冬虫夏草研究进展
冬虫夏草的药理功能研究进展
冬虫夏草的药理功能研究进展摘要：冬虫夏草是一种滋补强壮药材，具有补肺益肾、止血化痰等功效。
近年来，研究者用不同的方法对冬虫夏草及其有效成分进行了广泛的研究，发现冬虫夏草及其活性成分药理功能十分广泛，现代研究表明冬虫夏草的作用机制与免疫功能有关，并在此基础上涉及抗肿瘤、抗氧化、抗器官纤维化等方面。
本文针对冬虫夏草的药理功能研究进展进行了分析。
关键词:冬虫夏草；免疫调节；抗纤维化1抗肿瘤许多研究表明，冬虫夏草具有抗肿瘤作用。
实验表明冬虫夏草能提高NK细胞与肿瘤细胞的结合率，从而直接和间接地增强NK细胞对肿瘤细胞的杀伤活性，起到较强的抗肿瘤作用。
这种体内抗肿瘤作用与机体的免疫有关，而冬虫夏草在体外也具有抑制肿瘤细胞活性的作用。
研究冬虫夏草菌丝水提液对体外培养的小鼠骨髓瘤细胞(SP2/O)增殖的抑制作用和对其细胞凋亡的影响，表明冬虫夏草的抗肿瘤作用可能与其诱导肿瘤细胞凋亡有关。
2抗氧化冬虫夏草也是一种天然的抗氧化剂。
研究表明冬虫夏草在抑制亚油酸氧化、清除DPPH自由基和羟自由基、螯合金属离子的实验中均显示出很高的活性。
实验显示冬虫夏草可减少由电子的漏出而产生的自由基的含量，虫草提取液在肝线粒体呼吸链及氧化还原系统中能有效地拮抗由糖尿病氧化损伤造成的电子传递和质子泵出的偶联程度降低，改善和调节能量代谢，使ATP的含量增加，改善机体的能量供应，减少自由基对线粒体氧化还原能力的损伤，从而保护了线粒体膜的完整性，保护酶活性，有效地抑制自由基的损伤；在研究冬虫夏草水提液在兔ARDS(急性呼吸窘迫综合征)模型中的抗脂质氧化作用，说明通过其抗脂质氧化作用来抑制过度的炎症反应，从而减少肺间质渗出，减轻肺损伤。
冬虫夏草有提高肝组织SOD活性的作用，可促进机体在安静状态下自由基的消除过程，增加肝组织防御脂质过氧化的能力，降低MDA的含量。
冬虫夏草提高肝组织对抗脂质过氧化作用的机理有几个方面:(1)冬虫夏草中含有SOD，活性高达340U·g-1干重，可显著提高脏器中抗氧化酶活力，降低B型单胺氧化酶活力和MDA，拮抗脂质过氧化；(2)冬虫夏草中D-甘露醇是HFR的特异性清除剂，而所含虫草素对SAFR可能有清除作用，推断虫草素和D-甘露醇等成分共同作用于机体产生的大量自由基，防止自由基对细胞膜的攻击，保护膜功能的稳定性；(3)冬虫夏草中粘多糖与细胞相互作用，在膜表面形成了一层糖屏障，有效地防止机体缺氧时肝组织细胞膜脂质流动性的降低，保护细胞膜Na+、K+-ATP酶活性，维持细胞膜功能，从而防止细胞受到氧自由基的损伤；(4)冬虫夏草中核苷类物质可扩张肝组织动脉血管，改善肝组织氧的代谢平衡，降低肝组织耗氧量。
冬虫夏草的药理学研究进展
冬虫夏草的药理学研究进展摘要：冬虫夏草是一种珍贵的中药材，具有多种药理作用。
本文综述了冬虫夏草的化学成分、药理作用及其研究进展，旨在为冬虫夏草的开发利用提供参考。
关键词：冬虫夏草；化学成分；药理作用；研究进展一、引言冬虫夏草是一种珍贵的中药材，被誉为“草中之王”。
其主要产地为青藏高原，是一种寄生在蝙蝠蛾幼虫体内的真菌。
冬虫夏草具有多种药理作用，如免疫调节、抗氧化、抗肿瘤、抗炎等。
近年来，随着人们对中药的认识不断深入，冬虫夏草的研究也越来越受到关注。
