中药壁虎抗肿瘤作用的实验研究
无蹼壁虎药用成分抗肿瘤效果

无蹼壁虎药用成分抗肿瘤效果李耀辉;盛继文;耿秀芳;邵建新;赵小娟;张仕状【期刊名称】《陕西中医》【年(卷),期】2009(030)007【摘要】目的:改进无蹼壁虎药用成分的分离纯化方法和研究无蹼壁虎药用成分的抗肿瘤活性.方法:Al2O3柱层析分离纯化壁虎抗肿瘤成分,HPLC色谱法检测改进方法的分离纯化效果,甲基噻唑蓝(MTT)法测定HepG2肿瘤细胞株的生长,观察壁虎药用成分的抗肿瘤效果,流式细胞仪法测定药物诱导的细胞凋亡率.结果:Al2O3柱层析较硅胶柱层析改善了有效成分的分离纯化效果.壁虎中提取得到的成分对人肝癌肿瘤生长具有显著的抑制作用且呈与时间和剂量的相关性,显示出诱导肿瘤细胞凋亡的作用.结论:初步的提取纯化方法是有效的,壁虎的有效药物成分可能通过诱导细胞凋亡而发挥其抗肿瘤作用.【总页数】3页(P899-901)【作者】李耀辉;盛继文;耿秀芳;邵建新;赵小娟;张仕状【作者单位】潍坊医学院医用化学教研室,潍坊,261053;潍坊医学院医用化学教研室,潍坊,261053;潍坊医学院生物化学教研室;潍坊医学院医用化学教研室,潍坊,261053;潍坊医学院生物化学专业;潍坊医学院附属医院影像中心,261031【正文语种】中文【中图分类】R2【相关文献】1.无蹼壁虎线粒体全基因组及系统发育分析 [J], 秦峰;曾德龙;高成伟;秦新民;2.无蹼壁虎抗肿瘤活性成分对HepG2细胞增殖、迁移及凋亡的影响 [J], 谢斌;高志芹;石剑飞;于文静;连波;张仕状;刘顺梅3.三种壁虎染色体核仁组织者的银染色观察与无蹼壁虎的核型 [J], 郭超文;李洁莉4.无蹼壁虎和多疣壁虎种群内的差异 [J], 雷富民;方荣盛5.无蹼壁虎抗肿瘤活性成分对ECV304细胞增殖和凋亡的影响 [J], 赵静;吴潼;高志芹;于文静;谢斌;张仕状;李耀辉因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
壁虎、龙葵治疗肿瘤的药理与临床研究论文(共2篇)

壁虎、龙葵治疗肿瘤的药理与临床研究论文(共2篇)本文从网络收集而来,上传到平台为了帮到更多的人,如果您需要使用本文档,请点击下载按钮下载本文档(有偿下载),另外祝您生活愉快,工作顺利,万事如意!第一篇:壁虎治疗“肿瘤”的本草考证及药理探讨壁虎科动物无蹼壁虎或其他几种壁虎的全体[1]。
据记载,《本草纲目》已引前人记载,并对其各详加注释:(恭曰)蝘蜓又名蝎虎,以其常在屋壁、故名守宫,亦名壁虎。
蝘蜓《尔雅》、蝎虎、壁宫《唐本草》、壁宫子《圣惠方》、天龙《饮片新参》、爬壁虎《四川中药志》[2]。
时珍曰守宫善捕蝎、蝇,故得虎名。
扬雄方言云:秦晋、西夏为之守宫,亦曰蝘蜓,南阳人呼为蝘蜓,在泽中为之蜥蜴,楚人为之蝾螈。
并对守宫形态、习性进行了详述:守宫,处处人家墙壁有之,状如蛇医,面灰黑色,扁头长颈,细鳞四足,长者六、七寸,亦不闻诬人[3]。
以上记载表明,守宫之名最早见于《尔雅》,而入药最早应是唐代《唐本草》,亦即《新修本草》。
关于壁虎治疗肿瘤的历史记载《本草纲目》对壁虎的气味、主治叙述较详。
时珍曰:壁虎气味寒、咸,有小毒。
主治中风瘫痪、手足不举,或历节风痛,及风痉惊痫,小儿疳痢,疬风瘰疬,血积成痞,疗蝎螯。
中医认为,气为血帅,血随气行,气滞血瘀,遂成积聚肿块。
清代名医王清任《医林改错》中说:“肚腹结块,必有形之血。
”说明肿瘤的形成与气滞血瘀有关。
守宫散结止痛。
具有活血化瘀的功能,瘀去则疼痛止,血行则经脉通。
