几种胶体金技术详解
胶体金法各种方法法原理
胶体金法各种方法法原理胶体金（colloidal gold）是一种常见的纳米材料，广泛应用于生物医学、光电子学以及化学分析等领域。
胶体金法则是制备胶体金纳米颗粒的一种常用方法，它包括了各种不同的制备方法。
本文将详细介绍胶体金法的各种方法和原理。
一、胶体金法的概述胶体金法是指利用化学还原或还原剂将金离子还原成金原子并使其聚集形成胶体金颗粒的过程。
胶体金颗粒具有良好的可控性和活性，可以通过调节制备条件来控制其形状、尺寸和表面性质，便于在各个领域的应用中发挥优越性能。
二、化学还原法化学还原法是制备胶体金的一种常见方法。
其原理是通过将金离子与还原剂反应，使金离子还原为金原子，形成胶体金颗粒。
常用的还原剂有氨水、柠檬酸等。
这种方法制备的胶体金颗粒形状和尺寸较均匀，可以通过调节还原剂浓度、反应时间和温度等参数来控制颗粒的大小和形状。
三、光化学法光化学法是一种利用光照射来控制胶体金纳米颗粒形成的方法。
在该方法中，金离子在紫外光照射下被激发产生自由电子，然后与还原剂发生反应，形成胶体金颗粒。
这种方法具有反应速度快、颗粒形状可调控等优点。
光化学法的适应范围广，可以制备不同形状和尺寸的胶体金颗粒。
四、微乳液法微乳液法是一种利用乳化剂将金离子包裹在微乳液中，通过还原剂将金离子还原为金原子，最终生成胶体金颗粒的方法。
微乳液具有稳定性好、溶剂消耗少等特点，在胶体金制备中广泛应用。
该方法不受金离子浓度的限制，能够制备出较大尺寸的胶体金颗粒。
五、溶胶-凝胶法溶胶-凝胶法是一种将金离子逐渐转化为胶体金的方法。
首先，将金离子转化为胶态溶胶，然后通过加热或干燥使其凝胶，最终形成胶体金凝胶。
该方法可以制备出较大尺寸的胶体金颗粒，也可用于制备具有复杂结构的胶体金材料。
六、电化学法电化学法是一种利用电化学反应制备胶体金的方法。
在电化学细胞中，金阳极上的金离子被还原为金原子，并在阴极表面聚集形成胶体金颗粒。
该方法具有较高的纯度和良好的控制性能，可用于制备高质量的胶体金。
胶体金技术总结Ⅱ
胶体金技术总结Ⅱ一、胶体金技术原理胶体金技术的基本原理是将金金属离子还原成金纳米颗粒并通过其中一种方法使其分散在溶液中。
金纳米颗粒可以通过改变反应条件来调控其形貌和大小，以及表面性质。
其中，分散性是胶体金技术的重要特点，因为金纳米颗粒只有在分散状态下才能充分发挥其特殊性质。
二、胶体金技术制备方法化学还原法是最常用的制备胶体金的方法之一、它通过将金离子还原为金金属颗粒，并通过表面活性剂、电解质等调控分散性。
化学还原法制备的胶体金颗粒粒径较小且分散性好，但对条件要求较高。
溶胶-凝胶法是一种将溶胶中的颗粒逐渐转变为凝胶的制备方法。
通过控制凝胶形成的条件，可以调节金纳米颗粒的形貌和大小。
沉积法是通过将预制的胶体金颗粒沉积到底物表面，制备具有特定功能的薄膜或涂层。
该方法可以制备出均匀、稳定的胶体金薄膜，并且可以调控颗粒的形貌和密度。
光化学法是通过光化学反应将金离子还原为金颗粒。
光化学法制备的胶体金颗粒分散性好，并且可以调控颗粒的形貌和大小。
三、胶体金技术应用1.材料科学方面，胶体金可以用于制备纳米尺度的电子材料，如导电薄膜、导电纳米线等。
此外，胶体金还可以作为催化剂、催化剂载体、光催化材料等。
