乙醇,然后过滤注入高效液相色谱仪,经反相C18液相色谱柱分离后,紫外检测器230 nm波长处检测;以色谱峰的保留时间定性,色谱峰面积在一定范围内与浓度呈线性关系进行定量分析;三、实验仪器与试剂1、仪器：高效液相色谱仪Waters,美国：2487紫外检测器、1525高压输液系统、717进样系统、Waters Breeze色谱工作站；超声震荡仪；100 ml烧杯1个； 1 ml和100 μl移液枪；离心管若干个；离心管架；微孔滤膜0.22 μm;2、试剂：1 甲醇色谱纯；醋酸铵溶液0.02 mol/L,色谱纯；流动相分别超声脱气10 min2 山梨酸储备溶液1.0 mg/ml：准确称取0.2500 g山梨酸,加超纯水定容至250 ml;3 苯甲酸储备液1.0 mg/ml：准确称取0.2500 g苯甲酸,加超纯水定容至250 ml;四、实验步骤1、样品处理碳酸饮料雪碧：吸取10 ml碳酸溶液超声5 min,然后用微孔滤膜0.22 μm 过滤,滤液备用;吸取100 μl滤液于离心管中,并加入900 μl超纯水,混合均匀标记为样品;2、配制标准溶液1 取一定量的苯甲酸储备液,经滤膜过滤于离心管中;吸取滤液50 μl于另一离心管并加入950 μl超纯水,得到50 μg/ml的苯甲酸标准品,做好标记;2 同理得到50 μg/ml的山梨酸标准品,做好标记;3 混合标准品配制：分别吸取500 μl过滤后的苯甲酸和山梨酸储备液于离心管中混合均匀,得到500 μg/ml的混合标准品;吸取50 μl混合标准品500 μg/ml于离心管中并加入950 μl超纯水,得到25 μg/ml的混合样,标记为混标;3、色谱条件：色谱柱：C18反相键合色谱柱流动相：甲醇-0.02 mol/L醋酸铵溶液5 : 95流速：1 ml/min 检测波长：230 nm 进样量10 μl4、标准品和样品测定1 分别进苯甲酸50 μg/ml、山梨酸50 μg/ml标准品,确定保留时间;2 记录混合标准品25 μg/ml的峰面积并按下式计算样品中苯甲酸和山梨酸含量：计算方法：Cx=F×Cs×Ax÷As式中：Cx—为样品中被测物的含量μg/ml；Cs—为苯甲酸或山梨酸标准品的含量μg/ml;F—为稀释倍数；Ax—样品的峰面积；As—标准品的峰面积;五、实验数据记录及结果计算1、苯甲酸、山梨酸标准品的保留时间物质苯甲酸山梨酸保留时间min 6.780 9.1522、混合标准品及样品的峰面积物质苯甲酸山梨酸样品苯甲酸山梨酸峰面积mAUmin 386576 2067181 234426 31073、实验结果计算根据公式：Cx=F×Cs×Ax÷As计算得：C苯甲酸=10×25×234426÷386576=151.6μg/mlC山梨酸=10×25×3107÷2067181=0.375μg/ml雪碧中含有151.6μg/ml的苯甲酸,0.375μg/ml的山梨酸;六、注意事项1、如果被测溶液含有气泡,对测定和仪器的使用均有影响,因此需要将被测溶液超声加热除去二氧化碳;2 、苯甲酸的灵敏波长为230 nm,山梨酸的灵敏波长为254 nm,在此波长测定时苯甲酸的灵敏度较低;因此波长选择230 nm;3、平衡前用甲醇：水5:95冲洗柱子15 min,再用甲醇-0.02 mol/L醋酸铵溶液5:95进行平衡;4、开机顺序：高压输液系统、进样系统、柱温箱、检测器、电脑软件;5 、使用盐做流动相的时候：水：甲醇=95: 5冲洗柱子20 min以上；然后用甲醇冲洗色谱柱20 min以上,保存色谱柱;6 、关机：清洗结束后,点击并将泵流量输入为0,等压力降为0时,关掉泵电源,退出Breeze工作站,再关闭仪器各部分电源及计算机;7、注意在移液枪加完一种试剂之后,一定要记得换枪头。
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江苏天瑞仪器股份有限公司高效液相色谱法检测食品中的苯甲酸、糖精钠、山梨酸分析方法：食品添加剂的检测申请部门：研发二部编制人：杨晓燕申请人：杨晓燕、刘玉莲、张伟结题日期：2010.09.15高效液相色谱法检测食品中的苯甲酸、糖精钠、山梨酸杨晓燕，刘玉莲，张伟（江苏天瑞仪器股份有限公司，江苏215300）摘要：本方法利用高效液相色谱法快速分离检测食品中三种食品添加剂，采用C18，5μm，4.6×150mm 色谱柱；0.02mol/L乙酸铵(pH6.0)-甲醇为流动相；柱温30℃；流速1.0ml/min；检测波长230nm。
