香菇多糖提取作业
香菇多糖的提取方法及应用

香菇多糖的提取方法及应用香菇多糖是从香菇中提取的一种多糖类化合物,具有抗肿瘤、抗病毒、降血脂、降血糖等多种药理活性。
提取香菇多糖的方法主要包括水提法、酸提法、碱提法、酶解法等多种方法。
下面将对香菇多糖的提取方法及应用做详细介绍。
1. 水提法水提法是将香菇切碎后用水浸泡,通过水提取的方法获得香菇多糖的一种提取方法。
其优点是提取过程简单,设备要求低,且操作方便。
但缺点是提取率较低,且容易受到微生物污染。
2. 酸提法酸提法是将香菇切碎后用酸性溶液浸泡,通过酸的作用来提取多糖。
酸提取的优点是提取率高,但也会产生废液排放问题,同时酸性溶液容易对蛋白质产生影响。
3. 碱提法碱提法是将香菇切碎后用碱性溶液浸泡,通过碱的作用来提取多糖。
碱提取的优点是提取率高,同时对蛋白质影响较小。
但碱性溶液的使用需要注意对环境的影响,且碱性条件下易使多糖发生降解。
4. 酶解法酶解法是通过加入酶类来促进多糖的提取,能够有效地增加提取率。
但酶类的成本较高,同时酶解条件的控制较为严格。
提取得到的香菇多糖可以通过浓缩、絮凝、沉淀及净化等方法得到纯净的多糖产品。
香菇多糖的应用广泛,主要包括以下几个方面:1. 药品领域香菇多糖具有抗肿瘤、抗病毒的作用,被广泛应用于肿瘤治疗、免疫调节、抗病毒等方面。
临床研究表明,长期服用香菇多糖可以增强人体免疫力,减少感染病毒的风险。
2. 食品工业香菇多糖可作为功能性食品添加剂,提高食品的营养价值,增加食品的功能性。
例如可以将香菇多糖添加到饼干、饮料、果冻等食品中,以增强食品的健康功能。
3. 化妆品领域香菇多糖具有较好的保湿性,被应用于化妆品中具有很好的效果,如护肤乳液、面膜等产品中。
4. 其他领域香菇多糖还可以用于环保领域,例如用于废水处理,其能够起到絮凝剂的作用,帮助去除水中的杂质,达到净化水质的效果。
总而言之,香菇多糖的提取方法多样化,可以根据需要选择适合的提取方法,提取得到的多糖产品应用广泛,涉及药品、食品、化妆品等多个领域,具有很好的开发和利用前景。
香菇多糖的提取制备

三、操作要点 1.预处理:取干香菇,捣碎。 2.提取:将捣碎的干香菇置于不锈钢反应锅中,在搅拌 的条件下加6—7倍量水混匀,加热至90℃,搅拌保温60 min, 降温至40℃时转移到40℃水浴保温;并加入适量蛋白水解酶 液,pH值为自然(Ph6.4),搅拌反应60 min,然后迅速升温 到90-100℃,灭活1min降温后纱布过滤,收集滤液。 3.浓缩:将以上滤液置于解压浓缩罐中,然后解压浓缩 至l/5体积时,停止浓缩。 4.沉淀:将浓缩液置于搪瓷缸中.在搅拌的条件下,加1 倍量乙醇,然后静置过夜。过滤得沉淀物,滤液再加3倍量 乙醇,得沉淀物。
5.二次沉淀:将沉淀物置于搪瓷缸中,加约70倍量 的水,搅拌均匀,在猛烈搅拌下,滴加0.2mol/l几氢氧 化十六烷基三甲基胺水溶液,逐步调PH至12.8时产生 大量沉淀,离心,沉淀用乙醇洗涤,收集沉淀。 6.除蛋白:沉淀用氯仿、正丁醇洗涤去蛋白,水层 加3倍量乙醇沉淀,收集沉淀。 7.洗涤:沉淀依次用甲醇、乙醚洗涤,收集沉淀。 8.干燥:将沉淀置真空干燥器干燥,即为香菇多糖。
香菇多糖的提取制备
一、实验目的 掌握水溶醇沉法分离多糖类化合物的原理和 方法。
二、实验原理 在组织中,多糖多与蛋白质以共价相结合,所以在 生化产品制备工艺中,往往第一步多用酶降解蛋白质 部分或用碱使多糖—蛋白质间的键裂开,以促进多糖 在提取时的溶解。碱性提取可避免多糖中硫酸基团水 解而破坏。现多采用碱性提取的同时用蛋白质水解酶 处理组织。提取液中存在的蛋白质可用普通蛋白质沉 淀剂使之沉淀,也可用其他方法使变性沉淀,如适当 调pH和加热等。
四、思考题 1.有蛋白之前,加入酶液的目的是什么?
