凋亡相关基因Bax表达产物的检测资料
口腔黏膜白斑凋亡相关蛋白 Bcl－2和 Bax 的表达及意义
口腔黏膜白斑凋亡相关蛋白 Bcl－2和 Bax 的表达及意义满一;钟良军;徐巍巍【摘要】目的：通过探讨凋亡相关蛋白在口腔白斑病变过程中细胞凋亡状况和凋亡蛋白 Bcl－2、Bax 的表达的研究，探讨白斑发病机制及恶变机理。
方法采用免疫组织化学检测法，与正常口腔粘膜对照，观察分析29例口腔白斑中 Bcl－2、Bax 蛋白的表达水平。
结果上皮异常增生各组的凋亡指数均高于正常，Bcl－2、Bax 在上皮单纯增生、异常增生显过度表达，表达强度、分布也发生了改变。
结论癌前病变中，上皮细胞凋亡状况发生了改变，Bcl－2可能对增生组织向恶变的转化发挥阶段性的促进作用，促凋亡因子 Bax 作用加强；凋亡因子的发挥即相互协同又相互制约。
%Objective To investigate the expression and significance of apoptosis -related protein Bcl-2,Bax in oral leukoplakia (OLK),and to explore the mechanism of pathogenesis and cancerization of oral leukoplakia.Methods The expression levels of Bcl-2 and Bax were detected by immunohistochemistry in 29 cases OLK and 25 cases of healthy oral mucosa.Results The apoptosis indexes (AI) of OLK epithelial cells in simple hyperplasia, dysplasia ( mild,moderate, severe degrees ) were significantly increased, as compared with those in normal mucosa.In OLK epithelium, the overexpressions of Bcl-2,Bax in positive cells were observed,and the intensity and distribution of apoptosis-related protein were significantly changed.Conclusion In precancerous lesions,Bcl-2 may promote the progression of canceration of hyperplastic tissue, enhance the effects of Bax in inducing cell apoptosis,moreover,the effects of apoptosis-related proteins are not only cooperative but also restrict each other.【期刊名称】《河北医药》【年(卷),期】2015(000)009【总页数】4页(P1297-1300)【关键词】白斑;凋亡蛋白;Bcl-2;Bax【作者】满一;钟良军;徐巍巍【作者单位】065000 河北省廊坊市，中国石油天然气集团公司中心医院口腔科;杭州师范大学医学院口腔医学系;065000 河北省廊坊市，中国石油天然气集团公司中心医院口腔科【正文语种】中文【中图分类】R780.2口腔黏膜白斑是最常见癌前病损，处于向恶性转化的不稳定状态，以不同程度的上皮增殖和不典型上皮增生为基本特征，在细胞异常增殖中，凋亡相关蛋白都有质与量的变化。
柯萨奇病毒B3感染HeLa细胞后Bax和Bim的表达
［文章编号］1000-4718（2014）03-0524-05［收稿日期］2013-03-04［修回日期］2014-01-07*［基金项目］国家自然科学基金资助项目（No．30973233）；中南大学创新课题资助项目（No．2011ssxt196）△通讯作者Tel ：0731-88618205；E-mail ：yang_zcr@126．com 柯萨奇病毒B3感染HeLa 细胞后Bax 和Bim 的表达*杨丽，李欣，田朗，黄利华，李卓颖，杨作成△（中南大学湘雅三医院儿科，湖南长沙410013）［摘要］目的：观察HeLa 细胞感染柯萨奇病毒B3（CVB3）后Bax 和Bim mＲNA 和蛋白的表达。
方法：将HeLa 细胞分为未予以CVB3感染的对照组和予以CVB3感染的病毒组，取3h 、6h 、9h 、12h 和24h 的细胞，采用ＲT-PCＲ和Western blotting 分别检测Bax 和Bim mＲNA 和蛋白的表达。
结果：Bax 和Bim mＲNA 在对照组和病毒组HeLa 细胞中均有表达，在病毒组和对照组中Bax 和Bim mＲNA 的表达在各自组内均无显著差异（P ＞0.05），但在24h Bax 和Bim 在病毒组mＲNA 的表达低于对照组（P ＜0.05）。
Bax 和Bim 蛋白表达在对照组中各时点均有表达，但无显著差异（P ＞0.05）。
病毒组Bax 蛋白在24h 表达下降，差异有统计学意义（P ＜0.05），且病毒组表达明显低于对照组（P ＜0.05）；Bim 蛋白的表达随感染时间延长而下降（P ＜0.05），9h 、12h 和24h 表达病毒组低于对照组（P ＜0.05）。
结论：Bax 和Bim 在CVB3感染诱导的HeLa 细胞凋亡早期发挥作用。
