柠檬苦素的色谱研究进展
白鲜皮生物碱和柠檬苦素类化学成分的提取 实验
白鲜皮生物碱和柠檬苦素类化学成分的提取实验导语：本次实验是关于白鲜皮生物碱和柠檬苦素类化学成分的提取。
这是一项基础的化学实验，通过蒸馏法和色谱分离技术实现了白鲜皮生物碱和柠檬苦素类化学成分的提取和纯化。
本文将详细介绍实验步骤和注意事项。
实验目的：1.了解生物碱及柠檬苦素的基本性质。
2.掌握生物碱和柠檬苦素的提取和纯化方法。
实验原理：生物碱是一类含氮的有机化合物，具有苦味和毒性。
生物碱广泛存在于植物中，如可可、咖啡、茶等。
柠檬苦素是一种黄酮类化合物，也是一种天然苦味物质，广泛存在于植物中。
本实验的目的是提取白鲜皮中的生物碱和柠檬苦素。
白鲜皮是一种中药材，它所含的生物碱和柠檬苦素是具有一定药理作用的。
实验步骤：1.水蒸气蒸馏提取白鲜皮生物碱将100克白鲜皮粉末加水1000毫升，浸泡24小时，过滤掉杂质，取滤液，用水蒸气蒸馏器蒸馏3小时，将初馏液和收集的馏出液混合。
将混合液中的酸性成份中和后分离，用无水醋酸提取次，再用氯仿提取3次，合并有机相，旋蒸除去氯仿，得到淡黄色粘稠状的白鲜皮生物碱。
2.柠檬苦素类化合物的色谱分离将提取出来的白鲜皮生物碱与正己烷混合，在硅胶管柱上进行层析。
收集层析装置中的第一种颜色淡黄色的柠檬苦素类化合物。
再将收集到的化合物用无水醋酸重新洗涤后，旋蒸干燥得到白色粉末。
注意事项：1.操作过程中要保持室内通风良好，注意个人保护。
2.层析装置上样要均匀，不要超过载荷范围，不要受到震动和振荡。
3.不要将酸性物质与有机溶剂或硅胶直接接触，否则会使硅胶的活性降低，影响分离效果。
实验结果：经过水蒸气蒸馏和色谱柱分离，成功提取出了白鲜皮中的生物碱和柠檬苦素类化合物，并得到了纯度较高的样品。
我们可以通过化学方法进一步研究这些化合物，以期发现新的药物、食品和保健用品等。
结论：本实验成功提取出了白鲜皮中的生物碱和柠檬苦素类化合物，实验结果证明了蒸馏法和色谱分离技术在化学成分提取和纯化中的重要性。
通过本实验，我们不仅掌握了生物碱和柠檬苦素的提取和纯化方法，还深入了解了这些化合物的基本性质和应用前景。
反相高效液相色谱法测定枳实中柠檬苦素的含量
反相高效液相色谱法测定枳实中柠檬苦素的含量
蔡艳芳;江国荣
【期刊名称】《临床合理用药杂志》
【年(卷),期】2015(8)32
【摘要】目的分析反相高效液相色谱法测定枳实中柠檬苦素的含量。
方法采用Hypersil BDS C18（200mm×4.6mm,5μm）,流动相乙腈∶水=45∶55,流速为1.0ml/min,柱温为32℃,检测波长为220nm。
结果枳实中柠檬苦素的含量测定方法线性关系良好,柠檬苦素在0.0365~0.5568μg（r=0.9995）与峰面积呈良好的线性关系,平均加样回收率为99.40%,RSD值为1.79%（n=6）。
结论反相高效液相色谱法测定枳实中柠檬苦素的含量,方法简便、准确、重复性好,可用于枳实中柠檬苦素的含量测定。
【总页数】2页(P90-91)
【作者】蔡艳芳;江国荣
【作者单位】广东省佛山市第一人民医院.中山大学附属佛山医院药剂科;广东省佛山市第一人民医院药剂科
【正文语种】中文
【中图分类】R837
【相关文献】
1.反相离子对高效液相色谱法测定枳实中辛弗林的含量
2.反相高效液相色谱法测定苦豆子总碱中槐定碱含量
3.反相高效液相色谱法测定枳实、枳壳中橙皮甙和柚皮
甙的含量4.反相高效液相色谱法测定颈痛消丸中龙胆苦苷的含量5.反相高效液相色谱法同时测定鼻咽清颗粒中龙胆苦苷、迷迭香酸和蒙花苷含量
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柠檬苦素类化合物的药理作用研究进展
