色谱柱保护
色谱柱的使用和维护
色谱柱的使用和维护色谱柱是一种用于分离混合物的重要工具，广泛应用于化学分析、环境检测、药物研发等领域。
为了保证色谱柱的正常使用和延长其寿命，以下将介绍色谱柱的使用和维护方法。
一、色谱柱的使用1.色谱柱的激活新购买的色谱柱通常需要进行激活处理，以去除柱内杂质和保证柱的稳定性。
常见的激活方法包括使用最终使用的溶剂/流动相进行洗脱或者使用强极性溶液进行反向激活。
激活后，需用洗脱溶剂或流动相进行平衡。
2.样品的前处理样品的前处理对色谱柱的使用和维护至关重要。
首先，要确保样品的纯度和浓度，以避免对色谱柱产生污染。
其次，对于有机溶剂溶解的样品，最好使用过滤器进行过滤，以防止固体颗粒和杂质进入色谱柱。
3.流动相的选择正确选择和配置流动相对于色谱柱的使用非常重要。
根据需要分离的组分特性，选择合适的流动相性质和组成，并根据需要进行酸碱调节、添加缓冲剂等。
此外，注意保持流动相的流速稳定，并定期更换或再生。
4.检测器的设置根据需要检测的组分，选择合适的检测器并进行适当的设置。
常见的检测器包括紫外-可见吸收光谱仪（UV-Vis）、荧光检测器、质谱仪等。
在使用检测器前，要确保其正常工作并进行校准。
5.流量控制使用色谱仪时，应保持流量的稳定性。
定期检查和校准流量控制器，并调整至适当的设置，以确保色谱柱正常运行。
6.色谱条件的优化根据分析需要，在保证分离效果的前提下，进行色谱条件的优化。
包括优化流速、温度、柱渗透性、梯度洗脱程序等，以提高分离效果和保护色谱柱。
二、色谱柱的维护1.洗脱和平衡每次使用完色谱柱后，应进行洗脱以去除残留的样品和杂质，并用适当的溶剂进行平衡。
洗脱和平衡步骤的操作要轻柔，避免使用高压流动相进行冲洗。
对于一些特殊样品，如蛋白质和多肽，可以使用具有较强亲和性的溶剂进行洗脱和平衡。
2.色谱柱的储存条件当色谱柱暂时不使用或需要长期储存时，应注意以下几点：首先，将色谱柱从设备上拆卸下来，用纯净溶剂充分洗脱并平衡，保证柱内干净；其次，封闭柱两端，避免进入灰尘和空气，可以使用柱塞或盖子进行封闭；最后，将柱放置在干燥、阴凉的地方存放，避免受到阳光直射和高温。
C18色谱柱维护 常识
【讨论】高效液相色谱柱的保护各位同仁，为保证我们的分析效果，延长色谱柱的使用寿命，大家一起来贡献一下自己在色谱柱使用过程中的护柱秘诀吧。
我先来聊聊，算是抛砖引玉了1、最好用预柱。
（但要注意，若有时出峰异常，要先看看是不是它有问题了）2、每次做完分析，都要进行冲洗，分析用流动相中若无酸、碱、盐类物质，建议用90％甲醇冲洗30～60min；若分析用流动相中含以上物质，要先用10％甲醇（或用与分析用流动相同比例，把含酸、碱、盐溶液换成水）冲洗1小时左右，再梯度走到90％甲醇冲洗30～60min（若用多元泵）。
有必要时再循环几次，可以适当缩短时间。
若长时间不用该色谱柱，要冲洗好后，用纯甲醇或乙腈封存。
3、若流动相中用到离子对试剂，更应该好好冲洗，且该色谱柱最好作为专用，不能再做其它物质分析用。
因色谱柱填料性质已与原来所不同，在该柱上所摸索的色谱条件，可能在其它同类柱子上得不到重现。
4、尽量避免反冲，除非该色谱柱厂家明确说明允许。
5、普通C18柱尽量避免在40℃以上的温度下分析。
6、定期测柱效，有下降，可以用10％异丙醇甲醇冲洗色谱柱。
若柱效还没有改善，可以再生，甲醇－二氯甲烷－甲醇。
