非洲猪瘟病毒ASFV基因组主要编码蛋白课件

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2018-11-16--ASFV培训课件

2018-11-16--ASFV培训课件
3%的邻苯基苯酚、3%的碘化合物。
3.3样品处理
组织样本 用磷酸盐缓冲液制备成 10%(w/v) 的均质组织悬液 分别从组织的三个不同位置取样,手术剪剪取样品约0.2~0.5g,加入含有1mL无菌PBS (0.01mol/L,pH7.2~7.4)的离心管中(已添加灭菌钢珠),使用高通量组织研磨仪进行研 磨处理(70Hz,120s); 组织样品的处理需在二级生物安全柜中进行; 勿使液体溅到生物安全柜中。如不慎溅出,立即 使用2%NaOH喷洒覆盖溅出处一段时间消除污染
• pH 4~11.5 无血清 4~13.4 有血清
未熟肉品、腌肉、泔水中可长期存活
乙醚、氯仿等脂溶剂可破坏囊膜使其失活
在污染的猪圈中,1个月保持感染性 带血木板中可存活70d 在腐败的血中可存活15周 4℃条件下,感染猪血液中病毒感染力可以稳定保持18个月以上 骨髓和未煮熟的香肠、肉片和干火腿中存活3~6个月 冷冻病死猪尸体中15年保持存活
3.3样品处理
饲料样本 处理方法与组织样本相同。
全血(抗凝血)或血清 直接吸取,无需进行处理。
拭子 含液体拭子:直接吸取,无需进行处理。 无液体拭子:添加PBS液,浸泡20min,捻干拭子,即可。
3.4 样品灭活
60 ℃作用30min可彻底灭活病毒。
3.5 核酸提取
核酸提取方法选择: 抽提法-步骤繁琐、成本低 柱式提取-方便操作、成本高 自动提取-方便、自动
反应体系和循环条件:
PCR步骤
激活Taq酶
温度
95℃
时间
30s
循环次数
1ห้องสมุดไป่ตู้
DNA变性
95℃
5s
引物退火/延 伸
60℃
30s

非洲猪瘟流行病学ppt课件

非洲猪瘟流行病学ppt课件

—被污染的饲料、泔水、栏舍、车辆、器具和
衣物也能够使健康猪感染; —感染的猪肉和肉制品是ASFV重要的传染源; —野猪和软蜱是ASFV的储存宿主。
流行病学
传染源-我国钝缘蜱的分布
28个省存在117个种的蜱,其中软蜱包括锐缘蜱属7个种,钝缘
蜱属2个种(特突钝缘蜱(O. tartakovskyi)和乳突钝缘蜱(O.

二、流行病学
特点一宿主:家猪、野猪、软蜱
非洲的野猪: 疣猪(Warthogs) 丛林猪(Bush pigs) 大森林猪(Giant forest hogs)
欧洲的野猪:
野猪(Wild pigs)
欧洲野公猪
流行病学 传染源
—发病猪和带毒猪是ASFV的主要传染源, 发病
猪组织和体液中含有高滴度的病毒;
流行病学 易感动物
—猪与野猪对ASFV自然易感,各品种及个不同年龄的猪
群同样是易感的。
—野猪可自然感染ASFV,非洲猪瘟的自然宿主为非洲的 野猪,尤其是疣猪(phacochoerus africanus)、薮猪 (Potamochoerus porcus)、巨林猪(Giant Forest hog, Hylochoerus meinertzhangeni),而广泛分布于
一、病原学
非洲猪瘟病毒科中唯一成员 ASFV只有1个血清型,是唯一一种节肢动物——蜱作为传播媒介
的核酸为DNA病毒。
一、病原学
ASFV是一种在胞浆内复制的有囊膜的双股DNA病
毒,分类上属非洲猪瘟病毒科
(Asfarviridae),非洲猪瘟病毒属
(Asfivirus)成员,而且是其中的唯一成员。
概述
2007年 东欧——格鲁吉亚、亚美尼亚、俄罗斯