2.生物医学方面，胶体金颗粒具有良好的生物相容性和生物活性，可以用于制备药物载体、生物传感器、光热治疗等。
胶体金的表面还可以修饰生物分子，用于生物成像、生物分析等应用。
3.传感器方面，胶体金可以用于制备高灵敏度、高选择性的传感器。
通过修饰胶体金表面的功能分子，可以实现对特定分子的检测，并且可以通过纳米尺度的效应提高传感器的性能。
4.光电子方面，胶体金颗粒具有优异的光学性质，可以用于制备光电器件，如光伏器件、光探测器等。
胶体金颗粒的表面还可以修饰光子晶体，制备具有特殊光学性质的材料。
总之，胶体金技术是一种具有广泛应用前景的技术。
通过调控金纳米颗粒的形貌、大小和表面性质，可以制备出具有特殊功能的材料，并用于材料科学、生物医学、传感器、光电子等领域。
胶体金技术——精选推荐
胶体⾦技术⼀、胶体⾦的⼀般性状(⼀) 胶体⾦的颜⾊溶胶的颜⾊取决于分散相物质的颜⾊、分散相物质的分散度和⼊射光线的种类，是散射光线还是透射光，粒⼦越⼩，分散度越⾼，则散射光的波长越短。
对同⼀种物质的⽔溶胶来说，粒⼦⼤⼩不同，呈现的颜⾊亦不同。
如胶体⾦颗粒在5～20nm之间，吸收波长520nm，呈红⾊的葡萄酒⾊；20～40nm之间的⾦溶胶主要吸收波长530nm的绿⾊光，溶液呈深红⾊；60nm的胶体⾦溶胶主要吸收波长600nm的橙黄⾊光，溶液呈蓝紫⾊。
⼀般应⽤于免疫组织化学的胶体⾦颗粒为5～60nm范围内，溶液呈现红⾊。
在相当的⼀段时期内保持其溶胶不变性，称为胶体⾦的稳定性。
影响其稳定性的因素主要是电解质，其次是胶体⾦本⾝的浓度、温度及其他⾮电解质等。
(⼆) 胶体⾦的稳定性溶胶的稳定性介于⼩分⼦离⼦溶液和粗分散相之间，其颗粒作布朗运动，不易受重⼒影响⽽下沉。
然⽽，溶胶⼜是不稳定体系，它的胶粒溶剂化作⽤很弱，总⾯积较⼤、因在胶粒相互碰撞时，有⾃动合并为较⼤、较重的颗粒倾向。
当胶体颗粒直径变⼤，超出胶体范围⽽从介质中沉淀出来的现象叫聚沉。
影响其稳定性的主要原因有三点。
(1) 胶粒间的相互吸引⼒当胶粒相距很近时，这种吸引⼒可能导致胶体颗粒合并⽽变⼤。
(2) 胶粒及其溶剂化层胶粒及其溶剂化层(溶剂是⽔时就是⽔化层)的带电情况。
⼀种溶胶的各个胶粒都带有相同的电荷。
同性电荷相斥，双电⼦层变厚，胶粒带电量愈⼤，排斥⼒愈⼤，愈能阻⽌胶粒合并聚结，溶胶愈稳定。
(3) 胶体接⼝的溶剂膜当⼆个固体间夹有⼀厚层液体时，这层液体膜有⼀个反抗⼆固体接近的排斥⼒。
两个胶粒要进⼀步接近，只有克服它们之间的溶剂化膜的斥⼒才有可能，因此溶剂膜的斥⼒是使溶胶稳定的原因之⼀。
(三) 溶胶的聚沉现象胶粒之间存在吸引⼒与排斥⼒这对⽭盾，在溶胶胶粒带电及溶剂化的情况下，排斥⼒成为⽭盾的主要⽅⾯，溶胶稳定⽽不聚沉。
因为某种原因使溶胶粒带电量减到很⼩，甚⾄中和其所带电荷并能去溶剂化膜，胶粒之间可在更近的距离互相接近，引⼒成为主要⽭盾，引⼒超过斥⼒时胶粒便聚结发⽣聚沉。
胶体金法的定义和分类
胶体金是一种常用的标记技术，是以胶体金作为示踪标志物应用于抗原抗体的一种新型的免疫标记技术，有其独特的优点。
近年已在各种生物学研究中广泛使用。
在临床使用的免疫印迹技术几乎都使用其标记。
同时在流式、电镜、免疫、分子生物学以至生物芯片中都可能例用到。
