胎盘组织及血液中含有丰富的造血干_祖细胞
脐带血造血干细胞资料整理
1脐带血干细胞在现阶段，脐带血之所以能够应用于临床治疗多种疾病，与其含有丰富的HSCs/HPCs 直接相关。
除这些造血干/祖细胞外，其中还存在其他多种干/祖细胞，包括间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)、内皮前体细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)和非限制性体干细胞(unrestricted somatic stem cells, USSCs)等，在这一部分将以HSCs/HPCs为重点一一进行讨论。
1.1造血干/祖细胞(HSCs/HPCs)HSCs 要具有两个基本特性：(1)高度的自我更新能力或自我复制能力，这样可以保持干细胞数量恒定；(2)进一步分化为各系祖细胞及成熟血细胞的能力，这是HSCs 生命意义的体现。
HSCs 常以CD34为标记区分为CD34+ 细胞群和CD34- 细胞群，其中CD34+ 细胞群占95% 以上，而CD34- 细胞群不到5%，通常所说的HSCs 指的就是CD34+ 细胞群。
造HSCs/HPCs 是脐带血中含量最丰富的一种干/ 祖细胞，这也是目前脐带血临床应用的细胞基础。
在数量上，CD34+ 细胞所占比例与骨髓相似，高于外周血，约占有核细胞的1%~3%[2]。
但在质量上，脐血CD34+ 细胞体外长期培养中的CD34+CD45+ 细胞明显高于骨髓，CD34+ CD38- 和CD34+ CD33- 细胞在脐带血中CD34+ 细胞中的比例均显著高于骨髓，而且脐带血CD34+ CD38- 细胞的增殖分化能力高于骨髓[3]。
存在于脐带血CD34+ CD38- 细胞群中的人SCID小鼠再植细胞(SCID repopulating cell, SRC)的浓度约为1/600，远高于成人骨髓和细胞因子动员后的外周血[4]。
此外，脐带血中HSC/HPC 的含量及增殖能力(CFU-GM, BFU-E, CFU-GEMM)也均高于骨髓[5]。
胎盘干细胞功能介绍
胎盘干细胞功能介绍
胎盘中含有丰富的自体干细胞，一般这些干细胞能够代替骨髓、外周血的干细胞进行移植，且疗效好，副作用小，医疗费用低。
相比骨髓、外周造血干细胞移植，胎盘里面各种干细胞移植后排斥反应小，成功率高，尤其是自己的胎盘用来救治自己，成功率可达90%以上。
胎盘里面干细胞采集方便，有婴儿出生就可采集，而骨髓血干细胞的采集依赖骨髓捐赠，而且往往非常难配型成功。
胎盘中的造血干细胞能够用来医治多种血液系统疾病和免疫系统疾病，包括血液系统恶性肿瘤(如急性白血病、慢性白血病、多发性骨髓瘤、骨髓异常增生综合症、淋巴瘤等)、血红蛋白病(如海洋性贫血)、骨髓造血功能衰竭(如再生障碍性贫血)、先天性代谢性疾病、先天性免疫缺陷疾患、自身免疫性疾患、某些实体肿瘤(如小细胞肺癌、神经母细胞瘤、卵巢癌)，进行性肌营养不良等。
一份胎盘也是一份生命保险。
百年春生命银行建立自体干细胞库就能够把胎盘造血干细胞，胎盘亚全能干细胞，胎盘间充质干细胞，这一类人类重要的生物资源储存起来，达到取之于大众，为大众服务的目的，同时也能够满足个人自体储存的非常需要，以备日后不时之需。
胎盘的知识点
胎盘的知识点胎盘是哺乳动物母体与胎儿之间的重要连接器官，起着至关重要的营养供应、代谢产物排泄和免疫防御等多种功能。
胎盘在胚胎发育过程中形成，由胚胎的滋养层和子宫内膜的一部分组成。
它与胎儿的脐带相连，通过脐带与胎儿进行物质交换。
胎盘的结构复杂而多样，组织上可分为滋养层、胎盘母体、滋养膜和胎盘脐带等部分。
滋养层是胎盘中最内层的组织，它由胚胎的外胚层细胞和子宫内膜的内膜组成。
滋养层中含有丰富的血管和毛细血管，可以为胎儿提供养分和氧气。
胎盘母体由滋养层外的绒毛和滋养膜组成，绒毛上覆盖着大量的绒毛血管，起到了物质交换和气体交换的作用。
胎盘脐带连接着胎盘和胎儿，是胎儿与母体之间的桥梁。
脐带内含有两根动脉和一根静脉，动脉负责将含有废物和二氧化碳的血液从胎儿输送到胎盘，而静脉则将富含氧气和养分的血液从胎盘输送到胎儿。
胎盘除了提供营养供应和气体交换外，还具有免疫功能。
