034-砷盐检查法

江西欧氏药业有限责任公司GMP文件

1 目的

规范规范药品砷盐检查操作程序，确保检验工作质量。

2 范围

计算）的限量检查。

适用于药品数量砷盐（以A

S

3 职责

QC主任、QC化验员。

4 内容

4.1 简述

4.1.1 砷盐检查法中的第一法（古蔡氏法）用作药品中砷盐的限量检查；第二法（二乙基二硫代氨基甲酸银法）既可检查药品中砷盐限量，又可测定含量；两法并列，可根据需要选用。

4.1.2 古蔡氏法是利用金属锌与酸作用产生新生态的氢与药品中微量亚砷酸盐反应生成具有挥发性的砷化氢，遇溴化汞试纸产生黄色至棕色的砷斑，与同一条件下定量标准砷溶液所产生的砷斑比较，以判定砷盐的限量。

4.1.3 二乙基二硫代氨基甲酸银法是将生成的砷化氢气体导入盛有二乙基二硫代氨基甲酸银试液的管中，使之还原为红色胶态银，与同一条件下定量的标准砷溶液所制成的对照液比较，或在510nm的波长处测定吸收度，以判定含砷盐的限度或测定含量。

4.2仪器与用具

4.2.1 第一法（古蔡氏法）按药典规定：有机玻璃旋塞D和E的孔径与导气管C内径一致，以免生成的色斑直径不同，影响比色的准确度；B磨口塞，C管顶

端与D、E有机玻璃旋塞塞盖间应紧密吻合，以防砷化氢泄漏。

名称砷盐检查法

编号

SOP-ZL-FF-034-00

码

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4.2.2 第二法（二乙基二硫代氨基甲酸银法）按药典规定：B磨口塞应密闭，以防砷化氢泄漏；与标准磨口塞B相连的导气管C一端长度应不低于80mm，便于装醋酸铅棉花达80mm，另一端长度应不低于180mm，尖端内径不可超过1mm，以保证产生的砷化氢吸收完全；D管的标准管与样品管要一致，管内径，色泽，刻线要相同。

4.3 试药与试液

4.3.1 标准砷溶液精密称取三氧化二砷0.132g，置1000ml量瓶中，加20%

氢氧化钠溶液5ml溶解后，用适量的稀硫酸中和，再加稀硫酸10ml，用水稀释至刻度，摇匀，作为贮备液。

临用前，精密量贮备液10ml，置1000ml置瓶中，加稀硫酸10ml，用水稀释至刻度，摇匀，即得（每1ml相当于1.0ug的As）。

4.3.2 碘化钾试液：取碘化钾16.5g，加水使溶解成 100ml，即得。本液应监用新制。

4.3.3 酸性氯化亚锡试液：取氯化亚锡20g，加盐酸使溶解成50ml，滤过，即得。本液配制后3个月即不适用。

4.3.4 乙醇制溴化汞试液：取溴化汞2.5g，加乙醇50ml，微热使溶解，即得。本液应置玻璃塞瓶内，在暗处保存。

4.3.5 溴化汞试纸取质地较疏松的中速定量滤纸条浸入乙醇制溴化汞试液中，1小时后取出，在暗处干燥，即得。本试纸宜置棕色磨口塞玻璃瓶内保存。

4.3.6 锌粒以能通过1号筛的细粒无砷锌为宜，如使用锌粒较大时，用量酌情增加，反应时间亦应延长为1小时。

4.3.7 醋酸铅棉花取脱脂棉，浸入醋酸铅试液与水的等容混合液中，湿透后，沥去过多的溶液，并使之疏松，在100℃以下干燥后，贮于磨口塞玻璃瓶中备用。

4.3.8 二乙基二硫代氨基甲酸银试液取二乙基二硫代氨基甲酸银0.25g，加氯仿适量与三乙胺1.8ml，加氯仿至100ml，搅拉使溶解，放置过液，用脱脂棉滤过，即得。本液应置棕色玻璃瓶中，密塞，置阴凉处保存。

名称砷盐检查法

编号

SOP-ZL-FF-034-00

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4.4 操作方法

4.4.1 第一法（古蔡氏法）

4.4.1.1 标准砷斑的制备

4.4.1.1.1 装置的装备取醋酸铅棉花适量（60mg）撕成疏松状，每次少量，用细玻璃棒均匀地装入导气管C中，松紧要适度，装管高度为60~80mm。用玻璃棒夹取溴化汞试纸1片（其大小能覆盖D顶端口径而不露出平面外为宜），置旋塞D顶端平面上，盖住孔径，盖上旋盖E并旋紧。

