全血PCR直接扩增技术在亚甲基四氢叶酸还原酶基因C677T多态性分析中的应用
乳腺癌亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性的临床意义
乳腺癌亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性的临床意义马素刚;陈万军;孙德峰;王学利;张云龙【期刊名称】《中国现代普通外科进展》【年(卷),期】2022(25)10【摘要】目的:探讨乳腺癌亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)基因多态性的临床意义。
方法:收集54例乳腺癌女性患者血液样本(研究组)和93例正常女性血液样本(对照组),均进行DNA提取、PCR扩增、DNA限制性片段长度多态性分析。
分析MTHFR C677T、A1298C基因型在乳腺癌女性和正常女性中的分布差异。
结果:PCR-RFLP法检测显示,MTHFR基因野生型纯合子CC(198 bp)只有1条带,MTHFR杂合子CT(198 bp、175 bp)产生2条带,MTHFR变异型纯合子TT(175 bp)只有1条带。
研究组MTHFR 677CC、677CT和677TT基因型频率分别为37.04%、51.58%和11.11%,677C、677T等位基因频率分别为62.96%、21.51%;对照组MTHFR 677CC、CT和TT基因型频率分别为34.41%、48.39%和17.20%,677C、677T等位基因频率分别为37.04%、41.40%。
两组MTHFRC677T基因型频率和等位基因频率比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。
研究组MTHFR 1298AA、AC、CC基因型频率分别为62.96%、33.33%、3.70%,等位基因1298AA、1298CC的频率分别为79.63%、20.37%;对照组MTHFR 1298AA、AC、CC基因型频率分别为60.22%、34.41%、5.38%,等位基因1298AA、1298CC的频率分别为77.42%、22.58%。
两组MTHFR A1298C基因型频率和等位基因频率比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。
两组C677T与A1298C的组合基因型频率比较差异均无统计学意义(P>0.05),各基因型、组合基因型与乳腺癌易感性之间均无明显相关性。
叶酸代谢能力评估及亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性检测试剂盒性能验证
叶酸代谢能力评估及亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性检测试剂盒性能验证许晔琼;赵一琳;高曼秋【期刊名称】《实用检验医师杂志》【年(卷),期】2024(16)1【摘要】目的对江西诺德医疗器械有限公司生产的叶酸代谢能力测定试剂盒进行性能验证,评估该试剂盒能否满足江苏省常熟地区患者对亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)基因A1298C(rs1801131)及C677T(rs1801133)两个多态性位点的检测需求。
方法收集10例临床样本进行测序,将结果作为“金标准”,同时采用实时荧光聚合酶链反应(PCR)对标本的MTHFR基因多态性位点进行检测,与“金标准”结果比较,验证试剂盒的准确性。
选择测序确定的C677T多态性位点CC及TT基因型标本各1份,A1298C多态性位点AA及CC基因型标本各1例,重复测定5次以验证试剂盒的精密度。
同时对以上4份不同基因型的标本进行DNA浓度测定,根据试剂盒说明书中的性能描述,稀释至最低检出浓度5 mg/L,每例标本各检测3次,要求基因分型结果一致且符合测序分型结果,验证试剂盒的检测下限。
结果所有标本的MTHFR基因多态性位点检测结果与测序结果完全一致,准确率达到100%;对不同基因型的4例标本反复检测5次的结果完全一致,且循环阈值(Ct值)的变异系数(CV)≤5%;而稀释到检测下限的4例标本经过3次重复检测后,仍能准确进行基因分型。
结论采用MTHFR基因A1298C及C677T两个多态性位点检测试剂盒进行基因分型的结果准确、稳定、可靠,能满足实验室对MTHFR基因多态性检测的要求。