非洲猪瘟(ASF)

非洲猪瘟(ASF)

• DIF诊断亚急性和慢性ASF时只有40%敏感性,是由感染 组织中抗原抗体复合物阻断ASFV抗原与标记的抗ASFV免 疫球蛋白的结合引起的
• 血细胞吸附实验是指红细胞能吸附在体外培养的 感染ASFV的巨嗜细胞膜表面
• 在ASFV诱导的细胞病变出现前,红细胞能在巨嗜 细胞周围形成典型的玫瑰花环 • ASFV-DNA检测:PCR技术 • 抗体检测:感染ASFV后的6-8天能从血液中检测 到特异性的免疫球蛋白G,IFA、ELISA和免疫印 迹技术(IB)最常用
• 自然感染的潜伏期从4天到19天不等,实验室感 染潜伏期较短,一般2-5天
耳、背部严重瘀血
病猪精神沉郁,皮肤发绀,腹泻,粪便带血
鼻孔出血
发病机理
• 一般情况下,ASFV在家猪经口或鼻腔传播
• 也可通过蜱叮咬、皮肤划痕和注射感染ASFV • ASFV的感染从扁桃体和下颌淋巴结的单核巨嗜细 胞开始,随淋巴液和血液达到靶器官 • 感染ASFV后6-8天开始出现病毒血症,病毒血症 将存在很长时间
非洲猪瘟(ASF)
病原学
• ASFV基因组为双股、线形DNA分子,大小为 170-190kb • 在细胞中病毒粒子至少有28种结构蛋白和100种 以上的病毒诱导蛋白 • P73、P54、P30和P12有很好的抗原性
• ASFV主要在感染猪的单核巨嗜细胞中复制,未见 ASFV感染淋巴细胞 • ASFV能在软蜱中复制,ASFV能适应大量稳定的 细胞系,如VERO、MS和CV细胞
• ASF大体病变出现于脾、淋巴结、肾和心脏
• 脾脏呈红黑色,肿大,梗死,变脆 • 淋巴结水肿,出血,变脆,有时像黑红色的血肿, 切面呈现大理石样外观 • 肾脏皮质切面有点状出血,肾盂切面呈点状出血
• 心内膜或心外膜有出血点或出血斑

畜牧兽医专业《动物微生物学》PPT课件 非洲猪瘟病毒科

畜牧兽医专业《动物微生物学》PPT课件 非洲猪瘟病毒科

侵入细胞过程
• 在细胞核内转录、复制、核内装配 • 通过细胞裂解释放 • 腺病毒通过其纤突球部与敏感细胞膜上的特 异性受体结合后,即开始了感染过程 • 结合后的病毒,或依靠细胞的吞饮作用,或 直接侵入细胞
• 进入细胞浆内的病毒立即脱衣壳,五邻粒发 生解离,进而降低了衣壳的稳定性,其它六 邻粒及其相关蛋白也发生分离。 • 裸露的病毒核心体通过核膜上的空隙进入核 内,或释放出DNA进入核内,这个过程可在1 ~2个小时内完成。
减蛋综合症畸形蛋
• (2)人工感染1日龄雏鸡,到7日龄前后出现 精神萎顿和腹泻,并有少数幼雏鸡发生死亡
• 4、病毒培养 • (1)在鸭胚和鹅胚上复制的滴度高于鸡胚 • (2)能在鸭及鹅胚的肾细胞、肝细胞、成纤 维细胞上复制,并产生CPE(细胞肿胀、变圆 聚集成葡萄串状)。
• 5、生物特性 • (1)能凝集鸡及其他禽类的红细胞; (2)对热、酸和外界环境抵抗力较强。 • 6、诊断 • (1)病毒分离:病料采集和处理;鸭胚接种 • (2)病毒鉴定:血凝和血凝抑制试验。
• 2、腺病毒没有囊膜,核衣壳的直径为70~ 80nm,呈二十面体立体对称。 • 内为线状的双股DNA。 • DNA被包于蛋白外壳即衣壳内。 • 衣壳由252个壳粒组成,其中240个是六邻粒 构成二十面体的20个面以及棱的大部分。
• 3、纤突直径为2nm,长约10~31nm——随 腺病毒型而不同。 • 纤突顶端为一个4nm直径的球形物,这是病 毒感染细胞时结合于细胞受体的部分。 • 血凝素也在球部,可凝集大白鼠、恒河猴或禽 类红细胞,为型特异性抗原所在部位。
腺病毒科
一、分类
• 哺乳动物腺病毒属 • 禽类腺病毒属
二、一般特性
• • • • 各种动物的腺病毒形态基本相同 衣壳结构清晰 易在电子显微镜下仔细观察 在感染细胞核内的病毒粒子经常排列成结晶 状。 • 腺病毒的核酸和蛋白质又易分离提取,故是 目前动物病毒中在形态和化学结构上研究得 最为详细的病毒之一。

