多重耐药鲍曼不动杆菌16S rRNA甲基化酶基因的研究

·短篇论著·多重耐药鲍曼不动杆菌16S rRNA 甲基化酶基因的研究赵书平秦霞姜梅杰DOI ：10.3877/cma．j．issn．1674-0785．2012．22．077作者单位：271000山东省，泰安市中心医院检验科（赵书平、姜梅杰）；莱钢集团莱芜矿业有限公司医院检验科（秦霞）通讯作者：赵书平，Email ：dczhshp@126．com 【摘要】目的调查16S rRNA 甲基化酶基因在我院院内分离的多重耐药鲍曼不动杆菌中的表达情况，为临床合理使用抗菌药物和控制院内感染的发生提供依据。

方法用微量稀释法和纸片扩散法测定菌株的药敏情况。

PCR 方法检测armA 和rmtB 16S rRNA 甲基化酶基因在46株多重耐药鲍曼不动杆菌中的存在情况。

结果46株多重耐药鲍曼不动杆菌中，40株armA 基因阳性，未检出rmtB 基因，16S rRNA 甲基化酶基因携带率为87%（40/46）。

结论我院院内分离的多重耐药鲍曼不动杆菌16S rRNA 甲基化酶基因携带率很高，可能与氨基糖苷类耐药有关。

【关键词】鲍氏不动杆菌；多重耐药；16S rRNA 甲基化酶基因鲍曼不动杆菌已成为院内感染的主要致病菌。

已报道我院鲍曼不动杆菌引起的院内感染有逐年增多的趋势［1］。

特别是多重耐药鲍曼不动杆菌和泛耐药鲍曼不动杆菌的出现给临床治疗带来了很大的困难［2-4］。

有研究显示，细菌对氨基糖苷类抗菌药物产生耐药是因为氨基糖苷类抗菌药物作用靶位16S rRNA 基因突变所致［5］，16S rRNA 甲基化酶可导致庆大霉素等多种氨基糖苷类抗菌药物耐药［6］。

由于临床上经常用β-内酰胺类与氨基糖苷类药物联合用药治疗鲍曼不动杆菌引起的感染，但近年来这两类药物耐药性逐步升高。

因此调查16S rRNA 甲基化酶基在院内分离的多重耐药鲍曼不动杆菌中的存在情况，以期为临床合理使用抗菌药物提供依据。

一、材料与方法1．菌株来源：2010年6月至2011年6月在我院住院患者标本中分离出的46株多重耐药鲍曼不动杆菌，其中痰液44株，穿刺液1株，分泌物1株。

2．细菌鉴定及药敏试验：采用WalkAway 96PLUS NC31复合板鉴定菌种及药敏试验，同时采用K-B 纸片扩散法测定菌株对头孢哌酮/舒巴坦、美罗培南、替加环素、米诺环素等抗菌药物的敏感性。

用ATB PSE 药敏板检测菌株对多黏菌素E 等抗菌药物的敏感性。

M-H 琼脂和药敏纸片均为英国Oxoid 产品。

3．总DNA 的制备：采用煮沸法，吸取100μl 双蒸水，挑取过夜培养的鲍曼不动杆菌菌落2 3个，加入双蒸水中。

混匀后加热煮沸10min ，以12000r /min 离心10min ，上清液为细菌总DNA 溶液。

4．耐药基因检测：采用多聚酶链反应（PCR ）方法，引物参照文献［7］。

2种16S rRNA 甲基化酶基因的PCR 扩增引物序列见表1。

表1PCR 扩增引物序列引物引物序列序（5'→3'）产物长度（bp ）退火温度（ħ）armA-FAGGTTGTTTCCATTTCTGAG59155armA-R TCTCTTCCATTCCCTTCTCC rmtB-F ATGAACATCAACGATGCCC 76955rmtB-RCCTTCTGATTGGCTTATCCA5．DNA 测序：40株16S rRNA 甲基化酶基因armA 阳性PCR 产物，取9株送上海桑尼生物科技有限公司进行测序，测序结果在GenBank 网上查询。

二、结果1．抗菌药物敏感试验结果：见表2。

表246株多重耐药鲍曼不动杆菌对17种抗菌药物的敏感性抗菌药物敏感株数敏感率（%）中介株数中介率（%）耐药株数耐药率（%）阿米卡星3 6.500.04393.5头孢他啶00.000.046100头孢曲松00.000.046100环丙沙星00.000.046100头孢吡肟00.000.046100庆大霉素2 4.31 2.24393.5亚胺培南00.000.046100左氧氟沙星00.02 4.34495.7美罗培南00.000.046100哌拉西林00.000.046100复方新诺明1 2.200.04597.8哌拉西林/他唑巴坦00.000.046100妥布霉素3 6.500.04393.5头孢哌酮/舒巴坦614.01532.02554.0米诺环素2554.32043.512.2替加环素2860.90.00.0多黏菌素E461002．16S rRNA 甲基化酶基因检测结果：46株多重耐药鲍曼不动杆菌中，40株携带armA 基因，未检出rmtB 基因，16S rRNA 甲基化酶基因携带率为87%（40/46）。

armA 基因PCR 产物电泳结果见图1。

3．armA 基因PCR 扩增产物测序结果：取9株armA 基因阳性PCR扩增产物进行测序，结果均为16S rRNA甲基化酶基因armA，其中3株与编码HQ204573序列100%同源，5株与编码HQ204573序列99%同源。

