铁皮石斛的种质保存及其与共生真菌关系的初探
一株铁皮石斛内生真菌的鉴定及对株型的影响
一株铁皮石斛内生真菌的鉴定及对株型的影响王伟英; 邱珊莲; 邹晖; 戴艺民; 林江波【期刊名称】《《福建农业学报》》【年(卷),期】2019(034)007【总页数】5页(P837-841)【关键词】铁皮石斛; 内生真菌; 5.8SrDNA-ITS【作者】王伟英; 邱珊莲; 邹晖; 戴艺民; 林江波【作者单位】福建省农业科学院亚热带农业研究所福建漳州 363005【正文语种】中文【中图分类】R2820 引言【研究意义】铁皮石斛Dendrobium officinale是我国传统名贵中药材，其经济价值和药用价值颇高，具有增强免疫力、抗衰老、抗肿瘤、降血糖、降血压等功效。
铁皮石斛是一种典型的内生菌根植物，需要与合适的真菌共生才能完成其生活史[1]。
内生真菌在铁皮石斛的人工栽培、引种驯化以及资源再生和保护等方面具有重要的作用。
【前人研究进展】兰科菌根系统中存在多种内生真菌类型，主要属担子菌门、半知菌门和子囊菌门[2]，其中担子菌类真菌为优势菌群。
担子菌胶膜菌科中的无性态属瘤菌根菌属Epulorhiza sp.以及瘤菌根菌属的有性态胶膜菌属Tulasnella是兰科植物的主要共生真菌[3]。
菌根真菌参与兰科植物生长发育过程，主要表现为在自然条件下种子萌发、植株营养生长、生殖繁育均需与真菌共生形成菌根来提供必需的有机质和碳水化合物[4-6]。
【本研究切入点】连城冠豸山铁皮石斛是我国第二个获得地理标志的石斛品种，其品质较好。
近年来由于过度采摘导致冠豸山野生铁皮石斛濒临灭绝，因此对冠豸山的铁皮石斛内生真菌菌群研究就显得尤为重要。
了解连城冠豸山铁皮石斛的内生真菌的优势种群，对冠豸山铁皮石斛的保护和人工栽培，以及保持其内生真菌资源多样性具有重要意义。
【拟解决的关键问题】本研究从连城冠豸山长势较好的野生铁皮石斛根部分离到一株内生真菌T11，通过形态观察和分子生物学方法进行鉴定，并测试T11对盆栽组培苗生长的影响，以期为研究内生真菌与铁皮石斛产量、品质之间的相关性提供思路。
石斛属植物内生真菌的研究进展
［］ ３李
晶， 任志远 ， 自翔． 周 区域粮食 安全性 分析 与预 测—— 以陕
西省关中地区为例 ［ ］ Ｊ ．资源科学 ， ０ ，７ ４ ： — ４ ２ ５２ （）８ ９． ０ ９ ［］ ４ 蔡运龙 ， 傅泽 强 ， 戴尔阜 ． 区域最小人 均耕地面 积与耕地 资源调
控 ［］ Ｊ ．地理学报 ，０ ２ ５ （ ） １７—１４ ２ ０ ，７ ２ ：２ ３．
少， 对粮食安全不具有根本 性的破坏力 。由于农业用地结构
调整是双 向的， 即耕地可 以向其他农用地流转 ， 其他农用地也 可向耕地流转 ， 因此在政府合理的宏观调控下 ， 这不会对农业
孙江 山等 ： 石斛 属植 物内生真菌的研究进展 ｃｔ ａ 和半知 菌亚 门 （ ｅ ｔ ｏ ｙｏｉａ 约 有 ２ ｏｉ ） ｎ Ｄ ｕｅ ｍ ｃｔ ） ｒ ｎ ７个 属。张延 威、 韩燕峰综 合有关石斛 内生真菌的分离鉴定资料 ， 将鉴定分 离 出的石斛 内生真菌进行 了分类 （ １ 。虽然 已经分离鉴定 表 ） 的石斛属 内生真菌相对 较多 ， 对于我 国丰富 的药用 石斛资 但 源， 内生真菌 多样性的研究还远远不够 。
比分析——以宁夏回族 自治 区原州区为例［ ］ Ｊ ．干旱区资源与环 境 ，０６，０ ６ ：６—４ ． ２０ ２ （ ）３ ２ 【 ］ 运 龙． 自然 资 源 学 原 理 ［ ． ７蔡 Ｍ］ ２版 ． 京 ： 等 教 育 出版 北 高