【总页数】5页(P73-77)【作者】许晔琼;赵一琳;高曼秋【作者单位】常熟市医学检验所【正文语种】中文【中图分类】R73【相关文献】1.叶酸受体α在胃癌组织中的表达及其与叶酸、亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性以及胃癌生物学行为的关系2.叶酸代谢关键限速酶亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性与宫颈癌的关系3.亚甲基四氢叶酸还原酶基因及甲硫氨酸合成酶基因多态性与口服叶酸治疗高同型半胱氨酸血症疗效的关系研究4.四氢叶酸与叶酸对亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性人群妊娠结局影响5.亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性在产前筛查前的性能验证因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
定西市孕早期妇女叶酸代谢基因多态性检测报告
叶酸是一种水溶性B 族维生素，是人体所需的重要营养素。
叶酸具有母胎保护作用。
妊娠期叶酸缺乏与胎儿畸形的发生及不良妊娠结局密切相关。
有研究显示：妊娠早期叶酸缺乏主要导致胎儿畸形的发生，而妊娠中晚期叶酸缺乏，孕妇易发生胎盘早剥、妊娠期高血压疾病，胎儿易发生生长受限、早产、低出生体重甚至死胎[1]。
因此，为了有效降低胎儿发生神经管畸形、心脏缺陷等多种出生缺陷的风险以及妊娠相关疾病的风险，围孕期增补叶酸是非常必要的。
妊娠期妇女由于其自身的生理特点，对叶酸的需求量增加，还有因叶酸代谢基因异常引起的叶酸利用能力先天不足，更易发生叶酸缺乏。
因此，研究叶酸代谢酶亚甲基四氢叶酸还原酶MTHFR 基因多态性具有重要意义。
虽然有关MTHFRC677T 基因多态性的研究报道很多，但是，定西市孕早期妇女叶酸代谢基因多态性的研究尚未被报道。
本文通过检测定西市孕早期妇女的MTHFRC677T 基因多态性及基因频率分布情况，探讨其与叶酸代谢能力之间的关系。
【摘要】 目的 探讨孕早期妇女MTHFRC677T 基因多态性与叶酸代谢能力之间的关系。
方法 选择2019年12月至2021年9月在定西市人民医院围产中心做产检的1482例孕早期妇女作为研究对象，抽取静脉血，提取全血中的DNA，使用PCR_实时荧光法进行检测MTHFRC677T 基因多态性，分析基因频率分布情况。
结果 1482例孕早期妇女的MTHFRC677T 基因有3种类型，分别为野生型CC、杂合突变型CT、纯合突变型TT，各基因型频率分布依次为CC23.82%、CT48.76%、TT27.40%。
结论 定西市孕早期妇女MTHFRC677T 基因存在多态性，根据检测结果评估叶酸代谢障碍风险等级，指导高危孕妇合理补充叶酸，为本市预防和干预新生儿出生缺陷以及不良妊娠结局的发生提供可靠依据。
【关键词】 孕早期妇女；亚甲基四氢叶酸还原酶；叶酸代谢；基因多态性中图分类号 R71 文献标识码 A 文章编号 1671-0223(2022)02-038-02定西市孕早期妇女叶酸代谢基因多态性检测报告陈芳兰作者单位：743000 甘肃省定西市人民医院达到止血的目的[8]。
MTHFR基因C677T多态性与习惯性流产的关联性分析
MTHFR基因C677T多态性与习惯性流产的关联性分析张家颖;左文静;武广恒;孙赫彤【摘要】目的:探讨亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)基因C677T多态性与中国东北地区人群习惯性流产的关系,阐明其可能发生的分子基础,为该病基因诊断及易感人群的预防、治疗和预后提供新思路.方法:应用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法检测50例有生育史健康妇女(对照组)和56例习惯性流产女性(病例组)的MTHFR基因C677T多态性.结果:MTHFR基因C677T存在CC、CT 和TT3种基因型.病例组CC、CT和TT基困型频数分布与对照组比较差异有显著性(X2=6.254,P=0.044),TT与CC基因型频数分布比较差异有显著性(X2=6.345,P=0.012),TT与CT基因型频数分布比较差异无显著性(X2=2.099,P=0.147).病例组T等位基因频数分布与C等位基因频数分布比较差异有显著性(X2=7.054,P=0.008,OR=2.098,95%CI:1.210～3.636).结论:MTHFR基因C677T多态性与中国东北地区人群习惯性流产有关联,T等位基因可能是习惯性流产遗传易感因素之一.【期刊名称】《吉林大学学报（医学版）》【年(卷),期】2009(035)004【总页数】4页(P698-701)【关键词】习惯性流产;亚甲基四氢叶酸还原酶;C677T多态性【作者】张家颖;左文静;武广恒;孙赫彤【作者单位】吉林大学基础医学院生物化学与分子生物学实验中心,吉林,长春,130021;吉林大学基础医学院生物化学与分子生物学实验中心,吉林,长春,130021;吉林大学基础医学院生物化学与分子生物学实验中心,吉林,长春,130021;吉林大学基础医学院生物化学与分子生物学实验中心,吉林,长春,130021【正文语种】中文【中图分类】R345.2习惯性流产(habitual abortion)是指自然流产2次或2次以上者(约70%孕期不满12周流产)，国际上多称之为复发性自然流产(recurrent spontaneous abortion)，临床发病率约2%～5%[1]。
