基因表达的检测的几种方法
检测基因表达的方法
检测基因表达的方法基因表达检测是一个生物学检测方法。
背景知识荧光定量PCR技术是通过荧光染料或荧光标记的特异性探针，对PCR 产物进行标记跟踪，实时监控反应过程。
随着PCR 反应的进行，反应产物不断累积，荧光信号强度也等比例增加。
每经过一个循环，收集一次荧光强度信号，这样就可以通过荧光强度变化监测产物量的变化，结合相应的软件对产物进行分析，可以得到荧光扩增曲线，计算待测样品初始模版的量。
实时荧光定量PCR技术是一次由定性技术向定量技术的飞跃，运用该项技术，可以对DNA、RNA样品进行相对定量、绝对定量和定性分析。
服务项目1．相对定量包括RNA提取、反转录和扩增，采用SYBR Green I法和TaqMan探针法两种方式，一般采用2- ΔΔ Ct 法进行计算。
每个样本重复三次，一般情况我公司提供内参基因引物。
2．绝对定量需要制备标准品并建立标准曲线，然后检测目的样本中的基因，比对标准曲线得到基因准确拷贝数。
送样要求细胞（≥106 ）、组织（≥300mg）、血液（≥1ml）、叶片（≥100mg）等样品材料，基因组DNA或总RNA（体积≥20μl，浓度≥50 ng/μl）。
提供结果引物和探针及序列，反转录胶图，原始数据（包括扩增曲线和熔解曲线）、数据分析结果及实验报告。
检测基因表达的方法有哪些主要用探针检测mRNA或用抗体检测出表达的蛋白质(转录水平上对特异mRNA的检测和翻译水平上对特异蛋白质的检测)一、外源基因转录水平的鉴定基因表达分为转录及翻译两阶段，转录是以DNA（基因）为模板生成mRNA的过程，翻译是以mRNA为模板生成蛋白质的过程，检测外源基因的表达就是检测特异mRNA及特异蛋白质的生成。
所以基因表达检测分为两个水平。
即转录水平上对特异mRNA的检测和翻译水平上对特异蛋白质的检测。
转录水平上的检测主要方法是Northern杂交，它是以DNA或RNA 为探针，检测RNA链。
和Southern杂交相同，Northern杂交包括斑点杂交和印迹杂交。
检测基因表达变化的方法
检测基因表达变化的方法基因表达变化是指基因在特定条件下转录和翻译水平的变化。
检测基因表达变化的方法有很多种，以下是几种常用的方法：1. 转录组测序（RNA-seq）转录组测序是一种基于高通量测序技术的方法，可以检测基因在不同条件下的转录水平。
该方法首先从细胞中提取总RNA，然后通过建库、测序和分析得到每个基因的转录本序列。
通过比较不同条件下的转录本序列，可以发现基因表达的变化。
RNA-seq具有高灵敏度、高分辨率和高通量等优点，适用于研究基因表达的复杂性和动态性。
2. 定量反转录聚合酶链反应（qRT-PCR）qRT-PCR是一种基于PCR技术的方法，可以检测特定基因的表达水平。
该方法首先从细胞中提取总RNA，然后通过反转录得到cDNA，再通过PCR扩增得到目的片段。
通过比较不同条件下的目的片段拷贝数，可以发现基因表达的变化。
qRT-PCR具有高灵敏度、高特异性和可重复性好等优点，适用于验证RNA-seq等高通量测序方法的结果。
3. 微阵列分析微阵列分析是一种基于芯片技术的方法，可以同时检测多个基因的表达水平。
该方法将已知序列的探针集成在芯片上，然后将待测的cDNA或RNA与探针进行杂交。
通过检测杂交信号的强度，可以发现基因表达的变化。
微阵列分析具有高通量、高效率和高灵敏度等优点，适用于大规模的基因表达谱研究。
4. 原位杂交原位杂交是一种将探针与组织切片上的目标基因进行杂交的方法，可以检测目标基因在组织中的表达位置和表达水平。
