实验五_转座子引起的插入突变(精选)
分子生物学单选多选附答案
（注：单项和多项）1．证明DNA是遗传物质的两个关键性实验是：肺炎球菌在老鼠体内的毒性和T2噬菌体感染大肠杆菌。
这两个实验中主要的论点证据是（C）。
A．从被感染的生物体内重新分离得到DNA作为疾病的致病剂B．DNA突变导致毒性丧失C．生物体吸收的外源DNA（而并非蛋白质）改变了其遗传潜能D．DNA是不能在生物体间转移的，因此它一定是一种非常保守的分子E．真核心生物、原核生物、病毒的DNA能相互混合并彼此替代2．1953年Watson和Crick提出（A）。
A．多核苷酸DNA链通过氢键连接成一个双螺旋B．DNA的复制是半保留的，常常形成亲本-子代双螺旋杂合链C．三个连续的核苷酸代表一个遗传密码D．遗传物质通常是DNA而非RNAE．分离到回复突变体证明这一突变并非是一个缺失突变3．DNA双螺旋的解链或变性打断了互补碱基间的氢键，并因此改变了它们的光吸收特性。
以下哪些是对DNA的解链温度的正确描述？（C、D）A．哺乳动物DNA约为45℃，因此发烧时体温高于42℃是十分危险的B．依赖于A-T含量，因为A-T含量越高则双链分开所需要的能量越少C．是双链DNA中两条单链分开过程中温度变化范围的中间值D．可通过碱基在260nm的特征吸收峰的改变来确定E．就是单链发生断裂（磷酸二酯键断裂）时的温度4．DNA的变性（A、C、E）。
A．包括双螺旋的解链B．可以由低温产生C．是可逆的D．是磷酸二酯键的断裂E．包括氢键的断裂5．在类似RNA这样的单链核酸所表现出的“二级结构”中，发夹结构的形成（A、D）。
A．基于各个片段间的互补，形成反向平行双螺旋B．依赖于A-U含量，因为形成的氢键越少则发生碱基配对所需的能量也越少C．仅仅当两配对区段中所有的碱基均互补时才会发生D．同样包括有像G-U这样的不规则碱基配对E．允许存在几个只有提供过量的自由能才能形成碱基对的碱基6．DNA分子中的超螺旋（A、C、E）。
A．仅发生于环状DNA中。
基因组学——精选推荐
基因组学1.基因组学包括那些研究内容？（1）结构基因组学：通过基因组作图、核苷酸序列分析，研究基因组结构，确定基因组成、基因定位的科学基因组测序：⾸先将整个基因组的DNA分解为⼀些⼩⽚段，然后将这些分散的⼩⽚段逐个测序，最后将测序的⼩⽚段按序列组装基因组作图：在长链DNA分⼦的不同位置寻找特征性的分⼦标记，绘制基因组图。
根据分⼦标记可以准确⽆误地将已测序的DNA⼩⽚段锚定到染⾊体的位置上。
（2）功能基因组学：利⽤结构基因组学提供的信息和产物，在基因组系统⽔平上全⾯分析基因功能的科学。
功能基因组学的研究内容：(1)进⼀步识别基因以及基因转录调控信息。
(2)弄清所有基因产物的功能，这是⽬前基因组功能分析的主要层次。
(3)研究基因的表达调控机制，分析基因产物之间的相互作⽤关系，绘制基因调控⽹络图。
（3）⽐较基因组学：研究不同物种之间在基因组结构和功能⽅⾯的亲源关系及其内在联系的学科。
⽐较基因组学的研究内容:：（1）绘制系统进化树，显⽰进化过程中最主要的变化所发⽣的时间及特点。
据此可以追踪物种的起源和分⽀路径。
(2)了解同源基因的功能。
(3)对序列差异性的研究有助于认识产⽣⼤⾃然⽣物多样性的基础。
2.基因组学的历史变⾰与发展趋势？（⼀）1900年代以前:前遗传学时代（1）物种进化的⾃然选择学说——达尔⽂进化论。
（2）1865年G.Mendel发表豌⾖杂交实验结果，提出了遗传学的两⼤遗传规律—分离规律和独⽴分配规律，并认为是⽣物体内的遗传因⼦或遗传颗粒控制⽣物性状（⼆）1900—1950年代:经典遗传学时代标志：1900年,孟德尔遗传规律再发现标志着遗传学的诞⽣）⼈们开始把控制⽣物遗传性状的遗传单称为基因。
⽣命科学的研究基本都是围绕着基因来进⾏。
（三）1950—1990年代:分⼦⽣物学时代（前基因组学时代）标志：Watson & Crick 的DNA 双螺旋结构的发现[《Nature》1953.4.25]，标志着分⼦⽣物学时代的开始 F.Crick根据DNA 的X射线衍射图谱，提出了DNA双螺旋结构模型，解释基因复制的机制，从⽽真正开始从分⼦⽔平上研究⽣命活动。
生物--山东省聊城市2023届高三下学期2月期初考试