本文将综述冬虫夏草的化学成分、药理作用及其研究进展，以期为冬虫夏草的开发利用提供参考。
二、化学成分冬虫夏草的化学成分非常复杂，主要包括多糖、蛋白质、氨基酸、核苷酸、生物碱、三萜类化合物等。
其中，多糖是冬虫夏草的主要有效成分之一，具有免疫调节、抗肿瘤、抗氧化等作用。
研究表明，冬虫夏草中的多糖主要由葡萄糖、甘露糖、木糖、阿拉伯糖等单糖组成，具有较高的生物活性。
三、药理作用1. 免疫调节作用冬虫夏草具有显著的免疫调节作用，可以增强机体免疫力，提高抗病能力。
研究表明，冬虫夏草中的多糖可以刺激巨噬细胞、T淋巴细胞等免疫细胞的活性，促进免疫细胞的增殖和分化，增强免疫细胞的吞噬能力和杀伤能力，从而提高机体的免疫功能。
2. 抗氧化作用冬虫夏草具有较强的抗氧化作用，可以清除自由基，减轻氧化应激对机体的损伤。
研究表明，冬虫夏草中的多糖、三萜类化合物等成分具有较强的抗氧化活性，可以降低氧化应激指标的水平，减轻氧化应激对机体的损伤。
3. 抗肿瘤作用冬虫夏草具有一定的抗肿瘤作用，可以抑制肿瘤细胞的生长和扩散。
研究表明，冬虫夏草中的多糖、生物碱等成分可以抑制肿瘤细胞的增殖和分化，同时还可以促进机体免疫功能的提高，增强机体对肿瘤的抵抗力。
此外，冬虫夏草还可以减轻化疗和放疗对机体的损伤，缓解化疗和放疗的副作用，提高患者的生活质量。
4. 抗衰老作用随着人口老龄化的加剧，抗衰老成为了一个备受关注的话题。
冬虫夏草活性成分及药理作用研究进展
冬虫夏草活性成分及药理作用研究进展在自然疗法越来越受到重视的情况下,具有广泛药理作用的冬虫夏草越来越受到关注。
其药效成分主要有虫草素、腺苷、虫草多糖、虫草酸、麦角甾醇、脂肪酸、氨基酸等,具有调节免疫、抗肿瘤、抗氧化、抗纤维化、降血糖、抗细胞凋亡等多种药理作用。
本文归纳总结了冬虫夏草及人工发酵菌丝体的活性成分及其药理作用的研究进展,分析当前亟待解决的问题,并展望了冬虫夏草的研究趋势。
标签：冬虫夏草；活性成分；药理作用；综述冬虫夏草Cordyceps sinensis是肉座菌目麦角菌科真菌冬虫夏草真菌寄生在鳞翅目蝙蝠蛾科蝙蝠蛾属昆虫幼虫上的子座及幼虫尸体的复合体,主要分布在中国青藏高原西南部地区。
冬虫夏草具有“补肺益肾、止咳化痰、已劳嗽”(《本草从新》)之功。
现代研究发现,冬虫夏草及其活性成分可以提高人体免疫力、抗疲劳、抗氧化、抗纤维化,对呼吸道、肾脏、肝脏、神经系统、心血管系统等有很好的保健作用。
然而,由于冬虫夏草特殊的生长环境要求和严格的宿主特异性,加之长期大量采挖,野生冬虫夏草资源已供不应求。
因此,对冬虫夏草主要药效成分及其药理作用的深入研究能使其有针对性地得到利用,为充分发挥药用价值和充分利用资源提供依据。
笔者在综述近年来冬虫夏草药效成分及其药理作用研究的基础上,提出相应的建议,为冬虫夏草的进一步研究提供参考。
1药效成分1.1虫草素20世纪50年代初,Cunningham等[1]首次从蛹虫草(Cordyceps militaris)中分离出一种抗菌性物质3’-脱氧腺苷,即虫草素,之后许多学者对其进行了验证研究。
Hsu等[2]用高效液相色谱法(HPLC)测定了蛹虫草子实体和虫体中虫草素的含量分别为2.4 μg/g和5.4 μg/g。
虫草素具有广谱的抗菌活性及抗肿瘤、抗病毒、抗炎、抗凋亡、调节免疫和抑制mRNA翻译等作用,是冬虫夏草和蛹虫草的生物活性成分之一。
