小鼠胰岛素INS酶联免疫分析ELISA
小鼠胰岛素(INS)酶联免疫分析（ELISA）
试剂盒使用说明书
本试剂仅供研究使用
目的：本试剂盒用于测小鼠血清，血浆及相关液体样本中胰岛素(INS)的含量。
实验原理：
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠胰岛素(INS)水平。
用纯化的小鼠胰岛素(INS)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入胰岛素(INS)，再与HRP标记的胰岛素(INS)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的胰岛素(INS)呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中小鼠胰岛素(INS)浓度。
试剂盒组成：
1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。
一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4．请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。
如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。
5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物请避光保存。
7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9．本试剂不同批号组分不得混用。
10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。
操作步骤
1.标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在第一、第二孔中分别加标
准品100μl，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从第一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。
（稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为1800ng/L，1200ng/L ，600ng/L，300ng/L，150ng/L）。
2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样
品孔。
在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。
加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T的20倍）倍稀释后备用。
5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此
重复5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7.温育：操作同3。
8.洗涤：操作同5。
9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色
15分钟.
10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。
测定应在加终止
液后15分钟以内进行。
样本处理及要求：
1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上
清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心
20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。
3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程
中如有沉淀形成，应再次离心。
胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。
离心20分钟左右（2000-3000转/
分）。
仔细收集上清。
检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。
通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
5. 组织标本：切割标本后，称取重量。
加入一定量的PBS，PH7.4。
用液氮迅速冷冻保存备
用。
标本融化后仍然保持2-8℃的温度。
加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
分装后一份待
检测，其余冷冻备用。
6. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。
若不能马上
进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融.
7. 不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
计算：
以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。
试剂盒性能：
1.样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.95以上。
2.批内与批见应分别小于9%和11%
检测范围：
100ng/L -2000ng/L
保存条件及有效期：
1.试剂盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6个月。
大鼠血清胰岛素水平检测原理
大鼠血清胰岛素水平检测原理胰岛素是一种由胰岛β细胞分泌的多肽激素，对调节血糖水平起着重要的作用。
血清胰岛素水平的检测可以帮助了解机体的胰岛功能，对糖尿病等疾病的诊断和治疗具有重要意义。
本文将介绍大鼠血清胰岛素水平检测的原理。
大鼠血清胰岛素水平的检测主要通过酶联免疫吸附法（ELISA）来进行。
该方法利用特异性抗体与胰岛素分子结合，并通过酶的催化作用使底物发生染色反应，从而定量测定胰岛素的浓度。
具体而言，大鼠血清胰岛素水平检测的步骤如下：1. 样本处理：首先需要收集大鼠的血清样本，可以通过尾静脉抽血或其他适当的方式获取。
为了避免胰岛素的降解，需要迅速离心分离血清，并将样本储存在低温下，避免冻融循环。
2. 抗原包被：将提纯的胰岛素抗原溶液均匀涂覆在微孔板上，使其吸附在孔底。
然后，在孔底加入辅助蛋白，以提高抗原的吸附效率。
3. 样品加入：将预处理好的大鼠血清样本加入到微孔板中，与抗原结合。
一般来说，为了提高灵敏度，需要进行适当的稀释。
4. 洗涤：通过添加洗涤缓冲液，将未结合的物质洗去，以减少非特异性的背景信号。
