小鼠胰岛素说明书(1)
小鼠胰岛素(Insulin)说明书
小鼠胰岛素(Insulin)酶联免疫分析（ELISA）试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定小鼠血清,血浆及相关液体样本中胰岛素(Insulin)含量。
实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠胰岛素(Insulin)水平。
用纯化的小鼠胰岛素(Insulin)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入胰岛素(Insulin)，再与HRP标记的胰岛素(Insulin)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的胰岛素(Insulin)呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中小鼠胰岛素(Insulin)含量。
试剂盒组成：样本处理及要求：1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。
3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。
通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
5. 组织标本：切割标本后，称取重量。
加入一定量的PBS，PH7.4。
碧云天生物技术 Min6 (小鼠胰岛β细胞) 产品说明书
碧云天生物技术/Beyotime Biotechnology订货热线：400-168-3301或800-8283301订货e-mail：******************技术咨询：*****************网址：碧云天网站微信公众号Min6 (小鼠胰岛β细胞)产品编号产品名称包装C7406 Min6 (小鼠胰岛β细胞) 1支/瓶产品简介：Organism Tissue Morphology Culture Properties Mus musculus (Mouse) Pancreas Epithelial Adherent本细胞株详细信息如下:General InformationCell Line Name Min6 (Mouse Islet Β Cells)Synonyms Min6; MIN-6; Mouse INsulinoma 6Organism Mus musculus (Mouse)Tissue PancreasCell Type －Morphology EpithelialDisease Mouse insulinomaStrain －Biosafety Level* －Age at Sampling 13 weeksGender －Genetics －Ethnicity －Applications －Category Transformed cell line* Biosafety classification is based on U.S. Public Health Service Guidelines, it is the responsibility of the customer to ensure that their facilities comply with biosafety regulations for their own country.CharacteristicsKaryotype －Virus Susceptibility －Derivation －Clinical Data －Antigen Expression －Receptor Expression －Oncogene －Genes Expressed －Gene expressiondatabases －Metastasis －Tumorigenic －Effects －Comments －Culture MethodDoubling Time －Methods for Passages Wash by PBS once then 0.05% trypsin-EDTA solution and incubate at room temperature, observe cells under an inverted microscope until cell layer is dispersed (usually 1 minute)Medium DMEM (high glucose) 10% FBS+0.05mM 2-Mercaptoethanol MCH2 / 5 C7406 Min6 (小鼠胰岛β细胞)400-1683301/800-8283301 碧云天/BeyotimeSpecial Remarks －Medium Renewal －Subcultivation Ratio 1:5 to 1:15 Growth Condition 95% air+ 5% CO 2, 37ºC Freeze medium DMEM (high glucose)+20% FBS+10% DMSO ，也可以订购碧云天的细胞冻存液(C0210)。
小鼠胰岛素Insulin酶联免疫分析
小鼠胰岛素(Insulin)酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。
检测范围：96T30pg/ml-800pg/ml使用目的：本试剂盒用于测定小鼠血清、血浆及相关液体样本中胰岛素(Insulin)含量。
实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠胰岛素(Insulin)水平。
用纯化的小鼠胰岛素(Insulin)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入胰岛素(Insulin)，再与HRP标记的胰岛素(Insulin)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的胰岛素(Insulin)呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中小鼠胰岛素(Insulin)浓度。
试剂盒组成标本要求1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。
在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。