2020《H型高血压》答案
H型高血压：心脑血管疾病防治的精准医学之路试题正确答案如下：H型高血压：心脑血管疾病防治的精准医学之路选择题（共10 题，每题10 分）1 . （单选题）如果高血压患者，血液中的同型半胱氨酸（Hcy）高于或等于()，就可以称之为H型高血压。
“H型高血压”是最容易发生脑卒中的高血压，“H”一语双关，既指hypertension（高血压），又指Hcy升高。
我国3亿高血压患者中，()为“H型高血压”A .10umol/L，75%B .15umol/L，75%C .10umol/L，80%D .12umol/L，90%2 . （单选题）亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR) 是同型半胱氨酸代谢的关键酶之一，其677位点有三种基因分型：()，研究发现，MTHFR C677T 突变可使酶活性明显下降，使得甲基供体的生成不足，体内的Hcy代谢异常，从而导致Hcy浓度的()A .CC，CT，TT，降低B .AA，AC，CC，降低C .CC，CT，TT，升高D .AA，AC，CC，升高3 . （单选题）大量研究表明， Hcy升高是导致心脑血管事件，尤其是脑卒中发生的一个重要危险因素。
2002年BMJ的一项荟萃分析：Hcy 每升高()，缺血性心脏病风险升高()，脑卒中风险增加()；Hcy 每降低()，缺血性心脏病风险降低()，脑卒中风险降低()A .5μmol/L ，33%，59%；3μmol/L ，16%，24%；B .5μmol/L ，16%，24%；3μmol/L ，33%，59%；C .3μmol/L ，33%，59%；5μmol/L ，16%，24%；D .5μmol/L ，16%，24%；3μmol/L ，33%，59%；4 . （单选题）马来酸依那普利叶酸片（简称依叶）是目前国内外唯一治疗伴有血Hcy水平升高的高血压的药物。
依叶是首个作用于多靶点，具有同时降压、降Hcy水平、提高叶酸水平特点的单片复方制剂，控制卒中风险的最佳叶酸剂量为()A .0.4mg/dB .0.8mg/dC .1mg/dD .5mg/d5 . （单选题）中国脑卒中一级预防研究（CSPPT）是迄今为止世界上首个以脑卒中为主要终点，遵照国际标准进行的一项大型、随机、双盲对照临床研究。
MTHFR基因C677T多态性与冠心病患者血浆同型半胱氨酸和叶酸水平相关
MTHFR基因C677T多态性与冠心病患者血浆同型半胱氨酸和叶酸水平相关胡小平;刘春莲;武玲;戴晓婧;彭亮;焦海燕;陈银涛【摘要】目的研究宁夏地区汉族人群5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶基因(MTHFR)C677T多态性、同型半胱氨酸水平(Hcy)及叶酸水平与冠心病(CHD)的相关性.方法用病例-对照研究方法、应用限制性片段长度多态性扩增技术(PCR-RFLP)分析宁夏地区汉族202例冠心病患者及199例正常人群MTHFR C677T基因型频率及基因频率的分布特点.荧光偏振免疫分析法测定血浆Hcy水平,化学发光免疫分析法测定血清叶酸、VitB12浓度.结果 (1)病例组与对照组MTHFR C677T基因型频率分别为CC型23.3% vs 20.7%、CT型52.3%vs 54.5%和TT型24.4%vs24.8%,两组间基因型及等位基因频率分布无差异.(2)冠心病患者组中MTHFR基因C677T CC基因型患者血浆Hcy浓度(10.84 μmol/L)较T基因携带者(12.24μmoL/L)低(P<0.01).CC基因型患者血浆叶酸浓度(5.38μg/L)较T基因携带者(3.72μg/L)高(P<0.05).结论 MTHFR C677T的3种基因型频率在宁夏汉族冠心病患者和正常人群中的分布无统计学意义.MTHFR基因C677T多态性与冠心病的危险因素Hcy水平、叶酸水平相关.