呵呵，还有的一时想不起来了，各位有经验的战友请发表高见！1．样品要采用0.22或0.45μm滤膜过滤，流动相采用0.45μm滤膜过滤并脱气。
2．大多数反相色谱柱的pH稳定范围是2－7.5，尽量不超过该色谱柱的pH范围3．避免流动相组成及极性的剧烈变化。
4. 避免纯水冲洗反相色谱柱。
5．每次测试完毕，要用20倍柱体积的流动相冲洗色谱柱（分析色谱柱250×4.6mm柱体积3.2ml）。
如果使用极性或离子性的缓冲溶液作流动相，应在实验完毕后将柱子用纯水冲洗干净，并保存于乙腈中。
6．压力升高是需要更换预柱的信号。
1：溶剂中的不溶物—应使用色谱纯溶剂，膜过滤（孔径不超过0.45μm）2：样品中的不溶物—应对样品进行膜过滤（孔径不超过0.45μm）3：泵，进样器等中的不溶物—在泵和进样器之间安装内置过滤器，在进样器和柱之间安装预过滤器4：柱内不溶物的形成：由于溶剂的不互溶而产生的沉淀—用能溶解沉淀物的溶剂冲洗色谱柱；在不互溶溶剂中由于进样而产生的沉淀—检查样品液和流动相是否互溶；由于温度的改变或固定相的干涸而产生的沉淀—将色谱柱密封紧，并保持室温恒定！还有就是平衡色谱柱、色谱柱的再生：1 平衡色谱柱：反相色谱柱在经过出厂测试后是保存在乙腈/水中的。
保护液相色谱柱的三个简单方法
保护液相色谱柱的三个简单方法我们会不会觉得实验室的经费好像都在用来买色谱柱了？我们是否会想为什么色谱厂家不能生产寿命更长的色谱柱呢？实际上，如果在使用过程中有适当的保护，购买色谱柱的费用只占色谱分析总费用中非常小的部分。
一般色谱柱正常使用的寿命大概500-1000针左右，如果以这个数字来计算，色谱柱所占有的费用大概是整个分析费用的1-2%而已。
所以就算是我们觉得色谱柱的单价很高，想努力增加额外的保护以增加其寿命，其实对整体分析而言也无法省下太多费用。
我的观点是，如果一支色谱柱能有500针的进样，就可以算是完成它的使命了。
在一般情况下，对色谱柱寿命的合理期望是什么样的呢？又有哪些保护措施可以延长色谱柱使用寿命？一、绝对不要进样“垃圾”我经常开玩笑说，要保护色谱柱以得到最长寿命的方法就是不要开封色谱柱。
一旦开始使用，色谱柱的寿命就逐渐衰减一直到用坏为止。
而影响色谱柱寿命的两个主要因素是样品中的杂质和颗粒，因此如果我们能够在进样前去除样品中的杂质和颗粒，色谱柱的寿命一定会延长。
前处理的方法包括固相萃取（SPE），液液萃取和其他的过滤方法。
简单地说，如果在样品进入色谱柱前能大量减少其中的污染物，色谱柱的寿命一定会延长，但是同时我们也必须考虑花在前处理的时间和费用是否能得到合理的回报。
如果目前使用的色谱柱已经达到500针的进样量，而使用前处理所增加的时间和费用，如果需要将色谱柱的寿命由进样500针增加到2500针才划得来的话，就必须好好考虑是否前处理有其经济效益。
但是如果进血浆样品，不经过前处理，可能不到10针柱子就废了，这时候前处理就非常有必要了。
但是除了经济效益以外，对于使不使用前处理，对色谱数据的优劣也必须做一个比较。
在我们实验室中，这些前处理往往能够让我们即使在更低的浓度下也能收集到有效的数据，也能让我们得到更一致的结果。
不管有没有使用前处理，建议所有的样品在进样前经过过滤或是离心处理。
例如当样品经过滤膜可以滤除颗粒从而减少堵塞色谱柱的筛板，滤膜的孔隙大小必须小于色谱柱的筛板孔径大小。