时珍曰:血积成块,用壁虎一枚,白面和一鸭子大包裹研烂,作饼烙熟食之,当下血块,不过三五次即愈,甚验。
现代研究证明,活血化瘀可促进新陈代谢,消炎止痛,改善局部循环,之功效。
动物实验表明,散结类中药有抗癌或抑癌的功效。
本品性寒,寒能治热。
时珍用守宫(壁虎、天龙)治血积成痞,疬风瘰疬,反胃膈气均属现代医学的肿瘤范畴。
《医宗金鉴》论噎膈,反胃甚详:喷门干枯,则纳入水谷之道狭隘,故食不能下,为噎食也;《丹溪心法》”翻胃即膈噎,膈噎乃翻胃之渐。
壁虎的药理作用与临床应用研究进展

广 州 5 0 1 1 5 5)
【 要 】 对 壁 虎 的 药 理 作 用及 临 床 应 用 研 究进 展 进 行 了概 述 , 为 壁 虎 有 祛 风 活 络 、 结 止 痛 、 静 解 痉 的功 效 , 有很 摘 认 散 镇 具 好 的 药 用 价 值 , 于 治 疗 恶性 肿 瘤 、 用 结核 病 、 髓 炎 、 管 等 疑 难 杂 症 疗 效 确 切 。 骨 瘘
均 有 一 定 的 抑 制 作用 , 中 以全 壁 虎 的提 取 液 抗 肿 瘤 效 果 最 其
佳, 其低 、 高剂量组 的抑 瘤率为3 .%和5 .%, 内脏 低 、 1 6 21 而 高 剂量组 的抑瘤率仅 为8 %和 1.%, 内实验的结果再一次 . 4 68 体
吃完1500条壁虎治愈了肺癌,奇迹般痊愈,救了一条命!

吃完1500条壁虎治愈了肺癌,奇迹般痊愈,救了一条命!来自:民间验方传闻壁虎抗癌的药用价值壁虎是蜥蜴目的1种,又称守宫。
体背腹扁平,身上排列着粒鳞或杂有疣鳞。
指、趾端扩展,其下方形成皮肤褶襞,密布腺毛,有粘附能力,可在墙壁、天花板或光滑的平面上迅速爬行。
其中壁虎属约20种,中国产8种,常见的有多疣壁虎、无蹼壁虎、蹼趾壁虎与壁虎。
蜥虎属中国已知4种,半叶趾虎属、截趾虎属和蝎虎属中国各有1种,主要分布于华南地区。
本科动物没有活动的眼睑。
壁虎受到强烈干扰时,它的尾巴可自行截断,以后还再生出来新尾巴。
壁虎生活于建筑物内,以蚊、蝇、飞蛾等昆虫为食。
夜间活动,夏秋的晚上常出没于有灯光照射的墙壁、天花板、檐下或电杆上,白天潜伏于壁缝、瓦角下、橱柜背后等隐蔽处,并在这些隐蔽地方产卵,每产2枚;卵白色,卵圆形,壳易破碎。
孵化期1个多月。
壁虎去内脏的干制品入中药,名“天龙”,有补肺肾、益精血、止咳定喘、镇痉祛风和发散消肿的功效,可治淋巴结核、神经痛、慢性关节炎、乳房肿块等。
壁虎临床用于治疗食道癌、肠癌、原发性肝癌、肺癌等。
⑴治疗原发性肝癌、肺癌:壁虎注射液,每支2ml,含生药2g。
肌肉注射每次4~6ml,每日2次。
共治肝癌48例,总有效率为54%;治肺癌27例,显效2例,有效15例,总有效率为62.9%[11:103]。
⑵治疗食管癌:用壁虎50g(夏季用活壁虎10条),泽漆100g,锡块50g,用黄酒100ml浸泡5~7日,滤去药渣,制成壁虎酒。
每日3次,口服,每次25~50ml。
共治疗食管癌患者42例,治愈率为30.95%,总有效率为92.86%[16:1128]。
每日用壁虎1条和米适量炒至焦黄,研成细粉,分2~3次以少量黄酒调服。
治疗4例,临床症状均消失。
钡餐造影复查,1例食道下段狭窄消失,但边缘仍欠整齐;1例食道下段狭窄较前为轻;1例见癌灶消失;1例食道中段仍然狭窄,但脱落细胞检查阴性。
壁虎的干制品入中药,名“天龙壁虎”,有补肺肾、益精血、止咳定喘、镇痉祛风和发散消肿的功效,用于中风瘫痪,风湿关节痛,骨髓炎、淋巴结核,肿瘤。
鲜无蹼壁虎抗肿瘤活性成分脂质体研制及抗肿瘤实验研究

