Agilent 1260 Infinity 高效液相仪基本操作 PPT课件
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安捷伦1260高效液相操作规程
安捷伦液相1260高效液相色谱操作规程1.前期工作查找资料（最好是外文文献）了解别人做该样品时常用的流动相和固定相。
如果还不清楚样品是什么物质，最起码也应该对其极性进行了解，为选择合适的流动相和固定相打好基础。
流动相选择注意事项：①避免使用高粘度的溶剂作为流动相；②所选用的流动相一定要与样品相溶；③各流动相之间可以很好的相溶；固定相选择注意事项：a.正相色谱正相色谱用的固定相通常为硅胶（Silica）以及其他具有极性官能团胺基团，如（NH2，APS）和氰基团（CN，CPS）的键合相填料。
由于硅胶表面的硅羟基（SiOH）或其他极性基团极性较强，因此，分离的次序是依据样品中各组分的极性大小，即极性较弱的组份最先被冲洗出色谱柱。
正相色谱使用的流动相极性相对比固定相低，如正已烷（Hexane），氯仿（Chloroform），二氯甲烷（Methylene Chloride）等。
b.反向色谱反向色谱用的填料常是以硅胶为基质，表面键合有极性相对较弱官能团的键合相。
反向色谱所使用的流动相极性较强，通常为水、缓冲液与甲醇、乙腈等的混合物。
样品流出色谱柱的顺序是极性较强的组分最先被冲洗出，而极性弱的组分会在色谱柱上有更强的保留。
常用的反向填料有：C18（ODS）、C8（MOS）、C4（Butyl）、C6H5（Phenyl）等。
2.准备工作①用于液相色谱分析的样品溶液使用前要经过0.15µm过滤器过滤，必须达到均匀而无颗粒的状态；②流动相一定要选用色谱级别的（最好是默克、飞世尔、时联等牌子的），并且在使用之前一定要使用0.4µm过滤器过滤，再用超声波清洗仪脱气处理20-30min；③在连接柱子和色谱仪之前，阀件或管路一定要清洗干净，（一般用异丙醇将管路清洗）3.仪器操作（一）将所选择的流动相加入相应的试剂瓶中：棕色瓶对应A 泵，该瓶中只能加双蒸水或娃哈哈纯净水；B、C、D泵根据需要添加。
注：若流动相中有水、乙腈最好现用现处理，不宜放置太长时间。
Agilent1260基本操作方法PPT课件
2021/将3/9当前窗口中的谱图拷贝到剪贴板中
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在图谱上添加文字标注
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在图谱上添加线形标注
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在图谱上添加EMF格式的图形标注
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min
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2
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0
0
1.327 1.570
2.514 2.901 3.246
4.027 4.513
根据预实验确定采集时间
10
20min 40min 60min 80min
MeOH 20 40 40 80
H2O 80 60 60 20
40′
80′ 60′
0′
20′
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②仪器/采集-设置进样器
标准：0.1～100μL
前一针样品运行过程中，把 下一针的样品瓶抓取到针座
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DAD高级功能
利用等吸收图优化色谱条件
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反选后最亮处表示吸收最集中，即最大吸收。
参比波长：选择样品无吸收，且靠近样品吸收处。
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DAD高级功能 色谱峰纯度检索
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纯色谱峰的纯度因子将高于阈值 不纯峰的纯度因子将低于阈值
2
1.327 1.570
1.814
2.514 2.901 3.246
AgilentInfinity高效液相仪基本操作(共27张PPT)
（六）、检测器
（六）、检测器
（六）、检测器
氘灯的使用注意事项：
1、开灯后需预热，新灯大概需要十几分钟的预热时间，如果灯的使用 时间已经很长则预热时间也需适当延长。
2、不用频繁开关氘灯，否则影响寿命。
3、氘灯为消耗品，寿命为2000小时左右。 4、氘是一种衰变的元素，不建议提前购买氘灯作为储备消耗
（一）2、、溶剂冲柜 洗阀中PTFE（聚四氟乙烯）过滤芯的作用：过滤流动相中密封