5. 标记抗体加入：加入与胰岛素结合的酶标记二抗，使其与已结合的胰岛素形成抗原抗体复合物。
6. 洗涤：再次进行洗涤步骤，以去除未结合的酶标记抗体。
7. 底物加入：加入底物溶液，酶标记抗体结合的孔底会发生染色反应。
底物的选择取决于所使用的酶标记系统，一般常用的是TMB （3,3',5,5'-四甲基联苯胺）底物。
8. 反应终止：通过加入停止剂，停止底物的染色反应。
停止剂的选择与底物有关，一般为酸性溶液。
9. 读取测定：使用酶标仪读取吸光度，测定反应产物的光密度。
光密度与胰岛素的浓度成正比。
通过与标准品进行比较，可以计算出样本中胰岛素的浓度。
总结起来，大鼠血清胰岛素水平的检测主要通过酶联免疫吸附法。
该方法利用特异性抗体与胰岛素分子结合，并通过酶的催化作用使底物发生染色反应，从而定量测定胰岛素的浓度。
小鼠胰岛素(Insulin)说明书
小鼠胰岛素(Insulin)酶联免疫分析（ELISA）试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定小鼠血清,血浆及相关液体样本中胰岛素(Insulin)含量。
实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠胰岛素(Insulin)水平。
用纯化的小鼠胰岛素(Insulin)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入胰岛素(Insulin)，再与HRP标记的胰岛素(Insulin)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的胰岛素(Insulin)呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中小鼠胰岛素(Insulin)含量。
试剂盒组成：样本处理及要求：1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。
3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。
通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
5. 组织标本：切割标本后，称取重量。
加入一定量的PBS，PH7.4。
小鼠谷胱甘肽转移酶GST酶联免疫分析ELISA
小鼠谷胱甘肽S转移酶（GST）酶联免疫分析（ELISA）试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定小鼠血清，组织及相关液体样本中谷胱甘肽S转移酶（GST）的含量。
实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠谷胱甘肽S转移酶（GST）水平。
用纯化的谷胱甘肽S转移酶（GST）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入谷胱甘肽S转移酶（GST），再与HRP标记的谷胱甘肽S转移酶（GST）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的谷胱甘肽S转移酶（GST）呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中小鼠谷胱甘肽S转移酶（GST）浓度。
试剂盒组成48孔配置96孔配置保存说明书1份1份封板膜2片（48）2片（96）密封袋1个1个酶标包被板1×48 1×96 2-8℃保存标准品：450pg/ml ×1瓶×1瓶2-8℃保存标准品稀释液×1瓶×1瓶2-8℃保存酶标试剂 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存样品稀释液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存显色剂A液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存显色剂B液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存终止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存浓缩洗涤液（20ml×20倍）×1瓶（20ml×30倍）×1瓶2-8℃保存样本处理及要求：1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
人胰岛素定量检测试剂盒(酶联免疫法)说明书V9.0
终止溶液
1瓶
7mL
准备好使用
0.5M 硫酸
酶结合物 1×溶液的制备
按下表，用酶结合物缓冲液稀释酶结合物 11×（1+10），来制备所需体积的酶结合物 1×溶 液。当为整个平板制备酶结合物 1×溶液时，将所有酶结合物缓冲液倒入酶结合物 11×瓶中， 轻柔混合。
条数量 12 条 8条 4条
酶结合物 11× 1瓶 700 μL 350 μL
5 mL
准备好使用
酶结合物 11×
1瓶
过氧化物酶结合的鼠抗 apoB 单克隆抗体
酶结合物缓冲液
1瓶
蓝色
1.2mL 12mL
制备，见下文 准备好使用
洗涤缓冲液 21×
1瓶
稀释后储存：2-8℃，8 周
底物 TMB
1瓶
无色溶液
注意！光敏！
50 mL 22mL
制备 1×的洗涤缓冲 液需加入 1000mL 重 蒸水稀释 准备好使用
按下表，用酶结合物缓冲液稀释酶结合物 11×（1+10），来制备所需体积的酶结合物 1×溶 液。轻柔混合，1 天内使用。
板数量
酶结合物 11×
酶结合物缓冲液
10 个平板 5 个平板 3 个平板 2 个平板 1 个平板
1瓶 5.0 mL 3.0 mL 2.0 mL 1.0 mL
1瓶 50 mL 30 mL 20 mL 10 mL
酶结合物缓冲液
1瓶
蓝色
12mL 120mL
制备，见下文 准备好使用
洗涤缓冲液 21×
2瓶
200 mL
制备 1×的洗涤缓冲 液需加入 1000mL 重
稀释后储存：2-8℃，8 周
蒸水稀释
底物 TMB
酶联免疫测定(ELISA)标准化的一般原则
酶联免疫测定（ELISA）标准化的一般原则对酶联免疫测定标准化的目的就是通过这种标准化以改善实验室测定的准确度，从而提高不同的实验室间结果的可比性。
进行标准化的先决条件是，标准品和检测物应该是相同的，否则标准化就无从谈起。
这在目前的许多临床免疫测定项目中标准品往往没有达到这一要求。
涉及到免疫测定标准化的组织有世界卫生组织(WHO)生物学标准化专家委员会(ECBS)，其负责建立生物物质的国际标准及参比材料。
WHO通过国家生物学标准和质控物研究所(NIBSC)提供大多数多肽激素和一些肿瘤标志物的国际标准品。
一些区域和地区性组织也制备标准品，如美国的疾病控制中心(CDC)、美国病理学家协会(CAP)的国家委员会。
国家卫生研究所(NIH)提供尤其是用于研究目的的多肽激素标准品。