胎盘中含有大量的免疫细胞和抗体，可以抵御病原体的侵袭，保护胎儿免受感染。
此外，胎盘还可以分泌多种激素和生长因子，对胚胎的发育和成长起到重要的调节作用。
胎盘在胎儿发育过程中起到了至关重要的作用。
它不仅为胎儿提供了充足的营养和氧气，还保护了胎儿免受外界环境的伤害。
胎盘的发育异常或功能障碍可能导致胎儿发育不良、先天性缺陷或其他并发症。
因此，在妊娠期间，保持良好的饮食和生活习惯，定期进行产前检查和咨询医生是非常重要的。
胎盘是胚胎发育过程中不可或缺的器官，它不仅为胎儿提供营养和氧气，还具有免疫功能。
了解胎盘的结构和功能对于保障胎儿的健康发育至关重要。
在孕期，孕妇需要注意保持良好的生活习惯，及时就医并定期进行产前检查，以确保胎盘的正常发育和功能，为胎儿的健康奠定良好的基础。
胎盘有什么作用与功效
胎盘有什么作用与功效胎盘是胚胎发育过程中形成的一个器官，它是妊娠期间供给胎儿养分和氧气的重要组织，还起到产后排出胎儿废物的作用。
胎盘具有多种作用和功效，本文将详细介绍胎盘的组织结构、功能及其对人体的健康益处。
一、胎盘的组织结构胎盘主要由胎盘膜和胎儿血管组成。
胎盘膜由羊膜和绒毛膜组成，绒毛膜上有许多小绒毛，形成绒毛膜绒毛层。
胎儿血管细血管在胎盘膜之间分布，起到输送氧气和营养物质的作用。
二、胎盘的作用与功能1. 营养供给：胎盘是胎儿获取养分的重要途径。
通过胎盘的血液循环，胎儿可以从母体中吸收营养物质、氧气和荷尔蒙等，满足其生长和发育的需求。
2. 新陈代谢功能：胎盘具有新陈代谢功能，可以通过转化和调节胎儿的新陈代谢物质。
在胚胎发育过程中，胎盘能够清除胚胎体内的废物和代谢产物，保持胎儿环境的稳定。
3. 免疫保护：胎盘能够传递母体的免疫抗体和免疫细胞给胎儿，增强胎儿的免疫力。
这些抗体和细胞可以保护胎儿免受感染，降低新生儿感染的风险。
4. 激素分泌：胎盘能够分泌多种激素，如孕激素、胎盘类固醇激素等，这些激素对胎儿的生长和发育起着重要调节作用。
此外，胎盘还可以合成和分泌一些其他重要的生长因子，促进胎儿各个器官的正常发育。
5. 废物排泄：胎盘还能够排泄胎儿体内的废物和代谢产物，包括二氧化碳和尿液等。
废物通过胎盘膜和母体的血液进行交换，最终排出母体。
三、胎盘的功效1. 保持胎儿健康：胎盘提供给胎儿充足的营养和氧气，保证胎儿的正常生长和发育。
胎儿在母体内时处于相对封闭的环境中，通过胎盘的作用，胎儿得以保持营养供给的平衡，保证各个器官的正常发育和功能。
2. 提高孕产妇免疫力：胎盘能够传递母体的免疫抗体和免疫细胞给胎儿，同时也能够增强孕产妇本身的免疫力。
这对孕期健康和孕产妇抵抗疾病具有积极意义。
3. 促进产后恢复：胎盘中含有多种激素和生长因子，这些物质可以促进产后妇女子宫的收缩和恢复，减少子宫出血时间和数量。
同时，胎盘中的荷尔蒙也有助于调节孕产妇的激素平衡，缓解产后忧郁等不良情绪。
胎盘
问题一：脐带胎盘、干细胞有那么宝贵吗？为什么要储存脐带胎盘干细胞？保存新生儿脐带、胎盘干细胞不但为新生儿提供了健康的保障，全家都可以受益。
以往干细胞多取自成人骨髓，存在数量少、来源受限、采集过程痛苦的弊端；而脐带胎盘提取的干细胞的数量多、质量优、活性高、种类丰富，可多次使用，是理想的多能干细胞来源。
另外，新生儿干细胞具有免疫原性低的特点，不会触发免疫反应引起移植物抗宿主病，不仅储存者本人可以使用，而且储存者家人及无关受体均可使用，并且亲缘关系越近使用效果越好；潜伏性病毒和病原微生物感染及传播几率比较低；胎盘中的细胞更为原始，有更强的增殖分化能力。
储存一个宝宝的脐带、胎盘干细胞可以保障到全家人的健康。
如果脐带、胎盘被当作医疗废弃物丢掉，则多能干细胞这一异常珍贵的再生医学资源也将随之浪费且无法补救。
因此，非常有必要将这一宝贵的再生医学资源及时保存起来以便将来使用。
问题二：什么是脐带、胎盘干细胞？新生儿降生之时，一般可通过三种渠道获得干细胞。
第一种为脐带内血液源采集造血干细胞。
第二种为脐带自身内采集脐带间充质干细胞。
第三种为胎盘源采集胎盘多能干细胞和胎盘造血干细胞。
脐带间充质干细胞是指存在于新生儿脐带组织中的一种多功能干细胞，它能分化成许多种组织细胞，具有广阔的临床应用前景。