２ ． ５ 抗结 肠 癌作用
Ｊ ｉ ｎ ｈ ｅ ｅ Ｋ ｉ ｍ 等 研 究 发 现 柠 檬 苦 素 类 化 合 物 如
ｍｅ ｔ ｈ ｙ ｌ ｎｏ ｍｉ ｌ ｉ ｎ ａ ｔ ｅ， ｉ ｓ ｏ ｏ ｂ ａ ｃ ｕ ｎｏ ｉ ｃ ａ ｃ ｉ ｄ， ｉ ｓ ｏ ｌ ｉ ｍｏ ｎｅ ｘ ｉ ｃ ａ ｃ ｉ ｄ
整型、 Ａ 一环 开 环 、 Ｂ一环 开 环 、 Ｃ一环 开 环 、 Ａ， Ｂ一环 开
酯有 显著 的诱 导谷 胱 甘 肽 一Ｓ一转 移 酶 （ Ｇ Ｓ Ｔ ） 和 醌 还 原酶 （ Ｑ Ｒ） 活 性 以 抑 制 小 鼠 肝 癌 细 胞 的柠檬 苦素 类化 合物 的药 理作 用 ２ ． １ 抗 菌作 用
们 的运动 ， 研究 还发 现楝 叶提 取 物 可 以 消 除超 过 ９ ０ ％
些 其他 对人 体 的药 理 作用 ， 所 以， 在 功 能食 品 、 保 健
品 以及植 物 天 然 活性 药 物 的 开 发 方 面 具 有 广 阔 的前 景 。本文 就柠 檬苦 素类 似物 的结 构特 性 、 药理 作用 提 取 富集工艺 等 研究 现状 进行 了综 述 。 １ 柠 檬苦 素 类化 合物 的结构 特 性 迄今 为 止 已分 离 到大 约 ３ ０ ０多 种 柠 檬 苦 素 类 似
用Ｅ ５ ３ 。
柠 檬苦 素类 化合 物 是一类 高 度氧 化 的 四降三萜 类
植 物 次生代 谢 产物 ， 主要 存在 芸香 科 和楝科 ， 在 叶柄 花
科 和苦 木科 也 有少量 的分布 。含 柠檬苦 素 类化合 物 种 类 最 多 的是 楝 科 植 物 中 的 印 度 楝 树 ， 印度楝树 的根、
恶性疟 原 虫未成 熟 和成熟 的配子体 Ｊ 。
【文献综述】橘籽中柠檬苦素的提取工艺研究
文献综述应用化学橘籽中柠檬苦素的提取工艺研究柠檬苦素类化合物主要存在于芸香科植物果实中，如枳实（脐橙、柑桔、香橙）柚等中。
以果核（种子）中含量较高，果皮中含量较少（约万分之一至十万分之五）。
柑桔中的类柠檬苦素存在两种形式，一种为类柠檬苦素配基化合物, 已分离鉴定出37种，另一种为类柠檬苦素葡萄搪苷化合物，已分离鉴定出21种。
柠檬苦素的分子式：C26H30O8；分子结构如图1-1：图1-1柠檬苦素的分子结构最新研究表明柑橘中的三萜类物质在抗肿瘤方面有相当好的成效，柠檬苦素(1imonin)及其类似物就是其中一类重要组分。
柠檬苦素及其类似物在抗肿瘤、镇痛、抗炎、改善睡眠、抗病毒、抗菌、利尿、抗焦虑，调节体内胆固醇含量、防止动脉粥样硬化和除虫等方面都具有显著效果。
日本、美国已报道了柠檬苦素类物质制作功能性食品和饮料的专利，柠檬苦素的应用前景极为可观。
目前，柠檬苦素主要采用热提取、浸泡提取及超临界萃取等提取方法从天然植物中提取，研究人员已经成功从芸香科和楝科的多种植物中提取出柠檬苦素及其类似物。
由于热提取和浸泡提取柠檬苦素，需要耗费大量的时间和不必要的溶剂浪费，而且，在提取柠檬苦素的过程当中，脱脂和提取过程中所需要的溶剂对人体健康又有影响，而对于用超临界萃取的提取方法来说，节省了时间与溶剂的用量，并且无污染。
然而，对于现阶段的科技发展，超临界萃取的方法，无法得到广泛的应用。
因此，对于如何在最有效的时间，用最合适的溶剂和溶剂用量及尽最大限度来控制提取过程中溶剂对人体健康的影响的研究，显得越来越重要。
1、类柠檬苦素的应用进展类柠檬苦素是一类在农业、食品和健康上有重要价值的功能性化合物，许多研究发现，它们有抗癌作用、杀虫作用以及在柑桔化学分类上有重要意义。
2、抗癌作用1989年Lam等用柑桔类柠檬苦素在小鼠上做试验，发现类柠檬苦素能诱导GST （谷胱甘肽转移酶）的活性，能抑制化学致癌物诱导的肿瘤的发生。
其中诺米林在肝脏和小肠粘膜的诱导性最高，柠碱的诱导作用较弱。