［关键词］HeLa 细胞；柯萨奇病毒B3；细胞凋亡；Bax 蛋白；Bim 蛋白［中图分类号］Ｒ725［文献标志码］Adoi ：10．3969/j．issn．1000-4718．2014．03．024Expression of Bax and Bim in coxsackievirus B3-infected HeLa cellsYANG Li ，LI Xin ，TIAN Lang ，HUANG Li-hua ，LI Zhuo-ying ，YANG Zuo-cheng（Department of Pediatrics ，Third Xiangya Hospital of Central South University ，Changsha 410013，China．E-mail ：yang _zcr @126．com ）［ABSTＲACT ］AIM ：To observe the expression of Bax and Bim at mＲNA and protein levels in coxsackievirus B3（CVB3）-infected HeLa cells．METHODS ：HeLa cells were divided into control （non-CVB3infection ）group and CVB3infection group．The expression of Bim and Bax at mＲNA and protein levels was determined by reverse transcriptase poly-merase chain reaction （ＲT-PCＲ）and Western blotting analysis at 3h ，6h ，9h ，12h and 24h postinfection．ＲE-SULTS ：The mＲNA expression of Bax and Bim in control group was not significantly different among different time points ，so was that in CVB3infection group （all P ＞0.05）．However ，compared with control group ，the mＲNA expression of Bax and Bim in CVB3infection groups was decreased at 24h postinfection （all P ＜0.05）．The protein expression of Bax and Bim in control group was not significantly different among different time points （P ＞0.05）．However ，in CVB3infection group ，the protein expression of Bax was lower at 24h postinfection than that at 3h （P ＜0.05）．Meanwhile ，compared with control group ，the protein expression of Bax in CVB3infection group was decreased at 24h postinfection （P ＜0.05）．The protein expression of Bim in CVB3infection groups was decreased along with the time postinfection ，and was decreased at 9h ，12h and 24h as compared with control group （P ＜0.05）．CONCLUSION ：The proteins of Bax and Bim play an important role in CVB3-induced apoptosis of HeLa cells．［KEY WOＲDS ］HeLa cells ；Coxsackievirus B3；Apoptosis ；Bax protein ；Bim protein引起病毒性心肌炎（viral myocarditis ，VMC ）的病毒众多，而以柯萨奇病毒B3（coxsackievirus B3，CVB3）引起的病毒性心肌炎较常见［1-2］。
凋亡相关蛋白Bcl_2及Bax在糖尿病大鼠下颌下腺内的表达
CHIN ESE J OU RNAL OF ANA TOM Y Vol.32No.22009解剖学杂志 2009年第32卷第2期凋亡相关蛋白B cl22及B ax在糖尿病大鼠下颌下腺内的表达第1作者E2mail:wuxueping2003019@ 收稿日期:2008207214;修回日期:2008210227吴学平1 彭彦霄1 伍雪芳1 贾雪梅2(1皖南医学院组织学与胚胎学教研室,芜湖 241000;2安徽医科大学形态学中心实验室,合肥 230032)摘要 目的:观察糖尿病大鼠下颌下腺内凋亡相关蛋白Bcl22和Bax表达变化。
方法:SD雄性大鼠用链脲佐菌素复制糖尿病动物模型,H2E染色观察下颌下腺形态学变化,免疫组织化学SABC技术检测Bcl22及Bax蛋白表达变化。
结果:糖尿病组大鼠下颌下腺组织萎缩,间质纤维增生。
与对照组比较,糖尿病组大鼠下颌下腺导管上皮细胞Bcl22表达下降,Bax表达显著增加。
结论:Bcl22及Bax表达在糖尿病病理变化过程中出现了一定的变化规律。