加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7.温育：操作同3。
8.洗涤：操作同5。
9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
小鼠胰岛素样生长因子2-mRNA结合蛋白3(IGF2BP3)ELISA
本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断。
小鼠胰岛素样生长因子2-mRNA结合蛋白3(IGF2BP3)ELISA检测试剂盒使用说明书【小鼠胰岛素样生长因子2-mRNA结合蛋白3(IGF2BP3)ELISA检测试剂盒试剂盒名称】小鼠胰岛素样生长因子2-mRNA结合蛋白3(IGF2BP3)ELISA检测试剂盒【小鼠胰岛素样生长因子2-mRNA结合蛋白3(IGF2BP3)ELISA检测试剂盒试剂盒用途】定量小鼠血清、血浆及相关液体样本中胰岛素样生长因子2-mRNA结合蛋白3(IGF2BP3)的含量【小鼠胰岛素样生长因子2-mRNA结合蛋白3(IGF2BP3)ELISA检测试剂盒检测原理】本试剂盒采用双抗体两步夹心酶联免疫吸附法（ELISA）。
将标准品、待测样本加入到预先包被胰岛素样生长因子2-mRNA结合蛋白3(IGF2BP3)透明酶标包被板中，温育足够时间后，洗涤除去未结合的成分，再加入酶标工作液，温育足够时间后，洗涤除去未结合的成分。
依次加入底物A、B，底物（TMB）在辣根过氧化物酶（HRP）催化下转化为蓝色产物，在酸的作用下变成黄色，颜色的深浅与样品中胰岛素样生长因子2-mRNA结合蛋白3(IGF2BP3)浓度呈正相关，450nm波长下测定OD值，根据标准品和样品的OD值，计算样本中胰岛素样生长因子2-mRNA结合蛋白3(IGF2BP3)含量。
【小鼠胰岛素样生长因子2-mRNA结合蛋白3(IGF2BP3)ELISA检测试剂盒试剂盒组成】1酶标包被板12孔×8条7底物夜A6mL 2标准品：0.6mL8底物夜B6mL200ng/ml20mL9终止液6mL 320倍浓缩洗涤液4标准品稀释液6mL10说明书1份5样本稀释液6mL11封板膜1张6酶标试剂6mL12密封袋1个备注：标准品用标准品稀释液依次稀释为：200、100、50、25、12.5、6.25ng/ml 【小鼠胰岛素样生长因子2-mRNA结合蛋白3(IGF2BP3)ELISA检测试剂盒需要而未提供的试剂和器材】1、37℃恒温箱2、标准规格酶标仪3、精密移液器及一次性吸头4、蒸馏水5、一次性试管6、吸水纸【小鼠胰岛素样生长因子2-mRNA结合蛋白3(IGF2BP3)ELISA检测试剂盒操作步骤】1、准备：从冰箱取出试剂盒，室温复温平衡30分钟。
雷生物小鼠胰岛素ELISA试剂盒使用手册说明书
RayBio® Mouse Insulin ELISA KitCatalog #: ELM-InsulinUser ManualLast revised June 14, 2021Caution:Extraordinarily useful information enclosedISO 13485 Certified3607 Parkway Lane, Suite 100Norcross, GA 30092 Tel: 1-888-494-8555 (Toll Free) or 770-729-2992, Fax:770-206-2393Web: , Email: *******************RayBiotech, Inc.________________________________________RayBio® Mouse Insulin ELISA Kit ProtocolTable of ContentsSection Page # I.Introduction3II.Storage4III.Reagents4IV.Additional Materials Required4V.Reagent Preparation5VI.Assay Procedure6VII.Assay Procedure Summary7VIII.Calculation of ResultsA. Typical DataB. SensitivityC. Spiking & RecoveryD. LinearityE. Reproducibility 8 8 8 9 9 10IX.Specificity10X.Troubleshooting Guide11Please read the entire manual carefully before starting your experimentI. INTRODUCTIONThe RayBio® Mouse Insulin ELISA kit is an in vitro enzyme-linked immunosorbent assay for the quantitative measurement of Mouse Insulin in serum, plasma (Collect plasma using EDTA and Citrate as an anticoagulant. Heparin is not recommended as anticoagulants for use in this assay) and cell culture supernatants. This assay employs an antibody specific for Insulin coated on a 96-well plate. Standards and samples are pipetted into the wells and Insulin present in a sample is bound to the wells by the immobilized antibody. The wells are washed and biotinylated anti-Mouse Insulin antibody is added. After washing away unbound biotinylated antibody, HRP-conjugated streptavidin is pipetted to the wells. The wells are again washed, a TMB substrate solution is added to the wells and color develops in proportion to the amount of Insulin bound. The