（4）微量多孔板自动进样器
常①用作的 用分：析过垫泵滤有流落单动元相下泵中、的的二颗杂元粒泵物质和、四微以元生泵物及。等杂密质封。 垫磨损下来的碎屑。
不锈钢滤头可用异丙醇超声。 （六）、检测器 （六）、检测器 ４、荧光检测器（FLD） 3 、活塞杆采用人造单晶蓝宝石材料，不能超声清洗,用乙醇或温水或牙膏洗，软布擦。 ３、示差折光检测器（RID） ２、二极管阵列检测器（DAD）
二元泵前视图
二元泵工作原理示意图
泵头维护注意事项
1、泵头密封垫需要成对更换，反相体系和正相体系 所使用 的密封垫不同。
实验室中应至少备有一对泵头密封垫。 2、泵头密封垫可用10%异丙醇水溶液定期清洗，防止无机盐溶液析出
的盐过多，造成过早过快磨损。
3 、活塞杆采用人造单晶蓝宝石材料，不能超声清洗,用乙醇或温
品。
参考资料
官网：安捷伦科技大学-关于Agilent-售后服务在中国-产品技术
支持。
l
水或牙膏洗，软布擦。
冲洗阀中的过滤芯
其3、中氘，灯1B为型、消：耗打60品0b开，ar寿冲命为洗200阀0小时，左右以。水为溶剂，流速5ml/min,系统压力大于10bar应
四元泵前视图
（２4、）二微极量管多该阵孔列更板检自测换动器进冲（样D洗器AD）阀中的过滤芯。
高效液相色谱仪使用的综合(仪器分析课件)
G1312B(二元泵)
可在泵的条件设置中,
输入所用流动相的种类,并通过独立的安捷伦LC诊断软
件对单个溶剂进行泵校正
溶剂---溶剂B、C和D的百分比可以设置为 0到100%之间的任何值。“溶剂A”通常输 送剩余的量:100%-(%B+%C+%D) 时间表---此处设置同二元泵
G1313A(标准型自动进样器),G1329B(自动控温自动进样器) 设置进样器 右键点击进样器模块视图的空白处,选择“方法”后进入进样器的参数设置界面
下面步骤如果已经配置过,则不需要操作通过点击菜单左上方的 仪器,得到如下的界面
进可以分别创建位置和
输入相关信息,注意仪器类型一栏要选择 AGILENT LC SYSTEM,,输入完后点击确定。出现 如下界面
选定刚刚创建的仪器名称,点击“配置 仪器”选择“配置模块”,注意不要选 择“使用经典驱动程序”。如果仪器 中包括DAD、FLD,则需要选择“3D光谱 评估”。点击确定
G1312X(二元泵), 冲洗A、B两个通道;对于G1310X(单元泵),冲洗一个通
道即可
开启模块:鼠标右键点击每个模块的空白都会弹出提示框,选择“控
制”即可在新的窗口中选择打开或者关闭各个模。也可在仪器视图
中选
“打开”
监视基线:点击“视图>在线信号”打开“在线图谱
点击“改变”按钮,选择“可选信号”中需监视的信号,“添加”到“选定信号中”。 调整“窗口”中“X周范围”,如需要画“0”点基线,请选择“画零线”。调整Y轴 “Y轴范围”与“偏移量”或者选择“Y轴自动调整”来选择合适的监视图形
控制 右键点击泵模块视图空白处,选择“控制”进入泵的控制界面
泵一控制泵的“启动”,“关闭”或者“待机”状态泵密封垫清洗组件(选 配)一控制泵密封清洗蠕动泵的开关以及定期开关的程序
Agilent1260高效液相仪器的基本认识与使用注意事项ppt课件
2
必须更换
蠕动泵：用于seal wash,通常漏泄两个部位，上面漏液一般需更换 软管，下面漏液多为连接松动
压力波动：当系统压力波动 变大时，常见原因有两种。
1.流动相内有气泡，如未超 声，滤头内存有气泡。。
2.图中两个单向阀脏污或损 坏
如不是以上两种原因，则需 其他的排查
样品盘：在样品盘取出后我们可以看到图中标记位 置的三个白色的点，此处不可用手触摸，此为识别 标识，若有损坏或脏污可能影响样品的识别。
1.Purge压力：应小于10bar，超过10bar则必须找管理员进行更换滤芯 2.二通压力（连接在线过滤器+检测池）：一般15bar左右 3.当发现系统压力异常时：我们首先应使用从下到上逐个部分断开排除法， 察找压力异常部分，再根据情况进行解决
光线入口 光线通道 毛细管 出器：我们将在线过滤器装在检测池前，能够尽可能的保护我们的 流通池，以免堵塞。（此款在线过滤器100%甲醇通过是的压力大概3-4bar, 如超过5bar，说明滤芯脏污，低于2bar则应考虑是否滤芯破损） 滤芯：过滤器内的滤芯脏污后可以用甲醇或异丙醇进行超声清洗，仔细观 察我们会发现滤芯的其中一面有一个凹槽，我们统一将凹槽的方向朝着进 液的方向安装 不锈钢连接管线：与上面提到的管线类似，不可频繁弯折，以免折断
不锈钢接头和管 线：在液相仪器 上经常有使用图 中标记的这种不 锈钢管线和接头。 尤其是柱温箱中 的此处管线发生 断裂最多。原因 无非是此处我们 经常拆装柱子， 弯折次数最多， 且有部分使用人 员下手太重。
流通池：此款1260检测器的流通池缺点较为脆弱，易堵，有点为较为灵敏； 在标记区域内，可以看到，流通池的耐压是60bar，流通池内体积1微升。 当流通池堵塞时我们可以进行适当反冲，反冲压力为40bar
安捷伦HPLC1260操作流程ppt课件
逐步增大流速检查压力 稳定后打开检测器
稳定后清洗针与管路
跑基线
保存数据