柠檬苦素,诺米林含量测定方法
编号：FZD0163 枳实提取物中柠檬苦素和诺米林的含量测定方法
一、色谱条件
色谱柱：Hypersil ODS C18 4.6×150mm 5μm
流速：1.0mL/min
检测波长：210nm
灵敏度：0.01AUFS
柱温：25℃
进样量：10μ
流动相：A:甲醇-水（40：60，V/V）
B:甲醇-水（60：40，V/V）
梯度条件： T(min) A% B%
0 100 0
16 0 100
40 0 100
40.01 100 0
二、溶液制备
1．对照品溶液制备精密称取柠檬苦素和诺米林约10mg于50mL容量瓶中，加入甲醇溶解定容。
2．品溶液制备精密称取提取物样品适量于50mL容量瓶中（控制柠檬苦素的浓度大于20ug/ml,诺米林的浓度大于10ug/ml），加甲醇约30ml，超声振荡20min，冷却至室温，定容，用0.45μm滤膜过滤后，即得样品溶液。
三、样品测定
在上述色谱条件下，等仪器稳定，基线平稳后，进样测定,柠檬苦素和诺米林的保留时间分别为18、22min左右，与杂质分离良好，用外标法计算各组份含量。
高效液相色谱法测定柑橘皮中柠檬苦素
高效液相色谱法测定柑橘皮中柠檬苦素徐旭耀;黄秋儿;黄惠玲【摘要】HPLC was applied to the determination of limonin in citrus peels. The sample was ultrasonically extracted with （φ） 70% ethanol solution at 50℃ for 75 min. Sinochrom ODS-BP （250 min×4. 6 mm, 10 μm） column was used as stationary phase, a mixture of acetonitrile and water mixed in the ratio of 45 to 55 （by volume） was used as mobile phase; UV detection at 210 nm was used in the determination. Linear relationship between values of peak area and mass concentration of limonin was obtained in the range of 12. 0-384 mg·L^-1 Values of average recovery and RSD （n=5） found were 99.9% and 1.8% respectively.%提出了高效液相色谱法测定柑橘皮中柠檬苦素含量的方法。
样品用体积分数为70％乙醇溶液于50C超声提取75min。
以Sinochrom ODS-BP（250min×4．6mm，10μm）为分离柱，以乙腈-水（45＋55）溶液作为流动相，用紫外检测器在波长210nm处进行测定。
柠檬苦素的质量浓度在12．0-384mg·L^-1范围内与其峰面积呈线性关系，方法的平均回收率为99．9％，相对标准偏差（n=5）为1．8％。
柠檬苦素类化合物生物活性研究进展
安徽农学通报2024年01期经济作物柠檬苦素类化合物生物活性研究进展张文琦1纪宏秀1吴倩1王猛1魏德莉2（1聊城大学生命科学学院，山东聊城252059；2聊城市人民医院，山东聊城252200）摘要柠檬苦素类化合物是一类高度氧化的四环三萜类次生代谢产物，主要存在于芸香科（Rutaceae）和楝科（Meliaceae）植物中，包括柠檬苦素、诺米林和黄柏酮等物质。
本文对柠檬苦素类化合物的生理活性进行概述，总结其各类生物学活性及作用机制，为柠檬苦素进一步用于健康保护、食品开发和农业生产等提供参考。