社 ，００ ２０ ．
展角度来看 ， 生态退耕势在 必行 。这两种原 因造成 的耕地减
作者简介 ： 孙江 山（９ ６ ） 男 ， １８ 一 ， 山东 潍坊人 ， 硕士研 究生 ， 事真菌 从 及其基 因功能研究 。
通信作者 ： 乙
引， ， 男 博士 ， 教授 ， 事环境植物学 、 从 特色植 — ｉ： ｉｎ ｚｕｅ ｕ ｃ 。 ｍａｌ ｙｙ ＠ｇｎ． ｄ． ｎ ｉ
铁皮石斛贮藏过程中存在的问题及其保鲜技术研究进展
铁皮石斛贮藏过程中存在的问题及其保鲜技术研究进展一、本文概述铁皮石斛，作为一种珍贵的中药材，具有滋阴清热、生津止渴等多种药理作用，被广泛应用于中医药领域。
然而，在铁皮石斛的贮藏过程中，由于其独特的生物学特性和环境因素的影响，往往会出现品质下降、药效减弱等问题，严重影响了其临床应用和市场需求。
因此，研究铁皮石斛的保鲜技术，提高其贮藏稳定性，对于保证药材质量、推动产业发展具有重要意义。
本文首先综述了铁皮石斛贮藏过程中存在的问题，包括水分散失、酶活性变化、微生物污染等，分析了这些问题对铁皮石斛品质的影响机制。
随后，本文重点介绍了铁皮石斛保鲜技术的研究进展，包括传统的干燥贮藏技术、现代的气调贮藏技术、低温贮藏技术、辐照保鲜技术等，并分析了这些技术的优缺点和适用范围。
本文还探讨了新技术在铁皮石斛保鲜领域的应用前景，为铁皮石斛的贮藏保鲜提供了理论依据和技术支持。
通过本文的阐述，旨在全面了解铁皮石斛贮藏过程中存在的问题，掌握保鲜技术的研究进展，为铁皮石斛的贮藏保鲜提供科学指导和实践参考。
本文也期望能够促进铁皮石斛保鲜技术的不断创新和发展，为中医药产业的可持续发展做出贡献。
二、铁皮石斛贮藏过程中存在的问题铁皮石斛作为一种具有极高药用价值的中药材，其贮藏过程对于保持其药效和品质至关重要。
然而，在实际贮藏过程中，铁皮石斛面临着多种问题和挑战。
易受潮和发霉：铁皮石斛富含水分和糖类等易滋生微生物的成分，如果贮藏环境湿度过高或通风不良，很容易导致其受潮并发生霉变。
这不仅会降低其药用价值，还可能产生有害物质，对人体健康构成威胁。
药效成分损失：贮藏过程中，铁皮石斛中的活性成分可能会因光照、温度、湿度等因素的影响而逐渐分解或转化，导致药效降低。
如何保持其药效成分的稳定性，是贮藏过程中亟待解决的问题。
贮藏时间长短限制：铁皮石斛的贮藏期相对较短，长时间贮藏容易导致其品质下降。
如何在保证品质的前提下延长贮藏期，是铁皮石斛贮藏技术研究的重点之一。
铁皮石斛种质资源利用与产业发展
铁皮石斛种质资源利用与产业发展摘要：铁皮石斛（Dendrobium officinale）是兰科石斛属的多年生草本植物，野生品种濒临灭绝，经济价值极高。
本文综述了铁皮石斛种质资源利用与产业发展等问题。
关键词：铁皮石斛；种质资源；生长发育；栽培；产业铁皮石斛是兰科石斛属的多年生草本植物，观赏性强，也是名贵中药材，有生津养胃、滋阴清热等功效。
其自然条件下萌发困难，经济价值又高，导致开发过度。
加上环境日趋恶劣，野生铁皮石斛几近灭绝。
因此铁皮石斛被列为国家重点保护植物。
随着科技的提高，人工繁殖技术配合相应的栽培管理，使铁皮石斛的种质资源日趋丰富，产量与品质大幅提高，诞生了很多前景可观的产业。
1种质资源1.1铁皮石斛的分布与鉴定评价铁皮石斛在我国分布广泛，主要包括浙江、云南、安徽和贵州等地[1]。