胎盘干细胞中含有胎盘多能干细胞和胎盘造血干细胞。
胎盘源干细胞在临床应用前景中，存在举足轻重的作用。
在自体器官修复、移植、美容、遗传类疾病治疗及心脏病、肝病、糖尿病等多个等领域拥有无限前景。
问题三：很多妈妈都很怕痛，脐带、胎盘干细胞是如何收集的？脐带、胎盘干细胞采集过程十分简单，所有的婴儿从妈妈体内娩出，护士都会帮宝宝剪断脐带，把宝宝与脐带分离后进行的，整个过程对宝宝没有痛楚，对妈妈也没有任何影响，完全是废物利用，变废为宝，操作简便易行，在大多数妇产医院皆可完成。
问题四：储存脐带、胎盘干细胞的设备是什么样的？几十年以后已储存的干细胞还能用吗？干细胞储存在-196℃度的液氮罐中。
5.0-1血液和造血系统疾病(再障) PPT课件
[临 床 表 现 ]
一.症状 进行性贫血、出血和反复感染 1.贫血
呈进行性贫血 原因：造血功能低下所致，少数病人可存在无效 红细胞生成（原位溶血）即骨髓生成的红细胞在 未释放至周围血液前已被破坏 贫血程度严重，并具有贫血的各种临床表现
25
贫血的－临床表现
皮肤粘膜苍白
常见体征
由于贫血时缺氧的敏感器官血流量明显增加， 而皮肤粘膜毛细血管则缺血。故皮肤粘膜苍白， 尤以口唇、甲床、结膜最显著 神经肌肉缺氧，常伴有倦怠乏力、头晕、耳鸣、 记忆力减退和注意力不集中等。甚则可发生昏厥
分类
红细胞疾病：贫血、红细胞增多等
粒细胞疾病：粒细胞缺乏等
单核细胞和巨细胞疾病：恶性组织细胞病等
淋巴细胞和浆细胞疾病：淋巴瘤、白血病等
造血干细胞疾病：再生障碍性贫血等
脾功能亢进
出血性及血栓性疾病：血小板减少性紫癜等
5
贫
血
（Anemia)
贫血：外周血单位体积血液中的血红蛋白（ H b ) 浓度、红细胞（RBC）及血细胞比容（HCT）低于可 比人群正常值的下限 其中以 H b 最为可靠，也是临床上诊断贫血的最常 用的实验室指标
抗淋巴细胞球蛋白10-15mg（Kg/d）连用5天 抗胸腺球蛋白3-5mg（Kg/d）连用5天 NOTE: 用药前需做过敏试验 用药过程中用糖皮质激素防治过敏反应 静滴不宜过快，每日剂量应维持点滴12-16小 时；可与环孢素组成强化免疫抑制方案
43
二.针对发病机制的治疗
（一）免疫抑制治疗 2.环孢素
8
贫血根据病因分类
1.红细胞生成不足贫血 包括:原料缺乏和造血功能障碍、再障
2.红细胞破坏过多贫血
包括:多种原因引起溶血性贫血
胎盘组织及血液中含有丰富的造血干_祖细胞
胎盘组织及血液中含有丰富的造血干/祖细胞周胜利,宋剑秋,旭 日(山东脐带血干细胞中心,济南250002)摘要 大量的临床移植表明人脐血(UCB)可以在造血干细胞移植的儿童中得到造血重建,可是在成人中脐血移植(UCB T)效果并不理想,这主要是脐血中所含的细胞数及造血干/祖细胞数有限,而不适宜体重较大的成人。
本研究在收集脐血的同时,也分别收集胎盘血(U PB)及胎盘组织(U PT)中的细胞,检测有核细胞数,CD34(造血干/祖细胞的表明标记)阳性细胞,粒单细胞集落(CFU2GM)。
结果发现:来自于胎盘血和胎盘组织中的有核细胞数是脐血细胞的3-4倍;脐血、胎盘血及胎盘组织细胞的有核细胞数分别为(8.3±1.04)×108,(16.33±5.54)×108和(8.01±2.64)×108;CD34+细胞分别为(0.77±0.01)×106,(1.25±0.55)×106和(4.21±1.90)×106;在细胞的长期培养中,U PB细胞和U PT细胞能生存更长时间,而且这些细胞更易贴壁形成纤维样的细胞;冰冻前后U PT细胞活性及回收率无明显差异,表明胎盘细胞和脐血细胞一样适合于长期储存;而且,在U PB和U PT中含有更高比例的T淋巴细胞抑制细胞群,可能意味着U PB和U PT具有更强的免疫抑制功能。
结论指出,有必要建立含有胎盘和脐血细胞的血库,以便为大剂量放疗及化疗后的儿童及成年病人进行造血干细胞移植,为重建造血创造条件。