然而,虫草素在体内的快速代谢使其药用价值大打折扣[3]。
冬虫夏草提取物及其活性成分研究进展
冬虫夏草提取物及其活性成分研究进展发布时间：2023-06-15T08:43:12.551Z 来源：《科技潮》2023年10期作者：胡航[导读] 冬虫夏草菌寄生在蝙蝠蛾科昆虫幼虫上的子座与幼虫尸体的干燥复合体。
其气微腥、味微苦，性甘、平，归肺、肾经，具有益肺补肾和化痰止血的功效。
冬虫夏草既可作为其他治疗手段的辅助单方使用，也可制成复方制剂发挥作用。
杭州中美华东制药江东有限公司摘要：冬虫夏草菌寄生在蝙蝠蛾科昆虫幼虫上的子座与幼虫尸体的干燥复合体。
其气微腥、味微苦，性甘、平，归肺、肾经，具有益肺补肾和化痰止血的功效。
冬虫夏草既可作为其他治疗手段的辅助单方使用，也可制成复方制剂发挥作用。
由于来源有限，一些临床药品和保健食品中以组分和药理作用相似的发酵虫草菌粉作为原料，多年来，冬虫夏草中的活性成分受到科研工作者持续关注。
针对冬虫夏草各种提取物及活性成分的研究进行归纳，旨在为进一步研究冬虫夏草、挖掘其价值提供参考。
关键词：冬虫夏草；提取物；活性成分一、冬虫夏草提取物1.1提取物制备方法1.1.1冬虫夏草的选择传统的冬虫夏草药材，是以其干品入药，如《中国药典》对其描述为“晒至六七成干，除去似纤维状的附着物及杂质，晒干或低温干燥”。
而不同的干燥方式对冬虫夏草活性成分含量有影响。
对比了冷冻干燥、阴凉干燥、热风烘干3种不同干燥方式对冬虫夏草中代表性成分的影响，结果表明，通过冷冻干燥制备的冬虫夏草，维持了较高的超氧化物歧化酶（SOD）的活性，而热风烘干的产品中，麦角甾醇、胆固醇、豆甾醇等含量较高。
此外，一些研究在选择原料时采用了鲜冬虫夏草，在一定程度上避免了干燥方法及工艺对冬虫夏草提取物成分的影响。
1.1.2提取方法在制备冬虫夏草提取物时，最常用的方式是浸取。
为了提高浸取效率，可以采用一些辅助手段，如热回流、超声等。
比较了加热回流提取、超声波提取及热回流辅助超声波提取，通过对比常见重金属元素、指纹图谱、部分主要/差异性成分，发现含超声方式所制得的提取液稳定性和均一性均较好、提取到的生物活性化合物种类更多。
冬虫夏草的研究进展
菌物研究2006,4(2):60-64Journal of Fungal Research Vol14,No12,2006ISS N1672-3538冬虫夏草的研究进展许超德①武汉科技大学中南分校生命科学学院,湖北武汉430223摘 要:冬虫夏草是著名的传统中药,具有多种药用功效。
综述了近几年国内外冬虫夏草在无性型的确证、液体发酵、活性成分分离分析、药理学等方面的研究进展。
关键词:冬虫夏草;无性型;液体发酵;活性成分;药理学中图分类号:R931.71 文献标识码:A 文章编号:167223538(2006)022******* 冬虫夏草(Cordyceps sinensis)是球壳目(S phaeriales)、麦角菌科(Clavicipitaceae)、虫草属(Cordyceps)的虫生真菌,寄生于鳞翅目昆虫幼虫体上,把虫体变成充满菌丝的僵虫,这是菌核部分,由菌核生出有柄的棍棒形的子座[1]。
由于冬虫夏草具有抗肿瘤、抗菌、调节心血管、增强免疫等功能,被视为珍贵的中药材,闻名世界。