%Objective To investigate the correlation between methylenterahydrofolate reductase (MTHFR) geneC677T polymorphism, homocysteine (Hcy), folate and coronary heart disease (CHD) in the Han population of Ningxia region. Methods In this case-control study, we selected 202 patients with CHD and 199 healthy controls in Han population from Ningxia. The gene polymorphism of MTHFR C677T was detected by PCR-RFLP assay.Plasma Hcy concentrations were measured by fluorescence polarization immunoassay (FPIA) andserum folate and vitamin B12 concentrations by chemiluminescent immuno assay (CLIA). Results ( 1 ) In CHD and controlgroups,thefrequencies ofMTHFR C 6 7 7 T genotype were CC( homozygous wild ) 23.3％ vs 20. 7％, CT ( heterozygous ) 52. 3％ vs 54. 5％and TT (homozygous mutant) 24.4％ vs 24. 8％ respectively. There was no difference in the genotype and allele frequency distribution of MTHFRC677T polymorphism between two groups. (2) In CHD group, the plasma Hcy concentration of individuals with CC genotype was lower than that ofT allele carriers ( 10. 84 μmol/L vs 12. 24 μmol/L, P ＜ 0. 01 ). The plasma folate concentration of individuals with CC genotype was higher than thatof T allele carriers (5.38 μg/L vs 3.72 μg/L, P =0. 01 ). Conclusion There was no significant difference between CHD patients and healthy people in genetic polymorphism of MTHFR C677T in Hah population of Ningxia. The polymorphism of MTHFR C677T was related to the level of plasma Hcy and folate, which may function as a potential risk factor of CHD.【期刊名称】《基础医学与临床》【年(卷),期】2011(031)007【总页数】4页(P773-776)【关键词】冠状动脉疾病;5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶;基因多态性【作者】胡小平;刘春莲;武玲;戴晓婧;彭亮;焦海燕;陈银涛【作者单位】宁夏医科大学省部共建生育力保持教育部重点实验室,宁夏,银川,750004;宁夏医科大学医学遗传学与细胞生物学系,宁夏,银川,750004;宁夏医科大学第一附属医院,宁夏,银川,750004;宁夏医科大学第一附属医院,宁夏,银川,750004;日本东京大学,日本,东京,113-0033;宁夏医科大学省部共建生育力保持教育部重点实验室,宁夏,银川,750004;宁夏医科大学医学遗传学与细胞生物学系,宁夏,银川,750004;宁夏医科大学省部共建生育力保持教育部重点实验室,宁夏,银川,750004;宁夏医科大学医学遗传学与细胞生物学系,宁夏,银川,750004;宁夏医科大学省部共建生育力保持教育部重点实验室,宁夏,银川,750004;宁夏医科大学医学遗传学与细胞生物学系,宁夏,银川,750004【正文语种】中文【中图分类】R541.4冠心病(coronary heart disease，CHD)是威胁人类健康的重要疾病。
PCR-荧光探针法检测MTHFR C677T基因多态性及其与复发性流产的相关性