关键词 脐血;脐血库;胎盘组织;胎盘血;造血干/祖细胞中图分类号 R714156;Q462Rich H ematopoietic Stem/Progenitor Cells in the H uman Placenta Tissue and Placenta BloodZHOU Sheng2Li,SON G Jian2Qiu,XU Ri(S handong U mbilical S tem Cell Center,Ji nan250002)Abstract Clinical transplantation evidence has indication that umbilical cord blood(UCB)can be useful in the hematopoietic reconstitution in the children,but not well in the adult patients because of the low cell count.The purpose of our study was to evaluate a new method for collection of blood cells from human placenta and umbilical cord.We have simultaneously harvested blood cells from umbilical cord(UCB),placenta blood(U PB)and placenta tissue(U PT)for their content of nucleated cells,CD34(hematopoietic stem progenitor maker)positive cells.Result showed that the nuclear cell(NC)from U PB and U PT has three to four times than that from umbilical cord blood only,(8.3±1.04)×108(UCB),(16.33±5.54)×108(U PB),and(8.01±2.64)×108(U PT).CD34+cells are(0.77±0.01)×106, (1.25±0.55)×106and(4.21±1.90)×106respectively.The cells from U PB and U PT have more survival ability than the cells from UCB in the long2term cell culture condition.It is clear that the blood stored in the liquid nitrogen did not show large loss of total nucleated cell count and CD34+cells.It was observed that U PT and U PB contained more suppressor lymphocytes,which may be important in prevention of graft2versus2host disease.In conclusion,our data may have implications for the development of placental blood collection together with umbilical cord blood banking for the stem cell transplantation.K ey w ords umbilical cord blood;umbilical cord blood bank;umbilical placenta tissue;umbilical placenta blood; hematopoietic stem/progenitor cell 在人类的胚胎发育中,造血干/祖细胞首先发生在胎儿卵黄囊中,4个月后转移到胎儿肝脏中生长分化,新生儿出生后就定位在骨髓中,由骨髓不断地生长出各种不同发育阶段的白细胞,红细胞和血小板。
解剖学胎盘的名词解释
解剖学胎盘的名词解释胎盘（Placenta）是哺乳动物雌性个体在妊娠过程中形成的一种特殊组织，被称为“生活之树”。
它以其庞大而复杂的结构和重要的功能，在胚胎发育和母婴健康中起着至关重要的作用。