天然冬虫夏草生长条件苛刻,自然寄生率低,加上人们的滥采,导致天然资源紧缺,价格昂贵,因此,代用品的开发成为必然趋势,而代用品的开发有赖于冬虫夏草无性型的确证、液体发酵、活性成分分离分析、药理学等方面的研究,现就近几年国内外在这些方面的研究现状综述如下:1 无性型的确证冬虫夏草的生活史分为无性型(分生孢子)和有性型(子囊孢子)两个阶段,在人工栽培和发酵中通常运用其无性型,因此,无性型的正确鉴定至关重要。
冬虫夏草的无性型的确证现多采用分子方法,其中尤以内转录间隔区(ITS1和ITS2)与5.8S rRNA作为确证的指标。
Chen等[2]测定了从青藏和西藏高原采集的冬虫夏草(有性型)和几个相关无性型的内转录间隔区与5.8S rRNA基因序列,序列比较表明:冬虫夏草和中国被毛孢(Hir sutella sinensis)的关系最紧密,而与中国拟青霉(Pae2 cilomyces sinensis)、葡萄被霉属(Stachybotrys)或弯颈霉属(Tolypocladium)分歧明显,说明中国被毛孢是其无性型。
冬虫夏草研究现状及治疗进展
冬虫夏草研究现状及治疗进展本文从网络收集而来，上传到平台为了帮到更多的人，如果您需要使用本文档，请点击下载按钮下载本文档（有偿下载），另外祝您生活愉快，工作顺利，万事如意！【关键词】冬虫夏草；治疗进展；综述冬虫夏草简称虫草，为麦角菌科虫草属冬虫夏草真菌的子座及其寄主蝙蝠蛾科昆虫蝙蝠蛾幼虫尸体的复合体［1］。
在中国，因为其随季节变换而呈现不同的形态，故曰冬虫夏草。
作者就冬虫夏草的生物学研究现状及治疗进展作一综述。
1 概况一直以来，冬虫夏草在中国医学临床的应用已有数百年的历史。
在传统中药理论中，虫草具有滋阴壮阳之功效［1］。
早在1757年《本草丛新》中就曾对冬虫夏草作为一种药物有专门的记载，指出其具有保肺、益肾、止血、祛痰、止喘之功效。
随后的《本草纲目拾遗》中有关虫草的记载为味甘性温，益气秘精，专补命门，功同人参。
实际上，已有很多研究表明虫草具有明确的药理特性。
现代研究中已被报道的虫草属有增强免疫应答、抑制肿瘤细胞生长、保护肝肾功能、促进心血管循环、降低血糖以及拮抗氧自由基的生成等临床疗效。
然而，全世界发现有100多种虫草属或其替代品，所以目前市场上的虫草确认正成为一个重点的研究问题［2］。
2 虫草活性成分的研究天然的虫草平均含有25%的蛋白质、%的脂肪、%的纤维、29%的碳水化合物和%的醛固酮刺激素。
除此之外，还含有尿嘧啶、2，4二氧嘧啶、腺嘌呤、腺苷、甘露醇、麦角固醇和硬脂酸等。
虫草含有大量的虫草多糖，可以占到总干重量的3%～8%。
在培养的虫草属中，功能性的多糖来自于菌丝体的分泌［2］。
多糖是存在于自然界的醛糖和（或）酮糖通过糖苷键连接在一起的多聚物，是一切有生命的有机体必不可少的成分，与维持生物机能密切相关。
虫草多糖被发现具有多种生物学活性，包括抗氧化、免疫调节和抑制肿瘤等。
Sasaki等研究证实，来自真菌多糖的抗肿瘤活性与其相对分子质量大小有密切关系，只有大于16 000时才具有抗肿瘤活性。
冬虫夏草及其发酵菌丝体药理作用研究进展
Key words: Cordyceps sinensis; Ferment mycelia; Pharmacological effect