IFCC也已组织制备了一种脂蛋白和血清蛋白的标准品，可通过CAP得到。
国际癌发生生物学和医学学会已启动一个肿瘤标志物的决定计划。
在国内中国药品生物制品检定所提供一些多肽激素、肿瘤标志物等标准品。
卫生部临床检验中心则为全国各级医院血站实验室提供室内质控物。
尽管仅仅使用标准品并不能保证免疫测定结果的可比性，但标准品对保证免疫测定的重要性是不言而喻的。
目前在世界上有各种不同的科学协会如IFCC及国家临床实验室标准化委员会(NCCLS)以及美国和加拿大临床化学协会(AACC和CSCC)等正致力于免疫测定的标准化工作，这些组织也制备一些标准品。
在美国，免疫测定必须有食品和药物管理局(FDA)的批准。
在德国的监督机构是医学实验室标准化和文件化研究所(INSTAND)。
在国内免疫诊断试剂的审批由国家药品监督管理局(SDA)负责。
卫生部临床检验中心也正在着手临床免疫检验标准化方面的工作。
第一代生物学标准品是在70多年前由Henry Dale制备的用于胰岛素(insulin)测定的标准品，该标准品被WHO的前身即国家卫生组织联合会(League Of National Health Organization)所采用。
酶联免疫吸附试验(ELISA)测定错误结果的原因分析
ELISA测定错误结果的原因分析ELISA即酶联免疫吸附试验，是一种常用的固相酶免疫测定方法。
Engvall 和Perlmann于1971年最先应用该法进行了IgG定量测定，并命名为"enzyme linked immunosorbent assay (ELISA)"。
ELISA的基本原理是：①使抗原（或抗体）结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性；②使抗原（或抗体）与某种酶联结成酶标抗原（或抗体），而且此酶标抗原（或抗体）既保留其免疫活性，又保留其酶活性；③测定时将受检标本（抗体或抗原）和酶标抗原（或抗体）按不同步骤与固相载体表面的抗原或抗体进行反应，再用洗涤方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其它物质分开，最后结合在固相载体上的酶量与标本中受检的抗体或抗原量成一定比例；再加入酶反应底物后，底物被酶催化后变为有色产物，根据其颜色反应的深浅进行定性或定量分析，以了解被测标本中抗体或抗原含量。
ELISA方法被广泛应用于各种抗原和抗体测定。
但ELISA测定中影响因素较多，而且其操作中有一定的技术要求，在临床检验中除正常反应外，有时常可见到一些错误结果（即假阳性或假阴性结果）。
引起ELISA测定错误结果的原因主要有：①标本因素；②试剂因素；③操作因素。
本文就标本因素对ELISA测定的影响做如下讨论。
血清是最常用的ELISA标本，血浆一般可视为与血清同等的标本，标本引起的假阳性和假阴性结果主要是干扰性物质所致，分为内源性物质和外源性物质两种：1．内源性物质有人认为大约40%的人血清标本中含有非特异性干扰物质，可以不同程度影响检测结果。
常见的干扰物质有：类风湿因子、补体、嗜异性抗体、嗜靶抗原自身抗体、医源性诱导的抗鼠Ig (s)抗体、交叉反应物质和其它物质等。
（1）类风湿因子人血清中IgM、IgG型类风湿因子（RF）可以与ELISA系统中的捕获抗体及酶标记二抗的FC段直接结合，从而导致假阳性。
雷生物小鼠胰岛素ELISA试剂盒使用手册说明书
RayBio® Mouse Insulin ELISA KitCatalog #: ELM-InsulinUser ManualLast revised June 14, 2021Caution:Extraordinarily useful information enclosedISO 13485 Certified3607 Parkway Lane, Suite 100Norcross, GA 30092 Tel: 1-888-494-8555 (Toll Free) or 770-729-2992, Fax:770-206-2393Web: , Email: *******************RayBiotech, Inc.________________________________________RayBio® Mouse Insulin ELISA Kit ProtocolTable of ContentsSection Page # I.Introduction3II.Storage4III.Reagents4IV.Additional Materials Required4V.Reagent Preparation5VI.Assay Procedure6VII.Assay Procedure Summary7VIII.Calculation of ResultsA. Typical DataB. SensitivityC. Spiking & RecoveryD. LinearityE. Reproducibility 8 8 8 9 9 10IX.Specificity10X.Troubleshooting Guide11Please read the entire manual carefully before starting your experimentI. INTRODUCTIONThe RayBio® Mouse Insulin ELISA kit is an in vitro enzyme-linked immunosorbent assay for the quantitative measurement of Mouse Insulin in serum, plasma (Collect plasma using EDTA and Citrate as an anticoagulant. Heparin is not recommended as anticoagulants for use in this assay) and cell culture supernatants. This assay employs an antibody specific for Insulin coated on a 96-well plate. Standards and samples are pipetted into the wells and Insulin present in a sample is bound to the wells by the immobilized antibody. The wells are washed and biotinylated anti-Mouse Insulin antibody is added. After washing away unbound biotinylated antibody, HRP-conjugated streptavidin is pipetted to the wells. The wells are again washed, a TMB substrate solution is added to the wells and