该方法将探针与组织切片上的目标基因进行杂交，然后通过荧光或免疫组化等方法显色标记杂交信号。
通过观察杂交信号的数量和分布，可以发现基因表达的变化。
原位杂交具有高特异性、高灵敏度和定位准确等优点，适用于研究基因表达的组织特异性。
5. 免疫组织化学免疫组织化学是一种利用抗体与目标蛋白进行特异性结合的方法，可以检测目标蛋白在组织中的表达位置和表达水平。
该方法将抗体与目标蛋白进行特异性结合，然后通过显色标记抗体结合的位置。
基因表达水平检测方法
基因表达水平检测方法基因表达水平检测方法是解决生物学中一系列实验问题的重要手段之一。
从基因转录到翻译，功能蛋白的表达需要多个步骤的参与，因此需要详细检测各个节点的表达水平才能全面理解生物系统的工作原理。
本文将介绍10种不同的基因表达水平检测方法，并详细讨论其优缺点及应用范围。
1. 实时荧光定量PCR（qPCR）实时荧光定量PCR（qPCR）是测量DNA片段数量的常用方法之一，可用于定量分析RNA 和DNA的含量及检测异质核糖体。
该方法利用荧光标记的探针结合特定反应体系，通过放大和检测PCR产物的荧光信号来定量目标序列的数量。
相较于传统定量PCR方法，qPCR具有高灵敏度、高特异性和高重现性等优点，可以为基因表达量的精确定量提供可靠的实验数据。
2. RNA测序（RNA-seq）RNA测序（RNA-seq）是一种全转录组测序技术，可以检测不同组织、细胞或条件下mRNA 的表达水平。
该技术通过将RNA逐个转录成cDNA，然后对cDNA进行二代测序，并通过比对与基因组或转录组的比对，确定基因在不同组织或条件下的表达情况，并可以鉴定新的基因或异构体。
RNA-seq可以检测出非编码RNA、剪接异构体等多种信息，成为研究基因抑制、基因启动等事件的有力工具。
3. 微阵列技术微阵列技术是一种古老的基因表达测量方法，可用于同步检测数千个基因。
该技术利用特殊制备的阵列，识别和定量检测小分子或生物大分子（如基因或蛋白质）相互作用的过程。
与RNA-seq相比，微阵列技术成本相对较低，但检测范围较小，并且需要预先设计探针和矩阵。
微阵列技术也可以检测mRNA的异构体、SNP等信息，对于高通量、大规模分析有一定的优势。
4. 蛋白质质谱分析蛋白质质谱分析技术（protein mass spectrometry）可用于评估蛋白质在组织、细胞或条件下的表达量和修饰情况。
该方法将蛋白质分离和检测结合到一起，先通过酶解纯化和分离蛋白质产物，然后利用质谱技术进行检测。
真核细胞常用几种基因表达检测方法比较论文
关于真核细胞常用几种基因表达检测方法的比较【摘要】目前国际上对真核细胞基因的表达调控机制研究的已经相当深入了，相对应得对基因表达的产物的检测也逐渐多了起来。
首先基因表达的最终产物分为rna和蛋白质。
所以所有的检测方法都是以此为基础进行的。
其中以rna为检测底物的方法有：rt-pcr，northern blot等。
以蛋白质为检测的底物的方法有：elesa，western blot，免疫组化等。
各种方法有其适用范围及优缺点，本文就其最新进展及常用方法作一个阐述及总结。
【关键词】rt-pcr；northern blot；elisa；western blot；免疫组化真核细胞比原核细胞复杂的多，基因表达调控机制也不一样。
以介绍常用的真核细胞基因表达的检测方法来引导读者更深层次的理解真核细胞基因表达的复杂性。
更加全面得理解真核细胞的复杂隔室结构与其基因表达的关系。
及解决一些实验过程中常见的错误。
1.以rna为底物的检测方法1.1 rt-pcrrt-pcr为反转录rcr（reverse transcription pcr）的缩写。