纪 要 上。 1943 年, Berkeley 鉴定了中国的冬虫夏草, 正 式定名 为: 中 国 虫 草 Sphaeri sienesis。1878 年由 Saccardo 归 为 虫 草 属 Cordyceps, 由 此, 冬虫夏草的研究在国外 引起重视, 中国虫草也开始 驰名于世[ 2] 。
中 图分 类号: R529. 3
冬虫夏草的药理与临床研究进展
冬虫夏草的药理与临床研究进展冬虫夏草为麦角菌科真菌冬虫夏草菌Cordycepssinensi8(Berk)Sace.寄生在蝙蝠蛾科昆虫幼虫上的子座及幼虫尸体的复合体。
夏初子座出土，孢子未发散时挖取，晒至六七成干，除去似纤维状的附着物及杂质，晒干或低温干燥Ⅲ。
昧甘、性温;人肺、肾经;能补肺益肾、止血化痰，用于久咳虚喘、劳嗽咯血、阳痿遗精、腰膝酸痛。
现代研究证明冬虫夏草以其调节阴阳、肺肾双补之特性，补而不峻、温而不火之优势，广泛应用于免疫、心血管、呼吸、泌尿生殖、消化、神经系统疾病，备受关注。
1对免疫系统的影响2.提高机体单核一巨噬细胞系统的吞噬功能.冬虫夏草、虫草水提液、中国拟青霉水煎剂中的虫草多糖非经口给药均可激活单核一巨噬细胞的吞噬活性，提高吞噬百分率及吞噬指数，并增强腹腔巨噬细胞内酸性磷酯活性。
3.双向调节细胞免疫功能虫草多糖D一甘露醇糖对T、B淋巴细胞有显著诱导活性，能促进淋巴细胞有丝分裂，改善肾衰及乙肝患者T淋巴细胞亚群的功能，抑制T淋巴细胞的排斥反应，促进脾脏DNA的生物合成，加速脾细胞的分裂与增殖，从而增强机体的免疫和抗病能力。
由虫草代谢产物中成分LSP—I经结构改造而成nY720是一种新型免疫抑制剂，可强烈抑制器官移植病人的排异反应，相当于环孢素A，且细胞毒性小。
4.调节体液免疫虫草多糖能促进溶血素抗体的生成，提高血清IgG的含量和血清溶血素IgM的水平，增强体液免疫的作用。
5.双向调节NK细胞的活性冬虫夏草水提液呈量效依赖型增强活动期白血病人NK细胞杀伤K562肿瘤细胞的能力，但对缓解期白血病人体内的NK细胞表现为抑制作用。
6.提高红细胞超氧化物歧化酶(s0D)活性，降低血浆丙二醛(MDA)含量能延缓衰老，防治老年虚症。
7.抗肿瘤作用冬虫夏草水提液和多糖、腺苷能使肿瘤细胞的P53基因表达发生改变，引起细胞周期阻滞，细胞分裂停止。
最终导致细胞凋亡，从而达到抑制肿瘤细胞增殖的作用。
多种氨基酸和微量元素通过增强人体免疫功能而抗癌。
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・综 述・冬虫夏草研究进展郭宏春1,高继全2,习欠云1,李小红3(1.深圳绿鹏农科产业股份有限公司,广东深圳 518057;2.罗氏诊断(香港)有限公司北京代表处,北京 100021;3.中国农业大学生物学院微生物系,北京 100094)摘 要 冬虫夏草是一种名贵的药用真菌,由于其自身独特的药用价值而成为各国研究的热点。
其生物学特性、化学成分已经阐明,从先前的天然采集到现在的菌体人工培养,这种根本性的过渡也极大丰富了它的产量和应用。
目前对其药用机理已研究清楚,药用范围也十分广泛。
挖掘和开发这一名贵中药,在我国乃至世界医药上均具有十分重要的意义。