三种添加剂在0.01～3.42ng内线性相关系数r＞0.999，回收率为88.59%～108.13%，相对标准偏差RSD为0.978％～1.254％，检测限为0.37～0.92mg/kg。
关键词：高效液相色谱法；食品；食品添加剂HPLC-UV method for detection of benzoic acid, saccharin sodiumand sorbicacidYang xiaoyan,Liu yulian,Zhang wei（Skyray Instrument Co., Ltd. Jiangsu Province, Jiangsu 215300）Abstract：A method for simultaneous determination of three food additives in food by high performance liquid chromatography was used. Liquid chromatographic separation was performed on an C18, 5μm, 4.6×150mm column. The mobile phase is 0.02mol/L ammoninum acetate (pH6.0)-methanol with column temperature 30℃；flow rate 1.0ml/min, and detection wavelengths 230nm. The linear range for three food additives is 0.01～3.42ng; r>0.999, while recoveries of ten food additives are 88.59%～108.13%, RSD 0.978％～1.254％, and detectionlimits 0.37～0.92mg/kg.Key words：HPLC；food；food additives食品添加剂是食品工业的基础原料，对食品的生产工艺、产品质量。
安全卫生都起到至关重要的作用。
但毕竟不是食品的基本成分，尽量在用于食品之前已在试验室中进行多次安全性测试，但违禁、滥用以及超范围、超标准使用添加剂，都会给食品质量、安全卫生以及消费者的健康带来巨大的损害。
食品添加剂的种类和数量越来越多，对人们健康的影响也就越来越大。
随着研究的不断改进和发展，原来认为无害的添加剂，近年来发现还可能存在慢毒性、致癌作用、致畸作用及致突变作用等各种潜在的危害，因而更加不能忽视。
食品添加剂的检测，目的在于监督、保证和促进正确合理地使用食品添加剂，确保人民的身体健康。
苯甲酸、山梨酸、糖精钠均是常用的食品添加剂，其中防腐剂（苯甲酸、山梨酸）和糖精钠是饮料必测项目。
目前关于食品中防腐剂与甜味剂的检测方法有很多[1-4]，主要涉及的检测方法有薄层色谱法、比色法、离子选择电极测定法、气相色谱法、液相色谱法。
本文主要是参考其它文献对国家标准[1-2]将色谱条件进一步优化，使其检测效果更佳、可操作性更强。
1 实验部分1.1 试剂：甲醇：色谱纯氨水、乙酸铵：分析纯水：超纯水（符合实验室一级用水）苯甲酸、山梨酸、糖精钠标准物质：纯度＞99.0%1.2 仪器与设备：L C310高效液相色谱仪（江苏天瑞仪器股份有限公司），电子天平（赛多利斯科学仪器（北京）有限公司），超声波清洗器（张家港市神科超声电子有限公司），精密酸度计（上海精密科学仪器有限公司），超纯水机（南京易普易达科学发展有限公司）等。
1.3分析条件色谱柱：XB- C18色谱柱(250mm×4.6mm，5μm)；流动相：甲醇/0.02mol/L乙酸铵(V/V=85/15)；流速：1.0 mL／min；柱温：30℃；检测波长：230nm；进样量：10μl。
1.4标准溶液的配置用超纯水分别将3种标准品配置成1mg/ml苯甲酸，糖精钠、山梨酸的储备液（加入1～2滴的无水乙醇去气泡），使用时用甲醇稀释成浓度均为1.0μg/ml的混合标准溶液，如图1所示。
图1 食品添加剂液相色谱图1.5样品前处理汽水:准确称取5.00 g-10.00 g试样，精确至0.0001g，放入小烧杯中，微温搅拌除去其中溶解的二氧化碳气体，用氨水(1+1)调pH约为7。
加水定容至25 mL，经0.45μm滤膜过滤，待测。