浙江农林大学联合公司收集其种质资源300余份，经多项指标研究分析得出铁皮石斛种质资源遗传多样性丰富，有理化特征特性优良的种质，为选育新品种提供基础[2]。
而且在不同的环境条件下，铁皮石斛的形态、细胞学、理化性质、分子生物学等都会有一定的差异。
鉴定时，要从不同的方向来进行。
如形态学的鉴定指标可以是茎长、茎粗、花瓣长等，或采用性状及显微鉴别方法鉴别其根、茎、叶的特征。
诸燕[3]采用化学分析得出不同种质铁皮石斛多糖质量分数有显著差异。
或运用SSR等分子标记方法都能进行铁皮石斛种质的鉴定。
1.2铁皮石斛种质资源的创新种质资源的创新，能增加种质资源的遗传多样性，获得优异种质，对保护与开发更高产优质的品种有重要意义。
戴亚峰等[4]利用人工授粉与组织扩繁技术，选育出药材品质好、产量高、适应性强的“徽斛1号”。
2铁皮石斛的生长发育环境与栽培引种铁皮石斛独特的生长发育特点，其在自然条件下存在的数量很少。
为了保护与开发铁皮石斛资源，探究其最佳生长条件是首要任务。
铁皮石斛作为兰科植物，光合能力弱，光照的需求少。
唐丽等[5]通过室内模拟正交试验，对铁皮石斛进行多方法、多指标的测量，得出空气湿度是影响ETRmax等的重要因子，温度是影响株高的主要因子。
不同生境下野生铁皮石斛内生真菌多样性的初步研究
Ａｂｔａ ｔ Ｔｈ ｕ ｒｔｏ ｏ ｔ ｆ ｏＪ ａ ｅｉ ｒ ｗｔ ｅｉｄｃ ｌ ｃｅ ｒ ｍ ｗｏｄｆｅ ｅ ｔｈ ｂｔ ｔ ： ｎ ｓｒ ｅ ： ｅｎ ｔｉｉｎｒ ｏ ｓｏ ｆｋｉ ｌ ｎｇ ｏ ｈｐ ｒｏ ｏｌ ｔ ｄｆｏ ｔ ｉｆｒｎ ａ ｉａ ｓ Ｌａ ｇ Ｄ． ｎ ｅ
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不 同生 境下 野生铁皮 石 斛 内生真菌
多样性 的初 步 研 究
毛 益 婷 代 晓宇 ， ，马 荣
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中 图分 类 号 ：Ｑ９ ９ ７ ８ ４ ４．１．３ 文献 标 识 码 ： Ａ
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铁皮石斛原球茎与活体真菌液体悬浮共培养研究
铁皮石斛原球茎与活体真菌液体悬浮共培养研究［摘要］目的：建立铁皮石斛原球茎与活体真菌MF24液体悬浮共培养体系，为原球茎产业化生产提供科学依据。
方法：研究原球茎的培养体系是否适用于MF24真菌的生长，对光照和黑暗条件下单独培养的原球茎及与真菌共培养的原球茎的生长状况进行研究，测定生物量及增殖倍数，用HPLC分析比较原球茎中11个特征峰面积的变化。
结果：MF24真菌在培养原球茎的6，7V液体培养基中能正常生长，以1 500 lx光照8～10 h·d-1会延缓真菌的生长速度。
原球茎在光照或暗培养条件下都能正常生长，在原球茎培养初期加入MF24真菌，两者相互抑制生长。
在原球茎的生长稳定期接入5块直径9 mm真菌菌块，对原球茎的生长和化学成分的种类无显著影响，但光照条件下共培养5 d的原球茎中有10个化合物含量比对照降低13.64%～138.47%，暗培养条件下共培养5 d的原球茎中有7个化合物含量比对照提高0.71%～12.82%，4个化合物含量比对照小幅降低3.03%～14.14%。
结论：在适宜的条件下，活体真菌MF24可与铁皮石斛原球茎共培养，并影响其次生代谢水平。