关键词 糖尿病;Bcl22;Bax;下颌下腺;大鼠Expression of apoptosis2related proteins B cl22and B ax in thesubmandibular gland of diabetic ratWu Xueping1,Peng Yanxiao1,Wu Xuefang1,Jia Xuemei2(11De partment of Histology and Embryolog y,W annan Medical College,W uhu 241000;21Morpholog y Center L aboratory,A nhui Medical Universit y,Hef ei 230032,China)Abstract Obj ective:To investigate the expression changes of apoptosis2related proteins Bcl22and Bax in the submandibular gland of diabetic rats.Met hods:A Sprague2Dawley diabetic rats model was established after injection of streptozotocin.The submandibular glands were observed using H2E staining and immunohistochemistry methods.Results:In the diabetic rats, the submandibular gland atrophied and showed the significant proliferating interstitial pared with the control group,Bcl22immunopositive cells in the submandibular gland showed a descending tendency with the progression of the dis2 ease.Bax immunopositive cells were more significantly increased in diabetic rat.Conclusion:Bcl22and Bax expression is of a certain regulation in the pathogensis of diabetes mellitus.K ey w ords diabetes mellitus;Bcl22;Bax;submandibular gland;rat 近年研究表明,由于各种凋亡调控机制失衡,激发胰岛β细胞凋亡,导致胰岛分泌功能丧失,且由糖尿病引起的中枢神经[1]、肾[2]等并发症亦有Bcl22凋亡基因家族的参与,因此细胞凋亡成为Ⅰ型糖尿病的发病机制之一。
克银Ⅰ号方对银屑病患者促细胞凋亡相关基因Fas、bax表达的影响
9202. 2012. 07. 027 〔文章编号〕 10059202 （ 2012 ） 07138502 ；doi：10. 3969 / j. issn. 1005-
银屑病是一种临床常见的皮肤病 ， 发病率高、 易复发， 目前 尚无从根本上治疗本病的方法 。 随着对该病发病机制研究的 逐渐深入， 已证实银屑病患者除了具有多基因遗传背景外 ， 异 常 T 细胞导致的免疫失调与本病也高度相关 ， 尤其与细胞凋亡 的关系极为密切
bax 的表达变化。 结果 组（ 克银Ⅰ号方组） 和对照组（ 阿维 A 胶囊组） ， 比较两组临床疗效及治疗前后患处蜡块包埋表皮中促凋亡基因 Fas、 bax 的转阴率比较有显著性差异 （ P ＜ 0. 05 ） 。 结论 床治疗的总有效率比较无统计学意义 （ P ＞ 0. 05 ） ， 两组治疗后促凋亡相关基因 Fas、 bax 的表达。 对银屑病治疗有效； 可影响银屑病患者促细胞凋亡相关基因 Fas、 〔关键词〕 银屑病； 克银Ⅰ号方； 细胞凋亡； Fas； bax 〔中图分类号〕 R758. 63 〔文献标识码〕 A
bax 表达的影响 克银 Ⅰ 号方对银屑病患者促细胞凋亡相关基因 Fas、
马学伟
〔摘
孙国强
要〕 目的
陈
虎
张培红
云雅卿
1
王家颖
2
（ 河北省中医药研究院， 河北
石家庄 050031 ）
bax 表达的影响。 方法 观察克银Ⅰ号方对银屑病患者促细胞凋亡相关基因 Fas、
将 40 例寻常型银屑病患者随机分为治疗 两组临 克银 Ⅰ 号方
· 1386·
中国老年学杂志 2012 年 4 月第 32 卷
一系列凋亡信息的传递 ， 最终到达细胞表面受体 ， 使细胞存活 日期缩短
细胞凋亡实验报告
竭诚为您提供优质文档/双击可除细胞凋亡实验报告篇一：实验14细胞凋亡的诱导和检测实验14细胞凋亡的诱导和检测20世纪60年代人们注意到细胞存在着两种不同形式的死亡方式：凋亡（apoptosis）和坏死（necrosis）。
细胞坏死指病理情况下细胞的意外死亡，坏死过程细胞膜通透性增高，细胞肿胀，核碎裂，继而溶酶体、细胞膜破坏，细胞内容物溢出，细胞坏死常引起炎症反应。
细胞凋亡apoptosis一词来源于古希腊语，意思是花瓣或树叶凋落，意味着生命走到了尽头，细胞到了一定时期会像树叶那样自然死亡。
凋亡是细胞在一定生理或病理条件下遵守自身程序的主动死亡过程。
凋亡时细胞皱缩，表面微绒毛消失，染色质凝集并呈新月形或块状靠近核膜边缘，继而核裂解，由细胞膜包裹着核碎片或其他细胞器形成小球状凋亡小体凸出于细胞表面，最后凋亡小体脱落被吞噬细胞或邻周细胞吞噬。
凋亡过程中溶酶体及细胞膜保持完整，不引起炎症反应。
细胞凋亡时的生化变化特征是核酸内切酶被激活，染色体DnA被降解，断裂为50～300kb长的DnA片段，再进一步断裂成180～200bp整倍数的寡核苷酸片断，在琼脂糖凝胶电泳上呈现“梯状”电泳图谱(DnALadder)。
细胞凋亡在个体正常发育、紫稳态维持、免疫耐受形成、肿瘤监控和抵御各种外界因素干扰等方面都起着关键性的作用。
1．细胞凋亡的检测方法凋亡细胞具有一些列不同于坏死细胞的形态特征和生化特征，据此可以鉴别细胞的死亡形式。
细胞凋亡的机制十分复杂，一般采用多种方法综合加以判断，同时不同类型细胞的凋亡分析方法有所不同，方法选择依赖于具体的研究体系和研究目的（表？）。
表凋亡的检测方法（引自DL斯佩克特等，20XX）形态学观察方法：利用各种染色法可观察到凋亡细胞的各种形态学特征：（1）DApI时常用的一种与DnA结合的荧光染料。
借助于DApI染色，可以观察细胞核的形态变化。
（2）giemsa染色法可以观察到染色质固缩、趋边、凋亡小体形成等形态。