鲜无蹼壁虎抗肿瘤活性成分脂质体研制及抗肿瘤实验研究目的:鲜无蹼壁虎抗肿瘤活性成分提取分离纯化,鲜无蹼壁虎抗肿瘤活性成分脂质体的研制,鲜无蹼壁虎抗肿瘤活性成分抗实验性恶性肿瘤的药效学研究,初步探讨鲜无蹼壁虎抗肿瘤活性成分抗癌作用机制,探索癌症治疗药物靶向给药的新思路、新方法和新技术。
方法:捕捉地道鲜无蹼壁虎,并与蜥蜴相区别,MTT 法体外药理,药效学指导下考察不同提取方法的有效性,筛选最佳提取方案,采用85%乙醇超声提取鲜无蹼壁虎抗肿瘤活性成分,利用逆相蒸发法、薄膜分散法、旋转薄膜-超声法制备抗肿瘤活性成分脂质体,以粒径及其分布、包封率、载药量等为指标,通过单因素考察类脂材料用量、药物用量、超声强度、超声时间和水浴温度等对脂质体的影响,制备包封率较高的药物脂质体。
药效学体外实验用不同浓度的鲜无蹼壁虎抗肿瘤活性成分混悬液,分别处理CT-26和Heper-G2细胞株,MTT检测肿瘤细胞的生长活性,检测细胞凋亡率;体内动物实验采用4~6周龄,体重(22±2)g,♀,BALB/C小鼠动物造模。
小鼠恒温(25℃),恒湿度(45%)常规饲养,各小鼠左后肢背侧皮下接种CT-26细胞悬液0.1ml(5.5×105·ml-1),筛选出造模成功小鼠,随机分组:即正常对照组;荷瘤小鼠对照组;环磷酰胺阳性对照组;鲜无蹼壁虎抗肿瘤活性成分治疗组。
鲜无蹼壁虎抗肿瘤活性成分治疗组:于接种高致瘤性CT-26肿瘤细胞10d后开始腹腔注射(ip)鲜无蹼壁虎抗肿瘤活性成分混悬液及其脂质体,剂量分别为1mg·kg-1、5mg·kg-1、10 mg·kg-1;荷瘤小鼠对照组:腹腔注射等体积的生理盐水。
阳性对照组:腹腔注射环磷酰胺100mg·kg-1。
各组均qd,每天上午一次,共12天。
于治疗结束后脱颈处死全部小鼠,将小鼠摘眼球取血,ELISA法测定TNF-α含量,剥离瘤块,称瘤重,计算抑瘤率。
中药壁虎抗消化道肿瘤作用机制的研究进展

验结束 尚未见肿瘤生 长; 天龙 组 、 联 合组 的移植 瘤体 积 、 瘤 重均
明显小于模型组 , 联合组 与天龙组 比较 , 抑瘤率有所 提高 。这些 结果表 明天龙有与 5一F u相似 的抑瘤效 果 , 在 一定 程度上 抑制
白质 、 氨基酸 、 维生素和各 种微量元 素 , 但在抗 肿瘤 有效成 分 的 寻找方面取得成果不多 , 目前以壁虎小分 子肽类 成分研究为 主。
脏的干燥全体 , 是 传统 的成寒 软坚 中药 ,又名 天龙 、 守宫 等 , 其
味咸寒有小毒 , 具有祛风 、 定惊、 散结 、 解毒 的功效 J 。近年来 多
种丸 、 散、 膏等剂型已经人药 , 广泛应用于临床多种 疾病 , 对 多种
恶性肿瘤 、 结 核病 、 骨髓 炎 、 瘘管 、 窦道 等疑 难杂症 有确 切疗效 , 已愈来愈引起 医疗界的密切关注。药理学研究发现壁虎具 有抗
中药壁 虎抗 消化道肿 瘤作 用机制的研究进展
赵华 山 余 红 王建 刚
河北唐山 0 6 3 0 0 0 ) 某些抗 癌 中药 和有效 成分 被证 明是 ( 河北 联合大学基础医学院
[ 关键词 ] 壁虎 抗 肿瘤 机制 综述
壁虎的功效与作用

壁虎的功效与作用壁虎是一种常见的爬行动物,它们广泛分布于世界各地,尤其是亚洲和非洲地区。
壁虎有着许多令人印象深刻的特征,如能够爬墙和吸附在垂直表面上,这些特征使得壁虎在生态和医药领域具有广泛的应用。
本文将探讨壁虎的功效与作用。
一、在生态系统中的作用壁虎在生态系统中发挥着重要的作用。
它们是害虫的天敌,食用蚊子、苍蝇、蟑螂等害虫,有助于维持生态平衡和减少害虫的数量。
尤其是在城市环境中,壁虎常被人们作为杀虫剂的替代品,能够有效控制害虫的数量,减少对人类和农作物的侵害。