1971年Faulk和Taytor将胶体金引入免疫化学，此后免疫胶体金技术作为一种新的免疫学方法，在生物医学各领域得到了日益广泛的应用。
目前在医学检验中的应用主要是免疫层析法(immunochromatogra-phy)和快速免疫金渗滤法(Do t-immuogold filtration assay DIGFA)，用于检测HBsAg、HCG和抗双链DNA抗体等，具有简单、快速、准确和无污染等优点。
免疫胶体金技术的基本原理：胶体金是由氯金酸(HAuCl4)在还原剂如白磷、抗坏血酸、枸橼酸钠、鞣酸等作用下，可聚合成一定大小的金颗粒，并由于静电作用成为一种稳定的胶体状态，形成带负电的疏水胶溶液，由于静电作用而成为稳定的胶体状态，故称胶体金。
胶体金在弱碱环境下带负电荷，可与蛋白质分子的正电荷基团形成牢固的结合，由于这种结合是静电结合，所以不影响蛋白质的生物特性。
胶体金除了与蛋白质结合以外，还可以与许多其它生物大分子结合，如SPA、PHA、ConA 等。
根据胶体金的一些物理性状，如高电子密度、颗粒大小、形状及颜色反应，加上结合物的免疫和生物学特性，因而使胶体金广泛地应用于免疫学、组织学、病理学和细胞生物学等领域。
胶体金标记，实质上是蛋白质等高分子被吸附到胶体金颗粒表面的包被过程。
吸附机理可能是胶体金颗粒表面负电荷，与蛋白质的正电荷基团因静电吸附而形成牢固结合。
用还原法可以方便地从氯金酸制备各种不同粒径、也就是不同颜色的胶体金颗粒。
这种球形的粒子对蛋白质有很强的吸附功能，可以与葡萄球菌A蛋白、免疫球蛋白、毒素、糖蛋白、酶、抗生素、激素、牛血清白蛋白多肽缀合物等非共价结合，因而在基础研究和临床实验中成为非常有用的工具。
胶体金的制备方法
胶体金的制备方法1. 胶体金的概述胶体金是一种由纳米级金颗粒组成的胶体溶液。
胶体是指由两种或多种物质组成的系统，其中一种物质以微细颗粒的形式分散在另一种物质中。
胶体金具有许多独特的性质，如表面增强拉曼散射效应、可调控的光学吸收谱、生物相容性等，因此在生物医学、光学传感、催化等领域有广泛的应用。
2. 胶体金的制备方法胶体金的制备方法多种多样，下面介绍几种常用的制备方法。
2.1 化学还原法化学还原法是制备胶体金最常用的方法之一。
其主要步骤如下：1.制备金盐溶液：将金盐（如氯金酸钠）溶解在适量的溶剂中，如水或有机溶剂。
2.还原反应：向金盐溶液中加入一种还原剂，如氢氯化酸、乙酰丙酮、氢气等，使金离子还原为金原子。
3.形成胶体金：在还原反应中，金原子会聚集形成纳米级金颗粒，从而形成胶体金溶液。
化学还原法制备的胶体金具有粒径分布较广、形貌不规则的特点，但制备过程简单，操作方便。
2.2 光化学还原法光化学还原法是一种利用光照射来促进金离子还原反应的方法。
其主要步骤如下：1.制备金盐溶液：同化学还原法。
2.光照射：将金盐溶液暴露在紫外光或可见光照射下，光照射会激发金盐中的电子跃迁，从而促进金离子的还原反应。
3.形成胶体金：同化学还原法。
光化学还原法制备的胶体金具有尺寸均一、形貌规则的特点，但制备过程较为复杂，需要精确控制光照条件。
2.3 纳米颗粒生长法纳米颗粒生长法是一种通过控制金离子在溶液中的生长过程来制备胶体金的方法。
其主要步骤如下：1.制备金离子溶液：将金盐溶解在适量的溶剂中。
2.加入还原剂：向金离子溶液中加入一种还原剂，如某种有机物或金属盐。