color develops in proportion to the amount of Insulin bound. The Stop Solution changes the color from blue to yellow, and the intensity of the color is measured at 450 nm.Need your results faster? Try RayBiotech's SpeedE LISA platform for quantitative detection in just three hours.https:///speedelisa-kits/Short on sample, or need higher sensitivity? Check out the IQELISA™ Immuno-PCR platform. https:///immuno-pcr/II. STORAGEThe entire kit may be stored at -20°C for up to 1 year from the date of shipment. Avoid repeated freeze-thaw cycles. The kit may be stored at 4°C for up to 6 months. For extended storage, it is recommended to store at -80°C. For prepared reagent storage, see table below. III. REAGENTSIV. ADDITIONAL MATERIALS REQUIRED1.Microplate reader capable of measuring absorbance at 450 nm.2.Precision pipettes to deliver 2 µl to 1 ml volumes.3.Adjustable 1-25 ml pipettes for reagent preparation.4.100 ml and 1 liter graduated cylinders.5.Absorbent paper.6.Distilled or deionized water.7.Log-log graph paper or computer and software for ELISA data analysis.8.Tubes to prepare standard or sample dilutions.V. REAGENT PREPARATION1.Bring all reagents and samples to room temperature (18 - 25ºC) before use.2.Assay Diluent B (Item E) should be diluted 5-fold with deionized or distilled water before use.3.Sample dilution: Assay Diluent C (Item L) should be used for dilution of serum, plasma, and cell culture supernatant samples. The suggested dilution for normal serum/plasma is 2 fold. Collect plasma using EDTA and/or Citrate as anticoagulants. Heparin is not recommended as an anticoagulant for use in this assay. Note: Levels of Insulin may vary between different samples. Optimal dilution factors for each sample must be determined by the investigator.4.Preparation of standard: Briefly spin a vial of Item C. Add 400 µl Assay Diluent C (Item L) into Item C vial to prepare a 1,400 µIU/ml standard solution. Dissolve the powder thoroughly by a gentle mix. Add 180 µl Insulin standard (1,400 µIU/ml) from the vial of Item C, into a tube with 450 µl Assay Diluent C to prepare a 400 µIU/ml standard solution. Pipette 250µl Assay Diluent C into each tube. Use the 400 µIU/ml standard solution to produce a dilution series (shown below). Mix each tube thoroughly before the next transfer. Assay Diluent C serves as the zero standard (0 µIU/ml).180 µl250 µl 250 µl 250 µl 250 µl 250 µl250 µlStd1Std2Std3Std4Std5Std6Std7Zero Standard Diluent volume Item C + 400 µl450 µl250 µl250 µl250 µl250 µl250 µl250 µl250 µlConc.1,400 µIU/ml 400 µIU/ml 200 µIU/ml 100 µIU/ml 50 µIU/ml 25 µIU/ml 12.5 µIU/ml 6.25 µIU/ml0 µIU/ml5.If the Wash Concentrate (20X) (Item B) contains visible crystals, warm to roomtemperature and mix gently until dissolved. Dilute 20 ml of Wash Buffer Concentrate into deionized or distilled water to yield 400 ml of 1X Wash Buffer.6.Briefly spin the Detection Antibody vial (Item F) before use. Add 100 µl of 1X AssayDiluent B (Item E) into the vial to prepare a detection antibody concentrate. Pipette up and down to