逆转录pcr，或者称反转录pcr（reverse transcription-pcr，rt-pcr），是聚合酶链式反应（pcr）的一种广泛应用的变形。
在rt-pcr中，一条rna链被逆转录成为互补dna，再以此为模板通过pcr进行dna扩增。
由一条rna单链转录为互补dna（cdna）称作“逆转录”，由依赖rna的dna聚合酶（逆转录酶）来完成。
随后，dna的另一条链通过脱氧核苷酸引物和依赖rna的dna聚合酶完成，随每个循环倍增，即通常的pcr。
原先的rna模板被rna 酶h降解，留下互补dna。
rt-pcr的指数扩增是一种很灵敏的技术，可以检测很低拷贝数的rna。
rt-pcr广泛应用于遗传病的诊断，并且可以用于定量监测某种rna的含量。
试剂为：oligo多聚体，相当于mrna引物，amv（m-mlv）：逆转录酶dntp：脱氧核苷酸，rnase：rna酶抑制剂，pcr buffer：rt-pcr缓冲液，mgcl2：2价镁离子。
基因检测的方法和临床意义
基因检测的方法和临床意义
基因检测是一种检测生物体的基因信息的方法，它可以用于疾病预测、个性化医疗、遗传病筛查等方面。
以下是基因检测的一些方法和临床意义:
1. 分子生物学方法：分子生物学方法是指通过分析生物体的基因序列来确定其种类和表达水平的方法。
这种方法可以用于检测基因变异、基因表达异常和基因调控异常等。
2. 基因组学方法：基因组学方法是指通过分析生物体的整体基因序列来确定其种类和表达水平的方法。
这种方法可以用于检测基因变异、基因组结构异常和基因组表达异常等。
3. 转录组学方法：转录组学方法是指通过分析生物体的基因转录本来确定其基因表达模式和方法。
这种方法可以用于检测基因表达异常、基因调控异常和疾病发生机制等。
4. 蛋白质组学方法：蛋白质组学方法是指通过分析生物体的蛋白质组成来确定其功能和方法。
这种方法可以用于检测蛋白质异常和疾病发生机制等。
基因检测可以在疾病预测、个性化医疗、遗传病筛查等方面发挥
重要作用。
例如，基因检测可以预测某些疾病的风险，帮助人们采取积极的预防措施;还可以帮助医生制定个性化的治疗方案，提高治疗效果和生存率;同时，基因检测也可以用于遗传病筛查，帮助家庭预防遗传疾病的发生。
基因表达谱的分析和解读
基因表达谱的分析和解读基因表达谱是指生物体内基因在特定环境或状态下的表达情况的记录，是基因组学、分子生物学和计算生物学的交叉学科。
目前，随着高通量测序技术和计算能力的迅猛发展，基因表达谱分析逐渐成为生命科学研究的重要领域。
一、基因表达谱的分析1、测定基因表达谱基因表达谱的测定主要有两种方法：芯片技术和转录组测序。
芯片技术是通过制备特定的DNA探针，然后将其固定到芯片表面，用于检测样品中的RNA，可以同时检测几百万个基因。
转录组测序则是通过高通量测序技术，对RNA进行测序，可以获取到全基因组的表达信息。
两种方法具有互补性，可以提供更为全面的基因表达谱信息。
2、处理基因表达谱数据分析基因表达谱数据的主要任务是将大量的原始数据转化为可解释和可视化的结果。
常用的数据处理方法包括以下几个步骤：（1）数据归一化：由于样品之间的RNA浓度和RNA种类的差异，需要进行数据归一化，以消除这些技术差异。
（2）差异分析：根据生物实验的目的，选择适宜的分析方法，比较不同样品在基因表达水平上的差异。
（3）聚类分析：聚类分析可以将相似的基因表达谱分为一组，便于发掘潜在的基因功能和作用途径。
二、基因表达谱的解读1、生物信息学分析基因表达谱数据的解析和生物信息学密切相关。
常见的生物信息学分析包括基因富集分析、通路富集分析和功能注释分析。