提取香菇多糖的方案

提取香菇多糖的工艺原料处理:原料:香菇。
NaHCO固体,浓硫酸,95%乙醇稀盐酸,PH试纸,复试剂:蒸馏水,葡萄糖,苯酚,铝片,3合酶(木瓜蛋白酶:纤维素酶=2:1),设备和仪器:100ml容量瓶,6个50ml容量瓶,玻璃棒,蒸馏装置(温度计、沸石、三口烧瓶、冷凝管),烧杯若干,锥形瓶若干,棕色瓶一个,抽滤瓶,1、2、5、10ml吸液管,电子天平,真空干燥箱,恒温水浴锅,紫外分光光度计,粉碎机,40、60、80、100目的筛子,DL700-0.55×1.5超高压等静压机(上海大隆高压设备厂),真空泵,THZ-82A台式恒温振荡器,台式离心机。
1、标准葡萄糖溶液的配制精密称取105℃干燥至恒重的葡萄糖100.0mg,加蒸馏水溶解并定容于100ml容量瓶中,摇匀,配成浓度为1mg/ml标准葡萄糖溶液备用。
2、5%苯酚试剂的配制。
苯酚水浴加热溶解后称取100g,加铝片0.1g(先用1:6的盐酸除去铝片表面氧化铝后,再称量使用),加入碳酸氢钠30g,蒸馏,收集178-182℃的馏分,取馏出液7.5g,加入蒸馏水150mL,得5.0%的苯酚溶液,置于棕色瓶中备用。
3、标准曲线绘制以葡萄糖作为标准品,采用苯酚—硫酸比色法,用紫外分光光度计测定多糖含量。
精密吸取已配制的葡萄糖标准品溶液0.5,1,1.5,2,2.5,3ml置于6个50ml容量瓶中,加蒸馏水至刻度线,摇匀。
精密吸取2ml,分别加入5%苯酚溶液1ml,摇匀,迅速加入5ml浓硫酸,振摇5min,置沸水浴上加热15min,然后置冷水浴中冷却30min,以溶剂蒸馏水为空白作对照,在400~600nm内扫描,最大吸收波长为490nm。
在490nm处,测吸光值,以浓度为纵坐标,吸光值为横坐标,绘制标准曲线,得出葡萄糖标准品浓度Y(ug/ml)与吸光值X的回归方程:Y=15.336X-0.0298,R2=0.9997。
在2.5~15.0 ug/ml 范围内呈线性关系。
香菇多糖的提取方法

香菇多糖的提取方法
香菇多糖的提取方法如下:
1. 采购新鲜的香菇,清洗干净并切成小块。
2. 将香菇块放入大型锅中,加入足够的水,与香菇比例大约为10:1。
3. 将锅中的香菇块煮沸,然后改用中小火慢慢煮煮2-3小时。
这个过程中,可以不断搅拌,确保香菇均匀受热。
4. 使用细网过滤器或纱布等细密过滤器,将煮煮后得到的香菇汁滤掉固体部分。
滤液便是香菇多糖的提取物。
5. 将香菇多糖的提取物进行进一步处理,可以采用醇沉淀法。
将提取液中加入等体积的酒精,搅拌均匀,并置于低温环境下静置一段时间,使得多糖在酒精中沉淀。
6. 将酒精沉淀物通过离心机进行离心分离,得到固体沉淀。
7. 将固体沉淀经过冷冻干燥或真空干燥等方法使其干燥,得到香菇多糖粉末。
注:以上方法仅供参考,具体的提取方法可以根据实际情况和需要进行调整。
实验三香菇多糖的分离提取

实验三香菇多糖的分离提取实验三香菇多糖的分离提取一、实验目的让学生了解香菇多糖的理化性质及提取工艺流程,掌握真空浓缩技术。
二、实验原理香菇是一种药食两用真菌,具有提高免疫力、抗癌、降糖等多种生理功能。
水溶性多糖作为香菇主要活性成分之一,主要以β-1,3-葡聚糖的形式,分子量从几万到几十万不等。
