小鼠胰岛素(Insulin) Elisa试剂盒使用说明
胰岛素抗体(INS抗体)检测试剂盒(化学发光免疫分析法)产品技术要求泰格
胰岛素抗体（INS抗体）检测试剂盒（化学发光免疫分析法）
适用范围：本试剂盒主要用于体外定性检测人血清中的胰岛素抗体（INS抗体）。
1.1 规格
48人份/盒，96人份/盒。
1.2 主要组成成分
2.1外观
液体组分澄清，无沉淀或絮状物；其它组分无包装破损，标签外观完整、无脱落、标签标识清晰。
2.2 装量
装量不少于标示值。
2.3 实验有效性
测定的阳性对照与阴性对照相对发光值（RLU值）均值之比大于3.5时，实验结果成立。
2.4 阴性参考品符合率
10份胰岛素抗体阴性参考品检测结果不得出现假阳性。
2.5 阳性参考品符合率
5份胰岛素抗体阳性参考品检测结果不得出现假阴性。
2.6 重复性
同一份精密性参考品加样10孔，平行测试的相对RLU值强度分析精密度（C.V％）应不高于15.0％。
2.7 批间差
三批不同批次试剂盒，每批精密性参考品加样10孔，平行测试的相对RLU值强度分析精密度（C.V％）应不高于20.0％。
2.8 临界值
2.8.1 阳性率应≥95％；
2.8.2 阴性率应≥95％。
2.9 稳定性
2.9.1试剂盒在37℃放置7天，检测结果应符合2.1～2.6的要求。
2.9.2试剂盒在2℃～8℃放置12个月，检测结果应符合2.1～2.6的要求。
小鼠胰高血糖素样肽1GLP-1酶联免疫分析ELISA
小鼠胰高血糖素样肽1(GLP-1)酶联免疫分析(ELISA)试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用小鼠血清，血浆及相关液体样本中胰高血糖素样肽1(GLP-1)的含量。
试剂盒性能：1.样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.95以上。
2.批内与批见应分别小于9%和11%检测范围：请来电咨询保存条件及有效期：1.试剂盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6个月注意事项：1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。
一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4．请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。
如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值)，请先用样品稀释液稀释一定倍数(n 倍)后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数(×n×5)。
5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物请避光保存。
7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9．本试剂不同批号组分不得混用。
10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。
实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠胰高血糖素样肽1(GLP-1)水平。
用纯化的小鼠胰高血糖素样肽1(GLP-1)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入胰高血糖素样肽1(GLP-1)，再与HRP标记的胰高血糖素样肽1(GLP-1)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的胰高血糖素样肽1(GLP-1)呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值)，通过标准曲线计算样品中小鼠胰高血糖素样肽1(GLP-1)浓度。
小鼠胰岛素(Insulin)说明书
小鼠胰岛素(Insulin)酶联免疫分析（ELISA）试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定小鼠血清,血浆及相关液体样本中胰岛素(Insulin)含量。
实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠胰岛素(Insulin)水平。
用纯化的小鼠胰岛素(Insulin)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入胰岛素(Insulin)，再与HRP标记的胰岛素(Insulin)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的胰岛素(Insulin)呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中小鼠胰岛素(Insulin)含量。
试剂盒组成：样本处理及要求：1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。
3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。
通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
5. 组织标本：切割标本后，称取重量。
加入一定量的PBS，PH7.4。
小鼠胰岛素Insulin酶联免疫分析
小鼠胰岛素(Insulin)酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。
检测范围：96T30pg/ml-800pg/ml使用目的：本试剂盒用于测定小鼠血清、血浆及相关液体样本中胰岛素(Insulin)含量。
实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠胰岛素(Insulin)水平。
用纯化的小鼠胰岛素(Insulin)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入胰岛素(Insulin)，再与HRP标记的胰岛素(Insulin)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的胰岛素(Insulin)呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中小鼠胰岛素(Insulin)浓度。
试剂盒组成标本要求1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。
在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。
加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7.温育：操作同3。
8.洗涤：操作同5。
9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
小鼠胰岛素自身抗体(IAA)(PCT)ELISA试剂盒产品简介
小鼠胰岛素自身抗体(IAA）(PCT）ELISA试剂盒产品简介小鼠胰岛素自身抗体(IAA）(PCT）ELISA试剂盒产品简介小鼠胰岛素自身抗体(IAA）(PCT）ELISA试剂盒实验原理小鼠胰岛素自身抗体(IAA）(PCT）ELISA试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。
往预先包被小鼠胰岛素自身抗体(IAA）(PCT）捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻di洗涤。
用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的小鼠胰岛素自身抗体(IAA）(PCT）呈正相关。
用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。
样本处理及要求1. 血清：将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过夜，然后1000×g离心20 分钟，取上清即可，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
2. 血浆：用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本，并将标本在采集后的30分钟内于2-8℃1000×g离心15分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
