硅藻的培养

常用培养基的配置
f/2 Medium
(Guillard & Ryther 1962, Guillard 1975)
向950 mL过滤海水中加入下列物质：
Quantity 1 mL
Compound NaNO3
Stock Solution
Molar Concentration in Final Medium
常用培养基的配置
K Trace Metal Solution (Keller et al. 1987)
向 900 mL 蒸馏水中加入下列物质:
Quantity Compound Stock Solution Molar Concentration in
Final Medium
41.6 g Na2EDTA ·2H2O
注意事项
培养在适宜的温度、盐度、光照条件以及 光周期下。
不同培养目的采用不同的培养方法，封闭 培养或是半连续培养。
不同研究目的选择不同培养基以及控制培 养基添加比例。对于特殊要求添加特殊培 养基。
关于细胞计数。 单种培养和混合培养。
注意事项
细胞计数
不论是封闭培养还是半连续培养，研究过程中都需要对藻 液进行细胞计数以观察其生长。计数方法有显微计数和仪器 计数。显微计数要求藻液浓度较高，藻液浓度低时计数误差 较大。仪器计数有多种仪器可以选择，流式细胞仪，颗粒计 数仪等。考虑到硅藻的复大孢子繁殖，使用仪器计数某些硅 藻时可能会出现不同程度的偏差。出现不同的峰。此时，选 取合适的粒径范围进行计数非常重要。
常用培养方式
分批培养(batch culture) 在一个相对独立密闭的系统中，一次性投入培养基
对微生物进行接种培养的方式一般称为分批培养 (batch culture) 。由于它的培养系统的相对密闭性， 故分批培养也叫密闭培养( closed culture ) 。 分批培养特点： 1）操作简单。培养系统属于封闭式，培养过程中 除了控制温度和光强外，不进行其他任何控制。 2）直观反映细胞生长代谢的过程。分批培养中， 细胞的生长分为4个阶段：迟缓期,对数期、稳定期 及衰亡期。 3）培养周期短，染菌和细胞突变的风险小。
有些种类藻细胞呈链状链结，不能使用仪器计数，只能显 微计数(例如Skeletonema costatum )。
注意事项
单种培养和混合培养
做单种研究时为纯种培养，培养不能混入杂藻以及其他生 物。培养基添加以及接种操作都需要在无菌环境下进行。初 始接种密度不能太低，根据培养目的可以为100cells/ml左右。
向950 mL过滤海水中加入下列物质：
Quantity
Compound
1 mL 1 mL 1 mL
1 mL* 1 mL 1 mL 1 mL
0.5 mL
NaNO3 NH4Cl beta-glycerophosphate
Na2SiO3 ·9H2O* H2SeO3 Tris-base (pH 7.2) K trace metal solution
f/2 vitamin solution
Stock Solution
Molar Concentration in Final Medium
75 g/L dH2O 2.68 g/L dH2O 2.16 g/L dH2O
30 g/L dH2O* 1.29 mg/L dH2O 121.1 g/L dH2O (see recipe below)
75 g/L dH2O
8.83 x 10-4 M
பைடு நூலகம்
1 mL
NaH2PO4 ·H2O
5 g/L dH2O
3.63 x 10-5 M
1 mL *
Na2SiO3 ·9H2O*
30 g/L dH2O*
1.07 x 10-4 M*
1 mL
f/2 trace metal solution
(see recipe below)
做竞争性实验时为混合培养，培养同样不能混入杂藻以及 其他生物。需要无菌环境下培养基添加以及接种操作。初始 接种浓度以及比例要确定，一般混合培养接种比例计算按照 相同生物量，也就是“细胞数⨯细胞体积”相等。
作为饵料培养
硅藻也常常作为饲养植食性浮游动物的饵料。因此在实验 室也可作为饵料培养。作为饵料培养时，一般要求很高的浓 度，50万cells/ml以上。所以要求培养基中各营养盐充足， 并且在适宜的温度光照下进行。有时候由于培养水质的恶化， 藻细胞长不起来，从而影响浮游动物的饲养。这时为满足需 要可以进行藻液的浓缩。
1 mL
MnCl2 ·4H2O
180.0 g/L dH2O
1 x 10-8 M
1 mL
CuSO4 ·5H2O
9.8 g/L dH2O
1 x 10-8 M