关键词柠檬苦素；生物活性；抗癌；抗菌中图分类号S567.9文献标识码A文章编号1007-7731（2024）01-0021-06Overview of researches on limonoids and their biological activitiesZHANG Wenqi1JI Hongxiu1WU Qian1WANG Meng1WEI Deli2（1School of Life Sciences,Liaocheng University,Liaocheng252059,China;2Liaocheng People’s Hospital,Liaocheng252200,China）Abstract Limonoids are a class of highly oxidized tetracyclic triterpenoid secondary metabolites that are mainly found in the Rutaceae and Meliaceae plant families,including substances such as limonin,nomilin,and obacunone.In this study,we mainly review the main physical and chemical properties of limonins and their physiological activities on the body,systematically summarize their various biological activities and mechanisms of action,hoping to lay an important foundation for further application of limonins in health care,food development,agricultural production and other aspects.Keywords limonoids;biological activities;anticancer;antimicrobial柠檬苦素类化合物是一类具有呋喃环并且高度氧化的四环三萜类化合物，具有中等极性，不溶于水和乙烷，溶于烃类、醇和酮。
219316082_柑橘中类柠檬苦素的提取、分离纯化及检测技术研究进展
王夜梅，李江南，尹会平，等. 柑橘中类柠檬苦素的提取、分离纯化及检测技术研究进展[J]. 食品工业科技，2023，44（12）：470−479. doi: 10.13386/j.issn1002-0306.2022070069WANG Yemei, LI Jiangnan, YIN Huiping, et al. Research Progress on Extraction, Separation, Purification and Detection Technology of Limonins in Citrus[J]. Science and Technology of Food Industry, 2023, 44(12): 470−479. (in Chinese with English abstract). doi:10.13386/j.issn1002-0306.2022070069· 专题综述 ·柑橘中类柠檬苦素的提取、分离纯化及检测技术研究进展王夜梅1，李江南1，尹会平1，张耀海1，陈爱华1，苏学素2，焦必宁1,*（1.西南大学柑桔研究所，农业农村部柑桔产品质量安全风险评估实验室（重庆），农业农村部柑桔及苗木质量监督检验测试中心，农业农村部柑橘类果品质量安全控制重点实验室，重庆 400712；2.西南大学化学化工学院，重庆 400715）摘 要：柑橘是世界第一大类水果，每年有大量的柑橘加工副产品产生，这些副产品中含有丰富的类柠檬苦素化合物，具有抗肿瘤、抗炎、抗病毒等多种生理作用，已被应用于食品、医药和农业等领域。