3. 组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。
将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。
推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。
为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。
最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。
4. 细胞培养物上清或其它生物标本：请1000×g离心20分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
雷生物小鼠胰岛素ELISA试剂盒使用手册说明书
RayBio® Mouse Insulin ELISA KitCatalog #: ELM-InsulinUser ManualLast revised June 14, 2021Caution:Extraordinarily useful information enclosedISO 13485 Certified3607 Parkway Lane, Suite 100Norcross, GA 30092 Tel: 1-888-494-8555 (Toll Free) or 770-729-2992, Fax:770-206-2393Web: , Email: *******************RayBiotech, Inc.________________________________________RayBio® Mouse Insulin ELISA Kit ProtocolTable of ContentsSection Page # I.Introduction3II.Storage4III.Reagents4IV.Additional Materials Required4V.Reagent Preparation5VI.Assay Procedure6VII.Assay Procedure Summary7VIII.Calculation of ResultsA. Typical DataB. SensitivityC. Spiking & RecoveryD. LinearityE. Reproducibility 8 8 8 9 9 10IX.Specificity10X.Troubleshooting Guide11Please read the entire manual carefully before starting your experimentI. INTRODUCTIONThe RayBio® Mouse Insulin ELISA kit is an in vitro enzyme-linked immunosorbent assay for the quantitative measurement of Mouse Insulin in serum, plasma (Collect plasma using EDTA and Citrate as an anticoagulant. Heparin is not recommended as anticoagulants for use in this assay) and cell culture supernatants. This assay employs an antibody specific for Insulin coated on a 96-well plate. Standards and samples are pipetted into the wells and Insulin present in a sample is bound to the wells by the immobilized antibody. The wells are washed and biotinylated anti-Mouse Insulin antibody is added. After washing away unbound biotinylated antibody, HRP-conjugated streptavidin is pipetted to the wells. The wells are again washed, a TMB substrate solution is added to the wells and color develops in proportion to the amount of Insulin bound. The Stop Solution changes the color from blue to yellow, and the intensity of the color is measured at 450 nm.Need your results faster? Try RayBiotech's SpeedE LISA platform for quantitative detection in just three hours.https:///speedelisa-kits/Short on sample, or need higher sensitivity? Check out the IQELISA™ Immuno-PCR platform. https:///immuno-pcr/II. STORAGEThe entire kit may be stored at -20°C for up to 1 year from the date of shipment. Avoid repeated freeze-thaw cycles. The kit may be stored at 4°C for up to 6 months. For extended storage, it is recommended to store at -80°C. For prepared reagent storage, see table below. III. REAGENTSIV. ADDITIONAL MATERIALS REQUIRED1.Microplate reader capable of measuring absorbance at 450 nm.2.Precision pipettes to deliver 2 µl to 1 ml volumes.3.Adjustable 1-25 ml pipettes for reagent preparation.4.100 ml and 1 liter graduated cylinders.5.Absorbent paper.6.Distilled or deionized water.7.Log-log graph paper or computer and software for ELISA data analysis.8.Tubes to prepare standard or sample dilutions.V. REAGENT PREPARATION1.Bring all reagents and samples to room temperature (18 - 25ºC) before use.2.Assay Diluent B (Item E) should be diluted 5-fold with deionized or distilled water before use.3.Sample dilution: Assay Diluent C (Item L) should be used for dilution of serum, plasma, and cell culture supernatant samples. The suggested dilution for normal serum/plasma is 2 fold. Collect plasma using EDTA and/or Citrate as anticoagulants. Heparin is not recommended as an anticoagulant for use in this assay. Note: Levels of Insulin may vary between different samples. Optimal dilution factors for each sample must be determined by the investigator.4.Preparation of standard: Briefly spin a vial of Item C. Add 400 