PCR-荧光探针法检测MTHFR C677T基因多态性及其与复发性流产的相关性白微;唐少华【摘要】目的:探讨温州地区复发性流产与5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶(M T HFR)C677T多态性的相关性.方法 :回顾性分析2015年6月～2016年6月某院中医妇科保胎住院患者188例,根据自然流产病史分为对照组和RS A组.无自然流产史及无其他不良妊娠史且生育过健孩为对照组,连续自然流产2次及以上为RSA组,利用PCR-荧光探针法检测M T HFR C677T基因型,分析该方法的性能,比较RSA 组和对照组基因型、等位基因的分布频率,分析M T HFR 677T与RSA的关系.结果 :M T HFR C677T三种基因型及等位基因在对照组中的分布频率分别为CC(41.4％)、CT(46.5％)、TT(12.1％)和C(65.7％)、T(32.3％);在RSA组中的分布频率分别为CC(37.5％)、CT(38.9％)、TT(23.6％)和C(56.9％)、T(43.1％),两组中的分布差异无统计学意义.结论 :尚不能认为温州地区M T HFR C677T基因多态性与复发性流产具有相关性.【期刊名称】《数理医药学杂志》【年(卷),期】2019(032)006【总页数】3页(P868-870)【关键词】复发性流产;5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶;PCR-荧光探针法【作者】白微;唐少华【作者单位】温州市中医院;温州医科大学温州325000【正文语种】中文【中图分类】R34复发性流产(recurrent spontaneous abortion,RSA)，是指自然流产连续2次或2次以上，在全世界范围内其发生率为1%～2%，在中国其发生率高达5%。
复发性流产的病因复杂，包括遗产因素、生殖道解剖异常、免疫因素、内分泌因素、感染因素等，还有部分原因不明。
5，10-亚甲基四氢叶酸还原酶(methylenetetra hydrofolate reducta，MTHFR)是叶酸代谢中的一个重要的酶，可将5,10-亚甲基四氢叶酸转化为具有生物学功能的5-甲基四氢叶酸。
MTHFR基因C677T、A1298C双位点检测在男性不育症中的应用
新疆医学 XINJIANG MEDICAL JOURNAL
Vol.49 No.4 April.2019
·短篇论著·
MTHFR 基因 C677T、A1298C 双位点检测在男性不育症中的 应用
宋 娜，张 丹，苏滕艳，黄卫东
（新疆佳音妇产医院， 新疆乌鲁木齐 830000）
SONG Na， ZHANG Dan， SU Tengyan， HUANG Weidong
（Xinjiang Jiayin Maternity Hosptial, Urumqi, Xinjiang 830000, China）
Abstract：Objective To explore the application of double locus detection of methylenetetrahydrofolate reductase（MTHFR） C677T and A1298C in male infertility. Methods A retrospective analysis was performed on 100 male infertility patients admitted to our infertility clinic from January 2018 to August 2018 and 100 healthy men who were examined at the same time. The genotypes of C677T and A1298C were detected by fluorescence quantitative PCR, and the folic acid metabolism capacity of C677T, A1298C double locus detection and C677T unit point detection were compared by χ2 test. Results There were statistically significant differences between C677T, A1298C and C677T in folate metabolism in male infertility and healthy population （P < 0.05）. Conclusion the detection of C677T and A1298C can reduce the activity of MTHFR gene. Screening for male infertility with low folic acid metabolism.