3.控制生长条件：通过调节溶液的温度、pH值、浓度等参数，控制金离子的生长速率和方向。
4.形成胶体金：金离子在溶液中生长形成纳米级金颗粒，从而形成胶体金溶液。
纳米颗粒生长法制备的胶体金具有尺寸可调控、形貌可控制的特点，但制备过程较为复杂，需要精确控制生长条件。
3. 胶体金的应用胶体金由于其独特的性质，在多个领域有广泛的应用。
胶体金制备方法
胶体金制备方法胶体金是一种由纳米颗粒组成的胶体溶液，具有广泛的应用前景。
胶体金的制备方法有多种，下面将介绍几种常见的制备方法。
一种常见的胶体金制备方法是还原法。
该方法通常使用氯金酸盐作为金源，还原剂如氢氯酸、次氯酸钠、亚硫酸钠等，以及表面活性剂如十二烷基硫酸钠等。
首先，将氯金酸盐溶解在水中，加入适量的还原剂和表面活性剂，经过搅拌和加热处理后，溶液中的金离子被还原成金纳米颗粒，形成胶体金溶液。
另一种常见的制备方法是光化学法。
该方法利用光的照射作用，将金离子还原成金纳米颗粒。
一般使用紫外光或可见光作为光源，将含有金离子的溶液暴露在光源下，金离子在光的作用下逐渐被还原成金纳米颗粒。
该方法具有简单、快速的特点，适用于大规模制备。
电化学法也是一种常用的胶体金制备方法。
该方法利用电化学反应将金离子还原成金纳米颗粒。
首先，在电解质溶液中放置两个电极，其中一个电极为金电极，另一个电极为参比电极。
然后，将电流通过电解质溶液，在金电极上发生氧化还原反应，金离子被还原成金纳米颗粒，并被带到溶液中形成胶体金溶液。
还有一种常见的制备方法是化学共沉淀法。
该方法通常使用金盐和还原剂共同作用，使金离子被还原成金纳米颗粒。
首先，在含有金离子的溶液中加入还原剂，如氢氯酸或亚硝酸钠，然后通过搅拌和加热处理，金离子被还原成金纳米颗粒，形成胶体金溶液。
通过上述几种制备方法，可以得到不同形状和大小的胶体金纳米颗粒。
这些胶体金纳米颗粒具有良好的分散性和稳定性，可以广泛应用于生物医学、光学、催化等领域。
在生物医学中，胶体金纳米颗粒可以用于肿瘤治疗、生物传感器等。
在光学领域，胶体金纳米颗粒可以用于制备纳米光学材料、表面增强拉曼光谱等。
在催化领域，胶体金纳米颗粒可以用于催化剂的制备和催化反应的促进。
胶体金的制备方法有多种，每种方法都有其优缺点。
通过选择合适的制备方法和调控制备条件，可以得到具有不同性质和应用的胶体金纳米颗粒。
胶体金纳米颗粒的制备方法的研究和发展将进一步推动其在各个领域的应用。
胶体金检测技术-
阳性结果 样品中可能含有等于或源自于3ng/ml的盐酸克伦特罗。培训资料
四、ß -激动剂检测卡快速筛查尿样的方法介绍
以盐酸克伦特罗胶体金快速检测卡为例
一．适用范围： 主要用于定性检测，测定动物尿液，如猪尿、牛尿、羊 尿等样品中盐酸克伦特罗的残留。整个检测过程只需要 5~10分钟左右，灵敏度为3 ng/ml(3ppb)。也就是说当 尿液中盐酸克伦特罗的残留大于或等于3 ng/ml时，检测 卡才能检测到。
试纸条中的NC膜受潮后，尿样在上面无法正常泳动，无 法到达吸水纸的位置；胶金垫上的金标抗体受潮后会变性， 从而失去原有的生理性功能，影响抗原抗体的选择性反应。 因此，试纸条必须保持干燥，从包装袋中取出后要尽快使用。 3.检测时，避免阳光直射和电风扇、空调的风直吹