关键词 冬虫夏草;药用真菌;人工培养;研究进展中图分类号 Q931 文献标识码 A 文章编号 1005-7021(2003)01-0050-06 冬虫夏草(Cordyceps si nensis)是一种名贵的药用真菌,有多种药理功能,具有抗癌活性物质。
我国是发现和在医药上应用冬虫夏草最早的国家,随后,欧洲及世界其他各国才开始对这类真菌标本的采集、描述和鉴定。
随着人们逐渐发现和认识冬虫夏草的滋补疗效和提高人体免疫功能,它的开发利用倍受世人的极大关注,不仅各国菌物学家竟相研究,而且菌物类的爱好者和菇类栽培者也跃跃欲试。
所以近几年来冬虫夏草的研究取得了迅速的发展。
1 冬虫夏草的生物学特性 冬虫夏草属于子囊菌纲,肉座菌目(Hypocre2 ales),麦角菌科(Clavicipitaceue),虫草属(Cordy2 ceps)[1]。
是虫草属真菌寄生在昆虫—蝙蝠类上的结合体,蝙蝠类幼虫经虫草菌感染在冬天钻入地下致病死亡,菌核就在病虫尸体上形成,外表仍保持原来虫形,到翌年夏季温暖潮湿适于菌体生长时,从虫体头部生出一根有柄呈棕色、紫褐色、咖啡色至深褐色的棒状子实体,长4～11cm,粗约3 mm,形似1株野草,故名“冬虫夏草”[2]。
1.1 冬虫夏草生活史[1,3]虫草菌子实体,上部膨大物为圆柱状的子座,长3～4cm,阔5mm。
下部为子座柄,连接虫体头部。
子座内有许多子囊壳,呈圆锥形或长卵形,子囊壳内有子囊,细长,约240～485μm×12～16μm,每个子囊含有2～8个子囊孢子,长锥形,约160～477μm×5～6.5μm,具多数横隔。
每年7～8月,子囊孢子感染蝙蝠蛾幼虫后,发芽并很快长成菌丝,到10月份菌丝大量繁殖后,虫体腔内充满菌丝而死成为僵虫,自幼虫头部长出子座(子实体)。
天冷后子座停止生长,翌年气温回升时,僵虫体表长出菌丝并于土壤黏结成一层膜皮。
温度升至4～10℃,子座迅速生长,出土后15d,顶部膨大并产生子囊壳,子囊壳顶端有小孔,可使成熟子囊孢子从中弹出,侵染新的寄主。
40d后子座萎缩[3]。
冬虫夏草的菌物复合体中的菌不是一种而是复杂的真菌系,它们的差异常常取决于地域环境条件和寄主昆虫的种群特性,在自然界不同地区、不同土壤、气候、植被条件下的不同生物种群(寄生和菌系),常常发生特异的寄生、互生或共生关系,形成不同的生态系统。
据报道,冬虫夏草的无性阶段分别被小林义雄、陈庆涛、沈南英、杨云鹏、董建中等人分离鉴定为葡萄穗霉属(Stachybotry sp.)、中国拟青霉属(Paecilomyces sinensis)、冬虫夏草头孢菌(Cephalo sporium dongchongxiacae)、蝙蝠蛾拟青霉属(P.hepial)、蝙蝠蛾被包霉(Mortierella hepial)、圆柱菌(Seydalium sp.)。
近年来我国菌物学工作者对冬虫夏草无性型研究又有新进展,李兆兰发表了中国弯颈霉(T olypocladium sinensis),此菌株分离自云南迪庆州冬虫夏草的菌核,它与冬虫夏草的关系是2个虫生真菌并存,还是同一真菌2个世代并存尚待进一步研究。
另外,陈锡进从四川康定产的冬虫夏草分离到被毛孢属的一个新种,名为中国被孢霉(Hirsutella sinensis),认为是冬虫夏草的无性阶段[4]。
1.2 冬虫夏草的分布冬虫夏草生长于高寒山区,高山雪线附近,常见于海拔4000m以上的高山上,尤其多见于积雪、排水良好的高寒草甸。
