胶体金技术
胶体金法各种方法法原理
胶体金法各种方法法原理胶体金（colloidal gold）是一种常见的纳米材料，广泛应用于生物医学、光电子学以及化学分析等领域。
胶体金法则是制备胶体金纳米颗粒的一种常用方法，它包括了各种不同的制备方法。
本文将详细介绍胶体金法的各种方法和原理。
一、胶体金法的概述胶体金法是指利用化学还原或还原剂将金离子还原成金原子并使其聚集形成胶体金颗粒的过程。
胶体金颗粒具有良好的可控性和活性，可以通过调节制备条件来控制其形状、尺寸和表面性质，便于在各个领域的应用中发挥优越性能。
二、化学还原法化学还原法是制备胶体金的一种常见方法。
其原理是通过将金离子与还原剂反应，使金离子还原为金原子，形成胶体金颗粒。
常用的还原剂有氨水、柠檬酸等。
这种方法制备的胶体金颗粒形状和尺寸较均匀，可以通过调节还原剂浓度、反应时间和温度等参数来控制颗粒的大小和形状。
三、光化学法光化学法是一种利用光照射来控制胶体金纳米颗粒形成的方法。
在该方法中，金离子在紫外光照射下被激发产生自由电子，然后与还原剂发生反应，形成胶体金颗粒。
这种方法具有反应速度快、颗粒形状可调控等优点。
光化学法的适应范围广，可以制备不同形状和尺寸的胶体金颗粒。
四、微乳液法微乳液法是一种利用乳化剂将金离子包裹在微乳液中，通过还原剂将金离子还原为金原子，最终生成胶体金颗粒的方法。
微乳液具有稳定性好、溶剂消耗少等特点，在胶体金制备中广泛应用。
该方法不受金离子浓度的限制，能够制备出较大尺寸的胶体金颗粒。
五、溶胶-凝胶法溶胶-凝胶法是一种将金离子逐渐转化为胶体金的方法。
首先，将金离子转化为胶态溶胶，然后通过加热或干燥使其凝胶，最终形成胶体金凝胶。
该方法可以制备出较大尺寸的胶体金颗粒，也可用于制备具有复杂结构的胶体金材料。
六、电化学法电化学法是一种利用电化学反应制备胶体金的方法。
在电化学细胞中，金阳极上的金离子被还原为金原子，并在阴极表面聚集形成胶体金颗粒。
该方法具有较高的纯度和良好的控制性能，可用于制备高质量的胶体金。
胶体金技术总结Ⅱ
胶体金技术总结Ⅱ一、胶体金技术原理胶体金技术的基本原理是将金金属离子还原成金纳米颗粒并通过其中一种方法使其分散在溶液中。
金纳米颗粒可以通过改变反应条件来调控其形貌和大小，以及表面性质。
其中，分散性是胶体金技术的重要特点，因为金纳米颗粒只有在分散状态下才能充分发挥其特殊性质。
二、胶体金技术制备方法化学还原法是最常用的制备胶体金的方法之一、它通过将金离子还原为金金属颗粒，并通过表面活性剂、电解质等调控分散性。
化学还原法制备的胶体金颗粒粒径较小且分散性好，但对条件要求较高。
溶胶-凝胶法是一种将溶胶中的颗粒逐渐转变为凝胶的制备方法。
通过控制凝胶形成的条件，可以调节金纳米颗粒的形貌和大小。
沉积法是通过将预制的胶体金颗粒沉积到底物表面，制备具有特定功能的薄膜或涂层。
该方法可以制备出均匀、稳定的胶体金薄膜，并且可以调控颗粒的形貌和密度。
光化学法是通过光化学反应将金离子还原为金颗粒。
光化学法制备的胶体金颗粒分散性好，并且可以调控颗粒的形貌和大小。
三、胶体金技术应用1.材料科学方面，胶体金可以用于制备纳米尺度的电子材料，如导电薄膜、导电纳米线等。
此外，胶体金还可以作为催化剂、催化剂载体、光催化材料等。
2.生物医学方面，胶体金颗粒具有良好的生物相容性和生物活性，可以用于制备药物载体、生物传感器、光热治疗等。