基因富集分析是通过将基因表达谱中显著性差异的基因与特定的基因功能数据库相比较，来鉴定具有显著富集的通路和生物过程。
通路富集分析则是将差异基因与已知通路或生物过程相匹配，以确定哪些通路或过程与表型变化相关。
2、机器学习方法机器学习是一种人工智能的分析方法，目的是从数据中挖掘模式和规律。
基于机器学习的基因表达谱分类方法可以将样本分为不同的亚型或状态，以进一步理解基因表达谱的生物学意义。
常见的机器学习方法包括支持向量机、随机森林和人工神经网络等。
机器学习方法通常需要多个数据集的共同验证，以确保分析的稳健性和可靠性。
基因表达的检测方法
基因表达的检测方法
基因表达的检测方法超厉害好不好！咱先说说常用的检测方法之一——实时荧光定量PCR。
嘿，这就好比在基因的世界里玩寻宝游戏。
步骤呢，先提取样本中的RNA，然后反转录成cDNA，接着进行PCR 扩增。
在这个过程中，可一定要注意样本的质量呀，要是样本被污染了，那可就糟糕啦！那安全性咋样呢？一般来说，只要操作规范，那是相当安全的。
稳定性也不错，只要仪器状态良好，结果就比较可靠。
这种方法的应用场景可多啦！可以检测疾病相关基因的表达水平，哎呀，这就像给疾病来了个大揭秘。
优势呢，灵敏度高、特异性强。
比如说在检测癌症相关基因表达的时候，能早早地发现问题，这多棒呀！
再说说蛋白质印迹法。
这就像是在基因的海洋里捞鱼。
先提取蛋白质，然后进行电泳、转膜、抗体孵育等步骤。
操作的时候可得小心，别弄出个啥差错。
安全性也还行，只要注意试剂的使用。
稳定性嘛，也有保障。
它可以用来检测特定蛋白质的表达水平，哇塞，这对于研究疾病机制可太重要啦！优势就是可以直观地看到蛋白质的表达情况。
比如在研究神经退行性疾病的时候，能帮助我们了解蛋白质的变化，多厉害呀！
基因表达的检测方法真的是科研和医学领域的超级利器。
它们能让
我们更好地了解生命的奥秘，为疾病的诊断和治疗提供有力的支持。
所以呀，大家一定要重视这些检测方法，让它们为我们的健康和科学研究发挥更大的作用。
基因克隆与表达的研究方法
基因克隆与表达的研究方法基因克隆和表达是生命科学中重要的研究方法，它们在基因工程、药物研发、癌症治疗等领域发挥着重要作用。
在克隆和表达一个基因之前，需要先建立一个可重复的实验方法，以确保实验结果的准确性和可靠性。
本文将介绍基因克隆和表达的一些通用方法和技术。
1. PCR扩增PCR扩增是一种常用的克隆方法，它可以在短时间内高效地扩增DNA序列。
这种方法需要一对引物，在PCR反应中引物定向扩增目标序列。
PCR反应需要一个DNA模板、引物和聚合酶，在合适的反应条件和温度下进行。
PCR扩增后的产物可以纯化、酶切、克隆到表达载体上。
2. 限制性内切酶消化限制性内切酶消化是一种分子生物学技术，可以将DNA分子切成不同的长度，并生成暴露的粘性末端。
这样的末端可以与其他的DNA分子的互补末端连接起来，从而实现DNA的克隆。
在DNA克隆中，选择合适的限制性内切酶可以实现目标DNA序列的克隆。
3. 匀浆凝胶电泳匀浆凝胶电泳是一种检测DNA大小的技术，它可以用于确认PCR扩增产物的大小，鉴定DNA克隆的有效性以及纯化DNA等。
在匀浆凝胶电泳中，DNA样品被负载到凝胶上，并在电场作用下迁移。
根据DNA分子大小的不同，可以通过在凝胶上形成特定的DNA带和条带，从而检测DNA分子的大小。
4. 蛋白表达的研究方法蛋白表达是生命科学研究中重要的实验方法，可以获得对生命过程和重要分子的深入了解。
在蛋白表达中，需要克隆一个给定的基因到一个特定的表达载体上。
表达载体中包含能够转录和翻译蛋白质所需的所有元件。