开发高效的类柠檬苦素提取、分离纯化技术，研发快速的类柠檬苦素分析检测方法，有着重要的理论和实践价值。
本文介绍了柑橘中类柠檬苦素结构特征及含量，重点综述了类柠檬苦素的提取、分离纯化及检测技术。
总结发现新兴技术如超声辅助、超临界流体提取类柠檬苦素的提取效率较好，联合应用大孔树脂吸附、高速逆流色谱、制备型高效液相色谱法分离效果好。
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柠檬苦素的色谱检测方法研究进展摘要：赣南脐橙主要以鲜食为主，脐橙加工业落后，其主要原因为脐橙等柑橘类汁具严重的后苦作用，影响产品风味。
其中柠檬苦素为加工中主要苦味来源。
本文就柠檬苦素的色谱检测方法作简要的概述，旨在为脐橙的深加工中控制产品的质量提供一些参考。
关键词：脐橙；柠檬苦素；检测；色谱前言赣南是我国著名的脐橙生产基地，素有“中国脐橙之乡”之称。
赣南脐橙年产量已经突破150万吨，但目前国内对脐橙的开发利用率较低，95％以上产品仍依赖鲜销；且赣州以纽荷尔脐橙为主栽品种，占种植品种的90%以上，上市集中，常常出现“丰产不丰收”，脐橙滞销，果农“卖果难”等问题。
解决赣南脐橙滞销问题，最可行的办法就是大力发展脐橙深加工，而脐橙原料在深加工过程中变苦，是困扰脐橙果酒生产的难题。
脐橙鲜食或其鲜榨果汁并无苦味，但压榨的橙汁在室温中存放几个小时或在冰箱中冷藏过夜，会变苦。
这种脐橙果汁中的延迟苦味源于无苦味的前体物生成了柠檬苦素。
据报道，脐橙等柑橘类汁出现延迟苦味的原因主要是在酸性、加热、冰冻或机械损伤等逆境环境条件下，果实中所存在的非苦味的柠檬苦素A环内酯转变成了具有强烈苦味的柠檬苦素[1]。
脐橙苦味主要来自柠檬苦素类(limonin)的变化。
柠檬苦素含量的高低直接影响脐橙及其产品的品质，测定柠檬苦素的含量可用于控制脐橙及其相关产品的质量。
随着仪器分析技术的广泛应用和检测技术的发展，研究者建立了多种检测柠檬苦素类似物的方法，主要有分光光度法、薄层色谱法(TLC)、高效液相色谱法(HPLC)等。
1.薄层层析法薄层色谱法的优点是简便快捷，缺点是由于是目测，结果误差较大，所以分析重现性一直束缚着其的发展。
Dreyer 在最初的柠檬苦素检测方面做出了重要贡献，1965 年，Dreyer 首次使用薄层层析法( TLC) 对柠檬苦素类似物甙元进行了定量分析，用核磁共振技术（NMR）对柠檬苦素结构的解析[2]。
随后Hasegawa 和Bennett 利用这两种方法分离、鉴定30 种柠檬苦素苷配基和20 种柠檬苦素配糖体[3]。
我国研究学者将参照Maier等的方法并加以改进，薄板规格为150mm×100mm，展开剂为二氯甲烷：乙酸乙醋=4:7，显色剂为二甲氨基卞亚基罗丹宁：硫酸：乙醇=1：2：97(W/W)，展距为13.5cm，对柑橘果实提取样品中的柠檬苦素和诺米林进行定性，结果表明二者的R 值分别为0.25和0.37，分离度较好[4]。
为进一步揭示常山胡柚活性成分的药理作用，对胡柚皮进行综合开发利用，赵雪梅等对其有效成分的药理活性进行了研究，利用柱层析和薄层层析及现代波谱法(IR、NMR、MS)分离鉴定了常山胡柚果皮中3种化学成分的结构，试验方法为胡柚鲜皮，分别用95％和70％的乙醇回流提取后。
合并提取液，减压浓缩致无醇，依次用氯仿、丙酮、乙醇和70％乙醇萃取。