通过有机溶剂提取,真空浓缩技术进行分离提取。
三、实验材料与试剂原料:干香菇500g试剂:氯仿、正丁醇、医用纱布、浓硫酸、苯酚、工业酒精四、实验仪器组织捣碎机、水浴锅、旋转蒸发器、1cm比色皿、751分光光度计、电子天平、台式离心机、试管、量筒、烧杯、玻璃棒五、提取工艺流程1. 1kg干香菇切成小块,以1:10(重量比)加入水,用组织捣碎机进行均质;2. 取200mL均质液放入1L烧杯中,再加入300mL蒸馏水,加热至沸后,温火煮沸1小时,(注意:煮沸过程中用玻璃棒不断搅拌,以免烧杯底部发生糊结;并间歇加入少量水,使杯内液体体积保持在500mL左右;3. 加热完毕后,将杯内液体用8层纱布过滤,除去残渣,上清液转入另一烧杯中;4. 将上清液倒入圆底烧瓶中,在旋转浓缩仪上进行浓缩,浓缩条件为-0.1MPa 、60℃,浓缩液体积至100mL左右停止;5. 将浓缩液在1×10000g离心10min,将上清液转入另一烧杯,除去残渣;6. 上清液中加入等体积的氯仿正丁醇浓液(体积比为4:1),搅拌5min,静置30分钟;7. 将混合液体在1×5000g下离心20min,分离水相;8. 在水相中加入终浓度为80%的酒精,搅拌均匀,静置20min,1×5000g下离心10min;9. 取出沉淀物,放入已称重的干燥表面皿中,在真空干燥箱中80℃下真空干燥;10. 干燥后,称重,计算多糖的产率;11. 准确称取干燥后多糖20mg于500ml容量瓶中,加水定容;12. 取定容液2ml加入6%苯酚1ml,混匀,再加入浓硫酸5ml,混匀,放置20min后,于490nm测吸光度;13. 葡萄糖标准曲线的制定:准确称取葡萄糖20mg定容于500ml 容量瓶中,分别取0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6及1.8ml,补水至2ml,依12步骤反应液,并分别测吸光度,根据葡萄糖浓度和吸光度绘制标准曲线;14. 根据香菇多糖吸光度和葡萄糖标准曲线,计算多糖纯度。
香菇多糖的提取制备

多糖纯化
G—100凝胶充分溶胀后装柱 凝胶充分溶胀后装柱, Sephadex G—100凝胶充分溶胀后装柱,用 蒸馏水平衡48h 48h。 蒸馏水平衡48h。取上述香菇多糖提取物溶于 蒸馏水中,离心除去不溶物, 蒸馏水中,离心除去不溶物,上清液上柱分 用蒸馏水洗脱, 离,用蒸馏水洗脱,洗脱速度 5ml/20min,200nm波长紫外检测 波长紫外检测, 5ml/20min,200nm波长紫外检测,收集主要峰 部分,冷冻干燥得白色香菇多糖,并称重。 部分,冷冻干燥得白色香菇多糖,并称重。
分析检测
定性分析——苯酚— ——苯酚 ⑴定性分析——苯酚—硫酸法 硫酸试剂: 3g,浓硫酸5mL 溶于95mL 5mL, 酚—硫酸试剂:酚3g,浓硫酸5mL,溶于95mL 无水乙醇中,喷后,110℃,加热几分钟, 无水乙醇中,喷后,110℃,加热几分钟,糖 显棕色。 定量分析——分光光度法 标准曲线的制备 精密称取60℃干燥至恒重的甘露糖标准品0.1g 60℃干燥至恒重的甘露糖标准品0.1g, 精密称取60℃干燥至恒重的甘露糖标准品0.1g,置 100mL容量瓶中 定容至刻度线, 容量瓶中, 于100mL容量瓶中,定容至刻度线,用移液管量取 对照品溶液0 0.5、1.0、2.0、2.5、3.0mL。 