冲洗管路及关机
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关机前，用90%水冲洗柱子和系统0.5-1小时， 流量1.0mL/min，再用100%有机溶剂（甲醇） 冲0.5小时，然后保存方法和仪器设置。
退出化学工作站，及其它窗口，关闭计算机。 关掉液相主机各模块电源开关，拔掉电源插头。 做好仪器使用登记。
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进入工作站 主界面 方法和各模块参数设置 跑基线 样品命名与进样检测
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进入工作站
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主 界 面
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方
法
在各模块中 空白处点击 右键，选择 “方法”编
辑参数。
和 各 模 块 参 数
设
置
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1bar≈14.5psi≈0.1MPa=100kPa 不同仪器单位不同
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滤膜
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流动相超声与脱气 为了除去溶解在流动相中得气泡,降低基线
噪音，在HPLC开机前应把各溶剂瓶在超声机中 超声30min左右。
对于溶解在流动 相中的极微气体，安 捷伦1260HPLC四元 泵中集合了脱气机， 可以进一步对混合后 的流动相进行脱气处 理。
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流动相冷却 流动相在超声机中长时间超声后，由于水
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标准品
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1 环己烷羧酸
2 丙戊酸钠
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患者丙戊酸钠血药浓度检测色谱图
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Agilent 1260 Infinity 高效液相仪基本操作课件
学习交流PPT
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（四）、进样器
（1）标准自动进样器G1319B
（2）高性能自动进样器G1367E
学习交流PPT
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自动进样器进样过程（1）
进样前，六通阀切换到旁路位置，来自泵的溶剂进入端口1、6直接
流到色谱柱。
学习交流PPT
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自动进样器进样过程（2）
进样开始后，取样针抬起，把样品瓶抓至针座上，取样针扎入样品瓶，
学习交流PPT
7
（三）、泵
常用的分析泵有单元泵、 二元泵和四元泵。其中， B型：600bar C型：400bar
学习交流PPT
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四元泵前视图
学习交流PPT
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四元泵的工作原理示意图
学习交流PPT
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二元泵前视图
学习交流PPT
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二元泵工作原理示意图
学习交流PPT
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泵头维护注意事项
1、泵头密封垫需要成对更换，反相体系和正相体系 所使 用的密封垫不同。
Agilent1260高效液相色谱仪 硬件简介
学习交流PPT
1
目录
一、组成部分 二、工作原理 三、安装与维护
学习交流PPT
2
一、组成部分
（一）、溶剂柜 （二）、脱气机 （三）、泵 （四）、进样器 （五）、柱温箱 （六）、检测器
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
学习交流PPT
3
仪器的安装
连接线： ①电源线 ②LAN线 ③CAN线 ④遥控线
３、示差折光检测器（RID）