在表达系统中，可以使用细胞培养、原核生物、真核生物等不同的宿主来表达蛋白。
5. 功能分析的研究方法在获得基因克隆和表达蛋白之后，需要通过功能分析进一步了解目标基因和蛋白的生物学功能。
在功能分析中，常用的方法包括基因敲除、蛋白互作、基因组学、蛋白质修饰等。
通过这些方法，可以深入研究生物学体系的信号传导、调节机制、发育和疾病机制等问题。
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基因表达检测的最终技术目标是能确定所关注的任何组织、细胞的RNA的绝对表达量。
可以先从样本中抽提RNA，再标记RNA，然后将这些标记物作探针与芯片杂交，就可得出原始样本中不同RNA的量。
然而用于杂交的某个特定基因的RNA的量与在一个相应杂交反应中的信号强度之间的关系十分复杂，它取决于多种因素，包括标记方法、杂交条件、目的基因的特征和序列。
所以芯片的方法最好用于检验两个或多个样本中的某种RNA的相对表达量。
样本之间某个基因表达的差异性（包括表达的时间、空间特性及受干扰时的改变）是基因表达最重要的，而了解RNA的绝对表达丰度只为进一步的应用或多或少地起一些作用。
基因表达的检测有几种方法。
经典的方法（仍然重要）是根据在细胞或生物体中所观察到的生物化学或表型的变化来决定某一特定基因是否表达。
随着大分子分离技术的进步使得特异的基因产物或蛋白分子的识别和分离成为可能。
随着重组DNA技术的运用，现在有可能检测．分析任何基因的转录产物。
目前有好几种方法广泛应用于于研究特定RNA分子。
这些方法包括原位杂交．NORTHERN凝胶分析．打点或印迹打点．S－1核酸酶分析和RNA酶保护研究。
这里描述RT-PCR从RNA水平上检查基因表达的应用。
8 f3 f- |2 L) K) b7 ]- ~- |RT-PCR检测基因表达的问题讨论关于RT-PCR技术方法的描述参见PCR技术应用进展，在此主要讨论它在应用中的问题。
理论上1μL细胞质总RNA对稀有mRNA扩增是足够了（每个细胞有1个或几个拷贝）。
1μL差不多相当于50－100，000个典型哺乳动物细胞的细胞质中所含RNA的数量，靶分子的数量通常大于50，000，因此扩增是很容易的。
该方法所能检测的最低靶分子的数量可能与通常的DNAPCR相同；例如它能检测出单个RNA分子。
当已知量的转录RNA（用T7RNA聚合酶体外合成）经一系列稀释，实验结果表明通过PCR的方法可检测出10个分子或低于10个分子，这是反映其灵敏度的一个实例。
用此技术现已从不到1个philadelphia染色体阳性细胞株K562中检测到了白血病特异的MRNA的转录子。
因此没必要分离polyA+RNA，RNA/PCR法有足够的灵敏度来满足绝大多数实验条件的需要。
7 H+ F& _* S6 W( a8 p: [, @- d, {将PCR缓冲液同时用于反转录酶反应和PCR反应，可简化实验步骤。
我们发现整个反应过程皆用PCR缓冲液的结果相当于或优于先用反转录缓冲液合成CDNA，然后PCR缓冲液进行PCR扩增循环。
当然，值得注意的是PCR缓冲液并不最适合第一条DNA链的合成。
我们对不同的缓冲液用于大片段DNA 合成是否成功还没有进行过严格的研究。
反转录酶的选择似乎对实验方法成功与否并不十分重要。
BRL和BOEHRINGERMANNHEIM的MULV反转录酶进行全面的研究，但没有理由认为来源可靠的反转录酶不能适用于该方法。
在研究中，我们仅使用了PERKINELMER/CETUS公司生产的TAQ聚合酶。
cDNA第一条链的合成可用不规则六聚体、寡聚(dT)或PCR 下游引物来启动反应。