Stop Solution changes the color from blue to yellow, and the intensity of the color is measured at 450 nm.Need your results faster? Try RayBiotech's SpeedE LISA platform for quantitative detection in just three hours.https:///speedelisa-kits/Short on sample, or need higher sensitivity? Check out the IQELISA™ Immuno-PCR platform. https:///immuno-pcr/II. STORAGEThe entire kit may be stored at -20°C for up to 1 year from the date of shipment. Avoid repeated freeze-thaw cycles. The kit may be stored at 4°C for up to 6 months. For extended storage, it is recommended to store at -80°C. For prepared reagent storage, see table below. III. REAGENTSIV. ADDITIONAL MATERIALS REQUIRED1.Microplate reader capable of measuring absorbance at 450 nm.2.Precision pipettes to deliver 2 µl to 1 ml volumes.3.Adjustable 1-25 ml pipettes for reagent preparation.4.100 ml and 1 liter graduated cylinders.5.Absorbent paper.6.Distilled or deionized water.7.Log-log graph paper or computer and software for ELISA data analysis.8.Tubes to prepare standard or sample dilutions.V. REAGENT PREPARATION1.Bring all reagents and samples to room temperature (18 - 25ºC) before use.2.Assay Diluent B (Item E) should be diluted 5-fold with deionized or distilled water before use.3.Sample dilution: Assay Diluent C (Item L) should be used for dilution of serum, plasma, and cell culture supernatant samples. The suggested dilution for normal serum/plasma is 2 fold. Collect plasma using EDTA and/or Citrate as anticoagulants. Heparin is not recommended as an anticoagulant for use in this assay. Note: Levels of Insulin may vary between different samples. Optimal dilution factors for each sample must be determined by the investigator.4.Preparation of standard: Briefly spin a vial of Item C. Add 400 µl Assay Diluent C (Item L) into Item C vial to prepare a 1,400 µIU/ml standard solution. Dissolve the powder thoroughly by a gentle mix. Add 180 µl Insulin standard (1,400 µIU/ml) from the vial of Item C, into a tube with 450 µl Assay Diluent C to prepare a 400 µIU/ml standard solution. Pipette 250µl Assay Diluent C into each tube. Use the 400 µIU/ml standard solution to produce a dilution series (shown below). Mix each tube thoroughly before the next transfer. Assay Diluent C serves as the zero standard (0 µIU/ml).180 µl250 µl 250 µl 250 µl 250 µl 250 µl250 µlStd1Std2Std3Std4Std5Std6Std7Zero Standard Diluent volume Item C + 400 µl450 µl250 µl250 µl250 µl250 µl250 µl250 µl250 µlConc.1,400 µIU/ml 400 µIU/ml 200 µIU/ml 100 µIU/ml 50 µIU/ml 25 µIU/ml 12.5 µIU/ml 6.25 µIU/ml0 µIU/ml5.If the Wash Concentrate (20X) (Item B) contains visible crystals, warm to roomtemperature and mix gently until dissolved. Dilute 20 ml of Wash Buffer Concentrate into deionized or distilled water to yield 400 ml of 1X Wash Buffer.6.Briefly spin the Detection Antibody vial (Item F) before