术后化疗的Ⅱ期结肠癌患者血清Smad4的表达及临床意义

术后化疗的Ⅱ期结肠癌患者血清Smad4的表达及临床意义
作者：刘岩青盛吉章孙凤莉
来源：《中国实用医药》2015年第36期
【摘要】目的研究Ⅱ期结肠癌患者术后行辅助化疗前后血清Smad4表达水平及临床意义。

方法 110例Ⅱ期结肠癌术后辅助化疗的患者，根据有无复发情况分为复发组（37例）和未复发组（73例）；应用酶联免疫吸附剂测定法（ELISA）对其辅助化疗前后血清Smad4水平进行检测。

分析血清Smad4水平与患者无病生存时间的关系。

结果未复发组化疗后血清Smad4水平与化疗前相比明显升高，差异有统计学意义（P
【关键词】血清Smad4；结肠癌；化疗；酶联免疫吸附剂测定法
结肠癌是常见的消化系统恶性肿瘤，其易复发和转移的特性严重威胁着人类的健康和生命[1]。

Ⅱ期结肠癌最为多见，手术治疗是其公认的治疗手段，而辅助化疗也越来越普遍，但是辅助化疗的效果却存在争议。

因此，寻找能早期预测化疗疗效的分子生物学指标非常重要。

Smad4基因是转化生长因子-β（TGF-β）信号通路的重要级联分子，在信号转导、调节靶基因的转录过程中发挥着重要的作用[2]。

作者之前的研究表明Smad4在结肠癌的发生发展中起着非常重要的作用，参与了肿瘤新生淋巴管的生成，促进了肿瘤的转移[3]。

本研究进一步探讨血清Smad4水平变化在Ⅱ期结肠癌患者术后化疗中的临床意义。

现报告如下。

1 资料与方法
1. 1 一般资料选取沧州市中心医院 2013年5月～2015年8月经病理和临床指标诊断为Ⅱ期结肠癌患者110例，平均年龄（68±10）岁，平均随访时间为60个月。

其中未复发者（未复发组）73例，复发者（复发组）37例。

所有患者均行结肠癌根治术，术后行静脉化疗，
化疗方案：四氢叶酸200 mg/m2， 5-氟尿嘧啶425 mg/m2连续5 d， 28 d为1个周期，共化疗6周期。

所有患者术前均未接受化疗、放疗及免疫治疗等抗肿瘤治疗。

两组患者一般资料比较，差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性。

1. 2 血清Smad4的检测方法
1. 2. 1 建立标准曲线利用棋盘滴定法确定抗原、抗体最适工作浓度。

采用间接ELlSA法检测不同浓度标准品的吸光度值，以浓度为横坐标，以吸光度为纵坐标，建立标准曲线。

1. 2. 2 血清Smad4检测早晨空腹抽取静脉血3 ml 25℃条件下静置1 h， 10000 r/min高速离心10 min，取上清血浆1 ml，加入1.5 ml试管中，置入-65℃冰箱保存。

待所有血液样品
处理完之后统一采用ELISA检测Smad4蛋白浓度，实验严格按照Smad4蛋白（ELISA）试剂盒说明书操作。

1. 3 随访所有患者均采用电话随访、门诊复查和住院等相结合的随访方式。

1. 4 统计学方法采用Curve Expert1.30曲线软件绘制标准曲线。

采用SPSS20.0统计学软件进行数据统计分析。

计量资料以均数±标准差（ x-±s）表示，采用t检验；计数资料以率（%）表示，采用χ2检验。

P
2 结果
2. 1 两组患者化疗前血清Smad4水平变化比较复发组化疗前血清Smad4水平为
（36.5±8.7）pg/ml，而未复发组中化疗前血清Smad4水平为（75.4±12.7）pg/ml，两者相比差异有统计学意义（P
2. 2 两组患者化疗前后血清Smad4水平变化比较复发组术化疗后Smad4水平为
（40.2±11.5）pg/ml，与化疗前Smad4水平相比差异无统计学意义（P>0.05）。