胶体金的表面还可以修饰生物分子，用于生物成像、生物分析等应用。
3.传感器方面，胶体金可以用于制备高灵敏度、高选择性的传感器。
通过修饰胶体金表面的功能分子，可以实现对特定分子的检测，并且可以通过纳米尺度的效应提高传感器的性能。
4.光电子方面，胶体金颗粒具有优异的光学性质，可以用于制备光电器件，如光伏器件、光探测器等。
胶体金颗粒的表面还可以修饰光子晶体，制备具有特殊光学性质的材料。
总之，胶体金技术是一种具有广泛应用前景的技术。
通过调控金纳米颗粒的形貌、大小和表面性质，可以制备出具有特殊功能的材料，并用于材料科学、生物医学、传感器、光电子等领域。
胶体金法的定义和分类
胶体金是一种常用的标记技术，是以胶体金作为示踪标志物应用于抗原抗体的一种新型的免疫标记技术，有其独特的优点。
近年已在各种生物学研究中广泛使用。
在临床使用的免疫印迹技术几乎都使用其标记。
同时在流式、电镜、免疫、分子生物学以至生物芯片中都可能例用到。
1971年Faulk和Taytor将胶体金引入免疫化学，此后免疫胶体金技术作为一种新的免疫学方法，在生物医学各领域得到了日益广泛的应用。
目前在医学检验中的应用主要是免疫层析法(immunochromatogra-phy)和快速免疫金渗滤法(Do t-immuogold filtration assay DIGFA)，用于检测HBsAg、HCG和抗双链DNA抗体等，具有简单、快速、准确和无污染等优点。
免疫胶体金技术的基本原理：胶体金是由氯金酸(HAuCl4)在还原剂如白磷、抗坏血酸、枸橼酸钠、鞣酸等作用下，可聚合成一定大小的金颗粒，并由于静电作用成为一种稳定的胶体状态，形成带负电的疏水胶溶液，由于静电作用而成为稳定的胶体状态，故称胶体金。
胶体金在弱碱环境下带负电荷，可与蛋白质分子的正电荷基团形成牢固的结合，由于这种结合是静电结合，所以不影响蛋白质的生物特性。
胶体金除了与蛋白质结合以外，还可以与许多其它生物大分子结合，如SPA、PHA、ConA 等。
根据胶体金的一些物理性状，如高电子密度、颗粒大小、形状及颜色反应，加上结合物的免疫和生物学特性，因而使胶体金广泛地应用于免疫学、组织学、病理学和细胞生物学等领域。
胶体金标记，实质上是蛋白质等高分子被吸附到胶体金颗粒表面的包被过程。
吸附机理可能是胶体金颗粒表面负电荷，与蛋白质的正电荷基团因静电吸附而形成牢固结合。
用还原法可以方便地从氯金酸制备各种不同粒径、也就是不同颜色的胶体金颗粒。
这种球形的粒子对蛋白质有很强的吸附功能，可以与葡萄球菌A蛋白、免疫球蛋白、毒素、糖蛋白、酶、抗生素、激素、牛血清白蛋白多肽缀合物等非共价结合，因而在基础研究和临床实验中成为非常有用的工具。
胶体金免疫层析法原理
胶体金免疫层析法原理一、前言胶体金免疫层析法是一种常用的生物分离技术，广泛应用于生物医学、食品安全、环境监测等领域。
本文将从胶体金的制备、基本原理和实验操作等方面进行详细介绍。
二、胶体金制备胶体金是由纳米级金颗粒组成的溶液，其制备方法主要有两种：还原法和溶剂蒸发法。
其中，还原法是目前应用最广泛的方法之一。
1. 还原法还原法是指将氯金酸还原为纳米级金颗粒的方法。
具体步骤如下：（1）将氯金酸溶解在去离子水中，加入适量的还原剂（如氢氯酸或乙二醇）。