对照品溶液0、0.5、1.0、2.0、2.5、3.0mL。分别 50mL容量瓶中 加蒸馏水至刻度线, 容量瓶中, 置50mL容量瓶中,加蒸馏水至刻度线,再各精密量 1mL,置于具塞试管中,准确仪取8%苯酚溶液1mL 8%苯酚溶液1mL, 取1mL,置于具塞试管中,准确仪取8%苯酚溶液1mL, 快速加入浓硫酸5Ml,置水浴中加热15min 5Ml,置水浴中加热15min, 快速加入浓硫酸5Ml,置水浴中加热15min,取出冷 却至室温,橘黄色由浓度从小到大逐渐加深, 却至室温,橘黄色由浓度从小到大逐渐加深,将溶 液于490nm波长的可见分光光度计处测定吸收度, 490nm波长的可见分光光度计处测定吸收度 液于490nm波长的可见分光光度计处测定吸收度, 绘制标准曲线。 绘制标准曲线。
超声波法提取香菇多糖实验报告

竭诚为您提供优质文档/双击可除超声波法提取香菇多糖实验报告篇一:超声波提取香菇多糖汇报项目名称:超声波提取香菇多糖【工作汇报】超声波提取香菇多糖操作者姓名:王岚班级技术102专业生物技术前言1、实训的背景、目的和意义:实训背景:香菇(Lentinulaedodes)是侧耳科的担子菌,味道鲜美,药食两用,具有较好的保健作用。
香菇多糖是香菇中的重要营养成分和有效药用组分,具有抗病毒、抗肿瘤、调节免疫功能和刺激干扰素形成等功能,香菇还原糖对于人体糖分的补充也起着重要作用测定蛋白质的方法可分为两大类:一类是利用蛋白质的物理化学性质来推算,如密度、折射率、紫外吸收、荧光性等;另一类是利用化学方法来计算,如定氮、双缩脲反应、染料结合反应、酚试剂反应等主要测定方法有:双缩脲法、染料结合法、酚试剂法、紫外分光光度法、水扬酸比色法、折光法、旋光法、近红外光谱法.目前蛋白质测定最常用的方法是凯氏定氮法,是通过测总氮量来确定蛋白质含量的方法。
实训目的及意义:1、2、2、实训要解决的问题:掌握微量凯氏定氮仪测定蛋白质含量的原理。
熟练掌握微量凯氏定氮仪测定蛋白质含量的操作技术。
1、微量凯氏定氮法与常量法的同点?2、根据08年国标,样品消化完全一小时之后,需要冷却后加20ml水,为什么会有晶体析出,成分是什么,为什么会析出?3、香菇多糖的主要成分是什么?如何脱蛋白?3、实训操作关键技能1.在蒸馏过程中,切勿关闭电炉,否则会引起硼酸液的倒吸。
2.环境中氨气的含量要低。
3.定氮仪各连接处绝对不能漏气。
4.所用橡皮塞、管用前均需处理。
其方法是:浸在10%氢氧化钠溶液中煮沸约10min,再经水洗和水煮10min,最后冲洗数次。
材料及方法1、实训材料及配制、预处理技术干香菇,蒸馏水;电热恒温鼓风干燥箱组织粉碎机圆底烧瓶,铁架台,温度计超声波发生器(带加热功能)真空泵,漏斗,滤纸,滤布,烧杯,量筒,玻璃棒等微量凯氏定氮蒸馏装置一套、三角烧瓶、酸式滴定管、容量瓶溶液的配制1.浓硫酸:分析纯,95.5%2.80%苯酚:80克苯酚(分析纯重蒸馏试剂)加20克水使之溶解,可置冰箱中避光长期储存。
3 王博 香菇多糖的提取

香菇多糖的提取一,实验目的:掌握热水侵泡法分离多糖类化合物的原理和方法。