mix gently (the concentrate can be stored at 4ºC for 5 days). The detection antibody concentrate should be diluted 80-fold with 1X Assay Diluent B (Item E) andused in step 5 of Part VI Assay Procedure.7.Briefly spin the HRP-Streptavidin concentrate vial (Item G) and pipette up and down tomix gently before use, as precipitates may form during storage. HRP-Streptavidinconcentrate should be diluted 400-fold with 1X Assay Diluent B (Item E).For example: Briefly spin the vial (Item G) and pipette up and down to mix gently. Add30 µl of HRP-Streptavidin concentrate into a tube with 12 ml 1X Assay Diluent B toprepare a 400-fold diluted HRP-Streptavidin solution (don't store the diluted solution for next day use). Mix well.VI. ASSAY PROCEDURE1.Bring all reagents and samples to room temperature (18 - 25ºC) before use. It isrecommended that all standards and samples be run at least in duplicate.bel removable 8-well strips as appropriate for your experiment.3.Add 100 µl of each standard (see Reagent Preparation step 3) and sample intoappropriate wells. Cover wells and incubate for 2.5 hours at room temperature withgentle shaking.4.Discard the solution and wash 4 times with 1X Wash Solution. Wash by filling each wellwith Wash Buffer (300 µl) using a multi-channel Pipette or autowasher. Completeremoval of liquid at each step is essential to good performance. After the last wash,remove any remaining Wash Buffer by aspirating or decanting. Invert the plate and blot it against clean paper towels.5.Add 100 µl of 1X prepared biotinylated antibody (Reagent Preparation step 6) to eachwell. Incubate for 1 hour at room temperature with gentle shaking.6.Discard the solution. Repeat the wash as in step 4.7.Add 100 µl of prepared Streptavidin solution (see Reagent Preparation step 7) to eachwell. Incubate for 45 minutes at room temperature with gentle shaking.8.Discard the solution. Repeat the wash as in step 4.9.Add 100 µl of TMB One-Step Substrate Reagent (Item H) to each well. Incubate for 30minutes at room temperature in the dark with gentle shaking.10.Add 50 µl of Stop Solution (Item I) to each well. Read at 450 nm immediately.VII. ASSAY PROCEDURE SUMMARY1.Prepare all reagents, samples and standards as instructed.2.Add 100 µl standard or sample to each well. Incubate 2.5 hours at room temperature.3.Add 100 µl prepared biotin antibody to each well. Incubate 1 hour at room temperature.4.Add 100 µl prepared Streptavidin solution. Incubate 45 minutes at room temperature.5.Add 100 µl TMB One-Step Substrate Reagent to each well. Incubate 30 minutes atroom temperature.6.Add 50 µl Stop Solution to each well. Read at 450 nm immediately.VIII. CALCULATION OF RESULTSCalculate the mean absorbance for each set of duplicate standards, controls and samples, and subtract the average zero standard optical density. Plot the standard curve on log-log graph paper or using Sigma plot software, with standard concentration on the x-axis and absorbance on the y-axis. Draw the best-fit straight line through the standard points.A. TYPICAL