而未复发组化疗后Smad4水平为（99.3±21.5）pg/ml，显著高于于化疗前水平，差异有统计学意义（P
2. 3 化疗前血清Smad4与患者无病生存时间的关系患者化疗前血清Smad4的水平与其无病生存期呈正相关（I=-2.03， P
3 讨论
结肠癌是最常见的恶性肿瘤之一，严重威胁人类健康。

多种治疗手段，如手术治疗、化疗和靶向治疗，使Ⅱ期结肠癌的治愈率已明显提高，但化疗后仍有部分患者出现肿瘤的复发和转移[4]。

因此，寻找能早期预测化疗疗效的分子生物学指标非常重要。

目前，Ⅱ期结肠癌患者的最主要化疗方案还是以5-氟尿嘧啶为基础的化疗。

Smad蛋白被证实是TGF-β家族的下游信号蛋白，在信号转导、调节靶基因的转录过程中发挥着重要的作用[5]。

Smad4蛋白是其重要的成员之一，其位于人染色体18q21，是首先在胰腺癌中发现的新型抑癌基因[6]，其所编码的Smad4蛋白是转化生长因子-β（TGF-β）信号通路的重要级联分子，在信号转导、调节靶基因的转录过程中发挥着重要的作用[7]。

国外多项研究报道，在胰腺癌、乳腺癌、结肠癌、食管癌中， Smad4基因的缺失与失活可以增加肿瘤细胞的侵袭与转移能力，从而导致肿瘤的转移复发[8]。

Papageorgis等[2]经体外实验证实Smad4基因失活能与结肠癌细胞的化疗耐药有密切关系， Smad4可能在结肠癌的发生发展中发挥着重要的作用。

因此，本研究选取110例Ⅱ期结肠癌术后行以5-氟尿嘧啶为基础的辅助化疗的患者，对其化疗前后的血清中Smad4水平进行检测，探讨其在其化疗中的意义及其与无病生存时间的关系。

研究结果发现，复发组化疗前血清中Smad4水平明显的低于未复发组（P
总之，血清中Smad4的水平能预测Ⅱ期结肠癌患者术后对5-氟尿嘧啶为基础的辅助化疗的敏感性，并与化疗后患者的无病生存时间呈负相关， Smad4在结肠癌的发生发展中发挥着抑制因子的作用。

但是，因为本研究样本量有限，还待更大的临床样本来证实，同时，需要更多更深入的具体分子机制的研究。

参考文献
[1] Siegel R， DeSantis C， Virgo K， et al. Cancer treatment and survivorship statistics，2012. CA Cancer J Clin， 2012， 62（4）：220-241.
[2] Papageorgis P， Cheng K， Ozturk S ， et al. Smad4 in activation Promotes malignancy and drug resistance of colon cancer. Cancer Res， 2011， 71（3）：998-1008.
[3] Liu Y， Sheng J， Dai D， et al. Smad4 acts as tumor suppressor by antagonizing lymphangiogenesis in colorectal cancer. Pathol Res Pract， 2015， 211（4）：286-292.
[4] Ferlay J， Shin HR， Bray F， et al. Estimates of worldwide burden of cancer in 2008：GLOBOCAN 2008. Int J Cancer， 2010， 127（12）： 2893-2917.
[5] Annes JP， Munger JS， Rifkin DB. Making sense of latent TGF-β activation. J Cell Sci，2003， 116（Pt2）：217-224.
[6] Yanagisawa J， Yanagi Y， Masuhiro Y， et al. Convergence of transforming growth factor-beta and vitamin D signaling Pathways on SMAD transcriptional coactivators. Science，1999， 283（5406）： 1317-1321.
[7] Lagna G， Hata A， Hemmati-Brivanlou A， et al. Partnership between DPC4 and SMADProteins in TGF-beta signalling pathways. Nature， 1996， 383（6603）： 832-836.
[8] Hahn SA， Bartsch D， Schroers A， et al. Mutations of the DPC4/Smad4 gene in biliary tract carcinoma. Cancer Res， 1998， 58（6）： 1124-1126.
[9] Miyaki M， Iijima T， Konishi M， et al. Higher frequency of Smad4 gene mutation in human colorectal cancer with distant metastasis. Oncogene， 1999， 18（20）：3098-3103.
[收稿日期：2015-09-02]。