非洲猪瘟防控知识ppt课件.ppt

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非洲猪瘟防控知识ppt课件.ppt1、非洲猪瘟防控学问主要内容01.非洲猪瘟病原02·起源和危害03·传播路径和途径04·国内外疫情05·猪源血粉传播分析一、非洲猪瘟病原非洲猪瘟〔AfricanSwineFever,ASF〕是由非洲猪瘟病毒感染引起的猪的一种急性、热性、高度接触性传染病,可影响全部年龄的猪,主要引起出血热。

是世界动物卫生组织〔OIE〕法定报告的动物疫病,我国将其列为一类动物疫病。

是我国重点防范的外来动物疫病之一,不是人畜共患病,只感染猪和钝缘软蜱,是家猪、疣猪、欧洲野猪和美洲野猪的一种传染性极强的出血性疾病。

〔一〕非洲猪瘟的生物学特点非洲猪瘟病毒科〔Asfarviridae〕非洲猪瘟病毒属〔Asfarvirus〕的唯一成员2、兼具虹彩病毒和痘病毒的某些特性–唯一核酸为DNA的虫媒病毒–23个基因型9个血清型特点之一:基因组大而冗杂蓝耳病病毒15kb12倍猪瘟病毒12kb15倍口蹄疫病毒8kb24倍特点之二:基因多变基因型多达23个基因组两端各有一个高变区特点之三:对环境抵抗力较强非洲猪瘟病毒〔ASFV〕口蹄疫病毒〔FMDV〕☆56℃70分钟,60℃20分钟灭活56℃30分钟灭活☆25-37℃数周22℃时存活8~10周;37℃时存活10天☆4℃1年4℃可存活1年☆pH:无血清4-11.5,有血清4—13.4☆pH低于6或高于9时很快失活☆粪便中至少存活11d,在环境中存活数天在干粪中病毒可存活14天,在粪浆中可存活63、个月,在尿水中存活39天在地外表,夏季存活3天,冬季存活28天☆在死亡野猪尸体中可以存活长达1年室温放置15周的腐败血清☆4℃保存肉150天,骨髓188天,血液18个月至6年;冷藏〔4℃〕胴体产酸能在3天内杀死病毒☆冷冻〔-20℃〕肉中可存活数年冷冻〔-20℃〕在脾、肺、肾、肠内至少存活210天☆未熟肉品、腌肉、泔水中可长时间存活在腌制干火腿中可存活5个月在未经烧煮或高温烟熏的火腿和香肠中能存活3-6个月食盐对其无杀灭作用,在腌肉中可以存活,但受PH值影响,肉品自然发酵产生乳酸PH下降到5.3-5.7时就将其杀灭〔二〕非洲猪瘟流行病学特点特点之一:宿主涉及家猪、野猪和软蜱1、贮存宿主:〔1〕非洲的野猪4、:疣猪、丛林猪、大森林猪〔2〕钝缘〔软〕蜱〔3〕疫区的其他吸血昆虫,如血虱、蚊子和苍蝇等2、终末宿主:〔1〕欧洲的野猪:野猪〔2〕美洲的野猪:后颈野猪、白唇野猪等〔3〕家猪:即猪科猪属家猪种的成员 A.家养猪/SusscrofadomesticusB.欧洲野猪/SusscrofaferusC.非洲灌丛野猪/PotamochoerusporcusD.疣猪/PotamochoerusporcusE.巨型森林猪/HylochoerusmeinertzhageniF.钝缘软蜱〔雄性和雌性〕特点之二:感染途径和传播方式多种多样传播方式:直接接触传播、间接接触传播和媒介蜱传播3种方式直接接触--亲密接触间接接触--5、污染物媒介传播--软蜱等叮咬感染途径:消化道呼吸道血液非洲猪瘟病毒的循环模式ASFV主要定值循环:森林〔丛林〕传播循环、家猪(家猪-家猪)循环、野猪循环〔野猪-野猪〕、野家循环〔野猪-家猪〕、蜱-猪循环森林〔丛林〕传播循环在非洲,软蜱感染ASFV后通过叮咬传染给野猪,野猪感染后不表现临床症状但可以形成病毒血症并持续2-3周,未感染ASFV的软蜱通过叮咬获得病毒,病毒可长期在软蜱体内存活和繁殖,通过叮咬再感染其它野猪,从而形成“野猪-软蜱-野猪”之间的循环,称为“森林循环”,ASFV通过森林循环可长期存在于自然界中。