Bax、Bad基因真核表达质粒构建及转染人胚肾细胞后的翻译水平观察
Bax、Bad基因真核表达质粒构建及转染人胚肾细胞后的翻译水平观察王孜恒; 周敬伟; 侯筱宇【期刊名称】《《山东医药》》【年(卷),期】2019(059)030【总页数】4页(P21-24)【关键词】Bcl-2相关X蛋白; Bcl-2相关细胞死亡因子; 真核表达质粒; 人胚肾细胞【作者】王孜恒; 周敬伟; 侯筱宇【作者单位】徐州医科大学江苏徐州221000; 江苏省脑病生物信息重点实验室【正文语种】中文【中图分类】R743.31凋亡最早是由英国病理学家Kerr JF教授于1972年根据细胞形态学改变提出的概念，是指细胞在接受外界信号刺激后启动的主动的程序性细胞死亡过程[1]。
在人体内每天约有1×109个细胞发生凋亡[2]。
细胞凋亡涉及内源性凋亡途径和外源性凋亡途径，内外途径协同工作，清除体内有缺陷的细胞，使机体保持健康，而不受控制的细胞增殖会导致癌症[3]等疾病的发生发展。
重大脑疾病如缺血性脑血管病[4,5]、阿尔茨海默病[6]、帕金森病[7]等均与选择性的神经元凋亡有关。
深入研究选择性神经元凋亡的信号传递及调控有助于发现潜在的治疗药物靶点。
研究表明，Bcl-2家族蛋白可促进或抑制细胞凋亡，取决于它们的表达谱、定位或构象。
Bax 是首个发现的能够促进细胞凋亡的蛋白质，也是目前认为细胞凋亡中最为关键的分子[8]，其编码的蛋白质由192个氨基酸组成，分子量为20 kD[9]。
凋亡应激时，Bax从胞质向线粒体转移并形成寡聚体锚定在线粒体外膜上介导细胞凋亡[10]。
Bad是只含有BH3结构域的促凋亡蛋白，由204个氨基酸组成，分子量为23 kD[11]。
Bad能够促使Bax释放并向线粒体转移，其在细胞凋亡中发挥的作用同样不可忽视。
但是Bax和Bad在选择性神经元凋亡过程中的调控机制还有待进一步阐明。
本研究通过构建Bax、Bad基因的真核表达质粒pcDNA3.1-Bax和pcDNA3.1-Bad，并观察Bax、Bad在HEK293细胞中的表达情况，旨在为进一步研究脑疾病发生发展中Bax和Bad的亚细胞分布、线粒体转位及其调控机制奠定基础。
2018年凋亡相关基因-Bax在不同细胞中表达产物差异检测-文档资料
告知
实验（四）
细胞内微核的检测 家系分析
注意事项
一、二抗的稀释度、孵育时间和温度与染色强度、 背景有直接关系。
染色背景过高，在DAB显色之前，用含0.01-0.02 ％TWEEN20的PBS洗涤标本4次，再PBS洗2次， 然后DAB显色。 DAB有毒性（小心）
SABC试剂盒保存在4 ℃为佳(2年)，而-20 ℃短期 内生物活性则被破坏 。
25µl，37 ℃，1h PBS洗，5min X 3次
实验步骤
加0.3％ H2O2-PBS（甲醇），37 ℃，30min PBS洗，5min X 3次 SABC工作液（1ml PBS加入SABC 10µl，混匀）20-
30µl，37 ℃，1h PBS洗，5min X 3次 DAB显色：
器材与试剂
仪器：移液枪、枪头、滴管、显微镜 材料：培养细胞 试剂：甲醇、PBS、封闭液、一 抗、 二抗、
SABC、DAB 、0.3％H2O2-PBS、
试剂说明
PBS： 磷酸盐缓冲液（ 0.01M pH7.4 ） 封闭液： 山羊血清(或BSA)，用时PBS稀释 一 抗： 小鼠IgG，用时PBS稀释 二抗： 生物素标记的羊抗小鼠IgG 0.3％ H2O2-PBS（甲醇）
DAB显色工作液配制（现配）：1ml蒸馏水，加试 剂盒中A、B、C试剂各一滴，混匀后加至细胞孔 板，镜下控制，以蒸馏水终止反应。
观察结果
实验结果
缺糖前 Hela 细胞
缺糖 24h Hela细胞
缺糖 48h Hela 细胞
缺糖前 PC 12细胞
缺糖 24 h PC 12细胞
ห้องสมุดไป่ตู้
缺糖 48 h PC 12细胞
长期停训大鼠海马神经元细胞凋亡因子Bax、Bcl-2的表达
长期停训大鼠海马神经元细胞凋亡因子Bax、Bcl-2的表达赵永寿;田振军;白建超【摘要】The influence on the expression of Bax、Bcl-2 in the hippocampus neuron of stopping training 28 weeks rats is studied.Refered to the training scheme of Bedford,the training model of SD rats is established.All rats in the normal cage live 28 weeks and the expression change of Bax and Bcl-2 in the Hippocampus Neuron is observed.The results show that aerobic training promotes the ratio of Bcl-2/Bax in CA1 area and CA3 area of hippocampus,fatigue training restrain the ratio ofBcl-2/Bax in CA1 area and CA3 area of hippocampus after stopping training.It is analyzed that aerobic training has taken good care of the hippocampus neuron of the aged rats,fatigue training has effected the function of the hippocampus neuron of the aged rats.%以不同强度训练大鼠停训28周为对象,应用免疫组织化学技术,探讨运动对大鼠海马神经元细胞凋亡因子Bax、Bcl-2表达的影响.