反相色谱柱维护
反相色谱柱维护一、定期清洗色谱柱为了保持反相色谱柱的性能和延长其使用寿命，应定期清洗色谱柱。
清洗时应使用专门的清洗溶剂，以去除残留的杂质和污染物。
清洗频率取决于使用频率和流动相的种类，一般建议至少每三个月清洗一次。
二、避免使用强酸、强碱或高浓度有机溶剂强酸、强碱或高浓度有机溶剂可能会损坏反相色谱柱的固定相，因此在使用过程中应尽量避免。
如果必须使用这些溶剂，应先进行充分的试验，以确保对色谱柱的影响在可接受范围内。
三、定期检查色谱柱的固定相是否流失固定相的流失可能会影响色谱柱的性能，因此应定期检查色谱柱的固定相是否流失。
如发现固定相流失，应及时更换色谱柱。
四、使用合适的流动相流动相的选择对反相色谱柱的性能和使用寿命有着重要影响。
应选择与固定相兼容的流动相，以避免对色谱柱造成损害。
同时，应避免使用含有大量缓冲液的流动相，以减少对色谱柱的腐蚀。
五、避免将色谱柱暴露在高温或阳光直射下高温或阳光直射可能会影响反相色谱柱的性能和使用寿命，因此应避免将色谱柱暴露在这些环境中。
如果必须将色谱柱暴露在高温或阳光直射下，应采取适当的保护措施。
六、每次使用后，应冲洗色谱柱以去除残留物质每次使用反相色谱柱后，应冲洗色谱柱以去除残留的杂质和污染物。
这样可以延长色谱柱的使用寿命，并提高其性能。
七、色谱柱储存时应避免交叉污染不同类型和品牌的反相色谱柱应分别存放，以避免交叉污染。
同时，储存环境应保持干燥、清洁和通风良好。
对于长时间不使用的色谱柱，应定期检查其性能以确保其完好无损。
如何保护色谱柱柱效 色谱柱维护和修理保养
如何保护色谱柱柱效色谱柱维护和修理保养1.色谱柱断裂熔融石英色谱柱的聚酰亚胺涂层如有少许分裂它就会断裂。
聚酰亚胺涂层可保护易碎的熔融石英管线。
柱温箱持续的加热或冷却、柱温箱风扇的震动以及把色谱柱绕在圆形柱架上均会对管线造成压力。
zui后在薄弱处发生断裂。
通过轻划或磨损聚酰亚胺涂层会造成显现薄弱处。
通常锋利的尖或边划管线时会造成划痕。
色谱柱挂钩和标签、GC柱温箱的金属边、色谱柱切割器以及试验室试验台上的各种物品都带有锋利的尖或边。
色谱柱自身断裂的情况很少。
色谱柱制造业试图找出全部有缺陷的管线并避开在已制好的色谱柱中使用这些管线。
直径较大的色谱柱更简单断裂。
也就是说在处理0.45—0.53mm 内径的管线时要比处理0.18—0.32mm内径的管线更加谨慎以防断裂。
已断裂的色谱柱并非不能用。
假如已断裂的色谱柱保持在高温下连续运行或运行多个温度程序，则将特别简单损坏。
已断裂色谱柱的后半段暴露在高温的氧中会快速损坏固定相。
而色谱柱的前半段因有载气通过仍会保持完好。
假如已断裂的色谱柱未经加热而是仅在高温或含氧的环境下暴露很短时间，则后半段将不会受到任何严重损坏。
可以通过安装接头来接上已断裂的色谱柱。
任何合适的接头都可重新连接色谱柱。
一支色谱柱上不能装入超过2—3个接头。
多个接头会造成死体积（拖尾峰）问题。
2.热损坏超杰出谱柱的温度上限会造成固定相和管表面的加速损坏。
这样会造成色谱柱的过分流失，活性组分形成拖尾，以及/或降低柱效（分别度）。
幸好热损坏是一个很慢的过程，因此，在色谱柱严重损坏之前还有一段很长的时间可在高于温度极限的条件下使用。
当有氧存在时会大大加速热损坏。
对有泄漏或载气中氧含量较高的色谱柱进行过度加热可快速并*地损坏该柱。