（2）搅拌反应液，并加热至适当温度（通常为60-80℃），反应15-30分钟。
（3）待溶液冷却后，通过超声波处理或离心分离得到胶体金溶液。
2. 溶剂蒸发法溶剂蒸发法是指使用有机溶剂作为载体，在高温下将氯金酸还原为纳米级金颗粒的方法。
具体步骤如下：（1）将氯金酸溶解在有机溶剂中，如正己烷、二甲苯等。
（2）将反应液加热至100-150℃，使有机溶剂蒸发，并在高温下还原氯金酸为纳米级金颗粒。
（3）待溶液冷却后，通过超声波处理或离心分离得到胶体金溶液。
三、基本原理胶体金免疫层析法的基本原理是利用抗体与抗原之间的特异性结合作用，在胶体金表面修饰抗体，使其能够与目标物质结合并在固定相上进行分离。
具体步骤如下：1. 修饰胶体金表面将制备好的胶体金溶液与适量的抗体混合，在pH值调节下使其在胶体金表面吸附。
此时，抗体会通过其Fc段与胶体金表面上的硫基团形成化学键。
2. 准备样品将待测样品加入缓冲液中，并进行必要的前处理，如离心、过滤等。
3. 进行免疫层析将修饰好的胶体金与样品混合，使其形成复合物，并通过滤纸或柱层析等方法进行分离。
此时，抗原会与修饰在胶体金表面的抗体结合，形成固定相，并在分离过程中被捕获。
4. 检测结果通过检测固定相上的颜色变化等方式，判断目标物质是否存在。
四、实验操作1. 制备胶体金按照还原法或溶剂蒸发法制备胶体金溶液。
2. 修饰胶体金表面将适量的抗体加入胶体金溶液中，调节pH值并搅拌反应液，在室温下反应2-4小时。
胶体金法和干化学的区别
胶体金法和干化学的区别在医学检测领域，胶体金法和干化学法是两种常见的检测技术。
它们在操作原理、应用范围和准确性等方面存在一定差异。
本文将详细解析胶体金法和干化学法的区别，以帮助大家更好地了解这两种检测方法。
一、定义及原理1.胶体金法：胶体金法是一种基于免疫层析技术的快速检测方法。
它利用胶体金颗粒与抗原或抗体的特异性结合，通过显色条带的出现来判断检测样本中是否含有特定的病原体或物质。
2.干化学法：干化学法是一种以干燥的试剂层为基础的检测方法。
它通过检测样本与试剂层中的干燥化学试剂反应产生的颜色变化，来判断样本中特定物质的含量。
二、操作过程1.胶体金法：操作简便，无需特殊设备。
将待测样本滴在试纸上，通过毛细作用在试纸上移动，与胶体金标记的抗原或抗体结合，形成显色条带，根据条带的出现与否判断结果。
2.干化学法：操作同样简便，但需将样本滴在含有干燥化学试剂的试剂层上。
样本中的特定物质与试剂层中的化学试剂反应，产生颜色变化，通过对比色卡或仪器读取结果。
三、应用范围1.胶体金法：广泛应用于病原微生物检测、激素检测、药物残留检测等领域，尤其适用于现场快速检测。
2.干化学法：主要用于尿液、血液等生物样本中特定物质的定量或定性检测，如尿糖、尿蛋白、血红蛋白等。
四、准确性及重复性1.胶体金法：准确性较高，但受操作者主观判断影响较大，重复性相对较差。
2.干化学法：准确性较好，且重复性较高，但易受试剂层稳定性影响。
五、优缺点1.胶体金法：优点：操作简便、快速，无需特殊设备，适用于现场检测。
缺点：定量分析能力较差，重复性相对较差。
2.干化学法：优点：准确性较高，重复性较好，适用于定量分析。
缺点：对试剂层稳定性要求较高，操作过程中可能受外界因素影响。
总结：胶体金法和干化学法在操作原理、应用范围、准确性等方面存在一定差异。