参照Bedford训练方案,建立起Sprague dawley（SD）大鼠有氧训练与疲劳训练动物模型,停训28周后,观察大鼠海马神经元Bax、Bcl-2的表达变化.结果表明：长期有氧训练大鼠老年期海马神经元Bcl-2/Bax比值升高,长期疲劳训练大鼠老年期海马神经元Bcl-2/Bax比值下降.这是因为长期有氧训练促进了大鼠海马神经元产生了良好的适应,对大鼠老年期海马神经元起到保护和延缓其衰老的作用.而长期疲劳训练会影响到大鼠老年期海马神经细胞的功能状态.【期刊名称】《陕西师范大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2012(040)001【总页数】5页(P104-108)【关键词】运动训练;海马;细胞凋亡因子;停训;免疫组织化学【作者】赵永寿;田振军;白建超【作者单位】陕西教育学院体育系,陕西西安710061;陕西师范大学体育学院,陕西西安710062;陕西教育学院体育系,陕西西安710061【正文语种】中文【中图分类】G804.5细胞凋亡现象普遍存在于中枢神经系统的诸多疾病中.因此，神经细胞也涉及到复杂的凋亡机制.细胞凋亡与许多基因的表达状况密切相关，如Bax、p53、ced9、Bcl-2等.Bcl-2与Bax是细胞凋亡中两个重要基因调控的表达产物.Bcl-2的高表达可抑制细胞凋亡的发生，而Bax则起拮抗作用.Bcl-2和Bax蛋白之间的比例是决定细胞凋亡或抑制的关键因素.不同强度运动训练对海马细胞凋亡影响的研究近年时有报道［1-3］.实验研究显示，大强度运动训练后大鼠海马CA1区神经元凋亡显著增加，而中等强度运动训练后大鼠海马CA1区神经元凋亡不明显［4］.也有研究认为，中等强度运动可促进Bcl-2蛋白的表达，使Bax／Bcl-2比率显著降低，从而抑制了细胞凋亡；大强度运动促进Bax蛋白的表达，使Bax／Bcl-2比率显著升高，促进细胞凋亡.但有关长期运动训练停训后对中枢神经细胞凋亡的影响还未见报道.早年进行大强度运动训练后，由于种种原因停止训练，运动员往往出现一些不适应的临床表现，运动员晚年机体的健康问题受到广泛关注.早年进行不同强度的系统训练，停训后运动员晚年期的健康问题是否受早年训练的继续影响，值得研究.本研究以实验大鼠为对象，应用免疫组织化学技术探讨早年运动对停训大鼠老年期海马CA1和CA3区细胞凋亡因子Bax、Bcl-2表达的影响.雄性SD大鼠（3月龄，西安交通大学医学院动物管理中心提供）24只，体重248±24g，国家标准啮齿类动物干燥饲料喂养，自由饮食，温度为22℃～27℃，湿度为40%～60%.适应性喂养1周，然后进行实验.将SD大鼠随机分为安静对照组、有氧训练组和疲劳训练组，每组各8只.采用递增强度的跑台运动方式，运动负荷参照Bedford跑台训练法.对照组为正常笼内生活，不参与运动训练.有氧训练与疲劳训练组预先适应性训练3 d，起始训练速度为15 m／min，时间为15 min.有氧训练组每周训练5 d，共8周.递增速度为3 m／min，时间为5 min，运动至速度为20 m／min后增加跑台坡度至5°，训练时间为60 min.疲劳训练组每周训练6 d，共8周.递增速度为3 m／min，时间为5 min，运动速度至20 m／min后，增加跑台坡度到5°，运动速度至35 m ／min后跑台坡度增为10°，运动时间为60 min.训练8周后有氧与疲劳组停止训练，和对照组同处笼内，正常生活状态下饲养28周.乌拉坦（10%）腹腔注射麻醉，开胸左心室插管.中性甲醛固定液灌注40min，快速开颅取材，多聚甲醛（4%）固定，常规脱水，二甲苯透明石蜡包埋.切片厚为5μm，HE染色定位.Santa Cruz公司生产的兔抗小鼠、大鼠、人多克隆抗体Bax，兔抗小鼠、大鼠、人多克隆抗体Bcl-2.采用免疫组织化学SABC法，按试剂盒（博士德）说明书操作步骤进行.Bax、Bcl-2微波抗原修复.Bax、Bcl-2（1∶100），4℃过夜，37℃复温，PBS冲洗.滴加二抗37℃，20 min后PBS冲洗.滴加SABC 20 min，Tween＋PBS混合液冲洗2 h.DAB显色，苏木精复染、分化、脱水、透明、中性树胶封片.每次染色设阴性对照染色，PBS取代一抗，其他程序相同.Olympus 光学显微镜观察，数码相机照相，IPP图像分析软件进行分析处理，计算灰度值.免疫组织化学指标计算平均灰度值，结果以均数±标准差表示，所有数据采用SPSS软件分析，组间比较采用t检验，P＜0.05为差异有统计学意义.由表1可知，海马CA1区，Bax的阳性表达疲劳组＞对照组＞有氧训练组，各组间未见显著性差异（P＜0.05）；海马CA3区Bax阳性表达疲劳组＞对照组＞有氧训练组，各组间未见显著性差异.不同强度训练长期停训大鼠海马神经元Bax阳性表达显示，疲劳训练促进了Bax在CA1和CA3区阳性表达，而有氧训练抑制了Bax在CA1和CA3区的阳性表达.由表2可知，在海马CA1和CA3区神经元，Bcl-2的阳性表达为有氧训练组＞对照组＞疲劳组.在海马CA1区，疲劳训练组与对照组有显著性差异；疲劳训练抑制了长期停训大鼠海马神经元Bcl-2的阳性表达，在CA1区更为显著.有氧训练促进了长期停训大鼠海马神经元Bcl-2的阳性表达.细胞凋亡的作用机制比较复杂，受多重凋亡促进或抑制因素的影响.Bax蛋白的表达与维持脑缺血再灌注后细胞的存活相关［5］.Bax与Bc1-2的比值与细胞受刺激后发生凋亡的比率成正相关［6］.Bax的促细胞凋亡机制可能是其具有Ca2＋通道的活性，这一活性参与了细胞凋亡相关的线粒体通透性转变和凋亡发生的蛋白酶激活因子的过程［7-8］.Bax也可能通过控制释放细胞色素C这一通道而促进凋亡发生.Bc1-2的作用机制可能是通过线粒体外膜上的Bcl-2蛋白来稳定线粒体膜，防止线粒体促凋亡蛋白泄漏至胞质及阻断Ca2＋从内质网的释放，使依赖Ca2＋的核酸内切酶活性下降等途径阻断细胞凋亡［9］.此外，血小板激活因子、氧自由基、兴奋性氨基酸（如谷氨酸）、Ca2＋等都参与了细胞凋亡的过程［10］.Zhong等研究发现，在ionophore处理的PC1-2细胞中，Bcl-2过量表达并不能阻止胞内游离Ca2＋升高.