µl Assay Diluent C (Item L) into Item C vial to prepare a 1,400 µIU/ml standard solution. Dissolve the powder thoroughly by a gentle mix. Add 180 µl Insulin standard (1,400 µIU/ml) from the vial of Item C, into a tube with 450 µl Assay Diluent C to prepare a 400 µIU/ml standard solution. Pipette 250µl Assay Diluent C into each tube. Use the 400 µIU/ml standard solution to produce a dilution series (shown below). Mix each tube thoroughly before the next transfer. Assay Diluent C serves as the zero standard (0 µIU/ml).180 µl250 µl 250 µl 250 µl 250 µl 250 µl250 µlStd1Std2Std3Std4Std5Std6Std7Zero Standard Diluent volume Item C + 400 µl450 µl250 µl250 µl250 µl250 µl250 µl250 µl250 µlConc.1,400 µIU/ml 400 µIU/ml 200 µIU/ml 100 µIU/ml 50 µIU/ml 25 µIU/ml 12.5 µIU/ml 6.25 µIU/ml0 µIU/ml5.If the Wash Concentrate (20X) (Item B) contains visible crystals, warm to roomtemperature and mix gently until dissolved. Dilute 20 ml of Wash Buffer Concentrate into deionized or distilled water to yield 400 ml of 1X Wash Buffer.6.Briefly spin the Detection Antibody vial (Item F) before use. Add 100 µl of 1X AssayDiluent B (Item E) into the vial to prepare a detection antibody concentrate. Pipette up and down to mix gently (the concentrate can be stored at 4ºC for 5 days). The detection antibody concentrate should be diluted 80-fold with 1X Assay Diluent B (Item E) andused in step 5 of Part VI Assay Procedure.7.Briefly spin the HRP-Streptavidin concentrate vial (Item G) and pipette up and down tomix gently before use, as precipitates may form during storage. HRP-Streptavidinconcentrate should be diluted 400-fold with 1X Assay Diluent B (Item E).For example: Briefly spin the vial (Item G) and pipette up and down to mix gently. Add30 µl of HRP-Streptavidin concentrate into a tube with 12 ml 1X Assay Diluent B toprepare a 400-fold diluted HRP-Streptavidin solution (don't store the diluted solution for next day use). Mix well.VI. ASSAY PROCEDURE1.Bring all reagents and samples to room temperature (18 - 25ºC) before use. It isrecommended that all standards and samples be run at least in duplicate.bel removable 8-well strips as appropriate for your experiment.3.Add 100 µl of each standard (see Reagent Preparation step 3) and sample intoappropriate wells. Cover wells and incubate for 2.5 hours at room temperature withgentle shaking.4.Discard the solution and wash 4 times with 1X Wash Solution. Wash by filling each wellwith Wash Buffer (300 µl) using a multi-channel Pipette or autowasher. Completeremoval of liquid at each step is essential to good performance. After the last wash,remove any remaining Wash Buffer by aspirating or decanting. Invert the plate and blot it against clean paper towels.5.Add 100 µl of 1X prepared biotinylated antibody (Reagent Preparation step 6) to eachwell. Incubate for 1 hour at room temperature with gentle shaking.6.Discard the solution. Repeat the wash as in step 4.7.Add 100 µl of prepared Streptavidin solution (see Reagent Preparation step 7) to eachwell. Incubate for 45 minutes at room temperature with gentle shaking.8.Discard the solution. Repeat the wash as in step 4.9.Add 100 µl of TMB One-Step Substrate Reagent (Item H) to each well. Incubate for 30minutes at room temperature in the dark with gentle shaking.10.Add 50 µl of Stop Solution (Item I) to each well. Read at 450 nm immediately.VII. ASSAY PROCEDURE SUMMARY1.Prepare all reagents, samples and standards as instructed.2.Add 100 µl standard or sample to each well. Incubate 2.5 hours at room temperature.3.Add 100 µl prepared biotin antibody to each well. Incubate 1 hour at room temperature.4.Add 100 µl prepared Streptavidin solution. Incubate 45 minutes at room temperature.5.Add 100 µl TMB One-Step Substrate Reagent to each well. Incubate 30 minutes atroom temperature.6.Add 50 µl Stop Solution to each well. Read at 450 nm