免疫胶体金的技术
2. 凝胶过滤法
u 将探针溶液装入透析袋内， 4℃ ，置于硅胶或聚乙 二醇中浓缩至原体积的1 4～1 5 u 离心 1500 r min，20min 弃沉淀 u 经Sephacryl（丙烯葡聚糖）S400层析柱分离纯化。 用0.02mol/L TBS(0.1%BSA)洗脱 ? TBS的PH根据蛋白质种类而定 u 按红色深浅分管收集洗脱液
1. 光镜免疫金银法 3 在免疫金染色的基础上增加物理显影的步骤 3 显影液的配制及显影过程应在暗处进行 3 阳性部位呈黑色颗粒状 32. 电镜免疫金银法 3 包埋前染色, 包埋后染色
【IGSS法优点】
1. 可被用于光镜和电镜观察 2. 敏感性高 3. 定位准确 4. 背景清晰, 对比度好 5. 方法简便, 安全 6. 成本较低, 标本可长期保存
【常用还原剂】柠檬酸钠、鞣酸、白磷等
柠檬酸钠还原制备的金颗粒直径较大，15~150nm
白磷还原制备的金颗粒直径较小，3~12nm
【具体制备方法】
（二）影响溶胶稳定性的因素 u 电解质 u 胶体金浓度 u 温度 u 大分子物质
（三）胶体金的鉴定
【鉴定方法】在电镜下观察金颗粒的大小 及金颗粒的均匀程度
( 七) 标记探针的鉴定
1. 负染色检查: 将胶体金溶液滴在覆有
Formavar膜( 支持膜) 的镍网上, 空气中干燥, 醋 酸铀负染, 透射电镜下观察
2. 生物活性鉴定: 可用直接或间接法放射免疫
测定, 凝聚试验及免疫组化染色进行鉴定
四. 免疫胶体金染色方法
( 一 ) 免疫金染色法
Immunogold staining, IGS
( 五）标记
1. 计算所需待标记蛋白质的总量
根据用以标记的胶体金溶液总体积及所测定的最 适蛋白质稳定量，计算出所需待标记蛋白质的总量
胶体金免疫层析技术
胶体金免疫层析技术胶体金免疫层析技术是一种重要的生物分析技术，它在医学诊断、生物学研究、环境监测等领域有着广泛的应用。
本文将介绍胶体金免疫层析技术的原理、方法、应用及发展前景等方面，以帮助读者深入了解这一技术的重要性和特点。
一、胶体金免疫层析技术的原理胶体金免疫层析技术是一种基于抗原与抗体特异性结合原理的生物分析技术。
其原理基于胶体金颗粒的特殊性质，当胶体金颗粒与特定的抗体或抗原结合时，会产生颜色变化。
这种颜色变化可以通过裸眼观察或仪器测定来定量分析目标物质的含量，从而实现对目标分子的快速、灵敏、特异性检测。
二、胶体金免疫层析技术的方法1. 样品预处理在进行胶体金免疫层析技术前，需要对样品进行一定的预处理工作，以获得高纯度的检测目标。
这包括样品的收集、提取、稀释、清洁等操作，以确保样品的纯度和稳定性。
2. 抗原抗体结合在胶体金免疫层析技术中，首先将抗原或抗体与胶体金颗粒结合，形成胶体金-抗原或胶体金-抗体复合物。
这一步是整个技术的关键，其特异性结合决定了最终结果的准确性和可靠性。
3. 层析纸制备将样品和复合物应用于层析纸上，经过升温、冷却和其他特殊处理，使复合物在层析纸上呈现出清晰的条带，以便进行后续的观察和分析。
4. 结果分析通过裸眼观察或仪器测定，分析样品中的目标分子的含量，从而得出最终的检测结果。
三、胶体金免疫层析技术的应用1. 医学诊断胶体金免疫层析技术在临床医学中被广泛应用，例如对传染病、肿瘤标志物、生化指标等的快速检测，为疾病的早期诊断和治疗提供了重要的支持。