本文将对解剖学胎盘的相关名词进行解释和阐述，以期为读者深入了解胎盘的结构和功能提供有价值的信息。
胎盘的基本结构由胎膜和胎儿脐带组成，其形状呈现为一块圆形或椭圆形的薄板状组织。
正常情况下，胎盘呈灰白色或带有淡黄色，直径约为15-20厘米，厚度约1-2厘米。
在提供胎儿所需养分和氧气的同时，胎盘也起到分泌激素、排泄代谢废物和免疫调节等重要作用。
胎膜（Amnion）是胎盘中最内层的结构，由一层薄膜组成，分为两部分：羊膜和脐膜。
羊膜紧贴在胎儿身体表面，而脐膜则与母体的子宫壁相连。
胎膜的主要功能是包裹和保护胎儿，同时也有助于调节胎儿在羊水中的温度和维持适宜的湿润环境。
胎脐（Umbilical Cord）是连接胎儿和胎盘的管状结构，通过母体的脐孔与胎盘相连。
胎脐一般直径约为1-2厘米，长度约为40-60厘米。
它主要由三条血管、脐血管和一个凝胶状物质组成。
三条血管分别是两条动脉和一条静脉，动脉将血液从胎盘循环到胎儿体内，静脉则将富含氧和营养的血液从胎儿循环到胎盘。
脐血管是胎脐中的凝胶状物质，它主要起到支持和保护脐血管的作用。
胎盘组织的关键成分是绒毛（Chorionic Villus），它是胎儿和母体之间进行养分交换的关键结构。
绒毛由连续排列的柱状细胞组成，它们表面覆盖着微绒毛，增加了表面积以增强养分吸收。
母体和胎儿的血液通过母体侧的血窦和胎儿侧的血管进行交换。
这种血液交换确保了胎儿得到适当的氧气和营养物质，同时也允许逆向运输代谢废物。
除了养分交换，胎盘还具有分泌激素的功能。
胎盘分泌的激素对妊娠过程、胎儿发育和母婴健康起着重要的调节作用。
例如，绒毛膜促性腺激素（hCG）可以维持黄体功能，产生孕激素以维持妊娠；胎盘促乳激素（PL）可以促进乳腺的增长和发育，为母乳喂养做好准备。
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胎盘组织及血液中含有丰富的造血干/祖细胞周胜利,宋剑秋,旭 日(山东脐带血干细胞中心,济南250002)摘要 大量的临床移植表明人脐血(UCB)可以在造血干细胞移植的儿童中得到造血重建,可是在成人中脐血移植(UCB T)效果并不理想,这主要是脐血中所含的细胞数及造血干/祖细胞数有限,而不适宜体重较大的成人。
本研究在收集脐血的同时,也分别收集胎盘血(U PB)及胎盘组织(U PT)中的细胞,检测有核细胞数,CD34(造血干/祖细胞的表明标记)阳性细胞,粒单细胞集落(CFU2GM)。
结果发现:来自于胎盘血和胎盘组织中的有核细胞数是脐血细胞的3-4倍;脐血、胎盘血及胎盘组织细胞的有核细胞数分别为(8.3±1.04)×108,(16.33±5.54)×108和(8.01±2.64)×108;CD34+细胞分别为(0.77±0.01)×106,(1.25±0.55)×106和(4.21±1.90)×106;在细胞的长期培养中,U PB细胞和U PT细胞能生存更长时间,而且这些细胞更易贴壁形成纤维样的细胞;冰冻前后U PT细胞活性及回收率无明显差异,表明胎盘细胞和脐血细胞一样适合于长期储存;而且,在U PB和U PT中含有更高比例的T淋巴细胞抑制细胞群,可能意味着U PB和U PT具有更强的免疫抑制功能。
结论指出,有必要建立含有胎盘和脐血细胞的血库,以便为大剂量放疗及化疗后的儿童及成年病人进行造血干细胞移植,为重建造血创造条件。
关键词 脐血;脐血库;胎盘组织;胎盘血;造血干/祖细胞中图分类号 R714156;Q462Rich H ematopoietic Stem/Progenitor Cells in the H uman Placenta Tissue and Placenta BloodZHOU Sheng2Li,SON G Jian2Qiu,XU Ri(S handong U mbilical S tem Cell Center,Ji nan250002)Abstract Clinical transplantation evidence has indication that umbilical cord blood(UCB)can be useful in the hematopoietic