氯仿部位和丙酮部位反复用硅胶柱层析，Sephadex LH20凝胶层析，C 18反相柱层析，以高效薄层层析(TLC)展开，硫酸—香兰素及碘显色检测纯度，以石油醚—丙酮、氯仿—甲醇、甲醇—水等体系进行梯度洗脱，分离鉴定了30多种化合物结构，首次将柚皮素、柚皮甙、柠檬苦素这3种化学成分从该种植物中分离[5]。
2.高效液相色谱法近年来，HPLC法广泛应用于定性定量分析的检测，由于其具有准确、高效、灵敏、时间短、重现性好、样品前处理简单等优点，所以发展很迅速。
HPLC是柠檬苦素的主要测定及定量分析方法，该方法最初由Fisher创建[6]。
Soleiman 等人利用HPLC 技术，对伊朗马赞德兰省柑橘果汁中柠檬苦素进行了定量分析，柑橘果汁中柠檬苦素的平均含量为18.5±3.6ppm[7]。
Amit Vikram 等人利用C18反向柱、二元溶剂梯度体系、二极管检测器，同步定量检测了柠檬苦素、诺米林等7 种柠檬苦素苷配基和柠檬苦素配糖体，并且发现柠檬苦素和柠檬苦素葡糖苷分别是柠檬苦素苷配体和柠檬苦素配糖基的主要成分[8]。
我国利用高效液相研究柠檬苦素方面，具有大量成果。
Shaojie Li和Zhuang Wang采用HPLC检测温州蜜柑中三类主要苦味物质——柠檬苦素、诺米林、柚皮苷在生长过程中含量的变化，测定柠檬苦素和诺米林时，以二氯甲烷萃取，使用C18色谱柱，根据Manners等的方法，使用流动相配比为乙腈：10%甲醇=40:60，以1ml/min的速度等度洗脱，210nm波长下检测；检测柚皮苷时，以纯乙腈为流动相A，10%的乙腈为流动相B，参照Ribeiro等人的洗脱方法，在285 nm波长下检测。
结果表明，柠檬苦素、诺米林、柚皮苷分离效果好，检测精确度高[9]。
刘亮，戚向阳等人利用HPLC 技术对国产红葡萄柚、锦橙、酸橙和脐橙进行分析，同步分离检测柠檬苦素和诺米林两种化合物，使用C18 反向柱，45%乙腈作为流动相，检测波长为210nm。
样品的回收率、精密度和重现性都比较好[10]。
陈静等采用高效液相色谱法在KR100-5C18(4.6mm .i d.×250mm,5μm)上，分别以乙腈-四氢呋喃-水(体积比为17.5∶17.5∶65)和甲醇-冰醋酸-水(体积比为40∶1∶59)为流动相(流速均为1mL /m in)，在207nm和283nm检测波长下分别测定了柠檬苦素和柚皮苷。
实验结果表明，柠檬苦素在1.00～50.00mg /L时线性关系良好(r=0.999 2)，检出限为0.07μg，平均加标回收率为98.69%，相对标准偏差(RSD)为2.5%，用该法检测柑橘汁样品中的柠檬苦素，方法简便、快速、准确[11]。
刘棠等用高效液相色谱法测定柠檬苦素含量，以柚子果汁为对象研究柚苷酶处理、果汁浓缩和低温贮藏等工序对柑橘果汁中柠檬苦素含量的影响，采用的高效液相色谱条件为：进样量20 HL，柱温35℃，流动相为水(A)和乙腈(B)，以0.5 mL/min流速进行梯度洗脱，梯度条件：0～4 min，95％A：4～14 min，60％A：14～16 min，保持60％A；16～24 min，30％A：24～28 min，95％A：28～32 rnin，保持95％A；检测波长为210nm。
最终实现柠檬苦素、普鲁宁、袖皮苷和柚皮素完全分离，柠檬苦素检出限为0，95 ppm/mL，定量限为3.17 ppm/mL，样品回收率为102.6％～104.2％，相对标准偏差为0.34％～1.04％[12]。
3.超高效液相超高效液相色谱(UPLC)是分离科学中的一个全新类别，UPLC借助于HPLC的理论及原理，涵盖了小颗粒填料、非常低系统体积及快速检测手段等全新技术，增加了分析的通量、灵敏度及色谱峰容量。