如果用寡聚(dT)，一般每次反应加0.1μL 就够了。
如果用下游寡核苷酸作为第一条链的起始引物，10-50pmol最为理想。
反转录反应以后，加入适量的上游和下游引物进行PCR反应与用不规则六聚体方法一样。
三种启动方法中无论用那一种最后得到的扩增产物都同样理想。
而加入不规则六聚体似乎更容易得到前后一致的结果，且靶序列的合成量通常最多(E.S.K.)加入不规则六聚体方法一样。
三种启动方法中无论用那一种最后得到的扩增产物都同样理想。
而加入不规则六聚体似站更容易得到事一致的结果，且靶序列的合成量通常最多(E.S.K.未发表)。
第一条链合成完毕，不必加碱或RNA酶以除去RNA模板。
95℃热处理使反转录酶失活，同时也使RNA-DNA 杂合子变性。
不必加碱或RNA酶以除去RNA模板。
95℃热处理使反转录酶失活，同时也使RNA-DNA杂合子变性。
残留的RNA模板似乎对PCR反应无干扰。
5 d' b" L& Q' \ y寻找使PCR反应产生良好扩增结果的最低浓度的寡核苷酸引物是十分重要的。
我们发现过量的引物通常会产生许多妨碍随后分析的额外扩增产物。
浓度为5pmol的引物可得到非常清晰及有效的扩增产物。
当然，最好是找到你要扩增的每个序列的最佳引物量。
没有必要用全部的cDNA反应产物进行PCR扩增。
可取等分量cDNA样品用几组不同的引物作PCR分析;例如:一份cDNA反应物可用于研究几种不同类型的RNA。
cDNA反应物通常用PCR缓冲液衡释5倍。
将cDNA的浓度隆低至0.2mM，此浓度更适于Taq聚合酶。
dNTP浓度不应超过0.2mM，因为较高浓度的dDTP使Taq聚合酶的错误掺入或突变率增高。
对于扩增来说，即使dNTP的浓度低到0.05mM也不会出现问题。
' R7 z) H' u1 ]( }镁离子浓度对反应十分重要，因此应注意将镁的摩尔浓度保持恒定。
有时核酸溶于含1mMEDTA的缓冲液中，EDTA可歼螯合大多数镁离子。
通常，PCR反应中游离镁离子浓度应保持在2mM。
将PCRA循环次数减少，不可避免地产生许多非特异性的扩增产物。
很容易将长度不同的DNA的扩增。
即使基因组序列得到扩增，当引物与大小不同的外显子结合时，很容易将长度不同的MRNA与基因组的产物区别一来。
如果不了解基因组的结构，选用与5"编码基因间隔300-400bp的引物，脊椎动物的外显子很少大于300-400bp，因此很容易从不同的外显子中导出引物。
如果所研究的基因无内含子、或者研究完整原病毒RNA转录，为了获得有关PCR的结果有必要用DNA酶彻底处理RNA。
只要有很少量的基因组DNA污染，用此方法分析就会出现假阳性结果。
9 @9 o- ]( v; U N# ]% r$ h~9 |- L1 i7 ]( _+ `- h实际应用举例}/ W" [1 T. m$ P0 F$ M+ x基因表达检测8 p. z L9 A' G7 J" Q c8 q7 X用该方法先后扩增，检测了许多不同类型的细胞、组织和器官的mRNA。
当然，仅仅检测mRNA并没有新颖之处，它的新颖在于能对10-1000个细胞的RNA进行分析。
所需起始物质比通常的低很多，这使得研究者能设计并进行以前看是不可能进行的实验。
例如研究血细胞生成的研究人员经常用群体分析确定生长因子或环境对特殊细胞系发育的影响。
经常部到的一个问题是:群体细胞产生的何种生长/分化因子会影响其本身的发育。
现在可以确信，利用RNA/PCR技术能够对数百个群体的mRNA对任何与生长或分化有关的因子进行分析。
而用常规的杂交或抗体检测方法来分析它们是极其因难、甚至是不可能的。
