傅里叶变换红外光谱法测定当归果胶多糖的酯化度

第! 第#期! !!!!!!!!!!!光 谱 学 与 光 谱 分 析 "卷 ! !--" 年 # 月!!!!!!!!!!! !. / 0 1 2 % 3 0 % 6 7. / 0 1 2 5 &8 6 5 & 3 9 3 ) ) 45 ) 4
I = ! , I = * $ % & ' ! "! ( % ' #! ) ) ! : 5 2 0 ; ! " !
) + 提取( '当归粉碎后!经水提$醇沉$透析$冷冻干燥得 F < % 水提剩下的沉淀采用* -] 粗多糖 ? , 8 . Z -H H % & ( 5 @C$
% ' * g的 X M B 8 溶液室温提取!得粗多糖 X , 8 . Z ( ) = 纯化 '? , 8 . Z经 M X 8 X, . / ; 5 2 % 3 /O ] , I > 柱层析梯 ) 度洗脱!分别收集单一峰组分!透析!冷冻干燥得到 # 个纯 !? % 化组分 ? , 8 . Z < , 8 . Z !和 ? , 8 . Z # 分析 < ' ! ' ! ` B [ Q !红外光谱 将果胶标样和当归多糖测试样品干燥!真空条件下研磨 和测试样品微量!T 成粉状%分别取果胶标样 " M XI G g# > 2 F <范 研磨压片!采用 ( 于 9 0 % & / 1( / Y N 3` B [ Q G-!G -0 H
( ) < %经比较!组分 ? 的A 5 & 8 在指纹区的特征吸收峰 < , 8 . Z ! 和? , 8 . Z #与果胶标准样品的红外图谱相似!从而进一步证
实了 ? , 8 . Z !和 ? , 8 . Z # 主 要 为 果 胶 多 糖 的 推 断%而 且 在 和 和 ? , 8 . Z < <+ # * <! * "0 HF<处没有吸收!在 << <* 0 HF<只有弱吸收!归属于糖环上的O0@0C和糖苷键 O0 @0O!因此为中性糖% B + B D ' I 法测定样品酯化度 % !( 将不同酯化度的果胶标样进行扫描分析!每个样品测 # 次!相应数值取平均值%结果表明!对于高 M X 的果胶多糖 样品! #!= -0 HF<的吸收峰主要归属于 A 5 & 8 的甲氧 ! 基" @0O C O0C 的伸缩振动%此峰由于被 @0C" !G ! ## F <# #I -0 H 的宽峰部分掩盖因此无法用于 M X 的定量分析% 和< 0O 的 <+ # I # 0 HF<的吸收峰分别归属于羧酸酯" @ @ Q# ( ) F# < 和羧酸盐 " 0 伸缩振动 % 图谱显示 ! 当 O @ @ M X O ;@ 为! 0O I g时! <+ # -0 HF<处酯键" @ @ Q#O ;@ 的吸收峰很 小!趋于直线&随着 M X 的升高!吸收峰强度和峰面积随之 0O 的吸收峰强度 增加!而<I # -0 HF<处游离羧酸盐 " @ @F # 和峰面积逐渐降低&当 M X 为" G g 时!吸收峰趋于直线!二 者之间此消彼长%由于 M X 表示酯化的羧基占全部羧基的百 分数!因此! , " " M X 可通过与 N N N N'峰面积# <+ # <+ # -f <I # -# 建立线性回归方程求得%
F < -] !再加入 ' *H % & ( 5 @C 溶液!剧烈振荡!放置 < *H 9 6 F < 溶液 ! 振荡至粉红色消失 &加入 # < -H ]' *H % & ] C O & F <标准 滴酚酞试剂!用-] ' <H % & ( 5 @C 溶液滴定样品!记
I = #
! "0 HF< 的 强 吸 收 峰 为 羧 酸 盐 O ;@ 的 伸 缩 振 动%<I F " 0O 的不对称伸缩振动!同时也是糖的水化物样品的 @ @ # 吸收峰% <# <-0 HF<间的吸收峰是由 O0@ 伸缩振动 ! 所引起的!其中一种归属于糖环上的 O0@0C 和 糖 苷 键 O0@0O!另 一 种 则 归 属 于 A 5 & 8 羧 基 的 O0@0C 以 及 F <有一强吸收峰 ! 0 0 % 由于 O @ Q = # #0 H " ! #0 HF<附近有微 弱吸收锋!说明多糖分子以( 糖苷键为主!并含有一定量的 ,