2. 食品安全该技术可以用于食品中有害物质的检测，如农药残留、重金属污染等，确保食品的安全和健康。
3. 环境监测胶体金免疫层析技术也可以用于环境监测领域，检测水质、土壤质量等环境参数，为环境保护和生态平衡提供数据支持。
四、胶体金免疫层析技术的发展前景随着生物技术和纳米技术的不断发展，胶体金免疫层析技术将得到更广泛的应用和改进。
未来，可以预见该技术在药物筛选、基因检测、个性化医疗等领域将发挥越来越重要的作用。
poct胶体金法
poct胶体金法（原创版）目录一、POCT 胶体金法的概述二、POCT 胶体金法的原理三、POCT 胶体金法的应用领域四、POCT 胶体金法的优势与局限性五、POCT 胶体金法的未来发展趋势正文一、POCT 胶体金法的概述POCT（Point-of-Care Testing）即床边检测，是指在病人就诊地点附近进行的快速、简便的医学检测方法。
胶体金法是 POCT 中的一种重要技术，主要利用胶体金纳米颗粒与生物分子的特异性结合，通过颜色变化反映检测结果。
这种方法操作简便、结果快速且准确，非常适合临床现场检测。
二、POCT 胶体金法的原理POCT 胶体金法的原理主要基于金纳米颗粒与生物分子的特异性结合。
首先将金纳米颗粒与生物分子（如抗体）结合，形成特异性的纳米颗粒复合物。
然后将这些复合物固定在检测卡片上的相应区域。
当待检测样本中存在目标分子时，目标分子会与纳米颗粒复合物结合，引起颜色变化。
通过观察颜色变化，便可判断待检测样本中目标分子的含量。
三、POCT 胶体金法的应用领域POCT 胶体金法广泛应用于临床检测，如血糖、血红蛋白、尿蛋白、心肌标志物等指标的检测。
此外，该方法还可应用于病原微生物检测、肿瘤标志物检测等领域。
随着技术的不断发展，POCT 胶体金法在疾病诊断、病情监测和疗效评价等方面的应用范围将不断扩大。
四、POCT 胶体金法的优势与局限性优势：1.操作简便：POCT 胶体金法无需专业设备，操作简单，适合床边检测。
2.速度快：该方法结果快速，仅需数分钟，有利于病情的及时诊断和处理。
3.灵敏度高：POCT 胶体金法具有较高的灵敏度，可检测到较低浓度的目标分子。
4.便携性好：检测卡片便于携带，适用于各种现场检测环境。
局限性：1.检测范围有限：POCT 胶体金法适用于检测特定指标，不能满足所有检测需求。
2.结果可受干扰：由于颜色判断的主观性，结果可能受到操作者经验和环境等因素的影响。
3.试剂卡片保存条件较高：需要避光、防潮、低温保存，否则可能影响检测结果。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
胶体金技术问：检测cle ，金标记抗体扩大后，烘干后检测各项指标良好，但室温保存一天后，T 线下降很多是由什么原因造成的？室内开除湿机，组装好的板子，在自封袋里加干燥剂。
我烘干用了一整天，30 多个小时了，还有方法进行改进吗，这个抗体还能用来生产吗？经检测还是金子出了问题，我就是先少量做，找出各个值，然后才扩大的。
我就是先3ml ，再10ml 。
T ：（涛哥）那可能是生产放大过程控制的问题。
重新试验，先小试，逐步放大。
这就不行了啊，这还算不上生产扩大呢，怀疑误操作，重复试验试试，3ml 的、10ml 的都做一下。