RNA/PCR 技术在研究转基因动物方面将非常有用。
我们常常不仅要知道在动物体内转移的基因是否表达，而且要知道是在哪些细胞．组织或器官中表达。
随着RNA/PCR检测灵敏度的提高，能够检测转基因动物的多个部位而不必为取样而将它处死。
我们还可以列举许多这样的例子，但我们留给读者一些有关检测方面的设想。
4 ^$ i k2 N2 N, s( q用于诊断的RNA序列的扩增' n. u6 Y& `! m: g( |/ Z" j# i' V7 _. l" f. h, e. M在许多情况下，一个特异性的RNA分子可作为感染或遗传/癌疾病的诊断。
在反转录病毒疾病领域中，检测与具有侵染活性密切相关的反转录病毒RNA基因组或特异转录子是否存在是非常重要的。
现已对HIV-1病人，HTLV-1，2以及MoloneyMulV 的细胞株进行了研究。
也可以用RNA/PCR比较容易地检测出常见的感冒病毒即人鼻病毒。
对RNA和DNA病毒的RNA转录子的分析有利于对病毒的潜伏期，复制期等生活周期进行研究。
) T0 @% v7 C5 O7 z' _! ?- l$ W) p9 {+ p5 w) }在某些类型的癌细胞中有新的mRNA表达。
如慢性骨髓性白血病(CML)．某些急性淋巴白血病(ALL)和急性骨髓白血病(AML)，只在病人的白细胞中发现有嵌合的mRNA(BCR-ABL)。
此嵌合mRNA是诊断此类疾病存在的良好依据。
在许多肿瘤的治疗过程中，肿瘤细胞对化学治疗具有抗性。
DNA水平的扩增并不一定导致表达的增加，但大量相应的mRNA的存在则使表达增加。
DNA水平的扩增并不一定导致表达的增加，但大量相应的cDNA的存在则使表达增加。
用RNA/PCR方法来分析复合抗药性(MDR)10基因和胸腺核苷酸合成酶(TS)基因，发现了这mRAN水平的增高.突变的RAS原癌基因的mRNA分析(见参考文献25综术述)在癌症的诊断或预测方面具有诊断价值。
mRNA分析比常规的DNA基因组分析有优越之处。
由于没有内含子序列干扰mRNA的扩增，因此可以仅用一组引物就能够扩增H-，K-，和N-RAS三个mRNA序列(E.S.K，未发表)。
这样便可以比较容易地检测出第12、13和61密码的突变，这些突变被认为是发生癌的原因。
癌症诱因的检测3 j. s) S/ \' v' f; g在下面将列举数个RNA/PCR扩增方法的主要应用。
首先是对鼠鸟氨酸氨甲栈基转移酶mRNA进行亚克隆来确定缺失点突变的位置。
同样，该方法可用于检测哺乳动物细胞mRNA转录后的剪接，研究与HLA疾病相关性因素，分析人HPRT突变，研究自身免疫与T细胞受体序列之间的关系，分析人碱性磷酸脂酶的突变，研究土拨鼠肝炎病毒引发的c-myc活性，确定刺桐丁蛋白4.1mRNA的剪接变异，等等。
6 p/ l$ I6 ~5 W' E5 ^; U9 a$ \根据已发表的序列合成扩增mRNA的引物，我们发现用RNA/PCR是获取cDNA的最简便的方法。
用在5"末端带有限制性内切酶位点的引物来扩增mRNA的一部分或全部编码区域。
扩增后，PCR产物经合适的酶切并与适于表达的载体连接或制备成探针。
按此方法可在一星期内完成从RNA样品到用于高效表达的修饰cDNA克隆.这比常规的合成/筛选cDNA库，亚克隆靶cDNA，为达到表达目的而对克隆进行诱变等过程要简单得多。
区别主要在于用于扩增和分离cDNA克隆的引物为简并引物。
引物序列是根据氨基酸的序列而定的，因此当只知道很少的蛋白质序列时，就有可能扩增特异的RNA分子。
当只知一个内部序列时，只用一个基因特异性寡核苷酸引物，也可用PCR 从稀有mRNA中分离出cDNA。