最适分布海拔高度为4200～4600m,下限是3000m,上限是5100 m。
产区的平均气温为0.2～8℃,年降水量556.7～651.3mm,气候具有明显的干季和雨季。
在我国的分布主产于四川、西藏、青海、云南的高山、亚高山草甸区,近年在辽宁也有发现[1,3,5,6]。
1.3 冬虫夏草的寄主收稿日期:2002-05-12作者简介:郭宏春 男,生物工程师。
现从事生物发酵工程和转基因微生物的研究及中试工作。
05微生物学杂志2003年1月第23卷第1期 JOURNAL OF MICROBIOLO GY Jan.2003Vol.23No.1 冬虫夏草的寄生昆虫不止1种,包括了蝠蛾科的蝙蝠属(Hepial us)、类蝙蝠属(Hepialiscas)、棒蝙蝠属(N apial us)、二岔蝙蝠属(Forkal us)和双节蝙蝠属(B ipectil us)等5个属的20种蝙蝠类幼虫,其中,蝙蝠属的虫草蝙蝠蛾(Hepial us ar2 moricanus)、斜脉蝠蛾(H.oblif urcus)、白马蝠蛾(H.bai m aensis)和人支蝠蛾(H.renz hiensis)等是冬虫夏草的优势寄主[4～7]。
2 冬虫夏草的人工栽培技术 冬虫夏草的生长过程是先营寄生再作腐生,加之生境特殊,人工培育成功得具备一些必要条件:①菌种用真正无性阶段菌株(含无性孢子)或用成熟的天然生的子囊孢子作接种体;②寄生蝙蝠的饲养技术;③具备能满足虫与菌生理、生化要求的特定条件,使虫结合实现侵染寄主,以便长成虫草子实体。
目前有半人工栽培及人工栽培2种方法[1,2]。
2.1 半人工栽培是不脱离虫草生长的自然环境,或利用天然的方式来培养虫草子实体的方法,包含寄主昆虫饲养、接种和栽培等步骤。
2.1.1 寄主昆虫饲养 蝙蝠蛾的配合饲料配方是:马铃薯淀粉10g,脱脂大豆粉25g,干桑叶粉20g,蔗糖5g,琼脂10g,维生素B40mg,氯霉素25mg,金霉素0.1g,抗坏血酸1.5g,蒸馏水250mL。
用10%的甲醛、2%的次氯酸钠、0.1 %的氯化汞,各浸泡5min消毒虫卵。
无菌条件下将消过毒的虫卵接种于饲料中,15～18℃下培养。
空气相对湿度70%左右,化蛹。
湿度90 %,黑暗或微光照条件,成虫羽化。
2.1.2 接种 将子囊孢子制成较浓的孢子悬浮液,利用微型喷雾装置将其喷洒到幼虫体上,同时为提高感染机会,在幼虫的食物中混入冬虫夏草的菌丝体。
感染后,虫体外壳由深黄褐色变成淡黄色,最后全身披上灰白色菌丝而死亡僵化。
经过一段时间培养,便从病虫的头部生出子座,成为冬虫夏草。
2.1.3 栽培 人工栽培时掌握温度:孢子弹射时30℃,菌丝体生长20～28℃,10～20℃形成菌核,14～25℃形成子座,26～32℃长出地面。
湿度控制:菌丝体生长60%～70%相对湿度,10 %～20%形成菌核,孢子弹射、子座形成及长出虫草以60%～80%为宜。
光照控制:孢子萌发和菌丝生长不需光照,但从无性阶段到有性阶段,需一定程度的散射光,刺激长出子座。
另外,只需小量空气即可。
p H以5～6为宜。
2.2 人工栽培即栽培的各个环节均在人为条件下完成,冬虫夏草的人工栽培,包括种子液制备、场地选择及栽培3个步骤。