二,实验原理:多糖溶于热水,不溶于60%以上乙醇,所以用热水提取,乙醇沉淀除去部分醇溶性杂质;因为热水也可以将蛋白类物质提取出来,所以用乙醇除去提取液中的蛋白.三,实验材料与设备:香菇,葡萄糖,乙醇,苯酚,浓硫酸,紫外可见分光光度计,恒温浴槽。
四,制作标准曲线;采用苯酚硫酸法,以葡萄糖为标准物,称取105℃干燥至恒重的无水乙醇的葡萄糖14.8mg,置100ml容量瓶中,加水溶解并稀释至刻度,分别取:0.0ml ,0.4ml ,0.6ml ,0.8ml ,1.0ml ,1.2ml ,1.4ml ,1.6ml ,1.8ml ,加水补充至2.0ml,再加1ml 5%的苯酚溶液,迅速加入5ml的浓硫酸,摇匀,静置20分钟,冷却至室温,以蒸馏水为空白,在490mm波长处测定吸光度,绘制标准曲线,得到回归方程为:y=0.006x +0.032,R=0.9991,线性范围是:0~266.4ug.标准曲线的绘制:假如葡萄糖0 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4 1.6 1.8 溶液的量mlA490 0.005 0.016 0.020 0.019 0.029 0.031 0.041 0.044 0.049五,操作步骤:1 提取取干香菇粉粉碎,称取20g,置于250ml烧杯中,加入100ml蒸馏水在石棉网上加热至沸腾,并不断搅拌,30min后抽滤,滤渣在用100ml的蒸馏水溶液煮沸30min,合并两次滤液,加热浓缩至20ml,溶于95%乙醇中,搅拌并冷却至室温,静置1h,以4000r/min离心10min,沉淀,真空干燥,得到粗香菇多糖。
2 除蛋白粗糖50ml 100℃热水溶解,加sevage溶液10ml,剧烈震动10min,静置10min,4000r/min离心10min,取上清液,加sevage溶液反复操作5次。
3 纯化粗糖置于烧杯中,加蒸馏水50ml溶解,加入等体积的0.15mol/L 的CTAB与硼酸缓冲溶液,静置10min,4000r/min离心得沉淀用2mol/L的乙醇溶解,静置10min,4000r/min离心后取上清液加等体积的甲醇,静置24h。
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香菇多糖提取提取法:用物理提取的方法生产精细化学品,即通过将某一种物质按一定的要求从混合物中提取出来从而获得产品的方法。
张杨杨精化11221、认识香菇多糖(1)香菇多糖结构式分子式:〔C42H72O36〕n分子量:〔1152.9995〕n(2)香菇多糖性质香菇多糖(l e n t i n a n;L N T)是从香菇中分离纯化的一种葡聚糖,是以增强T细胞和巨噬细胞功能为主的免疫增强剂。
密度:1.88g/c m3;沸点:1472℃a t760m m H g。
溶于碱溶液或甲酸,微溶于热水或二甲亚砜,不溶于冷水、醇、乙醚、氯仿、吡啶或六甲基磷酰胺。
对硫酸和盐酸稳定。
(3)香菇多糖的功能香菇多糖具有激活细胞免疫、调节多种体液免疫因子、诱导α-干扰素生成,调节机体免疫应答反应,诱导白细胞对肿瘤浸润,导致肿瘤部位血管扩张、出血、坏死,阻止病毒与宿主细胞的结合,提高S O D〔超氧化物歧化酶〕活性,抑制M D A〔丙二醛〕生成,抗脂质氧化,降低胆固醇,调节糖代谢、改善糖耐量、扩张胃肠道产生饱腹感而减轻食欲,降低血糖等功能。