［关键词］铁皮石斛；原球茎；小菇属真菌；液体悬浮共培养；生物量；HPLC铁皮石斛Dendrobium officinale Kimura et Migo是重要的石斛药材来源[1]，利用液体悬浮培养生产铁皮石斛原球茎以代替原植物提取有效成分，是解决铁皮石斛药用资源紧缺的方法之一[2]，但如何提高原球茎的内在质量是工业化生产的关键问题。
植物内生真菌与其宿主是协同进化的，近年来，大量的研究表明内生真菌能够影响植物次生代谢产物的合成[3]。
在以往的研究中，先分别培养真菌MF24 Mycena sp.和铁皮石斛原球茎，再将发酵培养的真菌灭活制成诱导子（代谢物），加入原球茎中共同培养，来提高目的次生产物的含量[4]。
目前，将活体内生真菌菌丝体与宿主细胞直接共培养或利用内生真菌来诱导宿主细胞提高目的次生产物产量的研究少见报道。
铁皮石斛促生内生真菌的功能研究进展
１ 内生真菌与宿主的关系
内生真菌 因其独特的生活环境 ，与宿主关系密切 。 内生真 菌与宿主协 同演化 中形成 互惠共 生关系 ，一方
面 内生真 菌在 宿主 中吸收营养后 能分泌植物生长所需 要 的激素 ，提高营养元 素和代谢产物的积 累 ［ ７ － １ ０ １ ；另
一
２ ． ２ 提高石斛营养元素 的积累
具有相同或相近的生源合成途径 ，产生一些重要的抗
通讯作者 ：林江波，硕士，副研究员。 Ｅ － ｍ ａ ｉ ｌ ： ］ ｉ ｎ ｊ ｉ ａ ｎ ｇ ｂ ｏ
１ ９ ７ ６ ＠ ｙ ａ ｈ ｏ ｏ ． ｃ ｏ ｍ． ｃ ｎ
项 目来源 ：福建省科技厅公益类科研专项 （ ２ ０ １ ６ Ｒ １ ０ １ ２ — ５ ）
资助 。
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５ ２ －
中国园艺文摘
人类疾 病的药物 ，这类 内生菌也是 目前开 发药用资源 的重要途 经 ［ ２ ０ ］ ｏ相子春 从 铁皮石 斛根部 分离 到内
张集慧 等 采用 ＨＰ Ｌ Ｃ法分 析铁皮 石斛 内生菌
元素的净 增率尤 为显著 ，增量均在 １ ０ ０ ％以上 。
２ ． ３ 提高石斛代谢产物积 累量
石斛 所含化 学成分 主要 包括 多糖类 、生物 碱类 、 联苄类 、菲类 、芴酮类 、半萜类 、甾体、酚类等 ［ １ ５ １ ７ ］ ， 内生真菌在与石斛 的协同作 用下，能诱导这些次生代
中药材 ，具有很高 的药用价值 ；同时 ，盆栽铁皮石斛 已成为一种高档的观赏花卉 ，也具有很高 的观赏价值 。
铁皮石斛 多附生于树上或 岩石上 ，生长缓慢 ， 自身繁
殖 力低 ，野生 时需要 与内生菌共生 才能完成 生活史 。
铁皮石斛体 内包含 多种 内生真 菌，但只有部分 内生真
石斛内生真菌研究进展
石斛内生真菌研究进展作者：谢雯颖张星和来源：《市场周刊·市场版》2017年第07期摘要：研究表明植物内生真菌与植物之间形成互利共生的关系，具有促进植物生长次生代谢产物积累等功能。
本文简要综述了近年来铁皮石斛内生真菌的多样性、内生真菌与植株共生培养与展望等问题的研究进展。
关键词：石斛；内生真菌一、内生真菌的分离在植物内生真菌的分离过程中，除了尽可能保持组织的新鲜外，外植体表面的杀菌和分离培养条件是两个关键因素。
杀菌强度太大，不仅将表面微生物杀死，杀菌剂还可进入材料内部，杀死分布于表皮下的内生真菌，使所分离的内生真菌的种类和数量受到影响。
