琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制

2020/12/2
10
另取5支试管，标号，按下表操作
试剂
1号管 2号管 3号管 4号管 5号管
0.25%琥珀酸钠液
0.5
—
0.5
2
0.5
（ml）
0.5%草酸钠溶液（ml） —
0.5 0.5 0.5
2
蒸馏水（ml）
2
2 1.5 — —
肝糜液（ml） 1
1
1
1
1
甲稀兰（ml） 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2
2020/12/2
11
❖ 摇匀，静置于37℃的水浴中，注意观察各试 管的颜色变化。记录各管颜色消退的顺序和 时间，并进行分析。
2020/12/2
12
注意事项：
❖ 肝脏一定要充分研磨至糊状，以使琥珀酸脱 氢酶尽量释放到溶液中。
❖ 离心时注意离心管一定要精确平衡，并将重 量相同的离心管对称放置。（用天平精密平衡离心
❖ 试剂 pH7.4磷酸缓冲液 0.5%草酸钠溶液 生理盐水
0.25%琥珀酸钠溶液 0.01%甲稀兰溶液
2020/12/2
9
实验操作
❖ 肝糜液的制备： 用颈椎脱臼法处死小白鼠，立即剖腹将肝脏 全部取出，用生理盐水洗净肝脏，充分研碎 至糊状，然后分批加入少量磷酸缓冲液，边 加边磨，总共加入7ml，搅拌后离心约5分钟 （3000rpm）,将上清液倒入另一试管钟备用， 此即为含有琥珀酸脱氢酶的肝糜液。
管和它们的内容物，若有套筒，离心管应与套筒一起平衡， 否则轻者造成离心机损坏，重者会引起人员伤亡）（平衡后 应对称放置，不能错位，以免因离心所产生的离心力不对称 而损坏离心轴）
2020/12/2
13
❖ 离心结束后拿取离心管时动作要轻柔，不能震 荡离心管，以免肝糜液重新变浑浊。
❖ 反应开始后，反应液必须静止，不能再摇动。
2020/12/2
7
❖ 离心分离的原理： 将处于悬浮状态的细胞，细胞器，病毒和生 物大分子等称为“颗粒”，每个颗粒都有一 定大小，形状，密度和质量。当离心机转子 高速旋转时这些颗粒在介质中发生沉降或漂 浮，它的沉降速度与作用在颗粒上的力的大 小和方向有关。
2020/12/2
8
实验器材与试剂：
❖ 器材： 小白鼠，研钵，手术剪，手术镊子，2ml移 液管，10ml离心管，低速离心机
琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制
2020/12/2
1
问题
❖ 琥珀酸脱氢酶是哪个代谢途径中的酶，该酶 位于细胞的什么部位？催化什么化学反应？ 实验方案是如何设计检查该酶的活性状况？
❖ 何为竞争性抑制？本次试验中选择的抑制剂 是什么？如何设计实验方案检测该酶被抑制 的程度？
2020/12/2
2
精品料
• 你怎么称呼老师？ • 如果老师最后没有总结一节课的重点的难点，你
是否会认为老师的教学方法需要改进？ • 你所经历的课堂，是讲座式还是讨论式？ • 教师的教鞭 • “不怕太阳晒，也不怕那风雨狂，只怕先生骂我
笨，没有学问无颜见爹娘 ……” • “太阳当空照，花儿对我笑，小鸟说早早早……”
4
实验目的：
❖ 学习动物的处死与组织匀浆的方法 ❖ 学习离心机的使用方法 ❖ 进一步理解酶的竞争性抑制原理
2020/12/2
5
实验原理：
❖ 竞争性抑制是指分子结构与底物相似的抑制 剂可与底物竞争性结合酶的活性中心，抑制 酶的活性。竞争性抑制剂的抑制程度取决于 抑制剂与酶的亲和力及于底物的相对比例。
2020/12/2
6
❖ 草酸与琥珀酸分子结构相似，是琥珀酸脱氢酶 的竞争性抑制剂。琥珀酸脱氢酶催化琥珀酸脱 氢生成延胡索酸。在体内琥珀酸脱下的2H经 电子传递链传递，最后与氧结合生成水，并释 放能量。在体外则可用甲稀兰作为受H体，甲 稀兰接受琥珀酸脱下的2H而被还原为甲白， 由蓝色变为无色。在甲稀兰含量一定的条件下， 蓝色消退的快慢程度可指示琥珀酸脱氢酶的活 性，因此，可以依据蓝色消退的时间来判断该 酶活性被抑制的程度。
2020/12/2
14