DATAThese standard curves are for demonstration only. A standard curve must be run with each assay.B. SENSITIVITYThe minimum detectable dose of Mouse Insulin was determined to be 5 µIU/ml.Minimum detectable dose is defined as the analyte concentration resulting in an absorbance that is 2 standard deviations higher than that of the blank (diluent buffer).C. SPIKING & RECOVERYRecovery was determined by spiking various levels of Mouse Insulin into the sample types listed below. Mean recoveries are as follows:D. LINEARITYE. REPRODUCIBILITYIntra-Assay CV%: <10%Inter-Assay CV%: <12%IX. SPECIFICITYThis ELISA antibody pair detects mouse, human, rat, porcine and bovine Insulin.X. TROUBLESHOOTING GUIDEProblem Cause SolutionPoor standard curve Inaccurate pipettingImproper standarddilutionCheck pipettesBriefly centrifuge Item C and dissolvethe powder thoroughly by gently mixingLow signal Improper preparation ofstandard and/orbiotinylated antibodyToo brief incubationtimesInadequate reagentvolumes or improperdilutionBriefly spin down vials before opening.Dissolve the powder thoroughly.Ensure sufficient incubation time. Assayprocedure step 3 may be doneovernight at 4°C with gentle shaking(note: may increase overall signalsincluding background).Check pipettes and ensure correctpreparationLarge CV Inaccurate pipettingAir bubbles in wellsCheck pipettesRemove bubbles in wellsHigh background Plate is insufficientlywashedContaminated washbufferReview the manual for proper wash. Ifusing a plate washer, ensure that allports are unobstructed.Make fresh wash bufferLow sensitivity Improper storage of theELISA kitStop solutionStore your standard at <-70ºC afterreconstitution, others at 4ºC. Keepsubstrate solution protected from light.Add stop solution to each well beforereading plateRayBio® ELISA KitsOver 4,000 ELISA kits available, visit /ELISA-Kits for details.This product is for research use only.©2020 RayBiotech, Inc。
小鼠胰岛素样生长因子结合蛋白2IGFBP2酶联免疫试剂盒参考模板
仅供科研使用，不得用于临床检验。
小鼠胰岛素样生长因子结合蛋白2（IGFBP2 ）酶联免疫试剂盒（ELISA试剂盒）说明书黄石市艾恩斯生物科技有限公司【产品名称】通用名称：小鼠胰岛素样生长因子结合蛋白2（IGFBP2 ）酶联免疫试剂盒（ELISA试剂盒）英文名称：Mouse Insulin-like growth factor binding protein 2（IGFBP2 ）ELISA KIT【包装规格】48人份/盒，96人份/盒【预期用途】仅供科研使用，定量检测血清、血浆、细胞培养上清液中小鼠胰岛素样生长因子结合蛋白2（IGFBP2 ）的浓度。
【检验原理】本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验（ELISA）。
在预包被抗小鼠胰岛素样生长因子结合蛋白2（IGFBP2 ）抗体（固相抗体）的微孔酶标板中，加入小鼠胰岛素样生长因子结合蛋白2（IGFBP2 ）校准品和待测样本，再加入另一株HRP标记的抗小鼠胰岛素样生长因子结合蛋白2（IGFBP2 ）抗体（酶标抗体），经过温育与充分洗涤，去除未结合的组分，在微孔板固相表面形成固相抗体-抗原-酶标抗体的夹心复合物。
加底物A和B，底物在HRP催化下，产生蓝色产物，在终止液（2M 硫酸）作用下，最终转化为黄色，在酶标仪上测定吸光度（OD值），吸光度（OD值）与待测样品中小鼠胰岛素样生长因子结合蛋白2（IGFBP2 ）的浓度正相关。
拟合校准品曲线，可以计算出样本中小鼠胰岛素样生长因子结合蛋白2（IGFBP2 ）的浓度。
【主要组成成分】主要成分校准品检测范围：125-8000pg/ml。
校准品已经通过测试，结果表明HBs抗原阴性，HIV1、HIV2和HCV抗体阴性，由于不存在一种试验方法能够完全保证没有这些物质，本品必须按照具有潜在的感染性进行处理，处理过程应当遵循通用的安全措施。
需要但未提供的材料及耗材1、酶标仪2、精密移液器及一次性吸头3、蒸馏水4、洗瓶或者自动洗板机5、37℃水浴锅或恒温箱6、500ml量筒7、无粉一次性乳胶手套【储存条件及有效期】1、2-8℃保存，切勿冷冻，有效期6个月。
曲古抑菌素A促进小鼠骨髓间充质干细胞分化为胰岛素分泌细胞