它显示Bcl-2可以通过阻止Ca2＋升高事件下游的凋亡信号来抑制凋亡.因此，Bcl-2抗凋亡功能的发挥很大程度上依赖于它与别的蛋白的结合及相互作用.已证实有多种蛋白均可与Bcl-2发生结合性相互作用.另有研究称，氧化作用与细胞凋亡相关［11-12］.有人提出 Bcl-2可以通过一种抗氧化剂的作用或者通过抑制氧自由基的生成来抑制细胞的死亡［13］.在接受许多不同凋亡信号而发生凋亡的造血细胞中，Bcl-2的过度表达与组织细胞氧化损伤的降低程度相关联，而与活性氧中间体的生成、减少无关［14］.在因缺少谷胱甘肽而坏死的神经元细胞中，Bcl-2的表达与氧自由基的生成减少和对细胞组织氧化损伤的降低均相关.可见，Bcl-2似乎起一种抗氧化剂的作用，但仍不清楚Bcl-2是否保护内活性氧物质特异诱导的细胞死亡.通常，Bcl-2和Bax的比值决定着细胞凋亡的发生与否，当该比值上升时抑制细胞凋亡；比值下降时则促进细胞凋亡［15］.张梅等研究认为，大强度训练与海马神经元凋亡增加、海马神经元Bax基因表达增加及海马神经元Bcl-2／bax下降密切相关［4］.相关实验研究显示，不同强度运动长期停训后，Bax和Bcl-2在胸腺皮质淋巴细胞的胞浆髓质区表达不明显，有氧运动形成的生物学效应在长期停训后消失；疲劳训练产生生物学效应.长期停训后，伴随胸腺器官增龄性变化而呈下降趋向［16］.疲劳训练使大鼠海马区自由基过量，神经细胞受损.也可能缺血性脑损伤使兴奋性氨基酸（如谷氨酸）含量增加，过量的谷氨酸对神经元具有明显的损伤作用，致使细胞凋亡［17］.而长期间歇性训练使机体增强了抗氧化及自身的调节适应力，通过增强抗凋亡基因的表达来强化机体对运动的适应能力［18］.研究显示，长期适量运动可使脑细胞的存活能力和活动调节功能得到改善.该实验结果显示，疲劳训练抑制了长期停训大鼠海马神经元CA1、CA3区Bcl-2的阳性表达.而有氧训练促进了海马神经元CA1、CA3区Bcl-2的阳性表达.在长期停训大鼠海马CA1、CA3区，疲劳训练促进了神经元Bax的阳性表达，有氧训练抑制了神经元Bax的阳性表达.可见，疲劳训练致使长期停训大鼠海马神经元CA1、CA3区Bcl-2／Bax的比值降低，神经细胞趋于凋亡.其可能机制为：在长期疲劳训练的状态下，大脑处于相对的缺血、缺氧状态，海马神经元自由基含量升高，出现了神经细胞的线粒体钙超载，导致了海马神经细胞的缺血、缺氧性损伤，这成为了脑细胞凋亡的诱因.脑细胞长期的缺血、缺氧状态可使机体产生一种保护性抑制，通过细胞凋亡的形式将那些受到运动损伤、功能相对较差的细胞进行清除，以满足中枢神经系统对内外环境的适应需要，从而维持了中枢神经系统的功能，此一机制会持续到训练恢复后的较长一段时间.实验表明，有氧训练使长期停训大鼠海马神经元CA1、CA3区 Bcl-2／Bax的比值升高，海马神经元趋向于存活.可能机制为：（1）长期有氧运动可使脑细胞的存活能力和活动调节功能得到改善.Bcl-2可能通过调整其线粒体巯基的氧化还原水平控制其膜电位，进而达成对海马神经元的凋亡抑制；（2）Bcl-2也可通过对线粒体膜调节，改变其凋亡蛋白前体的通透性水平来发挥抗凋亡作用.分析认为，有氧训练使长期停训大鼠海马神经元产生了良好的适应能力，从而起到了保护脑神经细胞、延缓其衰老的作用.早年长期运动训练可影响到大鼠老年期海马神经元的功能状态.长期有氧训练大鼠老年期海马神经元Bcl-2／Bax比值升高，对海马神经细胞起到了保护作用，对延缓海马神经元衰老及促进其生理功能的正常发挥具有积极意义.长期疲劳训练大鼠老年期海马神经元Bcl-2／Bax比值下降，促进了细胞凋亡的发生，可能会影响到大鼠老年期海马神经细胞的功能状态.提示健身人群身体锻炼的运动量不宜过大；运动员早年应避免疲劳训练及其引起的机体组织器官的运动性应激损伤.【相关文献】［1］Oltvai Z N，Milliman C L，Korsmeyer S J.Bcl-2 heterodimerizes in vivo with a conserved homolog Bax that accelerates programmed cell-death［J］.Cell，1993，74（4）：609-619..［2］Kroener G.The protonco gene Bcl-2 and its role in regulating apoptosis［J］.Nat Medicine，1997，3（6）：614-620.［3］Gervais F G，Singaraia R，Xanthoudakis S，et al.Recruitment and activation of caspase-8 by the huntingtininteracting protein hip-1 and a noxel partner hippi［J］.Nature Cell Biology，2002，4（2）：95-105.［4］张梅，何叶.不同强度运动训练对大鼠海马CA1区神经元凋亡的影响［J］.天津体育学院学报，2006，21（2）：151-153.［5］Currie R W，Ellison J A，White R F，et al.Benign focal ischemic preconditioning induces neuronal HSP 70 and prolonged astrogliosis with expression of HSP 27［J］.brain research，2000，863（1／2）：169-181.［6］Guan qiu hua.Brain ischemia／reperfusion induced Expression of DP5 and its interaction with Bcl-2 thus freeing Bax from Bcl-2／Bax dimmers are mediated by c-Jun n-terminal kinase（JNK）pathway ［J］.Neuroscience Letters，2006，393（2／3）：226-230.