铁皮石斛内生真菌的分离在培养基选择上大多采用 PDA 培养基。
PDA 和 FIM 两种培养基分离铁皮石斛内生真菌，所得的菌株不一样，可能是因为PDA 和 FIM 所含的成分不同，真菌对营养的偏好有所差异，而使得分离结果有所不同。
二、内生真菌的多样性张丽[1]从铁皮石斛栽培苗中分离出内生真菌但无菌苗中没有分离出，并且栽培苗中内生真菌种类和数量随生长年限的增长而呈现增多趋势。
曹斌等[2]通过对营养根组织解剖和显微观察，发现只有当小苗接触栽培基质才能观察到菌丝。
表明铁皮石斛内生真菌不是从一开始就存在于植株内，而是通过生长环境中的栽培基质进入植物组织内才形成的。
由此可见生长年限和栽培基质也是铁皮石斛内生真菌多样性的原因。
三、内生真菌对铁皮石斛生长的影响（一）内生真菌与植株共生培养内生真菌与铁皮石斛组培苗共生，不论是地上部分植株还是地下部分根系生长内生真菌都有较强的促进作用，增加植株高度促进长出新芽和新根[8]。
接菌苗与对照组相比，平均鲜重增长率、大量和微量元素含量都有所增加，叶绿素含量和N、K、P 含量均比对照组高，内源激素 GA3（赤霉素）和 IAA（吲哚乙酸）含量增加 ABA（脱落酸）含量降低[3-4]。
内生真菌作为菌肥还能提高铁皮石斛的存活率，显著促进植株生长[5]。
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铁皮石斛的种质保存及其与共生真菌关系的初探本文以铁皮石斛（Dendrobium officinale Kimura et Migo）为实验材料,以带节间的茎段作为外植体,建立了一套适宜铁皮石斛种质保存和快速繁殖的组织培养体系。
通过比较基本培养基、激素、天然提取物浓度等多个因素,筛选了铁皮石斛快速繁殖体系的适宜培养基及培养条件。
从形态学角度,对外植体诱导愈伤组织并分化成幼苗的过程以及影响因素进行了总结。
以GeO<sub>2</sub>为锗源,利用生理生化指标测定,研究了不同浓度的锗对铁皮石斛原球茎生长的影响。
对野生铁皮石斛根部共生真菌进行了分离培养,并利用rDNA ITS区全序列,对部分共生真菌进行了分子鉴定。
论文研究结果总结如下: 建立了以铁皮石斛茎段作为外植体,保存种质的一种新的有效途径。
1/2MS培养基是诱导丛生芽的适宜培养基,以6-BA（2.0mg/L）和NAA（0.2mg/L）的组合对丛生芽的诱导率最高,附加10%的香蕉汁对诱导丛生芽的生根是最合适的。
丛生芽经过生根诱导后就可以形成完整植株,从而极大的缩短了繁殖周期。
愈伤组织在同一培养基上可以形成拟原球茎,拟原球茎的分化经历Ⅰ型、Ⅱ型两种类型,Ⅱ型原球茎还可分化形成不定芽,两者都能进一步形成完整幼苗。
外植体的大小、部位和生理状态都可以对愈伤组织的诱导造成影响。
由愈伤组织、不定芽和拟原球茎交错在一起的团块可以多次切割继代培养,这大大提高了无性繁殖的系数。
铁皮石斛原球茎富锗研究表明,低浓度锗明显促进铁皮石斛原球茎的生长,增强多个保护酶活性,维护膜系统的稳定性,浓度过高则对原球茎的生长起抑制作用。
在适宜的锗浓度下,利用铁皮石斛原球茎建立快速增殖的生物反应器,以实
现锗的生物转化,应用前景是非常广阔的。
对野生铁皮石斛根部共生真菌进行了分离培养,初步研究了共生真菌对原植物体生长的作用,并利用rDNA ITS区全序列对部分真菌进行了分子标记。
以期为石斛的大规模人工栽培提供更为有效的方法,为铁皮石斛的居群研究提供更为丰富的证据。