immediately.VIII. CALCULATION OF RESULTSCalculate the mean absorbance for each set of duplicate standards, controls and samples, and subtract the average zero standard optical density. Plot the standard curve on log-log graph paper or using Sigma plot software, with standard concentration on the x-axis and absorbance on the y-axis. Draw the best-fit straight line through the standard points.A. TYPICAL DATAThese standard curves are for demonstration only. A standard curve must be run with each assay.B. SENSITIVITYThe minimum detectable dose of Mouse Insulin was determined to be 5 µIU/ml.Minimum detectable dose is defined as the analyte concentration resulting in an absorbance that is 2 standard deviations higher than that of the blank (diluent buffer).C. SPIKING & RECOVERYRecovery was determined by spiking various levels of Mouse Insulin into the sample types listed below. Mean recoveries are as follows:D. LINEARITYE. REPRODUCIBILITYIntra-Assay CV%: <10%Inter-Assay CV%: <12%IX. SPECIFICITYThis ELISA antibody pair detects mouse, human, rat, porcine and bovine Insulin.X. TROUBLESHOOTING GUIDEProblem Cause SolutionPoor standard curve Inaccurate pipettingImproper standarddilutionCheck pipettesBriefly centrifuge Item C and dissolvethe powder thoroughly by gently mixingLow signal Improper preparation ofstandard and/orbiotinylated antibodyToo brief incubationtimesInadequate reagentvolumes or improperdilutionBriefly spin down vials before opening.Dissolve the powder thoroughly.Ensure sufficient incubation time. Assayprocedure step 3 may be doneovernight at 4°C with gentle shaking(note: may increase overall signalsincluding background).Check pipettes and ensure correctpreparationLarge CV Inaccurate pipettingAir bubbles in wellsCheck pipettesRemove bubbles in wellsHigh background Plate is insufficientlywashedContaminated washbufferReview the manual for proper wash. Ifusing a plate washer, ensure that allports are unobstructed.Make fresh wash bufferLow sensitivity Improper storage of theELISA kitStop solutionStore your standard at <-70ºC afterreconstitution, others at 4ºC. Keepsubstrate solution protected from light.Add stop solution to each well beforereading plateRayBio® ELISA KitsOver 4,000 ELISA kits available, visit /ELISA-Kits for details.This product is for research use only.©2020 RayBiotech, Inc。
小鼠胰岛素样生长因子2(IGF-2)酶联免疫分析(ELISA)
小鼠胰岛素样生长因子2(IGF-2)酶联免疫分析（ELISA）试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测小鼠血清，血浆及相关液体样本中胰岛素样生长因子2(IGF-2)的含量。
实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠胰岛素样生长因子2(IGF-2)水平。
用纯化的小鼠胰岛素样生长因子2(IGF-2)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入胰岛素样生长因子2(IGF-2)，再与HRP标记的胰岛素样生长因子2(IGF-2)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的胰岛素样生长因子2(IGF-2)呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中小鼠胰岛素样生长因子2(IGF-2)浓度。
试剂盒组成：注意事项：1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。
一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4．请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。
如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。
5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物请避光保存。
7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9．本试剂不同批号组分不得混用。
10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。
操作步骤1.标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在第一、第二孔中分别加标准品100μl，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从第一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。
CrystalChem超灵敏小鼠胰岛素ELISA试剂盒
CrystalChem超灵敏小鼠胰岛素ELISA试剂盒
小鼠胰岛素ELISA（超灵敏）用于仅使用5µL样本量来量化血清、血浆、细胞培养物和液体中的小鼠胰岛素水平。
Crystal Chem超灵敏小鼠胰岛素ELISA试剂盒参数：
样本类型：血清、血浆、细胞培养或液体
规格：96 wells (12 x 8 well strips)
液态试剂（标准试剂除外）
灵敏度：0.05纳克/毫升
分析范围：低范围分析：0.1-6.4 ng/mL
宽范围分析：0.1-12.8纳克/毫升
高量程分析：1-64纳克/毫升
精密批内精密变异系数≤ 10.0%
批间精密度≤ 10.0%
储存温度2-8°C
Crystal Chem 试剂盒特色：
小样本量：只需要5µL样品，非常适合小批量的小鼠样品。
高度灵敏和较精确：使用5µL的样品和CV，该分析的灵敏度为0.05 ng/mL≤ 10.0%.