【丙二醛】英文名:M a l o n d i a l d e h y d e;m a l o n i c d i a l d e h y d e;P r o p a n e d i a l简称:M D A分子式O H C-C H2-C H O分子量72.0634无色针状晶体,熔点72~74℃,一般含两个结晶水,60℃下真空干燥可得无水物,易潮解,纯的丙二醛在中性条件下稳定,但在酸性条件下不稳定。
由乙醛和甲酸乙酯在碱作用下缩合而得,可在高真空下升华精制,主要用于医药中间体、感光色素的原料。
与蛋白质不相容,有潜在的致癌性。
【超氧化物歧化酶】英文名:O r g o t e i n(S u p e r o x i d e D i s m u t a s e,S O D),别名肝蛋白、奥谷蛋白。
简称:S O D。
S O D是一种源于生命体的活性物质,能消除生物体在新陈代谢过程中产生的有害物质。
(4)香菇多糖的应用①、香菇多糖在医药领域的应用香菇多糖在治疗胃癌、结肠癌、肺癌等方面具有良好疗效。
作为免疫辅助药物,香菇多糖主要用来抑制肿瘤的发生、发展与转移,提高肿瘤对化疗药物的敏感性,改善患者的身体状况,延长其寿命。
香菇多糖与化疗剂联合使用,有减毒、增效的作用。
化疗药物杀伤肿瘤细胞的选择性较差,对正常细胞也具有杀伤作用,产生毒副作用,造成化疗不能按期按量进行;由于化疗的剂量不足,常引起肿瘤细胞的耐药性,成为难治性癌症,影响疗效。
化疗过程中服用香菇多糖,可以增强化疗的疗效,并减轻化疗的毒性作用;同时,化疗过程中患者的白细胞下降的发生率、胃肠毒性、肝功能损害及呕吐的发生明显降低。
这充分说明了香菇多糖与化疗并用可以增效、减毒,并增强患者机体的免疫功能。
香菇多糖配合其他药物治疗慢性乙型肝炎,可提高乙肝病毒标志物的转阴作用,减少抗病毒药物的副作用。
此外,香菇多糖可用于治疗结核杆菌感染。
②、香菇多糖在保健食品领域的应用香菇多糖是一种特殊的生物活性物质,是一种生物反应增强剂和调节剂,它能增强体液免疫和细胞免疫功能。
香菇多糖的抗病毒作用机制可能在于其提高感染细胞免疫力,增强细胞膜的稳定性,抑制细胞病变,促进细胞修复等功能。
同时,香菇多糖还具有抗逆转录病毒活性。
因此,香菇多糖是一种有待开发的抗流感的保健食品。
(5)香菇多糖的质量标准主要活性成分:香菇[L e n t i n u s e d o d e s(B e r k)s i n g]子实体提取、精制的多糖。
按干燥品计算,含香菇多糖应不得少于92.0%。
性状:类白色或浅黄色粉末;无味,有引湿性。
在水、甲醇、乙醇或丙酮中几乎不溶;在0.5m o l/L氢氧化钠中溶解。
比旋度:取本品,臵五氧化二磷干燥器中,减压干燥至恒重,精密称取适量,加0.5m o l/L氢氧化钠溶液溶解并定量稀释制成每1m l中含10m g的溶液,依法测定(中国药典),范围在+2~+15之间。
【比旋度】一种物理性质。
用光照射尼科尔棱镜,光波只能从一个平面振动通过。