reconstitution in the children,but not well in the adult patients because of the low cell count.The purpose of our study was to evaluate a new method for collection of blood cells from human placenta and umbilical cord.We have simultaneously harvested blood cells from umbilical cord(UCB),placenta blood(U PB)and placenta tissue(U PT)for their content of nucleated cells,CD34(hematopoietic stem progenitor maker)positive cells.Result showed that the nuclear cell(NC)from U PB and U PT has three to four times than that from umbilical cord blood only,(8.3±1.04)×108(UCB),(16.33±5.54)×108(U PB),and(8.01±2.64)×108(U PT).CD34+cells are(0.77±0.01)×106, (1.25±0.55)×106and(4.21±1.90)×106respectively.The cells from U PB and U PT have more survival ability than the cells from UCB in the long2term cell culture condition.It is clear that the blood stored in the liquid nitrogen did not show large loss of total nucleated cell count and CD34+cells.It was observed that U PT and U PB contained more suppressor lymphocytes,which may be important in prevention of graft2versus2host disease.In conclusion,our data may have implications for the development of placental blood collection together with umbilical cord blood banking for the stem cell transplantation.K ey w ords umbilical cord blood;umbilical cord blood bank;umbilical placenta tissue;umbilical placenta blood; hematopoietic stem/progenitor cell 在人类的胚胎发育中,造血干/祖细胞首先发生在胎儿卵黄囊中,4个月后转移到胎儿肝脏中生长分化,新生儿出生后就定位在骨髓中,由骨髓不断地生长出各种不同发育阶段的白细胞,红细胞和血小板。
人们曾经采用过富含造血干/祖细胞的胎肝用于造血干细胞移植,但由于来源困难以及细胞量的不足,而不能大规模用于临床。
近十余年来,人们已发现在脐血中含有丰富的造血干/祖细胞[1]。
脐血来源广泛,HLA配型对移植要求不严格,从而在世界各地纷纷建立起脐血库,开展脐血移植[2-4]。
到目前,全世界已开展近2000例脐血移植。
临床资料证明,脐血移植对于体重大于40公斤的病人的效果并不理想,即使在成功的儿童脐血移植中,血小板回 通讯作者:周胜利 电话:(0531)2999222-2502.传真:(0531) 2999533.E2mail:shengliz@・241・中国实验血液学杂志 Journal of Ex perimental Hem atology2002;10(2):142-147升时间也较骨髓移植为长[5]。