2020级高三下学期开学考试生物试题时间：90分钟分值：100分第Ⅰ卷（45分）一、单项选择题（30分）1. 细胞中的氨基酸有两种来源：一是从细胞外摄取，二是细胞内利用氨基酸合成酶自我合成。
鸟苷四磷酸（ppGpp）是细胞内的一种信号分子。
当细胞缺乏氨基酸时，某种RNA无法结合氨基酸（空载），空载RNA与核糖体结合后，启动RelA利用GDP和ATP合成ppGpp。
ppGpp可进一步提高细胞内甲类基因或降低乙类基因的转录水平，甚至直接抑制翻译的过程。
下列叙述错误的是（）A. 上述实例中存在负反馈调节，可一定程度上缓解氨基酸缺乏造成的影响B. 空载RNA属于tRNA，其上的反密码子与密码子的碱基之间通过氢键结合C. ppGpp可能与RNA聚合酶结合调控甲类基因启动子的开启促进其转录D. 推测氨基酸合成酶基因属于乙类基因，rRNA基因属于甲类基因2. 迁移小体是一类由细胞膜包被形成的细胞器，与细胞的迁移和细胞间的信息交流有关。
细胞迁移时，TSPAN4蛋白及胆固醇在细胞局部高度富集，增大了富集区域膜的弯曲度，形成迁移小体。
胞体持续地向迁移小体中运输胞内物质，最终迁移小体会释放到细胞外，为后续细胞的迁移提供路线信息。
某些线粒体可被迁移小体吞噬并从细胞中清除。
下列叙述错误的是（）A. 迁移小体的形成依赖于细胞膜的流动性B. 迁移小体内可能含有激素、淋巴因子等信号分子C. 抑制TSPAN4蛋白的合成，可能会促进癌细胞的扩散D. 迁移小体可清除损伤线粒体以维持细胞内部环境稳定3. 真核细胞中，细胞周期检验点是细胞周期调控的一种机制，检验点通过细胞的反馈信号来启动或推迟进入下一个时期。
三种常见检验点的功能如下表，其中检验点甲决定细胞是否进行分裂，若通过检验点甲，细胞进入分裂期。
下列分析不合理的是（）检验点功能甲评估细胞大小乙评估DNA是否准确复制丙评估纺锤体是否正确组装A. 检验点甲接受的反馈信号可能是细胞体积增大到一定程度B. 从检验点乙→丙，细胞中染色质丝缩短变粗成为染色体C. 在细胞周期中，细胞先经过检验点甲，再经过检验点乙D. 检验点丙可能对染色体平均分配到细胞两极有重要作用4．甲、乙为某哺乳动物处于不同分裂时期的细胞示意图，且图示两细胞均已发生变异；丙为细胞分裂过程中每条染色体上DNA含量变化曲线。
分子生物学习题答案
练习一参考答案一、名词解释1．中心法则答：central dogma，指遗传信息从 DNA 传递给 RNA，再从 RNA 传递给蛋白质的转录和翻译的过程。
遗传信息可以通过复制、转录或逆转录在 DNA 和DNA 之间或 DNA 和 RNA 之间传递，但是从核酸到蛋白的信息传递是单向的。
这是生物体遗传信息传递所遵循的基本法则。
2．核酶答：ribozyme，核酶一词用于描述具有催化活性的 RNA, 即化学本质是核糖核酸(RNA), 却具有酶的催化功能。
核酶的发现对于所有酶都是蛋白质的传统观念提出了挑战。
3．泛素答：ubiquitin，泛素是一种 76 氨基酸的多肽，可以在三种酶（E1，E2， E3）的催化下共价连接到把蛋白的 Lys ε-NH2，并进一步通过多泛素化，介导靶蛋白被蛋白酶体降解。
4．端粒酶答：telomerase，端粒酶是一种核糖核酸蛋白酶，由 RNA 和蛋白质构成，具逆转录活性，能够以自身的RNA 为模版，通过多次互补配对，延长染色体端粒3’末端。
5．信号肽答：signal peptide，指新合成多肽链中用于指导蛋白质跨膜转移（定位）的 N-末端的氨基酸序列（有时不一定在 N 端），至少含有一个带正电荷的氨基酸，中部有一高度疏水区以通过细胞膜。
大多数信号肽跨膜后被切除。
6．Intron答：内含子，内含子是基因内的可以被转录，但是在转录后的 RNA 加工加工过程被切除的部分，它不出现在成熟的 RNA 分子中。
大多数真核生物的基因都有内含子。
7．Shine-Dalgarno Sequence答：SD 序列，在原核 mRNA 上起始密码子 AUG 上游 4~13 个核苷酸处一段富含嘌呤的序列，可与16SrRNA 上的一段嘧啶丰富区域通过碱基互补结合，是原核 mRNA 和核糖体小亚基结合位点。
8．Okazaki Fragments答：冈崎片段，DNA 复制过程中，在后随链的复制是不连续的，首先形成DNA 短片段（1000-2000 碱基），这些片段被称为冈崎片段，它们随后被共价连接成完整的后随链。
转座子插入突变体库构建流程