猪瘟病毒PPT课件

猪瘟病毒PPT课件

跳加速,呼吸急促,皮肤出血,死亡率高。
• 亚急性呈现鼻、耳、腹肋部发绀,有出血斑。
• 慢性型特征为怀孕母猪流产、腹泻、呕吐,粪便有黏
液、血液。
• 最急性和急性型的病理变化以内脏器官的广泛出血为
特征,亚急性和慢性型则病理变化轻微。
脾脏肿大、出血性梗死
• HCV对环境的抵抗力不强,但存活的时间部分取决于
含毒的介质。
猪瘟病毒(HCV)电镜照片
流行病学
• 猪是本病惟一的自然宿主,不同品种、年龄和
性别的猪均可感染。
• 传染源:病猪和带毒猪 • 传播方式:易感猪与病猪的直接接触 • 感染途径:口腔、鼻腔,间或通过结膜、生殖
道黏膜或皮肤擦伤感染。
• 本病常发地区,猪群有一定的免疫性,其发病
均含大量感染性病毒。
• 猪是病毒惟一的自然宿主。ASFV在软蜱和猪之
间形成循环感染,使ASF在非洲很难消灭。
• 猪群中引进潜伏期病猪及其下脚料是非洲猪瘟
暴发的最常见原因。猪群一旦感染,传染迅速, 发病率和死亡率都极高。
临诊症状及病理变化
• 最急性型往往未见到明显临诊症状即倒地死亡。 • 急性型表现无食欲,体温升高到40~40.9℃,稽留3~
第四章 猪的传染病
内容概要
第一节 猪的病毒性传染病
一、猪 瘟 二、非洲猪瘟 三、猪繁殖与呼吸综合征(蓝耳病) 四、猪传染性胃肠炎 五、猪流行性腹泻 六、猪流行性感冒
第二节 猪的细菌性传染病
一、猪丹毒 二、猪痢疾(猪血痢) 三、猪支原体肺炎(气喘病) 四、猪传染性萎缩性鼻炎
第一节 猪的病毒性传染病
以控制本病。
• 疫苗接种应制订有效的免疫程序,应对猪群进
行抗体水平监测 。
• 新生仔猪疫苗接种后的免疫应答受到母源抗体