0 是啊，有时标记完检测后，T 线就下降（比预实验）T :标记完检测就下降，说明你标记本身就有问题呗。
你标记条件太脆弱，主要考虑你标记条件，重新优化下。
0 如果我再调整pH 值，抗体浓度，灵敏度就会达不到了T：通过其他途径提高灵敏度。
问：请问为什么C 线包被3mg/ml 不出现条带，而2mg/ml 的就有条带出现呢？T：正常，从蛋白固定基本原理出发，好好想想。
NC 结合蛋白的能力是有限的，其结合位点是会饱和的，假设其结合能力仅仅为2mg ，你包被3mg ，那边必然有相当一部分是结合不牢固或者压根就没固定住的，样本层析之后，金标蛋白结合了这些不牢固的蛋白，就会流走，不会显色。
检测线，也会有同样的情况，不过检测线包被过量的影响不止这么简单。
我主要指夹心法。
0 一般调整膜上浓度时在湿法时调整还是干法时调整啊？问：标记好的胶体金有沉淀是什么原因？T：常见的原因：标记条件不合适，封闭物质不纯，复溶液不合适都有可能，当然颗粒大了，也容易沉淀。
0 你们主要用什么方法摸索最佳PH 值？1.用碳酸钾用量调整，搞一排，然后看变色和离心后现象，还有检测结果啊。
0 这样岂不是需要很多抗体？呵呵2.标记又用不了多少抗体，又不是包膜。
0 离心后现象，怎么样的是理想的？3.就是没有预期想要的略微蓬松有红色的沉淀，比如贴壁、黑点、离不干净等，离心速度时间也要选好。
0 是啊，之前就发现有点贴壁和黑点，我延长了离心时间也没用。
4.小号金子1ml 离心几分钟就够了。
越大速度越低时间，这个速度和时间折中下自己调整。
问：不知道那些强假阳性有什么办法可以抑制？T：你加阻断剂试过没？0试过几种，没有效果，能阻断C线，对T线基本没阻断。
T：照这么说的话既然是同一对抗体而且胶体金法临床假阳性率这么高，我觉得你这对抗体可能对某种因素太敏感了吧，ELISA 是共价标记胶体金是物理标记是会有差异。
（涛）0 现在就是找不到原因，那强阳漏检呢？其实也有试过好几个抗体配对，基本都是那样的结果问：请教一下各位大虾，多抗标记的时候要注意哪些细节呢？T：尽量别标记多抗，实在是想标记多抗，把标记PH 提高点。
问：划线时的湿度条件是NC膜制备的要点之一，湿度应控制在45 %〜65%，有文献支持吗？T：文献呢是有滴，不过NC 供应商也会给你建议滴，你自己也是可以探索滴，最终都是要以产业化需要为准。
1.主要膜吸收蛋白的时候要是湿度太低会比较疏水，不利于吸收，一般在40% 以上，膜在点之前在这个环境下放置一定时间平衡一下。
0 点完的膜烘干后的湿度呢？是不是要低一点。
2.湿度不低，你怎么烘干啊。
0 呵呵，我的意思是已经烘干的板子拿出来切条时的湿度一般在多少啊。
没办法，我刚接触胶体金，现在公司在申报，委托的公司（艾伟德）给的资料很乱，前后都不对应。
问：谁知道MP 的HCV BLOT 3.0 哪有卖？T ：找丽珠吧，不过不一定卖给你，独家代理。
问：抗体灵敏度太高，有什么思路去降低灵敏度，从而达到规定的cutoof 值呢？1.反标，偶联抗原去标记，把抗体点T 线，同样的原料可以下降一个数量级的灵敏度。
T：THE ONE 说的对，从不公平竞争到公平竞争，灵敏度会下降比较明显的。
0 质控线没了？2.你不会用单独的质控系统的啊？rabbit IgG 和羊抗兔的多抗。
T：楼上说的对。
问：请教一下，Fusion5 用来包被时，需要进行处理吗？T：当然，是不可以直接使用的。