use. Add 100 µl of 1X AssayDiluent B (Item E) into the vial to prepare a detection antibody concentrate. Pipette up and down to mix gently (the concentrate can be stored at 4ºC for 5 days). The detection antibody concentrate should be diluted 80-fold with 1X Assay Diluent B (Item E) andused in step 5 of Part VI Assay Procedure.7.Briefly spin the HRP-Streptavidin concentrate vial (Item G) and pipette up and down tomix gently before use, as precipitates may form during storage. HRP-Streptavidinconcentrate should be diluted 400-fold with 1X Assay Diluent B (Item E).For example: Briefly spin the vial (Item G) and pipette up and down to mix gently. Add30 µl of HRP-Streptavidin concentrate into a tube with 12 ml 1X Assay Diluent B toprepare a 400-fold diluted HRP-Streptavidin solution (don't store the diluted solution for next day use). Mix well.VI. ASSAY PROCEDURE1.Bring all reagents and samples to room temperature (18 - 25ºC) before use. It isrecommended that all standards and samples be run at least in duplicate.bel removable 8-well strips as appropriate for your experiment.3.Add 100 µl of each standard (see Reagent Preparation step 3) and sample intoappropriate wells. Cover wells and incubate for 2.5 hours at room temperature withgentle shaking.4.Discard the solution and wash 4 times with 1X Wash Solution. Wash by filling each wellwith Wash Buffer (300 µl) using a multi-channel Pipette or autowasher. Completeremoval of liquid at each step is essential to good performance. After the last wash,remove any remaining Wash Buffer by aspirating or decanting. Invert the plate and blot it against clean paper towels.5.Add 100 µl of 1X prepared biotinylated antibody (Reagent Preparation step 6) to eachwell. Incubate for 1 hour at room temperature with gentle shaking.6.Discard the solution. Repeat the wash as in step 4.7.Add 100 µl of prepared Streptavidin solution (see Reagent Preparation step 7) to eachwell. Incubate for 45 minutes at room temperature with gentle shaking.8.Discard the solution. Repeat the wash as in step 4.9.Add 100 µl of TMB One-Step Substrate Reagent (Item H) to each well. Incubate for 30minutes at room temperature in the dark with gentle shaking.10.Add 50 µl of Stop Solution (Item I) to each well. Read at 450 nm immediately.VII. ASSAY PROCEDURE SUMMARY1.Prepare all reagents, samples and standards as instructed.2.Add 100 µl standard or sample to each well. Incubate 2.5 hours at room temperature.3.Add 100 µl prepared biotin antibody to each well. Incubate 1 hour at room temperature.4.Add 100 µl prepared Streptavidin solution. Incubate 45 minutes at room temperature.5.Add 100 µl TMB One-Step Substrate Reagent to each well. Incubate 30 minutes atroom temperature.6.Add 50 µl Stop Solution to each well. Read at 450 nm immediately.VIII. CALCULATION OF RESULTSCalculate the mean absorbance for each set