尿样一开始在NC膜上泳动时，是利用毛细管作用，如果 风吹太阳晒，NC膜上的尿样蒸发后难以到达吸水纸的位置，会 产生假阳性结果，因此，检测时要避免阳光直射和电风扇、空 调的风直吹。
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二 、包装 每个包装袋中包含盐酸克伦特罗免疫胶体金快速检测卡 ，滴管1个、干燥剂1片。
三、现场筛查步骤
1. 在进行测试前先完整阅读使用说明书，使用前将检测卡 和待检样本溶液恢复至室温。
2. 从原包装袋中取出检测卡，打开后请在一个小时内就地 使用。
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3．将检测卡平放，用移液器或滴管吸取尿液样品溶液，垂 直滴加3滴（约80ul）于加样孔中，加样后开始计时。
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图1 金颗粒示意 图
在溶液中金颗粒呈 圆形, 表面带有负电 荷 , 由于静电的排斥 力 , 使其在水中保稳 定状态，形成稳定 的胶体状态。
培训资料 3. 胶体金试纸条的构造
胶体金检测常用方法
胶体金检测常用方法
胶体金检测是一种常用的生物分析技术，广泛应用于生物学、医学、环境科学等领域。
常用的胶体金检测方法有以下几种：
1. 色谱层析法：将待检样品加入胶体金溶液中，经过色谱层析
柱进行分离，最终观察胶体金试纸的颜色变化，可判断样品是否含有目标分子。
2. 电化学法：将胶体金修饰在电极表面上，通过电化学反应检
测待检样品中的目标分子。
电化学法检测的胶体金电极具有灵敏度高、稳定性好等优点。
3. 原位杂交法：利用胶体金标记的探针与待测样品中的DNA或RNA进行杂交反应，通过颜色变化来判断目标分子的存在情况。
4. 免疫层析法：将待测样品加入含有特定抗体的胶体金试纸中，观察试纸的颜色变化来判断样品中是否含有特定抗原。
5. 荧光探针法：将荧光染料标记在胶体金表面上，通过荧光信
号来检测待测样品中的目标分子。
该方法具有高灵敏度、高选择性等优点。
这些方法在生物检测中广泛应用，为生物学、医学、环境科学等领域的研究提供了有力的技术支持。
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胶体金免疫分析技术详解随着免疫分析日益广泛应用于以临床为主以及非临床领域的诊断工业，免疫分析正在向两个方向发展：一类为全自动化的免疫分析；另一类为以硝酸纤维膜为载体的快速免疫分析。
前者需要价格昂贵的全自动仪器及与仪器严格配套的各种试剂盒，目前只能在医疗及检测中心应用，虽也能较快速给出结果，但仍需一定时间，不适合远离医疗及检测中心的地区，更不能用于“患者床旁检验”和普查的需要，在酶免疫分析的基础上，主要以硝酸纤维素膜为载体的快速诊断方法迅速和广泛地发展起来。
这类方法目前在文献及市场上的命名还很不统一。
它实际上属于快速斑点免疫结合分析，主要有以下两种方法：斑点免疫渗滤分析DIFA和斑点免疫层析分析DICA。
本篇主要介绍以金作为标志物的胶体金免疫分析技术。
金标记免疫分析技术也称免疫胶体金技术，是于1971年建立的一种信号显示技术。