此外,壁虎在生态链的顶端,它们的数量和分布对其他物种的存活和繁衍起着重要的影响。
壁虎的出现能够加强食物链的稳定性,维持物种多样性。
二、在中医药领域的应用在中国传统医学中,壁虎被广泛应用于中药配方中。
壁虎以其独特的药用功效备受关注。
据中医理论,壁虎性寒,味甘咸,具有清热解毒、生津止渴、散瘙止痒等作用。
以下是壁虎在中医药领域的几个主要应用方面:1. 政散瘀血:壁虎具有活血化瘀的功效,能够改善血液循环,促进伤口愈合。
在中医临床上,壁虎常被应用于治疗各种外伤和瘀血症状,如挫伤、骨折、淤血、血瘀等。
2. 清热解毒:壁虎有清热解毒的作用,常被用于治疗高热、痈肿、疮疡等症状。
壁虎能够降低体温、抑制炎症反应,有效消除热毒。
3. 润肺止咳:壁虎具有润肺止咳的功效,可以舒缓喉咙痛、咳嗽和气喘等呼吸系统疾病。
在传统中医药中,壁虎常被应用于治疗哮喘、慢性支气管炎等疾病。
4. 祛风除湿:壁虎具有祛风除湿的作用,能够缓解关节炎疼痛和风湿性关节炎等疾病。
壁虎的身体具有寒性,能够消除体内寒湿,改善湿气引起的疼痛和肿胀。
三、现代医学研究进展除了中医药领域的应用外,壁虎在现代医学研究方面也有许多进展。
1. 抗癌作用:最近的研究表明,壁虎拥有抗肿瘤的潜力。
研究发现,壁虎提取物中的活性成分可以抑制肿瘤的生长和扩散,并促进肿瘤细胞凋亡。
特别是在肺癌和乳腺癌等恶性肿瘤的治疗中,壁虎展示出了显著的抗癌效果。
名老中医:用壁虎治疗晚期食管癌的医案

名⽼中医:⽤壁虎治疗晚期⾷管癌的医案李修五(1923-1998),河南兰考⼈,出⾝于中医世家,原河南中医学院内科教授,全国第⼆批名⽼中医药专家学术经验继承指导⽼师,⾏医50余年,对恶性肿瘤的诊治颇具⼼得。
李修五⾏医五⼗余载,师古⽽不泥古,继承不忘创新,擅长治疗急性热病、⼼脑⾎管疾病、恶性肿瘤等疑难杂症。
多年来从事癌症防治研究,对恶性肿瘤有独到见解,组⽅⽤药严谨,疗效显著。
李⽒临床善⽤虎七散合旋覆代赭汤为基本⽅,以旋覆代赭汤扶正祛邪,降逆化痰、化瘀散结,配服虎七散解毒抗癌辨证治疗⾷道癌、胃癌等消化道癌症,每每都能取得很好的疗效。
【组成】壁虎70条焙⼲研⾯,加三七粉50g拌匀。
空腹每次服3 -4g,⽇2次,黄酒或开⽔送下。
【功效】理⽓化痰,破瘀软坚。
【主治】⾷管癌、胃癌。
【加减]瘀毒阻滞明显者,以蜈蚣30g,全蝎30g,⼟鳖⾍30g,⽩花蛇30g,⼴⽊⾹30g,鸡内⾦30g,三七15g,共为细末,每服3g,⽇2次,配合使⽤;⾷道梗阻、咽⾷不下者,配服开道散,以硼砂60g,⽕硝30g,硇砂6g,沉⾹、冰⽚各9g,礞⽯15g,共研粉,每次1g,含服,徐徐咽下,每⼩时1次,待黏沫吐尽,能进流质饮⾷后,改为3⼩时1次,连⽤2天后停⽤。
壁虎开道酒录⾃《中草药⼟⽅⼟法》活壁虎五条⽩酒⼀⽄⽤法:⽤锡壶盛酒,把壁虎放⼊酒内浸泡两天后即可使⽤。
每天早、中、晚饭前半⼩时饮⼗毫升,慢慢吮下。
湖北医学院第⼆附属医院于1969年9⾄11⽉,⽤上⽅观察⼗多例⾷道癌全梗阻患者,除⼀例不能饮酒外,其余均在服药后⼆⼗分钟达到开通⾷道的效果,⽴即饮⽔⽆阻。
部份病例第⼆天可吃⽶粑、⾯包和半流汁。
壁虎酒具有开通⾷道的效果,但不能根治肿瘤,必须在⾷道开通后配合有效⽅药治疗。
利膈散录⾃《朱良春精⽅治验实录》【组成】守宫、全蝎、蜂房、僵蚕、煅赭⽯各30克。
【⽤法】共研极细末每服4克,1⽇3次。
【功⽤】抗癌消瘤、软坚破结、降⽓利膈。
【主治】治疗晚期⾷管癌。