of duplicate standards, controls and samples, and subtract the average zero standard optical density. Plot the standard curve on log-log graph paper or using Sigma plot software, with standard concentration on the x-axis and absorbance on the y-axis. Draw the best-fit straight line through the standard points.A. TYPICAL DATAThese standard curves are for demonstration only. A standard curve must be run with each assay.B. SENSITIVITYThe minimum detectable dose of Mouse Insulin was determined to be 5 µIU/ml.Minimum detectable dose is defined as the analyte concentration resulting in an absorbance that is 2 standard deviations higher than that of the blank (diluent buffer).C. SPIKING & RECOVERYRecovery was determined by spiking various levels of Mouse Insulin into the sample types listed below. Mean recoveries are as follows:D. LINEARITYE. REPRODUCIBILITYIntra-Assay CV%: <10%Inter-Assay CV%: <12%IX. SPECIFICITYThis ELISA antibody pair detects mouse, human, rat, porcine and bovine Insulin.X. TROUBLESHOOTING GUIDEProblem Cause SolutionPoor standard curve Inaccurate pipettingImproper standarddilutionCheck pipettesBriefly centrifuge Item C and dissolvethe powder thoroughly by gently mixingLow signal Improper preparation ofstandard and/orbiotinylated antibodyToo brief incubationtimesInadequate reagentvolumes or improperdilutionBriefly spin down vials before opening.Dissolve the powder thoroughly.Ensure sufficient incubation time. Assayprocedure step 3 may be doneovernight at 4°C with gentle shaking(note: may increase overall signalsincluding background).Check pipettes and ensure correctpreparationLarge CV Inaccurate pipettingAir bubbles in wellsCheck pipettesRemove bubbles in wellsHigh background Plate is insufficientlywashedContaminated washbufferReview the manual for proper wash. Ifusing a plate washer, ensure that allports are unobstructed.Make fresh wash bufferLow sensitivity Improper storage of theELISA kitStop solutionStore your standard at <-70ºC afterreconstitution, others at 4ºC. Keepsubstrate solution protected from light.Add stop solution to each well beforereading plateRayBio® ELISA KitsOver 4,000 ELISA kits available, visit /ELISA-Kits for details.This product is for research use only.©2020 RayBiotech, Inc。
胰岛素耐量实验
Supplies
1ml注射器、剪刀、酒精棉球、计时器、
Preparations
1.配制0.9%NaCl
2.配制0.1 U/mL胰岛素
Procedures
(步骤)
1.按性别、年龄将小鼠分笼，每笼不超过5只小鼠；
2.禁食小鼠4h，无食物和粪便，自由进水；
3.在上午8点和9点之间开始实验；
7.准备注射器，装入所需体积的胰岛素溶液；准备针头、血糖仪、试纸；
8.测量空腹血糖浓度（t=0）:用酒精棉球擦拭鼠尾尖部，用剪刀剪下1-2mm组织，让血液流入插入血糖仪的试纸上，记下此时的读数，为避免失血过多，每次测量后对切口施加压力；
9.腹腔注射0.1 U/mL胰岛素：用酒精棉球擦拭腹腔，注射胰岛素，并按下计时器；
10.注射15min后，重复测量血糖水平，记下读数（t=15）;
11.依次测量注射30min、60min、120min后的血糖水平。
Results
Discussion
Raw Data
4.准备实验记录表，注明体重（BW），待注射葡萄糖溶液体积和不同时间点的葡糖糖水平；
mouse
BW(g)
注射胰岛素体积（ul）
葡萄糖水平（mg/dl）
0min
15min
30min
60min
120min
1
2
3
4
5.称体重并记录；
6.计算每只小鼠腹腔注射0.1 U/mL胰岛素的体积，按0.5U胰岛素/kg体重计算：胰岛素的体积（ul）=体重(g)X5