WHATMAN 有相关说明资料，丁香园上也有相应的文献翻译。
0 用作金标垫行吗？成本高不高？T ：当然高，Fusion5 有专用用途。
0 用在哪方面比较好？T：多方面，比如同时用做样品垫和金垫，改善CV ，比如某些高附加值数显产品，因其设计的需要。
这个材料有专用用途，用好了的话，效果是非常好的，小日本用的不错。
4. Fusion 5 性能非常优越，不信自己要点样品比较下。
问：各位前辈，请问你们谁知道HCV 的国家盘里面到底有哪些片段血清啊。
T：各个片段的都有一般NS3 片段的容易漏检最好单独再加上NS3 片段。
问：请教各位高手：免疫层析试纸中，PH 对信号强弱，反应特异性的影响是怎样的关系？T ：不可一概而论啊，最好哪个产品举个实例。
问：有问题请教，试纸条想大批量生产成产品，其中标记胶体金的单克隆抗体怎么大批生产呀？都是打小鼠吗？T ：可以外购啊。
0 但是我们做的抗体外面没有卖，我们已经做出来杂交瘤细胞株了，如果每次都打小鼠去腹水的话这其中批次的差别是不是有啊？T：只要细胞株一切正常的话，单位浓度下的单抗活性，批次间差异不大。
每次纯化，纯度多少会有点差异，批间差肯定是有的，不过正常来讲，不会对生产产生太大影响。
0 那我再标记的时候条件是不是还得重新摸索啊？T:不用，其实你的单抗生产岀来，肯定会做质检的。
0 就纯化好了之后，浓度测出来，然后就按摸索好的浓度标记就好了吗？T: 满足质检要求，成品生产工艺，就不用变。
你得先质检，万一细胞株有问题呢。
0 我们是大学里，好像没有做质检的啊。
T: 连质检都没有还搞什么产业化啊，想搞产业化就正儿八经来，要么跟生产企业合作，搞委托加工。
就算没有正儿八经的质检，起码一批单抗生产岀来要小试下吧，要不然直接批量生产，万一有问题损失岂不是很大。
0 一般委托加工他们可以给大量生产腹水吗，我们提供杂交瘤细胞株。
T: 干嘛不在高校做完这部分呢，花的是国家的钱，用的是免费劳动力。
把单抗做好，然后委托企业做成品，岂不是更好。
0 您的意思就是我们自己大量生产岀腹水，然后委托企业吗？T: 干脆把纯化也做了呗，提供纯化好的单抗给企业。
企业会对入厂的原材料进行检验的。
0 那如果我们纯化好了之后，那么多，企业一检查原材料不行，我们也白做了呀。
T: 不行，那肯定是白做了啊。
1.关键是你抗体制备的工艺要过关，每次制备的批间差异大的话，说明单抗制备工艺不成熟，需要优化。
问: 新手请教个问题，验证的ELISA 抗体对可以直接用于胶体金研发吗？只要通过调整浓度配比即可？还是需要重新寻找、检测抗体对？T: 这个不好说，ELISA 能用的，胶体金不一定能用，先做做试试吧，不行再换。
0 这个周期长吗？T: 看实验技能，如果准备工作做好的话，一天以内。
0 抗体对反应，ELISA 和胶体金，除了载体不一样，还有很多差别吗？我开始觉得可以直接拿过来用呢。
T :差别很多很多很多很多，位阻亚型纯度••…都是区别。
大部分都可以的。
0 正常情况下，产品研发周期要多久？1.顺利的俩月足够，不顺利的两年都不够。
T: 举个例子:比如说一个常规项目，原料成熟；质控品容易获得；标准无国标无行标，自己定标准；那么一整套工艺调试流程走下来，再做点性能评估试验，三个月吧。
不考虑稳定性测试。
如果是个科研课题的话，两个月足够了。