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中药壁虎抗肿瘤作用的实验研究(作者:___________单位: ___________邮编: ___________)作者:刘菲,王建刚,席守民,马晓娟【摘要】目的探讨中药壁虎抗肿瘤作用及其作用机制。
方法建立移植瘤小鼠S180肉瘤模型,将50只雌鼠随机分为对照组、环磷酰胺组、壁虎高组、中组、低组共5组,分别给于生理盐水灌胃1次/d,CTX(100 mg/kg)腹腔注射1次,壁虎高、中、低组(13.5,9,4.5 g/kg),每天灌胃1次。
14 d后,称取荷瘤小鼠瘤重、胸腺重、脾脏重,计算抑瘤率、胸腺指数、脾脏指数,观察腹腔巨噬细胞吞噬鸡血红细胞实验指标;用SABC免疫组化法检测血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的蛋白表达,TUNEL方法检测细胞凋亡率。
结果中药壁虎可抑制小鼠肉瘤S180 生长,高、中、低组抑瘤率可达49.8%,52.8%,43.1%;对免疫器官无影响;可降低肿瘤组织VEGF,bFGF蛋白的表达,诱导肿瘤细胞凋亡。
结论中药壁虎有抗肿瘤活性,其抗肿瘤的部分作用可能通过诱导肿瘤细胞的凋亡及抑制肿瘤血管的生成而实现。
【关键词】中药壁虎小鼠肉瘤S180 血管内皮生长因子碱性成纤维细胞生长因子Abstract:ObjectiveTo study the anti-tumor action of Gecko and its mechanism.MethodsThe transplanted tumor model of the mouse S180 sarcoma was established.Fifty mice were randomly divided into five groups,the control group,the CTX group,the Gecko group(high dose,middle dose,low dose).They were treated respectively with oral administration of saline,and intraperitoneal injection of CTX 100 mg/kg only one time,oral administration of Gecko in doses of 13.5,9,4.5 g/kg,one time a day.After 14 days,the anti-tumor activity was evaluated by tumor tissue weighing. The impact on immune organ was detected by accounting thymus index, spleen index and the number of peritoneal macrophage which phagocytose chicken red blood cells.The protein express of vascular endothelin growth factor(VEGF) and basic fibroblast growth factor(bFGF) were detected by SABC immunohistochemistry. The cell apoptotic rate was detected by TUNEL method.ResultsChinese medicine Gecko could