实验名称
胰岛素耐量实验
实验日期
实验记录人
JYH
Objective
1.检测小鼠体内注射胰岛素后，随着时间延长血糖水平的变化。
老鼠胰岛素惊厥实验
老鼠胰岛素惊厥实验（1）原理：胰岛素是调节机体血糖水平的激素之一。
给动物注射大量胰岛素后，引起血糖降低，动物出现惊阙现象。
（2）准备小白鼠、注射器、胰岛素溶液、50%葡萄糖、酸性生理盐水、0.01%肾上腺素、20%葡萄糖。
（3）操作步骤1．取4只体重相近的小鼠，分为实验组与对照组，每组二只。
2．给实验组小鼠腹腔注射（左手提起并固定小鼠，使鼠腹部朝上，鼠头略低于尾部，右手持注射器将针头在下腹部靠近腹白线的两侧进行穿刺，针头刺入皮肤后进针3mm左右，接着使注射针头与皮肤呈45°角刺入腹肌，穿过腹肌进入腹膜腔，当针尖穿过腹肌进入腹膜腔后抵抗感消失。
固定针头，保持针尖不动，回抽针栓，如无回血、肠液和尿液后即可注射药液。
注射量为0.1-0.2ml/10g体重。
）胰岛素溶液（0.1毫克/10克体重），胰岛素溶液浓度为2 国际单位/毫升。
3．给对照组小鼠腹腔注射等量生理盐水。
4．将两组动物做好标记后，放在室温下观察，比较两组动物的神态、姿势及活动情况。
5．当小老鼠出现抽搐、翻滚等惊阙反应时，记录时间，并将其中一只立即皮下注射（常选项背或大腿内侧的皮肤。
操作时，常规消毒注射部位皮肤，然后将皮肤提起，注射针头取一钝角角度刺入皮下，把针头轻轻向左右摆动，易摆动则表示已刺入皮下，再轻轻抽吸，如无回血，可缓慢地将药物注入皮下。
拔针时左手拇、食指捏住进针部位片刻，以防止药物外漏。
注射量约为0.1-0.3ml/10g体重。
）50%葡萄糖（0.1毫升/10克体重）。
6．比较对照组动物、注射葡萄糖的动物、以及出现惊阙而未经注射葡萄糖的动1．动物在实验前必须饥饿18-24小时。
2．用pH2.5-3.5的酸性生理盐水配制胰岛素。
酸性生理盐水配制：将10毫升0.1N HCl 加入300毫升生理盐水中，调pH值为2.5-3.5。
3．若实验在冬天进行，注射胰岛素后，最好将动物放在30-37℃环境下保温，以加快反应的出现。
小鼠胰岛素INS酶联免疫分析ELISA
小鼠胰岛素(INS)酶联免疫分析（ELISA）试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测小鼠血清，血浆及相关液体样本中胰岛素(INS)的含量。
实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠胰岛素(INS)水平。
用纯化的小鼠胰岛素(INS)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入胰岛素(INS)，再与HRP标记的胰岛素(INS)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的胰岛素(INS)呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中小鼠胰岛素(INS)浓度。
试剂盒组成：1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。
一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4．请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。
如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。
5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物请避光保存。
7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9．本试剂不同批号组分不得混用。
10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。
操作步骤1.标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在第一、第二孔中分别加标准品100μl，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从第一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。
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小鼠胰岛素定量分析酶联免疫检测试剂盒本试剂盒仅供科研使用。
用于体外定量检测小鼠血清、血浆或细胞培养上清液中的胰岛素浓度。
使用前请仔细阅读说明书并检查试剂组分是否完整, 如有疑问请与上海巧伊生物科技有限公司联系，我们将提供力所能及的帮助。
如您有其它需求，请登录上海巧伊生物科技有限公司网站或致电本公司。
胰岛素简介：胰岛素是糖代谢中最主要的激素之一。
胰腺的ß细胞岛细胞产生胰岛素前体蛋白，前体蛋白被加工成C肽和胰岛素。
它们以等摩尔浓度进入血循环中。
成熟的胰岛素由A、B两条链组成。
这两条链是通过两个二硫键桥接形成有功能的胰岛素分子。
血浆葡萄糖浓度的变化是胰岛素产生并分泌的最主要刺激因素，产生的胰岛素具有一些代谢调节作用。
其最主要的作用是，将外周血中糖转运到肝脏中贮存起来。
一些诸如肝糖生成障碍或在促进血糖升高的激素诸如胰高血糖素、肾上腺素、生长激素和皮质醇等作用下促进肝糖分解都可拮抗胰岛素的作用。
检测原理:本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法检测样本中胰岛素的浓度。
胰岛素捕获抗体已预包被于酶标板上，当加入标本或参考品时，其中的胰岛素会与捕获抗体结合，其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。
当加入与HRP耦连的抗胰岛素抗体后，抗小鼠胰岛素抗体与胰岛素接合，形成夹心的免疫复合物，其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。
最后加入显色剂，若样本中存在胰岛素将会形成免疫复合物，辣根过氧化物酶会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质，在加入终止液后呈黄色。
通过酶标仪检测，读其450nm处的OD值，胰岛素浓度与OD450值之间呈正比，通过参考品绘制标准曲线，对照未知样本中OD值，即可算出标本中胰岛素浓度。