非洲猪瘟病毒及感染ppt课件

非洲猪瘟病毒及感染ppt课件
15
全球疫情形势严峻
2009年:发生非洲猪瘟的国家6个:俄罗斯、格鲁吉 亚、纳米比亚、毛里求斯、坦桑尼亚、赞比亚。 2010年:发生ASF的国家俄罗斯。 2013-11-18日:赞比亚近2000头猪死于非洲猪瘟。 2018年8月3日—11月16日:我国ASF确诊66起。
16
二、病原学
非洲猪瘟病毒科中唯一成员。 ASFV只有1个血清型,是唯一一种节肢动 物—以蜱作为传播媒介的核酸为DNA的病毒。
非洲猪瘟病毒及感染
1
一、概述 二、病原学 三、流行病学 四、发病机理 五、临床症状 六、病理变化 七、诊断 八、防控措施
2
一、概述
是由非洲猪瘟病毒引起的一种急性、热性、 高度接触性传染病,以高热、皮肤发绀及淋巴结 和内脏器官严重出血为特征。非洲猪瘟在症状上 与急性猪瘟相似。
3
我国今年自8月3日在辽宁省沈阳市沈北新区 发生第一例非洲猪瘟以来,截止到目前2018年11 月19日,我国已有19个省(直辖市、自治区)发 生了71起非洲猪瘟。第65起非洲猪瘟发生于吉林 省白山市浑江区红土崖镇大清沟村冰湖沟地区的 一头死亡野猪,这起疫情,将成为我国非洲猪瘟 疫情发展过程中的一个标志性事件,因为野猪带 毒后,将成为自然疫源地,在我国目前养殖现状 下,非洲猪瘟净化将任重道远、遥遥无期。
—野猪可自然感染ASFV,非洲猪瘟的自然宿主为非洲的
野猪,尤其是疣猪(phacochoerus africanus)、薮猪 (Potamochoerus porcus)、巨林猪(Giant Forest
hog, Hylochoerus meinertzhangeni),而广泛分布于 欧亚大陆的野猪(Sus scrofa)也对ASF高度易感。
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五、临床症状