三、讨论Galimand等［5］研究发现，细菌对氨基糖苷类抗菌药物产生耐药是因为产氨基糖苷类修饰酶基因和氨基糖苷类抗菌药物作用靶位基因突变所致。

有报道［6，8］16S rRNA甲基化酶能保护细菌的16S rRNA，对临床常用的氨基糖苷类抗菌药物高水平耐药。

多重耐药鲍曼不动杆菌中氨基糖苷类修饰酶基因的研究已有报道［9］，氨基糖苷类修饰酶基因阳性率为89.1%（41/46），多重耐药鲍曼不动杆菌对氨基糖苷类抗菌药物耐药与氨基糖苷类修饰酶基因密切相关。

本研究结果显示，46株多重耐药鲍曼不动杆菌中，40株携带armA基因，16S rRNA甲基化酶基因阳性率为87%。

比缪心军等［10］报道的43株耐阿米卡星的鲍曼不动杆菌中，armA基因阳性率为69.77%高。

冯旰珠等［11］报道在20株多重耐药鲍曼不动杆菌中未检出16S rRNA甲基化酶armA、rmtB 基因。

提示我院多重耐药鲍曼不动杆菌对氨基糖苷类抗菌药物耐药率高与16S rRNA甲基化酶基因携带率高有关。

我院多重耐药鲍曼不动杆菌对氨基糖苷类、喹诺酮类和β-内酰胺类抗菌药物均高度耐药，仅对头孢哌酮/舒巴坦的耐药率为54%，但中介水平耐药率为32%，仅14%敏感。

对替加环素（60.9%）和米诺环素（54.3%）敏感性相对较高。

未发现对多黏菌素E耐药的菌株。

因此，我院临床医师治疗多重耐药鲍曼不动杆菌引起的感染时，可首选多黏菌素+孢哌酮/舒巴坦；头孢哌酮/舒巴坦+米诺环素或头孢哌酮/舒巴坦+替加环素。

由于不同地区鲍曼不动杆菌流行菌株可能存在差异，其基因型也各不完全相同，因此应掌握本地区鲍曼不动杆菌的耐药特性，对临床合理选用抗菌药物具有重要意义。

参考文献［1］姜梅杰，孙启英，李玉臣．2006-2009鲍氏不动杆菌耐药性分析．中华医院感染学杂志，2012，22：1469-1470．［2］Munoz-Price LS，Weinstein RA．Acinetobacter Infection．N Engl J Med，2008，358：1271-1281．［3］Peleg AY，Seifert H，Paterson DL．Acinetobacter baumannii：emergence of a successful pathogen．Clin Microbiol Rev，2008，21：538-582．［4］Doi Y，Husain S，Potoski BA，et al．Extensively drug-resistant Acineto-bacter baumannii．Emerg Infect Dis，2009，15：980-982．［5］Galimand M，Gerbaub G，Courvalin P．Spectinomycin resistance in Neisseria spp．due to mutations in16S rRNA．Antimicrob Agents Che-mother，2000，44：1365-1366．［6］Yokoyama K，Doi Y，Yamanc K，et al．Acquisition of16S rRNA methy-lase gene Pseudomomas aeruginosu．Lancet，2003，362：1888-1893．［7］杨银梅，叶惠芬，张伟红，等．臭鼻克雷伯和鲍曼不动杆菌中检出NDM-1型金属β-内酰胺酶基因．国际检验医学杂志2011，13：1407-1409．［8］杨银梅，陈晓文，张伟红，等．革兰阴性杆菌中16S rRNA甲基化酶和aac（6'）-Ib-cr基因的检测．中华检验医学杂志，2010，33：356-358．［9］姜梅杰，冯莉，张富森．多重耐药鲍曼不动杆菌中氨基糖苷类修饰酶基因及qacE△1基因的研究［J/CD］．中华临床医师杂志：电子版，2012，6：157-158．［10］缪心军，陈之力，陈玉熹，等．134株鲍氏不动杆菌携带16S rRNA 甲基化酶基因的研究．中华医院感染学杂志，2011，21：1075-1077．［11］冯旰珠，张扬，姚堃，等．多重耐药鲍曼不动杆菌16S rRNA甲基化酶、氨基糖苷类修饰酶基因研究．中国感染与化疗杂志，2008，8：303-306．（收稿日期：2012-06-20）（本文编辑：戚红丹）赵书平，秦霞，姜梅杰．多重耐药鲍曼不动杆菌16S rRNA甲基化酶基因的研究［J/CD］．中华临床医师杂志:电子版，2012，6(22):7404-7405．。