小鼠胰岛素定量分析酶联免疫检测试剂盒组成:组分 规格（96T/48T）小鼠胰岛素预包被板 12条/6条标准品稀释液 10ml/5ml小鼠胰岛素标准品 2支/1支(冻干)小鼠胰岛素抗体HRP结合物 10ml/5ml浓缩洗涤液 20× 30ml/15mlTMB底物 10ml/5ml终止液 5ml/3ml封板胶纸 3/2张说明书 1份标本收集:1.标本的收集请按下列流程进行操作；A.细胞上清标本离心去除悬浮物后即可；B.血清标本应是自然凝固后，取上清，避免在冰箱中凝固血液；C.血浆标本，推荐用EDTA的方法收集若待测样本不能及时检测，D.标本收集后请分装，冻存于－20℃，避免反复冻融。
2.血清标本不应添加任何防腐剂或抗凝剂；3.标本应清澈透明，检测前样本中如有悬浮物应通过离心去除。
4.请勿使用溶血，高血脂或污染的标本检测，否则结果将不准确。
注意事项:1.试剂盒请保存在2～8℃。
2.浓缩洗涤液因在低温下可能有结晶，请水浴加热使结晶完全溶解后再配制工作液。
3.标准品复溶加样后，剩余部分请丢弃。
4.底物请勿接触氧化剂和金属。
5.加样时，请及时更换枪头，避免交叉污染。
6.严禁混用不同批号的试剂盒组份。
7.充分混匀对保证反应结果的准性很重要，在加液后请轻轻叩击边缘以保证混匀。
8.室温反应，请严格控制在25～28℃。
9.洗涤过程是至关重要的，洗涤不充分会使精确度下降并导致结果误差较大。
10.试验中标准品和样本检测时建议作双复孔。
11.加样过程中避免气泡的产生。
12.血清和血浆标本的检测时，检测抗体的孵育时间应适当延长。
检测前准备工作:1.试剂盒自冰箱中取出后应置室温（25～28℃）平衡20分钟；每次检测后剩余试剂请及时于2～8℃保存。
2.将浓缩洗涤液用双蒸水或去离子水稀释(1份加19份水)。
3.标准品:加入标准品稀释液1.25ml至冻干标准品瓶中使胰岛素终浓度达到5.5ng/ml，室温反应，请严格控制在25～28℃，静置10~15分钟后轻轻混悬（建议抽吸几次）待彻底溶解，用标准品稀释液倍比梯度稀释后依次加入检测孔中。
（标准曲线取七个点，最高浓度为5.5ng/ml,标准品稀释液直接加入作为0浓度.）洗涤方法:自动洗板机或人工洗板：每孔洗涤液为300ul，注入与吸出间隔15-30秒。
洗板5次。
最后一次洗板完成后将板倒扣着在厚吸水纸上用力拍干。
实验过程需自备的材料：1.不同规格的加样枪及相应的枪头；2.酶标仪；3.自动洗板机；4.去离子水或双蒸水；操作步骤:1.通过计算并确定一次性实验所需的板条数，取出所需板条放置在框架内，暂时用不到板条请放回铝箔袋密封，保存于4℃。
2.建议设置本底较正孔，即空白孔,设置方法为该孔只加TMB显色液和中止液。
每次实验均需做标准品对照并画出标准曲线。
3.分别将标本或不同浓度标准品(10ul/孔)加入相应孔中，快速加入小鼠胰岛素抗体HRP结合物(100ul/孔)。
用封板胶纸封住反应孔，室温（25～28℃）孵育120分钟。
4.洗板5次，且最后一次置厚吸水纸上拍干。
5.加入显色剂TMB100ul/孔，避光室温（25～28℃）孵育10分钟。
6.加入终止液50ul/孔,混匀后即刻测量OD450值。
结果判断:1.复孔的值在20%的差异范围内结果才有效，复孔的值平均后可作为测量值。
2.每个标准品或标本的OD值应减去本底校正孔的OD值。
3.手工绘制标准曲线。
以标准品浓度作横坐标，OD值作纵坐标，以平滑线连接各标准品的坐标点。
通过标本的OD值可在标准曲线上查出其浓度。
4.若标本OD值高于标准曲线上限，应适当稀释后重测，计算浓度时应乘以稀释倍数。
典型数值和参考曲线浓度ng/ml 典型OD值1 典型OD值2 OD平均值00.09850.08450.09150.1718750.27730.16950.22340.343750.4010.24820.32460.68750.53480.41460.47471.3750.790.68940.73972.75 1.4492 1.2896 1.36945.5 2.3381 2.1695 2.2538小鼠胰岛素参考标准曲线注意：本图仅供参考，应以同次试验标准品所绘标准曲线计算标本含量。
灵敏度，特异性和重复性:1.灵敏度：多次重复结果表明，最小检出量为0.1ng/ml。
2.特异性：不与IGF-I、IGF-II、 小鼠 C肽、大鼠 C肽反应，与猪胰岛素、绵羊胰岛素、大鼠胰岛素、牛胰岛素及人胰岛素分别有628%，256%，146%，110%和195%交叉反应。
3.重复性：板内，板间变异系数均<10%.参考文献:Korner J, Savontaus E, Chua SC, Jr., Leibel RL, Wardlaw SL (2001) Leptin regulation of Agrp and Npy mRNA in the mousehypothalamus. J Neuroendocrinol 13:959-966Olsson R and Carlsson PO (2005) Better vascular engraftment and function in pancreatic islets transplanted without prior culture. Diabetologia 48:469-476Rydtren T and Sandler S (2002) Efficacy of 1400 W, a novel inhibitor of inducible nitric oxide synthase, in preventing interleukin-1beta-induced suppression of pancreatic islet function in vitro and multiple low-dosestreptozotocin-induced diabetes in vivo. Eur J Endocrinol 147:543- 551 10ELISA Kit for the Quantitative Analysis of Mouse Insulin The mouse Insulin ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay) kit is used for detection of mouse Insulin in cell culture supernatants,mouse serum and plasma.THE ELISA KIT IS FOR RESEARCH USE ONLY. Please read this instruction manual carefully and check out the