我们采用一种简单有效的方法分离胎盘中的细胞,发现在胎盘中有二类细胞,一类是切割胎盘后的胎盘血细胞(U PB),另一类是胎盘碾磨后的组织细胞(U PT),这二类细胞均含丰富的CD34阳性的造血干/祖细胞。
二类细胞的总数约为脐血细胞的3 -4倍。
这样,建立一座含有胎盘和脐血细胞的血库,就能有足够的细胞应用于儿童和成人间的造血干/祖细胞移植。
材料与方法孕产妇病史调查同脐血采集前的孕产妇调查[7]。
胎盘和脐血采集、组织配型、造血祖细胞集落培养及流式细胞术CD34+细胞计数方法同文献[7]。
深低温保存按K ogler等[10]脐血的深低温保存方法进行。
贮存细胞的冻融方法与脐血细胞的冻融相同[7]。
胎盘血和胎盘组织细胞的收集在收集完脐血后,尽可能保持胎盘的无菌状态和完整性,以无菌布包好后送到脐血库的无菌车间。
用无菌生理盐水冲洗净胎盘外的血迹,然后用双止血钳夹住脐带根部,用无菌剪刀在止血钳之间剪断脐带,以及去除附着于胎盘表面的包膜,再用无菌生理盐水清洗2次。
将完整胎盘置于1000ml无菌烧杯内,以无菌剪刀剪碎胎盘,收集从粉碎胎盘中流出的血液,称为胎盘血(U PB)。
将碎胎盘置于无菌不锈钢网上,用研钵棒一边研碎胎盘,一边用无菌生理盐水冲洗,收集从研磨后冲洗下的细胞,用滤网和注射器反复过滤数次,去除任何残留组织,离心用生理盐水洗2次,所收集的细胞称为胎盘组织细胞(U PT)。
细胞的长期培养在IMDM中加入20%的脐带混合血浆,10% 56℃灭活胎牛血清和1%(v ol/v ol)抗生素,制备成细胞培养液。
用该培养液调整UC B,UPB及UPT的细胞浓度为2×106/ml,以10ml分别加入25ml的培养瓶中,置于37℃,5%CO2孵育箱中培养。
每周半量换液2次,并每周做细胞计数和细胞活性检测。
贴壁细胞的传代培养以长期培养的相同方法把细胞置于25ml培养瓶中,每周换液2次。
待细胞贴壁并长满培养瓶底后,先用不含血浆的IMDM冲洗培养瓶2次,加入0.5%胰蛋白酶(trypsin)消化约5分钟,倒出胰蛋白酶溶液,加入细胞培养液,反复冲洗粘于培养瓶壁上的细胞,离心清洗1次,调整细胞的浓度为2×106/ ml,加入到另1个25ml培养瓶中,置于37℃,5% CO2孵箱中继续培养。
统计学分析应用计算机软件:Stat View(Abacus Concepts, Berkeley,CA,USA)计算分析。
每个数值均计算出平均值和标准差,采用t检验的方法。
结 果细胞活性的比较检测不同时间和不同温度对这些细胞的影响。
表1比较在同样的抗凝剂(CPDA21),同样的细胞浓度(2×106/ml)分别在4℃和25℃(室温)下细胞的活性和计数,表明U PB和UCB在同样的条件下具有同样的细胞活性,而U PT在开始时间活性较UCB为低,但这个细胞活性和计数并不随着温度和时间而有所改变。
说明活性低是由于研磨时的细胞损伤,而活性好的细胞并不会随时间和温度改变而死亡。
T able1 I nfluence of time and temperature on survival of nucleated cells in UCB,UPB and UPTCell typeTime(hours)TemperatureViability(%)Nucleated cells(×10-6)UCB 03 4℃ 100 225℃100 1.884℃100225℃100 1.7U PB04℃100225℃100 1.884℃100 1.825℃1002U PT04℃75225℃80284℃75 1.925℃752 3:immediate test after cell harvest.UCB:umbilical cord blood.U PB:umbilical placental blood.U PT:umbilical placenta tissue CD34+及有核细胞数目共收集5个胎盘及相应的脐血,从收集到处理・341・胎盘组织及血液中含有丰富的造血干/祖细胞细胞的平均时间为6小时,最长的为18小时。