动态范围：范围为0.1-64.0 ng/mL，仅使用5µL样品。
使用同一试剂盒进行低胰岛素和高胰岛素分析。
高特异性：这是一个易于使用的试剂盒，对小鼠胰岛素具有高度特异性，结果不到3.5小时。
标准曲线：。
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小鼠胰岛素(Insulin)Elisa试剂盒使用说明
货号：BC1710
保存：试剂盒保存：2-8℃，有效期6个月。
产品内容：
序号名称96孔配置
1酶标包被板96孔*1可拆卸板
2酶标试剂6ml*1瓶
3标准品(浓度16mIU/L)0.6ml*1瓶
4标准品稀释液2ml*1瓶
5生物素标记的抗Insulin抗体 1.5ml*1瓶
6显色剂A液6ml*1瓶
7显色剂B液6ml*1瓶
8终止液6ml*1瓶
9浓缩洗涤液（*30）20ml*1瓶
10封板膜1张
11使用说明书1份
产品说明：
小鼠胰岛素(Insulin)Elisa试剂盒仅供科研使用，定量检测细胞液、体液、组织、血清、血浆等标本中小鼠胰岛素(Insulin)的含量。
采用双抗体夹心法测定小鼠胰岛素(Insulin)水平。
用纯化的小鼠胰岛素(Insulin)抗体包被微孔板，制成固相载体，实验时依次在微孔板中加入样本及标准品，并加入HRP标记的胰岛素(Insulin)抗体，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，反复洗涤后加底物TMB显色。
TMB 在过氧化物酶的催化下转化为蓝色，再用硫酸终止反应，转变成黄色。
颜色的深浅和样品中的胰岛素(Insulin)含量呈正相关。
采用酶标仪在450nm波长测定吸光度（OD值），根据标准曲线，计算测试样品中胰岛素(Insulin)浓度。
实验材料与试剂配制：
1.仪器与材料：酶标仪（使用前预热30分钟），微量加液器、吸头、蒸馏水或去离子水，
滤纸。
2.洗液的配制：按1:30的比例配制洗液备用。
样品收集、处理及保存：
1.细胞培养上清：适用于检测体外培养的细胞分泌性成份。
用无菌管收集细胞上清液，以
1000×g离心15分钟，收集上清。
2.细胞：用PBS反复洗涤细胞3次，调整细胞浓度达到104-106/ml左右，通过反复冻融，使
细胞破坏并放出细胞内成份，或者细胞超声粉碎，离心取上清液检测。
3.血清：在室温下，血液自然凝固，以1000×g离心15分钟，取上清待测。
4.血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合后静置10-20分钟后，
以1000×g离心15分钟，收集上清。
5.体液：包括胸腹水、脑脊液，分泌物等。
使用不含热原和内毒素的离心管收集，以1000
×g离心15分钟，收集上清。
6.组织标本：切取组织标本，称取重量0.05g，加入500ul的PBS，用手工或匀浆器，或超
声破碎仪将标本匀浆，以2000-3000rmp离心20分钟，收集上清进行检测。
7.样品中不能含有NaN3，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
8.保存：如果样品不能立即检测，应将其分装，-70℃保存，避免反复冷冻。
保存过程中
如出现沉淀，应再次离心。
血液标本尽可能的不要使用溶血或高血脂血。
如果血清中含大量颗粒，检测前先离心或过滤。
不要在37℃或更高的温度加热解冻。
应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
操作步骤：
1.取出试剂盒，室温（20-25℃）放置30分钟。