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分子生物学重点
分子生物学：是研究核酸、蛋白质等所有生物大分子的形态、结构特征及其重要性、规律性和相互关系的科学，是人类从分子水平真正揭开生物世界的奥秘，由被动的适应转向主动的改造和重组自然界的基础学科。
基因：能产生一条肽链或功能RNA所必需的DNA片段。
无义突变：在DNA序列中任何导致编码氨基酸的三连密码子转变为终止密码子（UAG、UGA、UAA）的突变，它使蛋白质合成提前终止，合成无功能的或无意义的多肽。
同义突变：指碱基的改变不引起氨基酸改变的突变。
√C值：一种生物单倍体基因组DNA的总量。
√C值反常：也称C值谬误。
指C值往往与种系的进化复杂性不一致的现象，即基因组大小与遗传复杂性之间没有必然的联系，某些较低等的生物C值却很大，如一些两栖动物的C 值甚至比哺乳动物还大。
DNA转座（移位）：遗传信息从一个基因座转移至另一个基因座的现象，是由可移位因子介导的遗传物质重排。
RNA干涉（RNAi）：利用双链小RNA高效、特异性降解细胞内同源mRNA从而阻断靶基因表达，使细胞出现靶基因缺失的表型。
转座子：存在于染色体DNA上可自主复制和位移的基本单位。
转座作用的遗传学效应：1）转座引起插入突变2）转座产生新的基因3）转座产生染色体畸变4）转座引起生物进化√增强子：指能使和它连锁的基因转录频率明显增加的DNA序列，也能强化转录的起始。
√弱化子：指原核生物操纵子中能显著减弱甚至终止转录作用的一段核苷酸序列，该区域能形成不同的二级结构，利用原核生物转录与翻译的偶联机制对转录进行调节。
P26-组蛋白：组蛋白呈碱性。
真核生物染色体的组蛋白有5种，即H1、H2A、H2B、H3和H4。
这些组蛋白大都含有赖氨酸（Lys）和精氨酸（Arg）组蛋白特征：①进化上极端保守性②无组织特异性③肽链上氨基酸分布的不对称性④组蛋白的修饰作用（甲基化、乙酰化、磷酸化、泛素化、ADP核糖基化）⑤富含Lys(赖氨酸)的组蛋白H5√真核生物基因组的结构特点总结归纳如下:（1）真核基因组庞大，一般都远大于原核生物的基因组。
第七章 微生物遗传试题及答案
第七章微生物遗传试题一．选择题：71085.71085.已知DNA的碱基序列为CATCATCAT，什么类型的突变可使其突变为：CTCATCATA.A.缺失B.B.插入C.C.颠换D.D.转换答：()71086.71086.已知DNA的碱基序列为CATCATCAT，什么类型的突变可产生如下碱基序列的改变：CACCATCAT？A.缺失B.插入C.颠换D.转换答：()71087.71087.不需要细胞与细胞之间接触的基因重组类型有：A.接合和转化B.转导和转化C.接合和转导D.接合答：()71088.71088.转化现象不包括A.DNA的吸收B.感受态细胞C.限制修饰系统D.细胞与细胞的接触答：()71089.71089.将细菌作为实验材料用于遗传学方面研究的优点是：A.生长速度快B.易得菌体C.细菌中有多种代谢类型D.所有以上特点答：()71090.71090.转导噬菌体A.仅含有噬菌体DNAB.可含有噬菌体和细菌DNAC.对DNA酶是敏感的D.含1至多个转座子答：()71091.71091.在Hfr菌株中：A.F因子插入在染色体中B.在接合过程中，F因子首先转移C.在接合过程中，质粒自我复制D.由于转座子是在DNA分子间跳跃的，因此发生高频重组答：()71092.71092.以下碱基序列中哪个最易受紫外线破坏？A.AGGCAAB.CTTTGAC.GUAAAUD.CGGAGA答：()71093.71093.对微生物进行诱变处理时，可采用的化学诱变剂是：A.青霉素B.紫外线C.丫啶类染料D.转座子答：()71094.71094.在大肠杆菌(E.coli)的乳糖操纵子中，基因调节主要发生在__________水平上。
A.转化B.转导C.转录D.翻译答：()71095.71095.转座子___________。