0 我现在就是有个ELISA 的盒子，有现成的抗体对，想用胶体金的方法实现检测，看看这种可能性。
T: 可能性很大。
2.酶免能用的原料，80% 在胶体金项目上会失败。
T: 九天这个说的有点绝对了吧。
3.不算绝对，这个比例已经比较乐观了。
大部分问题就岀现在，活性不够上，酶免可以通过加大浓度提升活性，可是胶体金实验的活性提升范围很小。
而且，涉及到前带问题，更是不好解决。
T: 我这80% 都能成功。
问: 我最近做胶体金，用标记好的金标抗体检测抗原，不识别，好着急啊。
1.不要喷到垫上，直接用标记好的抗体进行爬样，看看有无显色。
0 我标记的抗体，然后把抗原用枪点在了膜上，之后又加的金标抗体，发现没反应。
我是自己制备的抗体，而且实验条件相对于公司来说比较不正规，一个人摸索。
我只是想拿包被的抗原检测一下标记的抗体怎么样，看有没有标记上。
按理说，抗原应该能和标记后的抗体结合上，可是我标记后的抗体不结合。
2.包被了抗原，干燥完全了吗？没干燥，抗原就没固定在膜上，结合了也冲掉了啊。
0我加金标抗体后发现点过抗原的地方明显显白色，而周围的抹上会留下胶体金的红色痕迹。
这应该能说明并不是抗原被冲走的缘故吧。
大家被标记的蛋白是怎么处理的？3.亲水性不好，处理液改一下，多加点亲水的物质啊。
抗体是老鼠还是兔子产的。
0老鼠。
4.最佳PH定过了？0定了，最佳蛋白标记浓度也实验过。
标记完后胶体金的颜色有些变化，变紫了点，这种现象正常吗？T :颜色稍微有些加深是正常的，抗原抗体在免疫层析条件下，没有特异性反应，想找到原因是个大工程，特别是你现在的情况。
你的抗原是重组的吧？分子量有多大，纯度多少，保存液是什么，浓度多大。
是包涵体抗原吗。
0抗原是购买的，具体信息不是特别清楚，但是我用抗原包板子后做酶联免疫反应，是阳性的，这说明我的抗体是可以和抗原结合的。
保存液是PBS —1%BSA溶液。
T :这就是问题所在，ELISA做着效果好，胶体金不一定能用。
你的单抗是怎么制备的，是用这个抗原免疫的吗。
既然很多信息都不知道，给你提供一个思路，你标记抗原，然后包被抗体吧。
当然这两种方法都不太科学，不过对于高校来讲，就做个实验而已，也就够用了。
0免疫抗原和检测抗原都是一种，用抗原免疫小鼠，培养的杂交瘤细胞，收集细胞培养上清，然后纯化的上清。
保存液是PBS —1%BSA 溶液，有问题吗。
5.如果你直接拿这个划膜的话，肯定是不行的。
T :有问题。
不知道你为什么选择这个保存液，也许是供应商提供的。
反正不管怎样，你标记抗原，包被抗体, 效果可能会好点。
II 0不是，是自己用的，你的保存液用的什么啊。
T :直接用0.01M PB 7.4 稀释下就可以了。
问：微生物检测阴性时正常，没有死金现象，但是检测阳性菌株时有死金现象, 法。
造成死金现象的原因是什么呢？我调了样品垫T线变浅。
用的是双抗体夹心，换过几种缓冲液, pH都调过。
还是没有解决这个问题。
1.阳性菌株ph多大？阴性的ph ?垫子的0 NC膜底部停留了。
pH测过，有点酸，在■■多少?阴性pH没测，用的生理盐水或培养基。
垫子5 —6左右。
像这样，上面阳性，下面阴性。
ph开始用7.0，后来调过7.5、8.5，没用。
T :我给你看个图，看看眼熟不？上阳下阴（又说下面是调整之后的阳性）0你这个金完全死了。