此技术最初用于免疫电镜检查，由胶体金颗粒标记抗原或抗体，与组织或细胞中相应的抗体或抗原相结合，在电子显微镜的检查时可起特异的示踪作用。
此后，此技术与银染技术相结合建立的免疫金银染色法，使抗原抗体特异反应信号可在光学显微镜下观察。
近10多年来，利用硝酸纤维素膜（NC）等为固相载体，以胶体金标记的抗原或抗体与特异配体的反应在膜上进行，建立了快速的金标记免疫渗滤技术和金标记免疫层析技术，并在传染病、心血管病、风湿病、自身免疫病的免疫学检测中广泛应用。
胶体金是指金微小粒子（0-100nm）分散在另一种物质中所形成的体系，通常指金以微小粒子分散在溶液中所形成的金溶胶，用此金溶胶标记蛋白质（抗原、抗体或SPA、SPG），胶体金颗粒具有高电子密度的特性，故在金标蛋白的抗原抗体结合处，显微镜下可见黑褐色颗粒；当这些标记物在相应的标记处大量聚集时，可在载体膜上呈现红色或粉红色斑点，从而用于抗原或抗体物质的半定量或定性。
与ELISA不同之处便是反应时间大大缩短，仅需要数分钟就完成了ELISA需数小时才能显示的结果。
因为在GIFA和GICA中，高浓度的抗体集中固定在纤维素的微孔中，待测抗原在渗滤或层析时，流经微孔与固定的高浓度抗体紧密接触，很快完成免疫结合反应。
这就是以膜为基础的胶体金快速免疫结合分析中的免疫浓缩作用。
在ELISA中，待测抗原要在液相中经过扩散作用，逐渐与吸附在固相表面的抗体结合。
同时，标记抗体也需要同样的扩散结合过程形成抗体-抗原-标记抗体复合物，故需时间较长。
故此技术做到了名副其实的POCT。
原理：将氯金酸（HAuCl4）用还原法制成一定直径的金溶胶颗粒（胶体金），标记金黄色葡萄球菌A蛋白（SPA）或抗体，用于免疫印迹、免疫组织化学定位或快速免疫渗滤、免疫层析实验。
金标记免疫渗滤技术的原理同一般的免疫斑点试验，也是用已知抗原或抗体包被NC膜，再用金标记抗体或抗原来进行快速快速测定，阳性时斑点呈胶体金的红色。
改进之处为采用了渗滤装置，更加简便。
金标记免疫层析则是利用NC膜条状纤维的毛细管作用，使样品在涌动中与金标记物及包被在NC膜上的抗原或抗体结合，出现呈色的阳性信号。
胶体金的制备：在溶液中金颗粒呈圆形，边缘平整，界线十分清楚。
金颗粒表面带有大量负电荷，由于静电的排斥力，使其在水中保持稳定状态，形成稳定的胶体，所以称其为胶体金。
胶体金的制作方法有白磷还原法，抗坏血酸还原法，柠檬酸三钠还原法和鞣酸—柠檬酸三钠还原法。
通过改变反应体系中氯金酸与还原剂的比例（即增加或减少还原剂的量）可得到所需不同直径的金颗粒。
但前两种方法制备得到的金颗粒直径大小不均一，所以目前常用后两种方法，以柠檬酸三钠还原法为例。
Frens标准方法：（1）取0、01%HAuCl4溶液50mL,加热煮沸，随即快速加入1%柠檬酸三钠溶液0.5mL.（2）约过25s沸腾的溶液变为淡蓝色，大约再过70s，蓝色突然转变为亮红色，（3）继续煮沸约5分钟后结束反应。
（4）冷却后用0.1MK2CO3溶液调至所需PH值。
（5）此后再延长反应时间或另加入额外的柠檬酸三钠都不影响实验结果。
该法制备得到的金颗粒直径约为41nm，如前所述，要想得到更大或更小的金颗粒，该方法依然可行，唯一不同的是需要改变加入还原剂的量。
另外，采用此标准方法所需反应时间最短。