2.2.1 种子液制备 悬浮液的配方为:马铃薯200g,磷酸二氢钾3g,硫酸镁1.5g,维生素10mg,增产灵0.5mg。
将孢子接种后,于24～28℃下培养。
2.2.2 场地选择 室外栽培选择土壤疏松、含沙量较大、通气良好的地方作栽培场,室内栽培用木板作成多层床架,上铺7cm沙土,湿度保持在40%,用树叶铺盖。
2.2.3 接种培养 接种时间选蝙蝠蛾幼虫发育到二龄时进行,在阴天或太阳下山后,用微型喷雾器喷到幼虫体上。
6～7月后,即可看到子座顶端露出土面。
也可用瓶子等装菜园土栽培。
我国沈南英(1985)把虫草头孢菌接种于特殊培养基—肉水500mL、水解蛋白5g、酵母1g、葡萄糖30g、磷酸二氢钾1g、蒸馏水400mL,长出了颜色、形态与冬虫夏草一样的子座。
四川中药研究所在产区康定,调查样方1000余个,采集样本1200余份,观测幼虫20多万头,实验1500余次,终于用康定虫草菌接种人工饲养的贡嘎蝙蝠蛾幼虫,成功地完成世代繁衍,人工培养出冬虫夏草。
3 冬虫夏草的液体深层发酵 由于天然虫草严格的寄生性以及特殊的生态环境,故其产量很低,资源紧缺。
市场供需脱节,价格高昂,大约6000元/kg[8],目前市场出售约10000元/kg以上。
利用液体深层发酵培养冬虫夏草菌丝体、提取物或发酵液,是解决冬虫夏草药源的一种有效途径。
实验表明,人工发酵培养得到的菌丝,经毒理、药理、植化研究,证明与天然虫草化学组成、药理作用基本一致,可代替天然虫草生产虫草制品,以弥补自然资源的短缺[9]。
据食用菌生物技术1989年国际会议报道,虫草菌丝体液体培养产率最高可达4%左右[10]。
据报道,国内有30多个单位的科学工作者在进行冬虫夏草的人工培养及采用其无性阶段的发酵物,代替野生冬虫夏草的研究方面已取得较为理想的结果。
尚德静等通过对冬虫夏草的深层发酵条件,如p H、培养温度、接种量、转速及对深层发酵培养基碳氮源和无机盐的筛选,确定了其最佳发酵条件为24℃、200r/min、p H5.0、接种151期 郭宏春等:冬虫夏草研究进展 量5%～15%,菌丝生长的最佳碳源为葡萄糖,最佳氮源为蛋白胨和氨基酸复合粉,最佳无机盐为磷酸二氢钾、硫酸镁和氯化钙[11]。
江晓路、葛蓓蕾对一株北虫草菌Y3的液体深层发酵条件进行了研究,确定了以土豆汁20%、蛋白胨8‰、蔗糖20‰、磷酸氢二钾1.5‰为主的发酵培养基,培养条件为:温度25～26℃,转速125r/min,接种量5%,摇床振荡培养4～5d。
获得了菌丝平均得率为1.8%的较高水平[12]。
李信、许雷、裴鑫德采用二次回归通用旋转组合设计方法,对蛹虫草菌丝体液体发酵培养基的最佳组合进行了研究,建立了培养基的反应模型,并用实验数据验证了数学模型,对培养基最佳优化组合的各种因子、影响产量的反应规律及交互作用进行了探讨,并在此基础上进行了蛹虫草菌丝体液体发酵条件的研究。
结果表明,蛹虫草菌丝体液体发酵的最适条件为:接种量为6%(体积与体积比),发酵初始p H7.0,培养基装量100 mL/500mL三角瓶,发酵温度24～28℃,发酵周期96h[13]。
张长凯等对虫草菌丝生长的深层培养条件进行了详细的研究,筛选出虫草菌丝深层培养的最优条件:葡萄糖 1.5%,麦芽汁1%,蛋白胨1%,酵母膏0.5%,p H6.0,温度23℃,接种量5%～10%,摇床转速80～90r/min[10]。