将GC的柱温箱zui高温度设定为色谱柱温度极限或稍高于该温度极限是防止热损坏的zui 佳方法。
这样可避开色谱柱意外的过热。
即使色谱柱受到热损坏，仍旧可使用。
把色谱柱从检测器上卸下来。
液相色谱仪色谱柱保护柱如何使用 液相色谱操作规程
液相色谱仪色谱柱保护柱如何使用液相色谱操作规程色谱柱是液相色谱中紧要的一个构成部分。
众所周知，色谱是一种分别、分析手段，分别是其核心，而色谱柱担负的就是其分别作用，可以说，色谱柱就是液相色谱仪的心脏。
保护柱则是为了降低分析柱受污染程度，延长分析柱使用寿命的紧要构成部分。
如何使用保护柱1、专柱专用，避开保护柱成为不同项目间的交叉污染源。
2、适时更换保护柱。
当峰的理论塔板数下降15%，或是柱压上升15%，或是关键分别度下降15%时，都应当适时更换保护柱。
3、不慎发生强污染时，可以将分析柱卸下，单独冲洗保护柱，可以使污染物更快的从保护柱中流出。
但是不行超声清洗保护柱，以免损伤柱芯。
保护柱使用注意事项：1、独立式保护柱与分析柱连接时，连接管路尽可能短，且接口切面平滑，尽量削减死体积以降低柱外展宽效应。
2、卡套式保护柱一般未标注液流方向，使用时应自行标注，并依照标注方从来使用，以免正反向使用后，截留的杂质污染分析柱。
3、直接填装的短柱型保护柱，显现柱压上升或峰型变差时，可不接分析柱进行反向清洗，清洗溶剂可参考分析柱清洗溶剂。
4、卡套式保护柱，柱芯替换时，注意柱芯与柱套是否存在方向上的匹配，同时不易旋拧过紧，以防滑丝。
5、保护柱或柱芯一般不建议超声清洗，因可能对填料表面修饰有影响。
6、相像一保护柱配不同的分析柱使用，每次使用前，保护柱需先清洗并用流动相平衡保护柱一段时间后，再接分析柱使用。
使用保护柱的目的在于延长分析柱的使用寿命，但选择合适的保护柱更加紧要，选择或使用不当也可能带来截然相反的效果高效液相色谱仪分析样品的预处理高效液相色谱仪分析样品的种类繁多，物理形态广泛，构成及其浓度多而杂多变，对分析结果的干扰因素很多，为达到分析目的，样品要进行有效的预处理。
一、样品预处理的紧要性：1、样品预处理所用时间宏大于色谱分别时间。
2、消耗大量的溶剂和其它化学品，占分析消耗总成本最大。
3、样品预处理是试验的重复性和精准性最差的环节，是影响试验结果好坏的紧要因素。
色谱柱维护保养方法
色谱柱维护保养方法色谱柱维护保养非常重要，可以延长其使用寿命，并确保分离效果和分析结果的准确性。
以下是常见的色谱柱维护保养方法：1. 色谱柱的储存：如果打算长时间不使用色谱柱，可以将其封装，并储存在干燥、避光和温度适宜的地方，以防止柱内填料受潮、变质或分层。
2. 柱前保护：可以在色谱柱前端安装一个柱前保护器，以延长色谱柱的使用寿命。
柱前保护器可以过滤掉样品中的大颗粒物质，防止其对色谱柱造成损害，并保护柱后的检测器。
3. 样品预处理：对样品进行合适的前处理，如过滤、稀释、净化等，可以减少对色谱柱的损害，减轻色谱柱的负担。
4. 样品pH调节：合适的pH值可以增强样品的溶解性，降低颗粒物质的沉淀和析出，从而延长色谱柱的使用寿命。
但要注意不要超出色谱柱的pH范围限制。
5. 洗脱溶剂选择：选择适合的洗脱溶剂可以有效地清洗色谱柱，去除残留物质，恢复柱性能。
常用的洗脱溶剂包括纯水、有机溶剂、缓冲液等。
选择洗脱溶剂时，要注意其对色谱柱填料的溶解性以及对分离结果的影响。