国内对UPLC在柠檬苦素的检测运用方面有较多研究，建立了金柑中柠檬苦素和诺米林的UPLC检测体系，该检测体系中柠檬苦素和诺米林在1μg/mL~1780μg/mL和1μg/mL~1720 μg/mL浓度范围内呈现出良好的线性关系，R2均为0.9999，加标回收率分别为97. 19%~100. 06%和95. 35%~99. 83%，相对标准偏差(RSD)分别为0.74%~2.25%和0.80%~3.36%，检出限分别为1.65μg/g和1.28μg/g，也可用于柑橘、柚子、橙等植物中柠檬苦素类化合物的检测[13]。
将UPLC与质谱联用，检测柑橘组织中的柠檬苦素含量，具体工作条件为：色谱柱waters ACQUITY BEH C18(50mm×2.5mm,1.9μm)；流动相：A为乙腈，B为纯水，采用梯度洗脱：A10%(0min)—50%(3min) —10%(4min) —10%(5min)，流速0.3mL/min，柱温40℃，进样量5μL，检测时间5min，正离子模式（ESI+）离子检测器：柠檬苦素母离子m/z=471.1，子离子m/z=425.3，m/z=161.1[14]。
4.高效液相色谱串联技术Manners和Hasegawa提出的HPLC-MS法，并使用微球硅胶柱和环己烷、四氢呋喃的二元体系分离柠檬苦素类似物甙元，该方法的高选择性已经达到商业标准[15]。
Gary 等人分别利用高效液相-电子轰击电离-质谱联用法（HPLC-EI/MS）和高效液相-常压化学电离-质谱联用法（HPLC-APCI/MS），对17 种已知的中性柑橘柠檬苦素苷配基化合物进行了鉴定。
已知的柠檬苦素类似物HPLC-MS 数据提供了色谱特征信息，常压化学电离分子量数据和电子电击碎片数据。
电子电击碎片模型与柠檬苦素的结构特征有关。
因此，电子电击碎片模型结合常压化学电离分子量数据可能会预测未知的柑橘柠檬苦素类似物[16]。
国内早在2000年，无锡轻工大学食品学院便建立了液相色谱—电喷雾质谱联用技术分析柑桔中的柠檬苦素类似物成分的方法，从我国浙江产的柚皮中测出两种柠檬苦素类似物配糖体奥巴叩酮配糖体和诺米林配糖体，为从复杂混合物中筛选生理活性成分提供了一个简便的方法[17]。
5.分光光度法分光光度法的优点是快速、简单。
分光光度法测量柑桔中的类柠檬苦素化合物主要是根据柠檬苦素和艾利希Ehrlich试剂的反应呈红色，可粗略的测量样品中的类柠檬苦素化合物的总量，而且快速方便，可用于类柠檬苦素的提取研究。
Breksa等建立了一种简单和快速测定柑橘汁中总柠檬苦素类似物苷元和配糖体含量的比色方法。
方法定量是基于待测物与4-苯甲醛反应会形成红色至橙色衍生物。
实验研究了4-苯甲醛浓度、反应时间、试剂组成对颜色的生成和敏感性的影响，并在实验条件进行了优化[18]。
刘君研究建立了紫外分光光度法快速测定类柠檬苦素的方法，以DMAB作为指示剂，进行比色分析，确定柠檬苦素标准品扫描最大波长为470nm，建立吸光度与浓度的线性回归方程为y=0.0028x+0.0047，R2=0.9945，其平均回收率在91.30%到94.48%之间。
此法不需要昂贵的设备，操作简单，具有较高的灵敏度，可快速准确的检测出柑桔种子中类柠檬苦素的总量[19]。
6.结语以上方法中，分光光度法仅适用于对柠檬苦素类化合物总量的测定，TLC法因依靠目测进行定量，测试结果误差较大，高效液相色谱法具有分离效率高，选择性好，检测灵敏度高，操作自动化，应用范围广等优点，目前检测柠檬苦素类似物最常用的是HPLC。
且高效液相色谱联用技术也得到了不断的发展，采用HPLC法及其联用技术检测柠檬苦素类化合物将日益受到研究学者的青睐。
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