摘!要!应用红外光谱技术建立了一种对果胶多糖酯化度" # 进行快速定量分析的方法%以当归果胶多糖 M X 为测试样品!采用傅里叶变换红外光谱仪" 建立了 M , " 之间的线性回归方程! ` B [ Q# X与 N N N <+ # <+ # -f <I # -# 相关系数为!表明果胶多糖的 M ' " = *! X 与其在<+ # -和<I # -0 HF<处的吸收峰面积之间有良好的线性关 系%经测定!从当归中提取的果胶多糖粗品和纯品的酯化度介于G ! ' # I g! * G ' I g之间%将 ` B [ Q 法与传统 的化学滴定法进行比较!两种方法间相对误差为+ ! 并具有良好的重现性 ! 且与传统方法相比具ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ样品用 g 量少$ 操作简单$ 快捷$ 灵敏度高等特点% 可成为替代化学滴定法的 ` B [ Q 测定果胶多糖酯化度具有可行性! 一种的快速易行而准确的方法% 关键词!` B [ Q&果胶多糖&酯化度&当归 中图分类号 ' 9 3 3 6 ' < , * " # Q ! = I 8!!% & ' < ' # " I G ! " # , I = ! , G !!文献标识码 J
第#期!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!光谱学与光谱分析 围内扫描%扫描# !次!分辨率为G0 HF<% < ' ! ' # B [ Q 法测定样品酯化度 M X !` 标准样品的制备'将三种已知 M ! X 分别为 ! gI * " g! " G g的果胶标样按比例配制成 M X 为G ! ' * g和+ I ' * g 的果 胶标样% 标准曲线的制 作'分 别 取 M X为! I g! G ! ' * g! * " g! + I ' * g! " G g的果胶标样采用 ` B .+ - 系列 ` B [ Q 在 GF < 范 围 内 进 行 扫 描 %采 用 单 次 衰 减 全 反 射 分 析 G -0 H ! " ! !Q !:8# %扫 描 8 B Q# M B A .检测器" M [ A [ ] 8 > 5 6 7 % & ; ) F < < ! =次!分辨率为G0 H !每个样品测 # 次!相应数值取平 均值%以 M " 为纵坐标! , " 为横坐标! X g# N N N <+ # <+ # -f <I # -# 绘制标准曲线!建立线性回归方程%测试样品 ? ! , 8 . Z X , !? , 8 . Z !及 ? , 8 . Z #的操作方法同上% 8 . Z 化学滴定法测定样品酯化度 < ' ! ' G ! 参照文献( %称取 * ") -H V 多糖样品于锥形瓶!溶于 F < 水中 ! 滴入 滴酚酞试剂 !用 -] < -H ]无 O @ * ' <H % & ! 标准 ( 5 @C 溶液滴定样品!记录起始滴定值E<&加入< -H ]
引!言
水果$蔬菜$中草药 # 细胞壁中 !!果胶多糖是存在于植物 " 的一种结构复杂的胶状聚合物! 主要以( ! , M , < G , A 5 & 8 为基本 组 成 单 元! 且 A 5 & 8 的羧基有不同程度的甲酯化 " 0O # % 酯化度 " 是分析果胶多糖的一项常规指 @ @ O C M X# # 标!通常以羧基酯化的百分比或甲氧基含量表示%不同的 M X 影响着果胶产品的溶解性$凝胶性$稳定性以及乳化性! ) < 是决定其凝胶机理的一个主要因素( % 测定果胶 M X 公认的标准方法为化学滴定法!但此法样 品用量大$操作过程复杂且费时%近年来!红外光谱作为一 种快速光谱分析技术已越来越多地应用于多糖的鉴定与组成 分析%其主要优点在于简便$快速$低消耗以及样品需求量 少$不破坏样品等%国内外学者已将傅里叶变换红外光谱仪
应用傅里叶变换红外光谱仪对果胶多糖的酯化度 " 进行 M X# 快速定量分析!并与传统的化学滴定法进行比较!研究其可 行性%
修订日期 ! + , < ! , I ! = , # , < ! !收稿日期 # 和山西省青年科研基金项目" # 资助 ! + + I < # * ! + ! < G ! !基金项目国家自然科学基金项目" 作者简介 孙元琳 ! 年生 ! 运城学院生命科学系副教授 ' & < " + < / , H 5 9 & 3 & U 1 3 5 ; % % ' 0 % H ' 0 6 3 & U 1 3 % 1 H 5 9 & ' 0 % H 4 4 ! !! "4 ";