6. 色谱柱的受控使用：在使用色谱柱进行分析时，要注意避免超过柱压和最大样品容量的限制，避免样品直接接触到填料床层面，避免样品中含有腐蚀性物质等。
7. 定期检查：可以定期检查色谱柱的性能，如检查柱背压、峰形、峰对称性、分辨率等。
8. 色谱柱的再生：当色谱柱分离效果下降时，可以尝试使用一些再生方法，如洗脱溶剂冲洗、温度升高、pH调节等，以恢复色谱柱的分离能力。
以上是色谱柱维护保养的一些常见方法，实际操作时应根据具体的色谱柱类型和样品特性进行调整。
此外，根据色谱柱供应商的建议和操作手册，进行正确的操作和保养也是非常重要的。
液相色谱柱保护柱安全操作及保养规程
液相色谱柱保护柱安全操作及保养规程液相色谱柱保护柱是在液相色谱分析中不可或缺的部分，它不仅可以延长色谱柱使用寿命，还能保证结果的准确性和可靠性。
但是，在使用液相色谱柱保护柱的过程中也存在一些潜在的危险，因此我们需要了解液相色谱柱保护柱的安全操作以及保养规程。
安全操作1. 确认柱保护柱适用于分析物在选择柱保护柱之前应该首先确认柱保护柱是否适用于分析物，也需要明确分析物的性质以及流动相的性质。
如果分析物中含有弱酸、弱碱成分，应该选择正相柱保护柱；如果分析物中含有酸性、碱性成分，则应该选择反相柱保护柱。
2. 正确连接柱保护柱在连接柱保护柱的时候需要确认连接口是否密封，避免柱保护柱造成柱床或者柱头受到破坏。
3. 确认起点和终点在连通柱保护柱之前，必须确定身份的起点和终点，以此来避免将流动相直接注入保护柱内部。
4. 避免高压冲击在液相色谱分析中，高压是常见的现象。
当高压过大或者压力突然降低时，会对柱保护柱造成冲击，导致保护柱损坏。
因此，需要避免压差过大，分段进行柱洗和换柱。
5. 避免液相中的氧化剂一些溶解度较差的氧化剂（如过氧化氢、亚硝酸盐等）会与柱保护柱中的硅酸胶反应，导致保护柱损坏。
因此，在使用液相色谱柱保护柱的时候需要避免使用这些氧化剂。
6. 定期更换柱保护柱柱保护柱是一种消耗品，在使用过程中需要定期更换。
如果不及时更换，柱保护柱中的沉淀物和过期的填料会对柱床造成污染，降低分析结果的准确性和可靠性。
保养规程1. 消毒为了避免保护柱内部发生细菌或者霉菌污染，需要定期消毒保护柱。
常用的消毒方法包括用有机溶剂洗涤、用二氧化硫气体灌注或者用过氧化氢消毒液处理。
2. 清洗柱体柱保护柱内部可能会形成脱落的硅酸胶颗粒，如果不及时清洗会对分析结果产生影响。
因此，需要定期用高纯度溶剂清洗柱体。
避免使用大量有机溶剂或者酸碱溶液，以免损坏保护柱。
3. 定时更换柱保护柱柱保护柱属于消耗品，使用一定时间之后需要及时更换。
在更换柱保护柱之前，应该进行柱床洗涤，避免污染保护柱内部。
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延长色谱柱使用寿命的方法色谱柱的使用寿命，除了与所分析的样品和流动相及使用频率有关系外，最主要的是与日常的委会密切相关。
为延长色谱柱的使用寿命，维护您的利益，请仔细阅读此部分。
色谱柱的使用寿命主要是分局柱效和柱压两个指标来衡量，如果一支色谱柱柱效太低或柱压太高，通常被认为该色谱柱已经结束。
因此，延长色谱柱使用寿命的关键是，消除引起柱效下降和柱压升高的因素。