附注：有研究者已经注意到影响胶体金质量及其稳定性的几种因素，制备过程中器具若全部使用干净的玻璃器皿，溶液一律用0.2µm滤膜过滤后使用，水用玻璃三蒸水，推荐使用超纯水，采取这些措施后制得的胶体金很稳定。
这些措施表明即使很微量的污物都会对胶体金制备带来不良影响。
虽然经常可见推荐使用硅化玻璃器皿的说法，其实使用普通玻璃器皿同样也能制出高质量高稳定性的胶体金。
免疫金的制备胶体金与抗原（或抗体）的结合物称为免疫金或胶体金标记物，在免疫组织化学技术中，又习惯称之为金探针。
胶体金标记蛋白的原理是：在碱性条件下，胶体金颗粒表面带负电荷，可与蛋白质所带正电荷基团之间产生静电吸引而牢固结合，这种结合对所标记蛋白的生物学活性无明显影响。
环境pH和离子强度是影响胶体金与抗原（抗体）吸附的主要因素，胶体金颗粒的大小、蛋白质的分子量及浓度等也影响蛋白质的吸附。
一般制备方法为：1、胶体金pH的调整（用K2CO3或HCL溶液调节pH至选定值。
原则上可选择待标记蛋白质等电点，也可以略偏碱。
但各标记物的最适反应pH往往需多次试验才能确定）；2、蛋白质最适标记量的确定（将待标记蛋白作一系列稀释后各取一定量加入装有一定量胶体金的试管中，然后分别加入NaCl溶液，混匀静置数小时，对照管与加入蛋白量不足的管颜色会由红变蓝，而蛋白量足或超过的管保持红色不变，其中含蛋白最低的一管即为稳定胶体金所必须的最适标记量。
以此比例并增加10%-20%即为标记全部胶体金溶液所需的蛋白总量）；3、标记过程（在电磁搅拌棒下将1/10体积的合适浓度的蛋白质溶液加于胶体金溶液中，反应一定时间后加入BSA并调整至pH8.5，放置室温继续反应数分钟）；4、离心去除未结合的蛋白质（各粒径的金粒子所需的离心转速与时间均不一样。
离心后去上清液，将沉淀用含PEG或BSA的缓冲液悬浮，恢复至原体积后再离心。
如此洗涤2-4次，以彻底除去未结合的蛋白质）。
NC膜硝酸纤维素膜(nitrocellulosefiltermembrane，简称NC膜)，在胶体金试纸中用做C/T线的承载体，同时也是免疫反应的发生处。
国内NC膜的分类主要有两种：135s和180s。
分类是依据现在大部分厂商用的4cm膜平均水的层析时间。
换算为孔径就是135s=8um，180s=6um。
那么从这个公式中可以看出，在通过同一长度位置时，金溶液通过的速度是快速膜>慢速膜。
那么通过速度越快和包被在T线的物质反应时间也就越短，读数快，那么灵敏度也就越低。
反之，反应时间长，读数慢，也就灵敏度高。
同时还有一个问题是，反应时间越长，发生非特异性结合的可能性就越大，所以过长时间的反应不一定就能够真正的提升灵敏度。
所以这里就有一个读数时间/反应灵敏度/非特异性结合的均衡。
综合以上，结论为膜孔径越小灵敏度越高。
但是同时也减慢了跑板速度，增加了非特异性结合的机会，也就是假阳性的升高。
所以要按照试验结果挑选适合实际项目的膜，找到合适的平衡点至关重要。
根据专家研究135s的一般用在双抗体夹心法，180s的一般用在竞争法。
胶体金免疫分析技术一、斑点金免疫渗滤试验原理：胶体金免疫渗滤分析（DIGFA）原理与操作步骤基本与ELISA相同：加样品于固定有配体（抗体或抗原）的硝酸纤维素膜上，通过渗滤在膜中形成抗体-抗原复合物，洗涤渗滤后，再加液体的胶体金标记抗体。