饮料类:准确称取5.00 g -10.00g 试样，精确至0.0001g，用氨水(1+1)调pH约7，加水定容至25mL，离心沉淀，上清液经0.45μm滤膜过滤，待测。
2结果与讨论2.1色谱条件优化选择2.1.1流动相比例的选择由于流动相已比较成熟，只是由于仪器及环境的改变引起分离效果及峰形有一定的差别，因此对流动相的比例做了一部分的调节，随着缓冲盐的增加色谱峰的拖尾因子相应的减少，色谱峰更美观，直至缓冲盐增至15%，效果最佳。
2.1.2波长选择利用S2800二极管阵列管检测器进行全波段扫描，分别得三种物质的最佳吸收波长如下，糖精钠为205nm，苯甲酸为229nm，山梨酸为257nm，而在230nm 处三种物质均有较大吸收，故选择230nm作为检测波长。
2.2峰位确定将各标准品配制成单标，按本方法确定的色谱条件，取各单标和混标10μl 分别进样测定，按各保留时间确定出峰顺序，出峰顺序为：苯甲酸、糖精钠、山梨酸。
2.3阴性和系统适用性试验不加入样品，加入试剂，按样品处理方法进行测定，在各组分相应保留时间处均没有吸收。
取混标10μl进样测定，三个峰相互之间的分离度均＞1.5，符合相关规定。
理论板数按糖精钠计，均大于8000。
2.4精密度和重现性实验取混标10μl进样6针，进行测定，考察各组分保留时间和峰面积的相对标准偏差，分析结果如表1所示。
组分峰面积A 相对标准偏差（R S D %）保留时间 R t 相对标准偏差（R S D %）8931603 6.833 87926556.833 8919949 6.847 8980461 6.845 8986352 6.843 苯甲酸8838496 0.876.839 0.082 84461117.598 83080337.598 8403722 7.618 8455194 7.618 8484635 7.611 糖精钠8396338 0.74 7.605 0.12 5140247 9.342 50753289.341 5114234 9.358 5141873 9.356 5169418 9.355 山梨酸51360400.62 9.3520.075 表1 精密度和重现性试验数据2.5 线性关系和检测限在本方法确定的实验条件下，苯甲酸、糖精钠、山梨酸在如下表进样量范围之间，线性关系良好。
各化合物的相关系数见表2。
在 S /N =3的条件下，确定各组分的检测限也列入表2中。
组分 线性范围 线性方程 相关系数 检测限（mg/L） 苯甲酸 0.02n g-2.49n g y=35923x-1250.40.99990.049糖精钠 0.04n g-3.42n g y=107334x-187320.99970.092山梨酸 0.01n g-0.78n g y=15117x+152780.99980.037表2线性关系和检测限结果2.6回收率试验采用在实际样品中加入不同添加水平的混标的方式进行回收率实验，按 1.5中的方法处理后分析，采用外标法定量，每个添加水平单独测3次，实验结果表明，其平均回收率为为88.59%～108.13%，R S D为0.978％～1.254％。
2.8实际样品的测试采用H P L C法测试部分汽水及饮料结果如表3所示。
添加剂的含量（m g/k g）样品名称苯甲酸 糖精钠 山梨酸 芬达 49.850.330.49可乐 0.130.06未检出雪碧 46.780.110.4绿茶 0.2未检出 0.31茉莉花茶 未检出 未检出 0.28表3汽水及饮料中食品添加剂的检测3结论综上所述，通过对各种汽水、饮料进行测试，本方法前处理简单、方便快捷、灵敏度高、回收率高、精密度好，且试剂用量少，避免了大量化学试剂的使用，减少了环境污染，用来测定食品中添加剂苯甲酸、山梨酸、糖精钠的含量是简单可行的。
参考文献：[1]G B/T5009.28－2003食品中糖精钠的测定[S].北京:中国标准出版社,2004:223-230.[2]G B/T5009.29－2003食品中山梨酸、苯甲酸的测定[S].北京:中国标准出版社,2004:231-239.[3]余炳生,梁广华,刘子阳,等.饮料及果品中糖精、苯甲酸、山梨酸和咖啡因的反相H P L C同时快速测定[J].食品科学,2001,22(2):67-70.[4]杨祖英.薄层色谱法测定山梨酸和苯甲酸 [j].中国酿造，1983,2（3）：32。