4.4.1.1.2 精密量取标准砷溶液2ml，置A瓶中，加盐酸5ml与水21ml，再加上碘化钾试液5ml与酸性氯化亚锡试液5滴，在室温放置10分钟后，加锌粒2g，立即将准备好的导气管C密塞于A瓶上，并将A瓶置25~40℃水浴中反应45分钟，取出溴化汞试纸，即得。

若供试品需经有机破坏后再行检砷，则应精密量取标准砷溶液2ml代替供试品，照各该药品正文项下规定的方法处理后，依法制备标准砷斑。

4.4.1.2 检查法取照该药品正文项下规定方法制成的供试液，置A瓶中，照标准砷斑的制备，自“再加碘化钾试液5ml”起依法操作。将生成的砷斑与标准砷斑比较，即得。

4.4.2 第二法（二乙基二硫代氨基甲酸银法）

4.4.2.1 标准砷对照液的制备

4.4.2.1.1 装置的准备取醋酸铅棉花适量（6mg），撕成疏松状，每次少量，用细玻璃棒均匀地装入导气管C中，松紧要适度，装管高度约80mm。精密量取二乙基二硫代氨基甲酸银试液5ml置D管中。

4.4.2.1.2 精密量取标准砷溶液2ml，置A瓶中，加盐酸5ml与水21ml，再加碘化钾试液5ml 与酸性氯化亚锡试液5滴，在室温放置10分钟后，加锌粒2g，立即将准备好的导气管C与A瓶密塞，使生成的砷化氢气体导入D管中，并将A 瓶置25~40℃水浴中反应45分钟，取出D管，添加氯仿至刻度，混匀，即得。

若供试品需经有机破坏后再行检砷，则应精密量取标准砷溶液2ml代替供试

名称砷盐检查法

编号

SOP-ZL-FF-034-00

码

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品，照各该药品项下规定的方法同法处理后，依法制备标准砷对照液。

4.4.2.2 检查法准备好C管装置，取照该药品项下规定方法制成的供试液，置A瓶中，照标准砷对照液的制备，自“再加碘化钾试液5ml”起依法操作。将所得溶液与标准砷对照液同置白色背景上，从D管上方向下观察，比较即得。

5 注意事项

5.1 所用仪器和试液等照本法检查，均不应生成砷斑，或经空白试验至多生成仅可辨认的斑痕。

5.2 新购置的仪器装置，在使用前应检查是否符合要求。可将所使用的仪器装置依法制备标准砷斑，所得砷斑应呈色一致。同一套仪器应能辩别出标准砷溶液1.5ml与2.0ml所呈砷斑的深浅。

5.3 制备标准砷斑或标准砷对照液，应与供试品检查同时进行。因砷斑不稳定，反应中应保持干燥及避光，并立即比较。标准砷溶液应于实验当天配制，标准砷贮备液存放时间一般不宜超过一年。

5.4 第一法（古蔡氏法）反应灵敏度约为0.75ug（以As计），砷斑色泽的深度随砷化氢的量而定，药典规定标准砷斑为2ml标准砷溶液（相当于2ug的As ）所形成的色斑，此浓度得到的砷斑色度适中，清晰，便于分辨。供试品规定含砷限量不同时，采用改变供试品取得量的方法来适应要求，而不采用改变标准砷溶液取量的办法。

5.5 药品中存在的微量砷常以三价的亚砷酸盐或五价的砷酸盐存在，五价状态的砷生成砷化氢比三价砷慢，故先加入碘化钾和氯化亚锡为还原剂，使五价砷还原为三价砷。

5.6 如供试品中存在锑盐，将干扰砷盐检查，所以本法不适用供试品为锑盐的砷盐检查。但在药典规定的实验条件下，100ug的锑存在不致于干扰测定。实验中加入氯化亚锡不仅有效地抑制锑的干扰，防止锑化氢与溴化汞试纸作用生成锑斑或与二乙基二硫代氨基甲酸银试液反应，干扰砷盐检查，还可与锌作用，在锌粒表面形成锌锡齐，起去极化作用，从而使氢能均匀连续地发生，有利于砷斑的