曲古抑菌素A促进小鼠骨髓间充质干细胞分化为胰岛素分泌细胞李佳萦;冯烈【摘要】AIM:To investigate whether trichostatin A ( TSA) , a new revulsant ,can induce mouse mesenchy-mal stem cells to differentiate into insulin-secreting cells and to explore the appropriate concentration of TSA .METHODS:The mesenchymal stem cell line from C57BL/6 mice was cultured in vitro and divided into 5 groups before treated with dif-ferent concentrations of TSA , ( group A:DMSO;group B~E:treated with 25 nmol/L, 50 nmol/L, 100 nmol/L and 200 nmol/L of TSA, respectively).After exposed to different cultured media for 10 d during the 2 stages, the cells were detec-ted by the following methods:the insulin-secreting cells in each group were identified by dithizone staining and the results were calculated with immunohistochemical half quantitative analysis .The insulin secreted by insulin-secreting cells in each group was identified by immunofluorescence , and the mean fluorescence intensity of insulin was compared .The content of insulin in each group was quantified byELISA .The appropriate concentration of TSA was determined according to the above results .RESULTS:TSA treatment for 10 d promoted the mouse bone marrow mesenchymal stem cells to differenti-ate into insulin-secreting cells which produced insulin .The immunohistochemistry and immunofluorescence imaging analysis of insulin-secreting cells showed that the insulin staining positive area , positive ratio , total density ofinsulin expression and mean fluorescence intensity of insulin in group B were significantly higher than those in the other TSA -treatedgroups .When the concentrations of TSA gradually increased , the contentof insulin reduced accordingly .The content of insulin in group B was significantly higher than that in the other TSA-treatedgroups .CONCLUSION:TSA treatment for 10 d promotes bone marrow mesenchymal stem cells from C57BL/6 mice to differentiate into insulin-secreting cells and the appropriate concen-tration of TSA is 25 nmol/L.%目的：观察曲古抑菌素A（ TSA）诱导小鼠骨髓间充质干细胞分化为胰岛素分泌细胞的适宜浓度。
小鼠胰岛素说明书(1)
小鼠胰岛素定量分析酶联免疫检测试剂盒本试剂盒仅供科研使用。
用于体外定量检测小鼠血清、血浆或细胞培养上清液中的胰岛素浓度。
使用前请仔细阅读说明书并检查试剂组分是否完整, 如有疑问请与上海巧伊生物科技有限公司联系，我们将提供力所能及的帮助。
如您有其它需求，请登录上海巧伊生物科技有限公司网站或致电本公司。
胰岛素简介：胰岛素是糖代谢中最主要的激素之一。
胰腺的ß细胞岛细胞产生胰岛素前体蛋白，前体蛋白被加工成C肽和胰岛素。
它们以等摩尔浓度进入血循环中。
成熟的胰岛素由A、B两条链组成。
这两条链是通过两个二硫键桥接形成有功能的胰岛素分子。
血浆葡萄糖浓度的变化是胰岛素产生并分泌的最主要刺激因素，产生的胰岛素具有一些代谢调节作用。
其最主要的作用是，将外周血中糖转运到肝脏中贮存起来。
一些诸如肝糖生成障碍或在促进血糖升高的激素诸如胰高血糖素、肾上腺素、生长激素和皮质醇等作用下促进肝糖分解都可拮抗胰岛素的作用。
检测原理:本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法检测样本中胰岛素的浓度。
胰岛素捕获抗体已预包被于酶标板上，当加入标本或参考品时，其中的胰岛素会与捕获抗体结合，其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。
当加入与HRP耦连的抗胰岛素抗体后，抗小鼠胰岛素抗体与胰岛素接合，形成夹心的免疫复合物，其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。
最后加入显色剂，若样本中存在胰岛素将会形成免疫复合物，辣根过氧化物酶会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质，在加入终止液后呈黄色。
通过酶标仪检测，读其450nm处的OD值，胰岛素浓度与OD450值之间呈正比，通过参考品绘制标准曲线，对照未知样本中OD值，即可算出标本中胰岛素浓度。
小鼠胰岛素定量分析酶联免疫检测试剂盒组成:组分 规格（96T/48T）小鼠胰岛素预包被板 12条/6条标准品稀释液 10ml/5ml小鼠胰岛素标准品 2支/1支(冻干)小鼠胰岛素抗体HRP结合物 10ml/5ml浓缩洗涤液 20× 30ml/15mlTMB底物 10ml/5ml终止液 5ml/3ml封板胶纸 3/2张说明书 1份标本收集:1.标本的收集请按下列流程进行操作；A.细胞上清标本离心去除悬浮物后即可；B.血清标本应是自然凝固后，取上清，避免在冰箱中凝固血液；C.血浆标本，推荐用EDTA的方法收集若待测样本不能及时检测，D.标本收集后请分装，冻存于－20℃，避免反复冻融。