obviously inhibit S180 sarcoma of mice,the inhibiting rate was 49.8%,52.8%,43.1% ,it had no impact on immune organ.It could reduce VEGF and bFGF protein expression in tumor tissue and induce tumor cell apoptosis.ConclusionChinese medicine Gecko has anti-tumor activity and its mechanism might be related toinduction of tumor cell apoptosis and the down-regulation of protein expression of VEGF and bFGF.Key words:Chinese medicine Gecko;S180 sarcoma of mouse;Vascular endothelin growth factor;Basic fibroblast growth factor壁虎又称为守宫、天龙等。
为壁虎科动物无蹼壁虎或多痣壁虎,多疣壁虎及其它几种壁虎的干燥全体,壁虎产于全国各地,性味寒,主要成分含马蜂毒类物质及组织胺类、蛋白质等,有攻毒疗疮、散结止疼、活血化瘀之效。
近年来多作丸、散、膏等剂型入药,临床多用于恶性肿瘤的治疗[1]。
本文旨在用移植性肿瘤整体动物研究方法,观察中药壁虎的抗肿瘤活性及其作用机制。
1 材料与方法1.1 材料1.1.1 药品与试剂中药壁虎购自安徽省亳州市永刚饮片厂有限公司。
将壁虎干燥全体研磨成细粉干燥保存。
用0.2%羧甲基纤维素将壁虎粉稀释成混悬液备用。
环磷酰胺购自江苏恒瑞医药股份有限公司(批号H32020857)。
细胞凋亡检测试剂盒(TUNEL法),VEGF、bFGF免疫组化染色试剂盒,DAB显色试剂盒均购自武汉博士德生物工程有限公司。
1. 1. 2 动物及瘤株试验所用昆明种小鼠由河南省医学实验动物中心提供(合格证:0001350 ),体重(26±2)g,均为雌鼠。
小鼠S180肉瘤的种鼠由河南省医科所提供。
1. 2 方法1.2.1 中药壁虎对小鼠S180移植瘤的抑制作用观察无菌抽取接种7 d 的小鼠S180腹水,用生理盐水稀释成8 ×106·L-1细胞悬液,每鼠右前腋皮下接种0.2 ml ,24 h 后将小鼠随机分成生理盐水对照组、CTX组、中药壁虎高(13.5 g/kg)、中(9 g/kg)、低(4.5 g/kg)3个剂量组共5 组,每组各10 只,每日小鼠称重后,阴性对照组根据体重按0.2 ml/10 g用生理盐水灌胃1次,环磷酰胺(CTX)按100 mg/kg第1天腹腔注射1次,壁虎组用0.2%羧甲基纤维素稀释至高(0.675 g/ml)、中(0.45 g/ml)、低(0.225 g/ml)浓度混悬液,按0.2 ml/10 g根据体重每天灌胃一次,共14 d。
14 d 后小鼠称重,眼眶取血计数白细胞数,脱臼处死取瘤块称重。
肿瘤抑瘤率= (对照组平均瘤重- 给药组平均瘤重)/ 对照组平均瘤重×100 %[2]1.2.2 中药壁虎对荷瘤小鼠免疫功能的影响按上述方法对小鼠S180移植瘤的抑制作用观察14 d 后,处死动物取胸腺、脾脏称重。