通过后的光叫作平面偏振光,当平面偏振光通过长1d m且每1m l含旋光物质1g的溶液,在一定的波长和温度下的旋光度称为比旋度。
【引湿性】药物的一种性质。
大多数药品在湿度较高的情况下,能吸收空气中的水蒸气而引湿,其结果使药品稀释,潮解,变形,发霉等现象,叫做引湿性。
也指在一定温度及湿度条件下物质吸收水分能力或程度的特性。
液体物质也具有引湿性。
2、追根溯源(1)诞生与发展过程1968年G o r o C h i h a r a首先从香菇子实体中浸提出6种香菇多糖,并证明其中一种具有明显的抗肿瘤作用,定名为L e n t i n a n1970年C h i h a r d和S a s a k i用热水浸提结合有机溶剂沉淀从香菇中提取到另外4种多糖。
1986年获日本厚生省批准生产并外销。
1988年我国卫生部批准进口,现今我国已有几家国产L N T上市(如南京振中和福州梅峰等)。
香菇多糖由于是单一组分,质量易于控制,且具有疗效高,剂量低,毒副作用小等优点,受到医生的青睐。
自此,世界各地掀起了一股从大型真菌中寻找抗肿瘤药物的热潮。
有关香菇多糖的研究尤其活跃,包括提取工艺及分离纯化研究,香菇多糖理化性质及药用价值研究。
但对多糖理化性质、结构、药效、药理等方面仍无定论,仍须继续深入研究。
(2)各种生产方法比较主要的多糖提取方法有如下几种:热水浸提法、酸(碱)浸提法、微波提取法、超声波提取法、复合酶解法等等。
①香菇多糖提取的工艺流程的对比多糖提取的常规工艺原料预处理→水(或酸)浸提→浸提物→真空浓缩→浓缩液→酒精沉淀→沉淀物→s e v a g e法脱蛋白→水相→丙酮洗涤→多糖粗制品采用复合酶解工艺原料预处理→复合酶解→酶解液→真空浓缩→浓缩液→酒精沉淀→沉淀物→丙酮洗涤→多糖粗制品复合酶解、酸处理结合热水浸提法提取香菇多糖的改进工艺原料预处理→复合酶解→酶解液→水浸提→酸浸提→浸提物→空浓缩→浓缩液→酒精沉淀→沉淀物→s e v a g e法脱蛋白→水相→丙酮洗涤→多糖粗制品②操作要点的对比热水浸提法向香菇处理物中加入20倍体积的蒸馏水,并在40℃水浴恒温下浸泡4h。
放臵冰箱冷冻柜中冷冻过夜。
将香菇浸泡液从冰箱中取出,解冻后在恒温水浴箱内分别抽提30m i n、60m i n、90m i n,用4层纱布过滤后收集滤液。
向滤渣中加入20倍体积的蒸馏水再抽提一次,沸煮时间同上用4层纱布过滤后收集滤液,合并两次滤液。
酸浸提法向香菇处理物中加盐酸溶液使其最终浓度分别为0.3m o l/L、0.4m o l/L、0.5m o l/L,臵于60℃恒温水浴中浸提8h,加适量的N a O H中和至中性,过滤,浓缩。
微波提取法向香菇处理物中按1:25加入去离子水浸泡过夜,粉碎,在一定微波条件下提取,冷却后离心,从上清液中取样测定其中多糖含量。
超声波提取法向香菇处理物中加入蒸馏水,进行超声波处理浸提。
8000r/m i n离心五分钟,取上清液,用旋转蒸发仪浓缩至10~20m l,加入两倍体积的无水乙醇,进行醇沉。
放臵过夜后再次离心,留取沉淀物,干燥至恒重。
复合酶浸提法向香菇处理物的中加0.1g纤维素酶和0.5g果胶酶,目的是为了酶解细胞表面结构及细胞间连接物,使其部分糖类物质的溶出。
往酶解后的香菇处理物中加入20倍体积的蒸馏水,并在40水浴恒温下浸泡80m i n。