当结果为阳性时，在膜上固定有抗体-抗原-胶体金标记抗体复合物而呈现红色斑点。
技术类型：1、双抗体夹心法用抗体结合在微孔膜中央，滴加待检标本，若标本中待测抗原与膜上抗体上结合，然后滴加金标抗体，再加洗涤剂洗涤后，阳性者即在膜中央呈红色斑点（胶体金聚集）。
2、间接法用抗原包被在微孔膜上，滴加待测标本，滴加洗涤剂洗涤后，滴加金标抗抗体，加洗涤剂洗涤后，阳性者即在膜中央呈红色斑点（胶体金聚集）。
该法由于血清标本中非目的性的IgG的干扰，易导致假阳性结果，临床上运用较少。
装置示意图装置分解图二、斑点金免疫层析试验原理：斑点金免疫层析实验（DICA）是胶体金标记技术和蛋白质层析技术相结合的以微孔滤膜为载体的快速固相膜免疫分析技术。
与胶体金免疫渗滤实验的过滤性不同，DICA中滴加在膜一端的标本溶液受载体膜的毛细管作用向另一端移动，犹如层析一般，在移动过程中被分析物与固定于载体膜上某一区域的抗体（或抗原）结合而被固化，无关物则越过该区域而被分离，然后通过胶体金的呈色条带来判定实验结果。
技术类型：1、双抗体夹心法如上图所示，G处为金标记抗体（免疫金），T处为包被抗体，C处包被抗金标抗体，B处为吸水纸。
测试时A端滴加待测标本，通过层析作用，待测标本向B端移动，流经G处时将金标抗体复溶，若待检标本中含有待测抗原，即形成金标抗体-抗原复合物，移至T 区时形成金标抗体-抗原-抗体复合物，金标抗体被固定下来，在T区显示红色线条，呈阳性反应，多余的金标记抗体移至C区被抗金标抗体捕获，呈现红色质控线条。
2、竞争法如上图所示，G处为金标抗体，T处包被标准抗原，C处包被抗抗体，测试时待测样本加于A端，若待测标本中含有待测抗原，流经G处时结合金标抗体，当混合物移至T处，因无足够游离的金标抗体与膜上的标准抗原结合，T处无棕红色线条出现，实验结果为阳性，游离金标记或金标记复合物流经C处，与该处的抗金标抗体结合出现棕红色的质控带，若标本中不含待测抗原，金标抗体则于T处膜上的标准抗原结合，在T处出现棕红色的线条，实验结果为阴性。
3、间接法为了消除待测血清标本中大量的非特异性IgG与特异性IgG竞争结合金标记抗人IgG，降低试验敏感性，胶体金间接免疫层析法测抗体常设计成反流免疫层析法。
测试卡可分为左右折叠的两部分，右面中央纵向贴有NC膜条为膜上包被有抗原线T，E处为含能与蛋白结合的有色染料的样本加样区，F处为吸水材料；左面中央开有观察窗口B，C处固定有金标记羊抗人抗体，A、D处为吸水材料。
测定时先将缓冲液加在D处层析至C处使金标物复溶，然后将标本加在E处使其与染料一起在膜的层析作用下向F端移动，若标本中有待测抗体存在，则于膜上抗原结合形成抗原抗体复合物，待有色染料延伸至膜上标记线G处，在F处加缓冲液，合上测试卡，A的强大吸水作用使膜上液体反向移动，标本中非特异性IgG及无关物被洗回E处，随后而来的金标羊抗人抗体与抗原抗体复合物结合，出现棕红色线条。
无棕红色线条出现则表明血清中无特异性抗体。
该法有效的排除了非特异性抗体对测试的干扰。
临床应用应用范围包括感染性疾病抗原、抗体检测，如HBsAg、疟原虫抗原、TB—Ab、HP—Ab、HIV—Ab等；各种蛋白质抗原检测，如AFP、CEA、肌红蛋白、肌钙蛋白、尿微量白蛋白、OB等；激素检测，如HCG、LH、FSH、TSH等；药物检测，如吗啡、可卡因等。