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全血PCR 直接扩增技术在亚甲基四氢叶酸还原酶基因C677T多态性分析中的应用刘冉1，尹立红1*，浦跃朴1，周国华2，王仪3，潘恩春3，杨文洲3摘要： ［目的］ 应用全血PCR 直接扩增技术检测淮安汉族人群亚甲基四氢叶酸还原酶基因MTHFR C 677T 多态性并分析其地理分布特征，评价该技术在大规模现场人群基因多态性筛检中的应用价值。
［方法］ 应用全血PCR 直接扩增技术分析205例淮安汉族健康个体MTHFR C677T 的基因型分布频率，并与传统的聚合酶链反应—限制性片段长度多态性（Polymerase chain reaction and restriction fragment length polymorphism ，PCR-RFLP ）技术检测结果进行比对。
并将检测结果与已报道的不同地区汉族人群资料进行比较。
［结果］ 全血PCR 直接扩增技术与传统PCR-RFLP 法测定MTHFR C677T 多态性的分布频率具有高度一致性（Kappa =0.946，95%CI ：0.906~0.985）。
结果表明淮安汉族人群MTHFR C677T 的基因型频率分别为CC 32.68%、CT 46.83%、TT 20.49%；C 和T 等位基因频率分别为56.10%和43.90%；结合其他9个地区的汉族人群MTHFR 677T 等位基因频率的趋势性χ2检验，发现MTHFR 677T 的分布随地理纬度的降低，T 等位基因频率也降低（P =0.001）。
［结论］ 全血PCR 直接扩增技术简便易行，适用于人群基因多态性的快速筛检。
在所研究的10个中国汉族人群中MTHFR C677T 多态性显示与不同地理纬度的地区分布有统计学相关性。
关键词：外周血；亚甲基四氢叶酸还原酶；单核苷酸多态；筛检技术MTHFR C677T Polymorphism Rapidly Detected with Direct Ampli fi cation Protocol in Peripheral Blood Samples LIU Ran 1，YIN Li-hong 12*，PU Yue-pu 1，ZHOU Guo-hua 2，WANG Yi 3，PAN En-chun 3，YANGWen-zhou 3（1.School of Public Health ，Southeast University ，Jiangsu Nanjing 210009，China ；2.Huadong Research Institute for Medicine and Biotechnics ，Jiangsu Nanjing 210002，China ；3.Huaian Center for Disease Control and Prevention ，Jiangsu Huaian 223001，China ）Abstract ：［Objective ］ To examine the frequency distribution of methylenetetrahydrofolate reductase （MTHFR ）C677T polymorphisms in Huaian Han population and to evaluate the application of Direct Amplification Protocol for detecting genetic polymorphisms in population. ［Methods ］ Polymorphisms of MTHFR C677T in 205 Huaian Han healthy volunteers was detected with Direct Amplification Protocol and RFLP technique ，respectively. The frequency of MTHFR C677T gene types was compared with other Han population data from different areas in China. ［Results ］ There was high consistency of MTHFR C677T polymorphisms between the method with blood sample and with genomic DNA （Kappa =0.946，95%CI 0.906~0.985）. The frequencies of the C/C ，C/T and T/T genotypes in the subjects were 32.68%、46.83% and 20.49% respectively ，and the allele frequencies of 677C and 677T were 56.10% and 43.90% respectively. The analysis of MTHFR 677T allele frequency with Han population in other nine different areas in China showed the distribution of MTHFR 677T was decreased with geographical