［7］王景涛，陈贺忠.大鼠局灶性脑缺血后Bax蛋白质阳性表达的变化和细胞凋亡关系的研究［J］.黑龙江医药科学，2003，26（2）：8-9.［8］屈红林，王勇.干细胞与运动性骨骼肌细胞凋亡［J］.中国临床康复，2010，14（6）：1088-1091.［9］Mertens H J，Heinerman M J，Evers JL.The expression of apoptosis related proteins Bcl-2 and Ki67 in endometrium of ovulatory menstrual cycles［J］.Gynecol obstet invest，2002，53（4）：224-230.［10］Bozlu G，Atici A，Turhan H，et al.Platelet-activating factor antagonist（ABT-491）decreases neuronal apoptosis in neonatal rat model of hypoxic ischemic Brain Injury ［J］.Brain Research，2007，1144（2）：193-198.［11］Reed J C.Bcl-2 and the regulation of programmed cell death［J］.Cell Biology，1994，124（1／2）：1-6.［12］Nunnez G.In vitro electrophysiological properties of rat dorsal column nuclei neurons［J］.Immunology Tody，1994，15（8）：582-589.［13］Zhuang J，Dinsdale D，Cohen G M.Apoptosis，in human monocytic THP 1 Cells，results in the release of cytochrome c from mitochondria prior to their ultrocondensation formation of outer membrane discontinuities and reduction in inner membrane potential ［J］.Cell Death Difference，1998，5（11）：953-962.［14］Lin E Y，Kozak C A，Orlofsky A，et al.The Bcl-2 family member，Bcl-2，maps to mouse chromosome 9 and human chromosome 15［J］.Mamm Genome，1997，8（4）：293-298.［15］彭黎明，王曾礼.细胞凋亡的基础与临床［M］.北京：人民卫生出版社，2000：125-132. ［16］朱德元，田振军.运动训练长期停训对大鼠胸腺组织细胞凋亡的影响［J］.陕西师范大学学报：自然科学版，2009，36（6）：102-105.［17］邱宏军，田振军，赵永寿，等.运动训练大鼠长期停训后海马神经元NSE的表达变化［J］.北京体育大学学报，2009，32（11）：58-60.［18］陈德权，邓树勋，彭峰林.间歇运动对大鼠骨骼肌凋亡基因Bax、Bcl-2及相关因素的影响［J］.北京体育大学学报，2008，31（7）：922-925.。
cin及宫颈癌组织中凋亡相关基因bcl-2、bax及caspase-3蛋白的表达
中文摘要目的近年来人们对研究ｃｉｒｑ（宫颈上皮内瘤样病变）中细胞凋亡所扮演的角色很感兴趣，并认识到启动及调节凋亡的机制在决定何种ＣＩＮ病变有可能进展为浸润癌时的重要价值。
目前了解比较深入，较为公认的是ｂｃｌ一２基因及其相关蛋白与凋亡的关系。
本实验通过免疫组化的方法检测ｂｃｌ一２、ｂｏｘ、ｃａｓｐａｓｅ一３蛋白在正常宫颈上皮、ＣＩＮ以及宫颈癌中的表达情况来研究ｂｃｌ一２家族基因对凋亡的调节情况以及他们三者与疾病进展的关系。
方法检测对象为中国医科大学附属第一医院２０００—２００３年手术及宫颈活检组织、ＬＥＥＰ刀手术标本蜡块７９例，患者年龄２ｌ一５６岁，平均年龄４１．６４±２．８６岁，其中正常宫颈组织（ＮＥ）１７例，宫颈上皮内瘤样病变—低度（ＣＩＮ—Ｌ）２１例，宫颈上皮内瘤样病变一高度（ＣＩＮ—Ｈ）１９例，宫颈浸润鳞癌组织（ＳＣＣ）２２例。
凋亡相关基因ｂｃｌ一２、ｂａｘ及ｃａｓｐａｓｅ一３蛋白的表达采用单克隆抗体免疫组化法。
所有标本均经１０％福尔马林固定，常规石蜡包埋，连续切片厚３—５¨ｍ，主要试剂兔抗人ｂｃｌ一２、ｂａｘ、ｃａｓｐａｓｅ一３蛋白单克隆抗体。
ｂｃｌ一２、ｂｏｘ、ｃａｓｐａｓｅ一３蛋白表达均定位于细胞浆，阳性细胞数兰１０％判定为蛋白表达阳性。
采用ＳＰＳＳ软件中卡方检验方法进行统计学分析。
结果１、Ｂｅｌ一２在正常宫颈上皮中无表达．其在ＣＩＮ—Ｌ及ＣＩＮ—Ｈ中的阳性率分别为２８．５７％和６８．４２％，随着ＣＩＮ病变的进展ｂｃｌ－２基因蛋白的表达率呈明显的上升趋势（Ｐ＜Ｏ．０５）。
在宫颈癌中ｂｃｌ—２的阳性表达率仅为２２．７３％，与ＣＩＮ—Ｈ相比明显降低（Ｐ＜Ｏ．０５）。
２．ｂｏｘ在正常宫颈上皮中少量表达，表达率为５．８８％。
其在ＣＩＮ—Ｌ及ＣＩＮ—Ｈ中的阳性率分别为８０．９５％和６３．１６％，随着ＣＩＮ病变的进展ｂａｘ基因蛋白的表达率未呈明显的下降趋势（Ｐ＞０．０５）。
在宫颈癌中ｂａｘ的阳性表达率为３１．８２％，与ＣＩＮ—Ｈ相比有显著降低（Ｐ＜０．０５）。
凋亡基因bcl-2,bax在大肠癌、癌旁黏膜和正常黏膜中的表达及临床意义
青岛大学硕士学位论文凋亡基因bcl-2，bax在大肠癌、癌旁黏膜和正常黏膜中的表达及临床意义姓名：巩秀珍申请学位级别：硕士专业：人体解剖及组织胚胎学指导教师：王守彪;夏玉军2002.4.1互３９８９２中文摘要凋亡基因ｂｃｌ一２，ｂａｘ在大肠癌、癌旁黏膜和正常黏膜中的表达及临床意义摘要目的探讨凋亡基因（ＡｐｏｐｔｏｔｉｃＧｅｎｅ）ｂｃｌ～２和ｂａｘ在大肠癌、癌旁黏膜和正常黏膜中的表达与大肠癌的发生、发展的关系，及其表达与临床病理特征之间的关系和临床意义。