A.能从DNA分子的一个位点转移到另一个位点B.是一种特殊类型的质粒C.是一种碱基类似物D.可引起嘌呤和嘧啶的化学修饰答：()71096.71096.当F+F-杂交时A.F因子几乎总不转移到F+细胞中B.F-菌株几乎总是成为F+C.基因重组的发生频率较高D.F因子经常插入到F-细胞染色体上答：()71097.71097.在U形玻璃管中，将一滤片置于二株菌之间使之不能接触，在左臂发现有原养型菌出现，这一现象不是由于：A .接合B.转化C.普遍转导D.专性转导答：()71098.71098.F因子和λ噬菌体是：A.与寄主的生活能力无关B.对寄主致死C.与染色体重组后才可复制D.仅由感受态细胞携带答：()71099.71099.细菌以转化方式进行基因转移时有以下特性：A.大量供体细胞的基因被转移B.包含有F质粒参加C.依靠噬菌体感染受体细胞D.可通过从供体细胞中提取DNA片段来完成答：()71100.71100.一个大肠杆菌(E.coli)的突变株，不同于野生型菌株，它不能合成精氨酸，这一突变株称为：A.营养缺陷型B.温度依赖型C.原养型D.抗性突变型答：()71101.71101.转导子是指：A.供体菌B.转导噬菌体C.转导前供体菌D.转导后受体菌答：()71102.71102.以下不是专性转导特点的是：A.必须是原噬菌体状态B.供体细胞中的任何染色体基因片段都有机会被转移到受体细胞中C.通常包括了一个基因如半乳糖(gal)基因的重组D.原噬菌体转导导致噬菌体某些基因留在了细菌的基因组中答：()71103.71103.当Hfr F-时，A.进入到F-细胞中的第一个基因随Hfr菌株的不同而不同B.采用在不同时间中断杂交的方法来作基因图C.单链DNA链的5 '端首先进入F-细胞D.所有上述特点全正确答：()71104.71104.抗药性质粒(R因子)在医学上很重要是因为它们：A.可引起某些细菌性疾病B.携带对某些抗生素的特定抗性基因C.将非致病细菌转变为致病菌D.可以将真核细胞转变为癌细胞答：()71105.71105.在普遍性转导中，同源DNA分子的交换要求：A.转座子B.插入序列C.DNA链的断裂和重新连接D.反转录答：()71106.71106.F+F-杂交时，以下哪个表述是错误的？A.F-细胞转变为F+细胞B.F+细胞转变为F-细胞C.染色体基因不转移D.细胞与细胞间的接触是必须的答：()71107.71107.以下突变中哪个很少有可能产生回复突复：A.点突变B.颠换C.转换D.染色体上三个碱基的缺失答：()71108.71108.准性生殖：A.通过减数分裂导致基因重组B.有可独立生活的异核体阶段C.可导致高频率的基因重组D.常见于子囊菌和担子菌中答：()71109.71109.流产转导不具有_________的特性。
鸡白痢沙门氏菌Mini-Tn5转座子插入突变
进行筛选，获得大量在不同位点插入突变的突变体，从中筛选鸡白痢沙门氏菌某功能缺陷型突变株。通过对突变
株的基本特征以及PCR鉴定后，再进行插入基因定位。结果表明，Km和Cm抗性基因已成功转座至鸡白痢沙门
氏菌基因组上；基因定位显示突变株均有且只有1个插入位点，插入位点的位置不尽相同。这为研究鸡白痢沙门
氏菌功能基因和筛选特定突变株提供了必要的基础。
失，并对其某种功能进行有针对性的筛选（如肠内黏 附、细胞内生存等），最后通过基因定位鉴定突变株 插入的功能失活基因，从而获得诸多与此功能相关 的突变株[3]。因此突变株的获得对研究细菌的感染 与致病的分子机制十分有用[4-5]。为此，本研究利用 自杀性质粒pUT 携带的mini-Tn5转座子对鸡白痢 沙门氏菌进行转座突变[6-8]，构建并鉴定突变株，以
表1 试验用的细菌和质粒 Table 1 Bacteria and plasmids in the research
应条件：94℃5min；94℃5个循环；72℃10min。PCR产物预期大小约
为1.0kb。回收PCR产物连接至pUC18载体中，
转化至E.coli DH5α，获得重组质粒，命名为 pUC-
关键词：鸡白痢沙门氏菌；基因转座；突变；基因定位
中图分类号：S852.61
文献标识码：A
文章编号：0366-6964（2008）05-0621-06
Insertion Mutagenesis in Salmonella pullorum by Mini-Tn5 Transposon
GENG Shi-zhong，JIAO Xin-an*，CHEN Xiao-iuan, PAN Zhi-ming,ZHANG Hui,CHEN Xiang
Cm，经鉴定后送宝生物工程（大连）有限公司测序。