临床病理解剖学非洲猪瘟ppt

临床病理解剖学非洲猪瘟ppt
猪群非洲猪瘟的方法有:封林(不打扰野猪群,不捕猎,电网隔离),设立陷阱, 发现野猪尸体及时处理等。
临床症状
临床上与猪瘟相似 淋巴器官、网状内皮组织、肾脏、皮下广泛出血,脾脏肿大,母猪流产
注意:猪瘟免疫猪群出现类似急性猪瘟症状时,应怀疑非洲猪瘟。
无症状突然死亡; □ 发病率、病死率高; □高热,体温升高 40.5 至 42℃; □ 耳、四肢、腹背部皮肤有出血点、发绀; □呕吐,腹泻或便秘,粪便带血; □ 虚弱、步态僵直,不愿站立等; □偶见眼、鼻有黏液脓性分泌物。 □ 精神沉郁、食欲下降; □ 呼吸困难,湿咳; □关节疼痛、肿胀; □妊娠母猪流产、死胎、弱仔。
图10:肾盂及肾乳头部的出血斑( 急性)
图11:肾盂处散在的出血点(急性 )
图1 2 :肿大、出血的肝胃淋巴结, 可出见有血凝块(急性)
图1 3 :肝胃淋巴结切面 ,肿大并呈暗红色。( 急性)
图1 5 :胆囊水肿(
图1 4 :心包积液及心包肌 层有散在的出血点(急性 )
图16:肺部可见肉芽肿病 变, 形成一结节(慢性
Acute ASF. (A) An enlarged, purpleeblack spleen crosses the entire abdominal cavity (hyperaemic splenomegaly). (B) Several lymph nodes display degrees of haemorrhage, most intensely in the medulla. (C) Cut sections of lymph nodes with marbled appearance. (D) Petechial haemorrhages in the renal cortex.
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4. p49 (B438L)1317nt,438aa 非结构蛋白p49也是病毒衣壳的组成成分之一,p49的缺失将影响 p72的正确折叠和p14的移位,使病毒衣壳无法正确组装。
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主要编码蛋白
5. p72 (B646L)1941nt,646aa p72蛋白是非洲猪瘟病毒的主要结构蛋白,也是组成病毒粒子20面 体衣壳的主要部分,也称为VP72/p73蛋白。通常产生于病毒感染的 后期,约占非洲猪瘟病毒粒子总蛋白的32%。有研究表明,不同来 源的ASFV毒株的p72蛋白所具有的抗原决定簇都相当保守,具有的 免疫原性比较稳定,常用于血清学诊断和免疫制剂的研发。
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主要编码蛋白பைடு நூலகம்
3. p14 (E120R)363nt,120aa p14蛋白在细胞内表达的分子量大小不均一,为12-25ku,体外试 验表明该蛋白有着与DNA结合的特性,同时也能和p72蛋白相互 作用并结合,共同组成衣壳。
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主要编码蛋白
6. p54(E183L)552nt,183aa p54蛋白同样是非洲猪瘟病毒的重要结构蛋白,蛋白分子中含有 一段跨膜区域,主要集中于衍生的内质网膜处。p54蛋白的跨膜 结构区域对病毒蛋白经过内质网膜转化成病毒囊膜前体的过程十 分重要。p54蛋白与细胞质动力蛋白DLC8可发生特殊的交叉反应 ,介导病毒的细胞内运输。在细胞对病毒内摄过程和病毒在细胞 内的加工过程中都起着重要作用。p54蛋白在非洲猪瘟病毒的感 染早期能诱导casepase-9和casepase-3激活,激活细胞凋亡作用, 进而诱发细胞吞噬,这是非洲猪瘟发病机制中的重要环节。
pE199L
壳 p35
p15
p8
pp220 (CP2475L) pp62 (C9530R)
Protease (S273R)
DNA
RP1 RP5 RP2 RP6 RNA聚合酶亚基
RP3 RP7
类 pD1133L pQ706L 核 pG1340L pB962L
转录因子
Poly(A) pol Capping enzyme Methyltransferase
RNA修饰酶
p10 pA104R
与DNA结合的主要结构蛋白
DNA pol X DNA ligase AP endonuclease
碱基切除修复
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主要编码蛋白
1. p12 (O61R)186nt,61aa 病毒蛋白 p12位于外囊膜上,也是内囊膜的组成成分之一。在病 毒侵染细胞时,可吸附细胞膜,使病毒进入细胞内。
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主要编码蛋白
7.p17(D117L)354nt,117aa 若缺失p17,组装后的病毒将变得不稳定,失去感染作用。蛋白 p17同时还具有抑制蛋白水解的作用,使多聚蛋白pp220和pp62不 能进一步水解。
8. pE248R (E248R)747nt,248aa 位于成熟病毒粒子内囊膜的pE248R蛋白在病毒感染细胞时会发 生酰基化,对病毒早期侵入宿主细胞起到十分重要的作用。
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主要编码蛋白
9.p32(CP204L)615nt,204aa p32蛋白分子量约为30ku。在病毒感染早期表达,能够引起机体 产生免疫反应,因此该蛋白具有比较好的抗原性。研究表明,针 对p32蛋白的抗体能够抑制病毒内化,说明p32蛋白也参与病毒进 入细胞的过程。
外 囊 膜

p12 (O61R)
毒 衣
p24 CD2v
(EP402R)壳
文ppp档471仅492供(( (参考EBB,1不46234能086作RLL为)) )科学依内囊膜据,请勿pppppp2H模15E12724仿21(;40( (如88ER有ROD1不16(8当113之7REL处L))2,)4请8联R系)网站或核本人删除ppppp13315。57440
2.CD2v(EP402R)1209nt,402aa CD2v蛋白位于病毒粒子的外囊膜上,由信号肤序列和一个跨膜
区组成,因为它拥有两个免疫球蛋白样的结构域,其氨基酸序列与 CD2分子非常相似,可以与猪红细胞表面的CD2受体发生特异性结 合,因此ASFV可以吸附在猪的红细胞表面。具有血吸附性的非洲 猪瘟病毒,在感染时90%的病毒粒子呈红细胞吸附的状态,这种现 象可能与非洲猪瘟病毒在猪体内的传播有关。
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