加蒸馏水至最终体积为 1L，高压灭菌。
实验室常用硅藻培养
三 角 褐 指 藻 Phaeodactylun tricornutum 威 氏 海 链 藻 Thalassiosira weissflogii 假微型海链藻 Thalassiosira pseudonana 中 肋 骨 条 藻 Skeletonema costatum
-
0.5 mL
f/2 vitamin solution
(see recipe below)
-
加过滤海水直到最终体积为1L，高压灭菌。 注意：高压灭菌事会产生大量的硅沉淀，因此，当藻类不需要硅时可以 不添加硅元素。
常用培养基的配置
f/2 Trace Metal Solution (Guillard & Ryther 1962, Guillard 1975)
-
1 x 10-4 M
3.15 g FeCl3 ·6H2O
-
1 x 10-5 M
1 mL
Na2MoO4 ·2H2O
6.3 g/L dH2O
1 x 10-8 M
1 mL
ZnSO4 ·7H2O
22.0 g/L dH2O
1 x 10-9 M
1 mL
CoCl2 ·6H2O
10.0 g/L dH2O
1 x 10-9 M
5 x 10-8 M
180.0 g/L dH2O
9 x 10-7 M
加蒸馏水至最终体积为 1L，高压灭菌。
常用培养基的配置
f/2 Vitamin Solution (Guillard & Ryther 1962, Guillard 1975)
向 950 mL 蒸馏水中加入下列物质：
Quantity
2 x 10-9 M 3 x 10-7 M
加蒸馏水至最终体积为 1L，4℃保存。
注意：因为维生素 B12 和生物素是以结晶形式存在，因此在配制母液的时候， 1mg 维生素 B12 只需加 0.89mL dH2O，1mg 生物素只需加 9.6mL dH2O。
常用培养基的配置
K Medium
(Keller et al. 1987)
向 950 mL 蒸馏水中加入下列物质:
Quantity Compound
3.15 g 4.36 g 1 mL 1 mL 1 mL 1 mL 1 mL
FeCl3 ·6H2O Na2EDTA ·2H2O CuSO4 ·5H2O Na2MoO4 ·2H2O ZnSO4 ·7H2O CoCl2 ·6H2O MnCl2 ·4H2O
Compound
1 mL
10 mL 200 mg
Vitamin B12 (cyanocobalamin) Biotin Thiamine ·HCl
Stock Solution 1.0 g/L dH2O
Molar Concentration in
Final Medium 1 x 10-10 M
0.1 g/L dH2O -
硅藻的培养
王提峰
----2013.10.28
硅藻简介
硅藻门（Bacillariophyta）有100,000多种，可分为2纲，中心硅藻纲 和羽纹硅藻纲。
植物体单细胞，或由细胞彼此连接成链状、带状、丛状、放射状的群 体，浮游或着生。
二分裂繁殖形成两个细胞，一个与母细胞大小相等，一个则比母细胞 小。这样连续分裂的结果，个体将越来越小。为种群延续，硅藻有特 殊的产生复大孢子的繁殖过程。还有有性繁殖。
8.83 x 10-4 M 3.63 x 10-5 M
1 x 10-5 M
1.07 x 10-4 M* 1 x 10-8 M 1 x 10-3 M -
(see recipe below)
-
加过滤海水直到最终体积为1L，高压灭菌。 注意：高压灭菌事会产生大量的硅沉淀，因此，当藻类不需要硅时可以 不添加硅元素。
常用培养方式
半连续式培养( semi-continuous culture) 半连续式培养又称为重复分批式培养或换液培养，
在细胞增长和产物形成过程中，每间隔一段时间， 从中取出部分培养物，再用新的培养液补充，使维 持细胞浓度恒定或培养液总体积不变。 半连续培养特点： 1）细胞可持续指数生长，并可保持产物和细胞在 一较高的浓度水平，培养过程可延续到很长时间。 2）可进行多次收获。
Stock Solution Molar Concentration
in Final Medium
-
1 x 10-5 M
-
1 x 10-5 M
9.8 g/L dH2O
4 x 10-8 M
6.3 g/L dH2O
3 x 10-8 M
22.0 g/L dH2O
8 x 10-8 M
10.0 g/L dH2O
有些硅藻作为饵料时可能产生毒性物质，这时作为饵料时 应特别注意。选取合适的饵料藻非常关键。