４、荧光检测器（FLD）
５、蒸发光散射检测器（ELSD）
其中，选择性检测器：VWD、 DAD和 RID；
通用型检测器： FLD学、习交E流LPSPTD。
Agilent 1260 Infinity 高效液相仪基本操作
4、氘是一种衰变的元素，不建议提前购买氘灯作为储备消
耗品。
参考资料
官网：安捷伦科技大学-关于Agilent-售后服务在中国-产 品技术支持。
/article/2/1524.html
（一）、溶剂柜
问题：液相储液瓶中滤头的作用？注意事项？
①作用：过滤流动相中的颗粒物、微生物等杂质。 ②注意事项： a、玻璃滤头不能超声；不锈钢滤头可用异丙醇超声。 b、滤头应定期（每三个月）更换或清洗。
（二）、脱气机
１、分类：有内置和外置两种类型。 ２、工作原理：见下图。
（三）、泵
常用的分析泵有单元泵、 二元泵和四元泵。其中， B型：600bar
C型：400bar
四元泵前视图
四元泵的工作原理示意图
二元泵前视图
二元泵工作原理示意图
泵头维护注意事项
1、泵头密封垫需要成对更换，反相体系和正相体系
用的密封垫不同。 实验室中应至少备有一对泵头密封垫。 2、泵头密封垫可用10%异丙醇水溶液定期清洗，防止无机盐 溶液析出的盐过多，造成过早过快磨损。 3 、活塞杆采用人造单晶蓝宝石材料，不能超声清洗,用乙 醇或温水或牙膏洗，软布擦。
所使
冲洗中的过滤芯
1、打开冲洗阀，以水为溶剂，流速5ml/min,系统压力大于
10bar应该更换冲洗阀中的过滤芯。
2、冲洗阀中PTFE（聚四氟乙烯）过滤芯的作用：过滤流动 相中密封垫落下的杂质以及密封垫磨损下来的碎屑。
（四）、进样器
1、分类：有手动和自动进样器两种。其中，自动进样器 又包括： （1）标准自动进样器
（2）高性能自动进样器
（3）双通道自动进样器 （4）微量多孔板自动进样器 （5）制备型自动进样器 2、工作原理：
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四元泵前视图
四元泵的工作原理示意图
二元泵前视图
二元泵工作原理示意图
泵头维护注意事项
1、泵头密封垫需要成对更换，反相体系和正相体系 所使 用的密封垫不同。 实验室中应至少备有一对泵头密封垫。
2、泵头密封垫可用10%异丙醇水溶液定期清洗，防止无机盐 溶液析出的盐过多，造成过早过快磨损。
3 、活塞杆采用人造单晶蓝宝石材料，不能超声清洗,用乙 醇或温水或牙膏洗，软布擦。
（四）、进样器
（1）标准自动进样器G1319B
（2）高性能自动进样器G1367E
自动进样器进样过程（1）
进样前，六通阀切换到旁路位置，来自泵的溶剂进入端口1、6直接 流到色谱柱。
自动进样器进样过程（2）
进样开始后，取样针抬起，把样品瓶抓至针座上，取样针扎入样品瓶， 计量泵抽取样品。
自动进样器进样过程（3）
取样结束后，针从样品瓶中拔出，将样品瓶抓离针座，针扎入针座毛细管， 六通阀切换回主流路位置，将样品冲到色谱柱中，出峰。
（五）、柱温箱
（六）、检测器
分类：
１、可变波长检测器（VWD） ２、二极管阵列检测器（DAD） ３、示差折光检测器（RID） ４、荧光检测器（FLD） ５、蒸发光散射检测器（ELSD） 其中，选择性检测器：VWD、 DAD和 RID；
冲洗阀中的过滤芯
1、打开冲洗阀，以水为溶剂，流速5ml/min,系冲洗阀中PTFE（聚四氟乙烯）过滤芯的作用：过滤流动 相中密封垫落下的杂质以及密封垫磨损下来的碎屑。
（四）、进样器
1、分类：有手动和自动进样器两种。其中，自动进样器 又包括： （1）标准自动进样器 （2）高性能自动进样器 （3）双通道自动进样器 （4）微量多孔板自动进样器 （5）制备型自动进样器 2、工作原理：
耗品。
参考资料
官网：安捷伦科技大学-关于Agilent-售后服务在中国-产 品技术支持。
/article/2/1524.html
Agilent1260高效液相色谱仪 硬件简介
目录
一、组成部分 二、工作原理 三、安装与维护
一、组成部分
（一）、溶剂柜 （二）、脱气机 （三）、泵 （四）、进样器 （五）、柱温箱 （六）、检测器
仪器的安装
连接线： ①电源线 ②LAN线 ③CAN线 ④遥控线
（一）、溶剂柜
（一）、溶剂柜
问题：液相储液瓶中滤头的作用？注意事项？
①作用：过滤流动相中的颗粒物、微生物等杂质。 ②注意事项： a、玻璃滤头不能超声；不锈钢滤头可用异丙醇超声。 b、滤头应定期（每三个月）更换或清洗。
（二）、脱气机
１、分类：有内置和外置两种类型。 ２、工作原理：见下图。
（三）、泵
常用的分析泵有单元泵、 二元泵和四元泵。其中， B型：600bar C型：400bar
通用型检测器： FLD、ELSD。
（六）、检测器
DAD检测器前视图
（六）、检测器
（六）、检测器
（六）、检测器
氘灯的使用注意事项： 1、开灯后需预热，新灯大概需要十几分钟的预热时间，如
果灯的使用时间已经很长则预热时间也需适当延长。 2、不用频繁开关氘灯，否则影响寿命。 3、氘灯为消耗品，寿命为2000小时左右。 4、氘是一种衰变的元素，不建议提前购买氘灯作为储备消