以下是色谱柱的日常维护方法：一、流动相的PH应在使用的范围内Welch公司的色谱柱除反相氰基柱PH1.5-9.0外，其反相色谱柱的PH范围均为1.5-10，由于填料中存在Si-C和Si-O键，流动相超过其PH范围将会导致硅胶基质流失和键合相碳链断裂，使柱效下降，使用寿命变短。
由于流动相的PH 控制不当而对色谱柱造成的损害，通常很难是色谱柱恢复，因此必须认真对待，严格控制流动相的PH值。
二、去除样品和流动相中的固体颗粒样品和流动相中含有的固体颗粒物质会堵塞色谱柱筛板，筛板被堵住不仅会引起柱压的升高，而且也会引起柱效下降，因为筛板的堵塞会引起液流不均，导致色谱峰型拖尾、变宽，从而使柱效下降。
因此，建议使用超纯水和色谱纯试剂，在分析样品前对样品进行针筒过滤，流动相过0.45μm滤膜。
三、使用保护柱或在线过滤器样品和流动相经过滤后并不能完全消除固体颗粒物质，因为泵的磨损、密封圈和管路的老化也会产生固体颗粒物质，这些固体颗粒被流动相带入色谱柱，堵塞筛板，导致柱压升高、柱效下降。
保护柱和在线过滤器上都有筛板，其孔径与色谱柱孔径相同，因此可以阻止固体颗粒物质到达色谱柱，有效防止色谱柱筛板的堵塞。
由于柱压升高在分析故障中占很大比例，因此，除对样品和流动相进行过滤外，建议您在色谱柱进样端加上保护柱或在线过滤器。
如果去人色谱柱柱压升高是由于进样端筛板被堵引起的，科选择一下方式进行补救：1、先在色谱柱前加上保护柱或在线过滤器，然后用甲醇、水=20/80ml/min反向冲色谱柱180min。
2、先在色谱柱进样端加上保护柱或在线过滤器，然后反向使用。
四、正确使用缓冲盐缓冲盐通常易溶于水，难溶于有机溶剂，因此缓冲盐使用不当会使其析出，堵塞填料基质上的微孔和颗粒间的空隙，使填料板结，柱压上升；同时阻碍了基质上键合的碳链自由舒展，使色谱柱的保留能力下降，柱效降低。
缓冲盐析出后，去除非常困难，因此，正确的使用缓冲盐对延长色谱柱使用寿命非常重要。
正确使用缓冲盐的目的是防止缓冲盐析出，因此正确使用缓冲盐的方法可归结为一句话：使用前要过滤，使用后要冲洗。
具体方法如下：1、等度条件：使用缓冲盐前和使用后需用过渡流动相以1.0ml/min流速冲洗60min；使用后去除缓冲盐的另一个方法是用过渡流动相以0.2ml/min流速冲洗色谱柱过夜。
2、梯度条件：用含有缓冲盐的流动相跑梯度之前，用与初始流动相组成相同的过渡流动相以1.0ml/min流速冲洗60min，再用该过渡流动相以1.0ml/min冲洗色谱柱120min。
含缓冲盐流动相的梯度设定应尽量平缓，以避免梯度过程中缓冲盐析出。
注意：过渡流动相是指有机相和水相的组成与分析流动相相同，区别只是过渡流动相不含缓冲盐。
3、缓冲盐析出的补救方法：1）方案1：用甲醇/20/80以1.0ml/min流速35摄氏度条件下反向冲洗色谱柱120min 2）方案2：用甲醇/水=20/80以0.2ml/min流速反向冲洗色谱柱过夜。
五、防止强保留物质在色谱柱上存留强保留物质和大分子化合物在色谱柱中累积，对样品中的化合物产生额外的保留行为，不仅引起峰型变宽、拖尾，使柱效下降，同时也会引起保留时间的变化，累积到一定程度时还会导致柱压升高。
由于强保留物质和大分子化合物对色谱分离的影响是一个累积效应，需要一定的时间才会体现出来，但对许多药品特别是复杂样品而言，很难判断其是否是含有强保留物质，因此要防止强保留物质的累积，需要在每天的日常维护中用纯甲醇或乙氰清洗色谱柱。