latitude （P =0.001）. ［Conclusion ］ The frequency of the genetic polymorphisms of MTHFR C677T in Chinese Han populations from different areas depends on geographical latitude. The MTHFR C677T distribution of Huaian Han population group is consistent with the model of population groups with the latitude range between N30° and N35°. Direct Amplification Protocol in peripheral blood samples is a good system of direct PCR amplification with blood sample for rapid identification of genetic polymorphisms.Key Words ：peripheral blood ；methylenetetrahydrofolate reductase ；single nucleotide polymorphism ；screening基金项目：国家自然科学基金资助项目（编号：30571540，30671732）作者简介：刘冉（1974-），女，博士生，研究方向：肿瘤环境基因组学*通讯作者（Correspondent author）：尹立红教授，E -mail：lhyin@. cn 作者单位：1.东南大学 公共卫生学院，江苏 南京 210009；2.华东医学生物技术研究所，江苏 南京 210002；3.江苏省淮安市疾病预防控制中心，江苏 淮安 223001文章编号:1006-3617(2007)01-0021-04 中图分类号:R735.1；R394-33 文献标识码:A【论著】亚甲基四氢叶酸还原酶（ methylenetetrahydrofolate reductase，MTHFR）是叶酸代谢中的关键酶之一，它可将还原型辅酶I（NADPH）相关的5，10-亚甲基四氢叶酸还原为5-甲基四氢叶酸［1］。
前者生物学作用为细胞内一碳基团的传递体，参与嘌呤和嘧啶的合成及DNA 修复过程；后者作为甲基供体，在甲硫氨酸合成酶的催化下，同型半胱氨酸接收甲基基团，生成蛋氨酸，并进一步复甲基化为S -腺苷甲硫氨酸，参与体内广泛的甲基化反应。
这一代谢途径的正常运转在维持DNA 正常甲基化和核苷酸从头合成以及DNA 损伤修复是至关重要的［2］。
目前研究发现MTHFR基因在人群中具有多态性，C677T是最常见的突变，导致高度保守的丙氨酸突变为缬氨酸，降低黄素腺嘌呤二核苷酸（FAD）与MTHFR结合能力，影响MTHFR的酶活性和热稳定性［3］，可能与神经管缺陷、心脑血管疾病和部分癌症发生的遗传易感性有关。
目前单核苷酸多态（single nucleotide polymorphism，SNP）的检测多采用外周血样本提取的基因组DNA，由于该方法不适于现场操作，且受到样本保存条件和DNA提取效果的限制，在大规模人群SNP筛检中不易推广。
本研究采用的全血PCR直接扩增技术，应用特殊的缓冲体系Cocktail PCR Buffer［4，5］，可用全血样本直接进行PCR反应，克服了传统PCR反应对DNA样本的要求高的不足，简化了操作过程，降低了研究成本和技术复杂性。
本研究对随机抽取的江苏淮安205例健康体检者采用全血PCR直接扩增技术检测MTHFR C677T的聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（Polymerase chain reaction and restriction fragment length polymorphism，PCR-RFLP），并与以DNA为模板的传统PCR-RFLP方法进行比较，评价全血PCR直接扩增技术在大规模现场人群易感基因筛检中的应用价值。
同时，为进一步认识MTHFR第677位点多态性在中国汉族人群中的分布特征，我们结合已报道的9个不同地区汉族人群MTHFR C677T多态性资料，对MTHFR C677T多态与地理分布的关系进行分析，以了解影响叶酸代谢个体差异的因素，为进一步研究其与相关疾病的关系提供依据。
1 材料和方法1.1 研究对象随机抽取江苏淮安常住居民中健康体检汉族个体205名，男性127名，女性78名，年龄17~80（41.44±14.10）岁，调查研究对象的一般情况和吸烟、饮酒习惯，经调查对象知情同意后，同时抽取外周静脉血5 ml，EDTA抗凝，混匀后-20℃保存备用。
1.2 基因型分析1.2.1 MTHFR的全血PCR直接扩增留取外周全血样本1 ml直接用于包含MTHFR C677T多态位点的目的片段扩增。
引物序列：上游引物5′TGA AGG AGA AGG TGT CTG CGG GA 3′；下游引物5′AGG ACG GTG CGG TGA GAG TG 3′；PCR反应体系：包括用于全血PCR反应的Cocktail PCR Buffer 3.93 μl，dNTP 200 μmol/L，引物1 μmol/L，Taq酶1.25 U，加水补充至24 μl，混匀，12 000g离心5 s后加入全血模板1μl。