2.分组：取出96孔板，根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数，把剩余
的板条继续冷藏处理。
分别设标准品组（6个浓度）、空白孔、待测样品组。
标准品的
稀释：准备小试管6只，依次编好号码，先在各小试管中加入标准品稀释液100ul，然后取原浓度标准品100ul加入一只已编好号的试管中，充分混匀;再在该试管中取100ul 加入第二支试管中，充分混匀；再在该试管中取100ul加入第三只试管中，充分混匀；
再在该试管中取100ul加入第四只试管中，充分混匀；再在该试管中取100ul加入第五只试管中，充分混匀；然后在该试管中取100ul，弃掉。
第六只试管作为0号标准品。
稀释后各管浓度分别是：8.0mIU/L，4.0mIU/L，2.0mIU/L，1.0mIU/L，0.5mIU/L，0mIU/L。
注：为减少实验误差，保证准确性，建议设置复孔。
3.加样：依照标准品的顺序分别加入50ul的标准品溶液于空白微孔中；空白对照孔加入
50ul的蒸馏水；其余微孔中先加样品40ul然后再加生物素标记的抗Insulin抗体10ul。
加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
4.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此
重复5次，拍干。
6.加酶标溶液：标准品组、待测样本组各孔中加入50ul的酶标溶液（空白对照孔除外）。
7.温育：酶标板用封板纸密封后，放入湿盒内于37℃恒温孵育1小时。
8.洗板：用稀释后的洗涤液注满每孔，静置15-30s，充分清洗酶标板5次，用吸水纸彻底
拍干。
9.显色：各孔加入显色剂A液50ul后，再加入显色剂B液50ul。
10.终止：25-37℃下避光反应10-15分钟，加入50ul终止液。
11.读板：在450nm波长读取各孔的OD值。
注：读板时必须拭干板底残留的液体和手指痕迹，读板时间控制在终止反应后的30分钟内，以免影响准确性。
数据计算：
1.绘制标准曲线：各标准品OD值减去底色即减去空白孔OD
值，以6个标准品的OD值为纵坐标y，以标准品的浓度为
横坐标x，绘制曲线图，如图示，并计算出回归方程y=ax+b。
2.将待测样品的OD值代入方程式，计算各组样品浓度，再
乘以稀释倍数，即为样品的实际Insulin浓度。
3.敏感度：0.01mIU/L
注意事项：
1.实验操作中必须使用一次性吸头，避免交叉污染。
2.加样：加样时，要控制加样速度，避免第一孔与最后一孔间的时间间隔过大，否则将会
导致不同的预孵育时间，从而影响实验的准确性以及重复性。
3.孵育：严格按照说明书上规定的孵育时间和温度进行。
4.反应时间的控制：加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化，如果颜色较深，请提前加
入终止液终止反应。
5.建议实验前预测样品含量，如样品浓度过高，应对样品进行稀释，计算结果时乘以相应
的稀释倍数。
6.建议使用本试剂盒时先做预实验（即先做标准曲线，试用几个标本），如果对本试剂盒
有任何疑问，可和所购经销商联系，如果因运输过程导致试剂盒失效，可要求调换，但概不承担产品本身以外的任何损失。
安全性：
1．避免人体直接接触显色剂A、B和终止液。
一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。
2．实验中不要进食、抽烟或使用化妆品。
3．不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。