／方法全部标本取自青岛肛肠医院２０００～２００２年大肠癌病人和正常人。
大肪狺组织为临床病理已经确诊，术前未经放疗和化疗，而且带有癌旁黏膜的癌组织块，共１００例。
正常黏膜组织取自经纤维结肠镜检查的正常人，共ｌＯ倒。
每一例取一个组织块，共１１０块。
每块组织连续切片，片厚４弘ｍ，分三套贴片。
各取一张切片做ＨＥ染色，行常规病理组织学诊断，用于癌、癌旁黏膜及正常组织定位，并给免疫组化染色结果提供对照。
其余两套切片分别进行免疫组织化学法染劬分别测定ｂｃｌ—２和ｂａｘ基因在大肠癌、癌旁黏膜和正常组织中的表达。
ｙ结果癌旁黏膜与癌相比，ｂｃｌ一２的表达有显著性意义（Ｐ＜Ｏ．０５），ｂａｘ的表达有显著性意义（Ｐ＜ｏ．０５）；与正常黏膜相比，ｂｃｌ一２和ｂａｘ在大肠癌和癌旁黏膜中的表达均有显著意义（Ｐ＜ｏ．０５），；其表达的变化与大肠癌的临床病理特征关系不明显（Ｐ＞－０．０５）。
结论ｂｃｌ２，ｂａｘ基因与大肠癌的发生、发展有关，其中癌旁黏膜为移行黏膜，有癌变的可能；ｂｃｌ一２和ｂａｘ基因表达与大肠癌的临床病理特征无关。
关键词大肠癌；癌旁黏膜；基因ｂｃｌ－２；基因ｂａｘ；免疫组织化学∥ｏＶｖ７、／研究生：巩秀珍（人体解剖及组织胚胎学）导师：王守彪夏玉军ＥＸＰＲＥＳＳＩＯＮＯＦＡＰＯＰＴＯＴＩＣＧＥＮＥｂｃｌ一２．ｂａｘＩＮＣＯＬＯＲＥＣＴＡＬＣＡＲＣＩＮＯＭＡ，ＭＵＣＯＳＡＡＤＪＡＣＥＮＴＴＯＣＬＯＮＩＣＣＡＲＣＩＮＯＭＡＡＮＤＮＯＲＭＡＬＣＬＯＮＩＣＭＵＣＯＵＳＭＥＭＢＲＡＮＣＥＡＮＤＩＴＳＣＬＩＮＩＣＡＬＳＩＧＮＩＦＩＣＡＮＣＥＡＢＳＴＲＡＣＴＯｂｊｅｃｔｉｖｅＴｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｏｆｂｃｌ一２＆ｂａｘｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓｉｎｃｏｌｏｒｅｅｔａ［ｃａｒｃｉｎｏｍａ、ｍｕｃｏｓａａｄｊａｃｅｎｔｔｏｉｔａｎｄｎｏｒｍａｌｃｌｏｎｉｃｍｕｃｏｕｓｍｅｍｂｒａｎｃｅａｎｄｔｈｅｄｅｖｅｌｏｐ—ｍｅｎｔｏｆｔｈｅｃｏｌｏｒｅｃｔａｌｃａｒｃｉｎｏｍａ，ａｎｄｉｔｓｃｌｉｎｉｃａｌｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ．Ｍｅｔｈｏｄｓ１００ｃａｓｅｓｏｆｃｏｌｏｒｅｃｔａＩｃａｒｃｉｎｏｍａ。
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下次实验内容
家系分析、传代细胞染色体标本的 制备
实验步骤
培养细胞（96孔板，每组正常、缺糖损伤、两个浓度药物 损伤各2孔）
吸弃培养液，PBS洗，3次 (轻轻摇动后吸弃，小心) 甲醇固定5min PBS洗，3次（同上）（加时用吸管，吸时用枪，以后同） 加入封闭液25µl，37 ℃，30min，吸去上清液 加一抗25µl，37 ℃，1-2h后置4℃冰箱过夜(每组各3孔) PBS洗，3次 加二抗（1ml PBS加入生物素化山羊抗小鼠IgG 10µl）25µl，
实验结果
缺糖前 HeLa 细胞
缺糖 24h HeLa细胞
缺糖 48h HeLa 细胞
缺糖前 PC 12细胞
缺糖 24 h PC 12细胞
缺糖 48 h PC 12细胞
注意事项
吸弃及加液时要注意不要将细胞吹起 一抗的稀释度、孵育时间和温度与染色强
度有直接关系。 染色时间要控制好，及时以蒸馏水终止反
实验（三)
凋亡相关基因－Bax的表达产物的检测
实验原理
免疫细胞化学（免疫组化）是将抗原、抗体 间的免疫反应引入细胞标本，并通过对其 所带有的特殊标记物的显示，籍以对细胞 内某抗原或抗体作定性、定位以及定量检 测。
链霉亲和素—生物素—过氧化酶复合物技 术（SABC技术）
其特点是利用链霉亲和素分别连接生物素标记 的第二抗体和生物素标记的酶。
链酶亲和素—生物素—过氧化物酶复合物 DAB(diaminobenzidine)显色液试剂盒：
（ 3,3´-二氨基联苯胺、TBS、 H2O2 ）
课前操作
周二下午接种细胞 96孔板（每组8孔） 正常、缺糖损伤、两浓度药物损伤各2孔
周三中午损伤（6孔） 周四中午固定、加封闭液（正常、缺糖
损伤、两浓度药物损伤各1孔，共4孔）， 30分钟后加一抗 周五中午加二抗
SABC
antigen
器材与试剂
仪器：移液枪、枪头、滴管、显微镜、湿盒 材料：培养细胞 试剂：甲醇、PBS、封闭液、一 抗、 二抗、
SABC、DAB 、0.3％H2O2-PBS DMEM培养液（10%小牛血清的高糖、无糖） 顺铂（20、 40umol/l ）
试 剂说明
PBS： 磷酸盐缓冲液（0.01M，PH7.2） 封闭液：5% 牛血清白蛋白（BSA，即用型） 一 抗： 小鼠IgG（抗小鼠、抗大鼠、抗人），用 时PBS稀释 二抗： 山羊抗小鼠IgG(生物素化) SABC (avidin-biotin-peroxidase complex ) ：
37 ℃，1h PBS洗，3次
实验步骤
加0.3％ H2O2-PBS（30-50µl），37 ℃，30min PBS洗，3次 SABC工作液（即用型）25µl，37 ℃，30min PBS洗，3次 DAB显色：
DAB显色工作液配制（现配）：用三蒸馏水稀释 DAB显色液（20倍），混匀后加至96孔板（2530µl/孔），镜下控制，以蒸馏水终止反应。 观察结果
链霉亲和素对生物分子有极高的亲和力，是一 般抗原抗体亲和力的一百万倍，其对组织和细 胞的非特异吸附很低，该方法背景很低。
SABC大约可以形成一百万个左右的过氧化物酶 和五十个左右的链霉亲和素所构成的复合物
SABC具有很高的敏感性、低背景和操作简便的 优点。
(avidinbiotinperoxidase complex )