迅速升温沸腾90m i n,后过滤得滤液。
离心沉淀,上清液浓缩,乙醇沉淀。
复合酶解,酸与热水相结合浸提法向香菇处理物中加0.1g纤维素酶和0.5g果胶酶,目的是为了酶解细胞表面结构及细胞间连接物,使其部分糖类物质的溶出。
加20倍体积的水在40水浴恒温下浸泡80m i n。
后再迅速升温煮沸60m i n,用4层纱布过滤后收集滤液,再调节p H分别为4.5、5.0、5.5,进行酸浸提,然后再用4层纱布过滤后收集滤液。
合并两次滤液。
浓缩。
(3)现在常用的生产方法以上几种方法均有优点和缺点,而现如今也都在被使用!在此,我以热水浸提法来介绍其生产技术。
3、生产技术(1)原料及要求:将香菇清洗干净,除去其根部,将剩下的菌伞挤压,切小块放入真空干燥箱干燥,待香菇恒质量,放入粉碎机中粉碎,将粉碎后的香菇粉依次通过40,60,80,100目的筛子,得到40目以下、40~60目、60~80目、80~100目、100目粒度以上的样品,过筛之后把各级香菇粉分别装到清洁干燥的烧杯中,编号贴上标签,臵于真空干燥箱中待用。
【所谓的多少目】是指在每英寸(一个规定的单位长度2.54厘米)的长度上有多少筛孔,如果有80个孔,就是80目筛,孔数越多,孔眼也就越小,经80目筛后的颗粒的直径为2.54/80=0.03175c m(2)生产原理:多糖溶于热水,不溶于60%以上乙醇,也不溶于氯仿正丁醇.热水浸提时,香菇组织膨胀破裂,多糖成分浸出,所以用热水提取,乙醇沉淀除去部分醇溶性杂质;因为热水也可以将蛋白类物质提取出来,所以用氯仿正丁醇萃取除去提取液中的蛋白。
(3)工艺流程:【s e v a g e法脱蛋白】正丁醇、氯仿混合溶液(正丁醇:氯仿=1:4或1:5)和样物提取液混合并且振荡,不需要加热,利用离心机离心,直到离液面交界处无白色混悬,也就是蛋白质介于提取液与试剂交界处即可,最后分别提取即可。
(4) 工艺流程说明及主要工艺参数:热水浸提向香菇处理物中加入20倍体积的蒸馏水,并在40℃水浴恒温下浸泡4h。
放臵冰箱冷冻柜中冷冻过夜。
将香菇浸泡液从冰箱中取出,解冻后在恒温水浴箱内分别抽提30m i n、60m i n、90m i n,用4层纱布过滤后收集滤液。
向滤渣中加入20倍体积的蒸馏水再抽提一次,沸煮时间同上,用4层纱布过滤后收集滤液,合并两次滤液。
真空浓缩将上述滤液用旋转蒸发器在75℃,0.09P a大气压下进行浓缩,收集浓缩液。
并用高速离心机在6000r p m离心15m i n,目的是去除蛋白质和杂质,得上清液。
酒精沉淀分离在浓缩液中加入4倍体积的95%乙醇,使香菇多糖呈絮状凝胶物沉淀析出,而大部分蛋白质和其它成分保留在溶液中,再用高速离心机在7000r p m下离心15m i n得沉淀。
s e v a g e法脱蛋白将上述沉淀溶于适量的蒸馏水中,分别加入20%体积的氯仿和7%体积的异戊醇生成絮状凝聚物,用高速离心机在5000r p m离心15m i n得沉淀。
重复上述操作,直至无凝聚物生成。
丙酮洗涤脱水将酒精沉淀物用丙酮洗涤脱水两次,倒入放有干燥滤纸的培养皿中(滤纸重0.98g),然后将培养皿放在50℃的烘干箱中进行干燥3h,得到香菇多糖粗制品。