material provided before use, and you can contact with our company if any questions. You can enter our website or call us for other aim.IntroductionInsulin is the principal hormone responsible for the control of glucose metabolism. It is synthesized in the ß-cells of the islets of Langerhans as the precursor, proinsulin, which is processed to form C-peptide and insulin. Both are secreted in equimolar amounts into the portal circulation. The mature insulin molecule comprises two polypeptide chains, the A chain and B chain (21 and 30 amino acids respectively). The two chains are linked together by two inter-chain disulphide bridges.Secretion of insulin is mainly controlled by plasma glucose concentration, and the hormone has a number of important metabolic actions.Its principal function is to control the uptake and utilisation of glucose in peripheral tissues via the glucose transporter. This and other hypoglycaemic activities, such as the inhibition of hepatic gluconeogenesis and glycogenolysis are counteracted by the hyperglycaemic hormones including glucagon, epinephrine (adrenaline), growth hormone and cortisol.Principles of the TestThe kits is a solid sandwich enzyme-linked immunosorbent assay for detection of mouse Insulin. An anti- mouseInsulin monoclonal antibody has been absorbed onto the wells of the microtiter strips provided. Samples including specimens or standards were pipetted into wells. The mouseInsulin in specimens or standards would be captured by the coated antibody and the free others were removed by washing. The mouse Insulin HRP-conjugated antibody were added and binds to mouse Insulin captured by the first antibody, which formed a sandwich. After this, subtrate solution would be added and catalyzed by the HRP, and a coloured product is formed. The intensity of the colored product is used to calculate in proportion to the amount of mouse Insulin in the original specimen. Materials provided with the kits:reagent 96/48Test KitMouse Insulin Antibody-Coated Wells 12strips/6stripsStandard Diluent 10ml/5mlMouse Insulin Standard 2/1vial(s)HRP coupled Antibody 10ml/5mlWash Buffer Concentrate 20× 30ml/15mlTMB 10ml/5mlStop Solution 5ml/3mlPlate Covers 3/2Complete Instruction Manual 1Specimen Collection1.Collecting specimen as following:A.The particulate of the cell culture supernatants should be removed before use.B.Serum was obtained from clot at room temperature.C.Please collect plasma with EDTA.D.Assay immediately or store samples at-20℃. Avoid free-thaw cycles.2.Antiseptic and anticoagulant should not appear in Serum samples.3.Any particulate should be removed from samples before use.4. Do not use grossly hemolyzed or lipemic samples.Note: Strongly recommend that the serum and plasma samples should be diluent as doubling dilution before use. Precautions for use:1.Please storage the Kit at 2～8℃。