清洗方法：1、未使用缓冲盐：每天分析完成后，先用上述方法除去缓冲盐，然后再用甲醇或乙氰反向冲洗色谱柱60min。
2、使用过缓冲盐：分析完成后，先用上述方法除去缓冲盐，然后在用纯甲醇或乙氰反向冲洗色谱柱60min3、补救方法：水——乙氰——氯仿（或异丙醇）——乙氰——水每一步以1.0ml/min流速反向冲洗色谱柱60min。
C18色谱柱的选用、保养与维修C18色谱柱的选用、保养与维修杨武亮林剑鸣姚煜※关键词C18色谱柱选用维修保养据统计，近80%的有机物及无机物可以用高效液相色谱法进行分离，其中反相色谱中的C18色谱柱是高效液相色谱中最为常用的一类色谱柱。
下面就C18色谱柱的选用、保养与维修作一介绍。
1C18色谱柱的选用C18的选用主要考虑2个问题，即柱填料和柱规格对色谱柱的影响。
1.1C18柱的填料对色谱柱的影响柱填料的物理性能对填料色谱行为有重要影响。
填料主要的物理性能包括如下：颗粒度、孔径、孔体积、键合相化学、含碳量及烷基化处理。
(1)颗粒度是指柱填料的颗粒直径的大小。
实际上色谱柱上所标的粒径是一个平均值。
如粒径“5μm”并不是柱中填料所有的颗粒直径都是5μm，实际上有一个颗粒分布度。
这种分布度对柱反压及柱效有重要作用。
一般来说，平均颗粒度越小，颗粒分布度越小，色谱柱效越高，反压亦越高。
目前C18柱填料粒径在4～10μm之间。
(2)孔径是指填料颗粒间的孔间隙。
一般所说的孔径是指填料的平均孔径。
球形填料装柱后平均孔径分布比较窄，柱床结构均匀，柱效高，重现性好；无定形填料平均孔径分布较宽，柱床结构不均匀，流动相线性速度不均匀，谱带扩宽。
平均孔径的大小对分离大分子化合物有较大的影响，在分离含有较大分子的样品时可能会有分子排阻效应，或产生吸附效应从而影响定量的回收率及准确度。
因而在用反相色谱分离诸如蛋白或多肽样品时应考虑选用大孔径(如30 nm)的反相柱填料。
孔体积作为硅胶多孔性的参数，在分离分析较大分子化合物时可作参考，选用较大孔体积的反相柱填料。
(3)化学键合相填料在高效液相色谱法中占有极重要的地位。
它可以键合极性较大的有机基团，采用极性较小的溶剂作流动相。
亦可键合极性较小的有机基团，选用极性较大的溶剂作流动相。
C18色谱柱是以硅烷化键合型(Si-O-Si-C)存在的，这类键合反应目前应用最为普遍。
如以十八烷基三氯硅烷与全多孔型硅胶M-Porasil-C18反应生成烷基化学键合相，商品名为M-Bondapak-C18。
(4)碳含量即填料中的含碳量。
传统的测量技术是将填料加热到碳氢键断裂，然后通过测定损失的重量或形成的二氧化碳来计算碳含量。
可以通过增加碳键的长度或增加键合密度来增加碳含量。
碳含量增加，柱子的保留值增加。
键合相的色谱行为与键合密度有关，也与硅胶的密度及填料的表面积有关，填料的密度越高，填柱所需的硅胶量越多，柱子的含碳量也越高。
如果用2种不同密度相同碳含量的填料填充柱子，其保留行为将明显不同。
因此，单独以碳含量来预测色谱行为是不够的。
(5)C18硅烷化试剂是一个大于2 nm大分子，因此会与已键合在相邻的硅醇基上的C18硅烷化试剂产生严重的立体位阻。
其结果导致在硅胶表面有大量的残留硅醇基没有与硅烷化试剂反应，这些极性的硅醇基在一定色谱条件下会与碱性化合物相互作用引起峰形拖尾，从而可影响定量分析结果。
这些问题在一定程度上可以通过烷基化处理加以克服。