胸腺指数=胸腺重/体重,脾脏指数=脾脏重/体重[3];观察荷瘤小鼠巨噬细胞吞噬功能的影响[4],对小鼠S180移植瘤的抑制作用观察第14天,用药后2 h每鼠腹腔注射5%鸡红细胞0.4 ml,12 h后处死动物消毒腹部,剪开皮肤,经腹腔注入生理盐水2 ml,转动固定板1 min,然后抽取腹腔液1 ml滴涂于干净载玻片,置于37度的孵箱中温育30 min,以丙酮-甲醇液(1∶1)固定5 min,再用4%姬姆萨瑞特氏液染色5 min,用蒸馏水漂洗晾干。
在油镜下计数200个巨噬细胞中吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数及每个巨噬细胞中被吞噬的红细胞数,按下公式计算:吞噬百分率(%)=吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数/200个巨噬细胞×100 %吞噬指数=被吞噬的鸡红细胞总数/200个巨噬细胞1.2.3 小鼠S180肉瘤组织病理学变化肿瘤组织用10%中性甲醛固定,石蜡包埋切片,常规HE染色,光镜观察肉瘤组织病理变化。
1.2.4 VEGF,bFGF蛋白表达的检测用SABC免疫组化法,操作步骤按照试剂盒说明书进行。
苏木素复染细胞核,将已知的阳性切片作阳性对照,以PBS代替一抗作为阴性对照,VEGF及bFGF判定与分析:凡细胞浆、细胞膜出现棕黄色颗粒或均质样棕黄色结构者为VEGF或bFGF免疫反应阳性细胞。
免疫组化染色评分按Rahman等[5]的方法进行,评分标准是:根据着色细胞的比例(染色范围)及染色强度,染色范围(阳性细胞比率)分为0~4级,阴性为0分;阳性细胞1%~25%为1分;25%~50%为2分;51%~75%为3分;76%~100%为4分。
染色强度划分为0~3级,阴性为0分;弱阳性为1分;中等强度为2分;强阳性为3分;两者得分相加为最后得分。
1.2.5 细胞凋亡率检测用原位末端脱氧核苷酸转移酶标记法(TUNEL)法检测[6],小鼠肉瘤石蜡切片常规脱蜡,操作步骤按照试剂盒说明书进行,苏木素复染细胞核,将已知的阳性切片作阳性对照,以不含末端脱氧核糖核酸转移酶的标记液处理的切片作阴性对照,细胞核中出现棕黄色颗粒为阳性细胞,随机选10个视野,每个视野观察100个细胞,计数阳性细胞数,计算凋亡指数(apoptoticIndex,AI)AI(%)=阳性细胞计数/观察细胞总数×100%。
1.2.6 统计学方法实验数据采用±s表示,应用SPASS12.0统计软件进行统计学处理,多组间数据采用方差分析,两两比较采用t检验。
2 结果2.1 壁虎对小鼠S180肉瘤的抑制作用由表1可知壁虎组各组瘤重明显降低,高、中、低组抑瘤率分别为49.8%,52.8%,43.1% ,与阴性对照组相比有显著差异(P0.01),说明壁虎有抗肿瘤活性。
从白细胞计数结果显示各用药组白细胞数均有所降低,以环磷酰胺组降低明显(P0.05),壁虎各组也降低,但与对照组比较无明显差异(P0.05)。
表1 各组对小鼠S180肉瘤的抑制作用(略)2.2 壁虎对荷瘤小鼠免疫功能的影响见表2。
可知CTX组与对照组相比,胸腺指数与脾脏指数明显降低(P0.05),壁虎各剂量组与对照组相比无明显差异。
吞噬百分率与吞噬指数方面,CTX组与对照组相比显著降低(P0.01);壁虎组与对照组相比明显降低(P0.05)。
说明中药壁虎没有增强荷瘤小鼠的免疫功能作用。
表2 各组对荷瘤小鼠免疫功能的影响(略)2.3 小鼠S180肉瘤组织病理学变化见图1。
经HE染色后镜下观察,可见瘤组织呈巢状或片状生长,肿瘤细胞密集排列,细胞大小不同,形态各异;细胞核大小不一,核质比例增大;染色质呈颗粒状,分布不均匀,可见不对称性,多极性核分裂等病理性核分裂象。