烷基化处理是在键合相上完成的独立反应，以减少在硅胶表面的硅醇基。
烷基化处理采用小分子(如三甲硅烷)的试剂，其空间位阻远小于C18基团。
大多数固定相仅有30%可覆盖的键合位置。
据报道，通过某些极活跃的化学试剂及特殊的反应条件，最高的覆盖量可达50%。
很好地了解硅胶键合相的物理特性将有助于在高效液相色谱的反应中选择合适的色谱柱。
表面上看C18柱虽然化学官能团相同，而实际上不同品牌的C18柱性能可能有很大差别，从而产生不同的分离结果。
1.2C18柱的规格对色谱柱的影响柱填料的选择关系到色谱分离的可能性，而柱规格的选择直接影响分析速度、分离能力、检测能力及每次分析的溶剂消耗等。
柱规格包括两方面：柱内径和柱长度。
柱内径，分析型一般为2～6 mm,制备型20 mm，大者可达80 mm；柱长度，分析型5～30 cm，制备型15～50 cm。
一般来说，柱内径不影响分离度与分析时间的关系。
今天，柱技术已发展到不同柱内径的柱子能够具有相同的性能。
不同内径的柱子又各具特点，对相同的分析时间和分离度来说，内径大的柱子比内径小的柱子多消耗溶剂。
另一方面，较小内径的柱子对相同的检测信号来说所需样品量亦较少。
因此，在样品量有限时，可使用小内径柱。
柱长度增加虽可改善分离效果，但阻力也随之增加，必须提高入口压力。
柱压是同时影响增加分离度和减少分析时间的主要障碍。
分离度、分析时间及柱压三者相互制约，选择好其中两者，则第3个因素也就选好了。
长柱可以给出高分离度，短柱可提供快速分离，我们可以根据样品情况去选用合适的色谱柱。
1.3C18柱选用的基本原则(1)选用经过烷基化处理封口的填料可防止碱性化合物的拖尾现象。
(2)选用含碳量高的柱子，增加保留值。
(3)选用较短的柱子(如15 cm，7.5 cm)。
(4)选用小颗粒度的填料。
(5)对分子量大的组分选用大孔径填料的柱子。
2C18色谱柱的日常使用与保养在日常分离分析工作中，色谱柱使用是否得当，直接影响色谱柱的寿命。
下面介绍C18柱在日常使用过程中应注意的事项。
(1)柱子在装卸、更换时，动作要轻，接头拧紧要适度。
必须防止较强的机械振动，以免柱床产生空隙。
(2)如果仪器用来做常规分析，样品种类有限，但分析次数多，则不妨为每一类常规分析配置1根专用柱，这样有助于延长柱子的寿命。
(3)如使用柱温控制装置时，应注意在通入流动相后才能升温。
(4)流动相使用前需进行脱气处理，以免降低柱效和影响检测等。
样品溶液需经适当的前处理及过滤，以减少柱污染和堵塞。
(5)在更换流动相种类时，应注意溶剂的互溶性，防止发生盐析现象。
(6)柱子的实际操作压力应低于填装时的最高压力，最好在最高压力一半以下。
一般不超过20 593.965～2 9 419.95 kPa。
在低压力(≤14 709.975 k Pa)的范围使用，可使柱保持长时期的高柱效。
(7)C18色谱柱属非极性键合相色谱柱，流动相的pH值应严格控制在2～7之间，以免损坏柱子。
(8)在完成分离分析工作之后，不应立即停机，需及时对色谱分析系统进行冲洗，一般0.5 h以上，以除去色谱柱内的杂质。
(9)如果流动相中有盐类，首先用水充分清洗。
如果是胺类(如三甲胺类或四丁基胺类)添加到流动相中，要用50%甲醇和0.05%磷酸溶液混合溶剂冲洗，不要只用水冲洗。
(10)C18一般用100%甲醇作为保存溶剂，以防柱子干裂而损坏。