鸡胚
鸡胚接种注意事项

鸡胚接种注意事项鸡胚接种是家禽育种中重要的一环,它对于确保育种工作的顺利进行和家禽的健康发展至关重要。
以下是鸡胚接种的一些注意事项:1. 鸡胚的来源和存储:确保鸡胚的来源可靠,选择健康的种鸡作为母鸡,对母鸡进行充分的预防接种,排除传染病的风险。
鸡胚应当存储在适当的温度和湿度下,避免过高或过低的温度对鸡胚质量的影响。
2. 接种器具的消毒:鸡胚接种器具包括针头、注射器等,使用前应当进行严格的消毒处理,以避免交叉感染。
消毒可采用高温蒸汽、化学消毒剂等方法进行,确保器具表面干燥后方可使用。
3. 接种环境的准备:接种前要对接种环境进行充分的准备,确保无尘、无菌的环境,以减少接种后的感染风险。
接种室内要保持干燥,地面要清洁干净,空气流通良好,配备必要的消毒设备和安全用品。
4. 鸡胚的处理和接种操作:接种前,对鸡胚进行外观检查,选择外形完整、无明显异常的鸡胚作为接种对象。
接种时要先将鸡胚表面进行消毒处理,然后通过注射器将疫苗接种到鸡胚的腹腔内。
接种时要确保操作准确、迅速,并且不要使鸡胚受到过多的创伤。
5. 接种后的照顾:鸡胚接种后要给予适当的照顾,要保持鸡胚温暖、干燥,充分休息。
鸡胚接种后要进行观察,确保没有异常症状的出现。
同时,要给予它们充分的营养和护理,以促进它们的正常生长发育。
总之,鸡胚接种是育种工作中至关重要的一步,正确的接种操作和注意事项会直接影响到家禽育种的成果。
因此,在进行鸡胚接种时,我们要选择好的鸡胚来源,进行必要的消毒和准备工作,规范的操作流程和良好的鸡胚照顾是确保接种成功的关键。
只有做好这些,才能保证家禽育种的顺利进行,提高家禽的免疫力和生产性能,为养殖业的发展做出积极的贡献。
鸡胚发育图解 ppt课件

鸡胚孵化图片
种蛋 优良种蛋
是获得高孵化 率的物质基础, 是集现代家禽 遗传育种,全 价营养饲料和 疾病净化科技 成果的“载 体”。现代蛋 用种鸡的种蛋 分白壳和褐壳 两类,肉用种 鸡在选育过程 中不注重蛋壳 颜色,其蛋壳 颜色间于白壳 与褐
鸡胚发育图解
鸡胚孵化图片
受精蛋 鸡的卵子 在输卵管的漏斗 部与镜子相遇而 受精,受精卵在 母体内滞留期间 不断分裂,到种 蛋产出体外时已 分裂成一团细胞, 此时为胚胎发育 的囊胚期,从正 面看囊胚像覆盖 在卵黄表面的圆 盘,中央为明区, 边缘为暗区,通 常成为胚盘。
鸡胚发育图解
鸡胚孵化图片
第1天 经过 24小时的 孵育,胚 盘变大变 厚,明区 和暗区同 时增大, 在卵黄上 可见到椭 圆形的盾 壮区称为 胚盾是未 来的胚区。
鸡胚发育图解
鸡胚孵化图片
第2天 胚盘已扩 展一倍并被红 色的血管围成 樱桃形或椭圆 形,这些血管 即胚胎的卵黄 囊循环的边缘 血管——缘窦。 胚盘中心有一 弯曲的透明 体——胚胎, 透明体中可见 一搏动着的小 红点,即原始 心脏。
鸡胚发育图解
鸡胚孵化图片
第3天 由孵化的第 一天开始,蛋白 中的水分通过半 透明卵黄膜向卵 黄中移动,使卵 黄水分含量大增, 新进来的水分并 不与卵黄液全面 融合而主要存于 胚区。胚胎与伸 展的卵黄囊血管 形似蚊子,白壳 种蛋通过照视可 见蚊状的血管区, 俗称“蚊虫珠”。
鸡胚发育图解
鸡胚的发育

第五天(120h)观察(4.17) 组员:陈五东 王欢 袁立军 单娅娅
鸡胚开蛋壳后现象
2、分离胚体移至体视镜下的现象 3、其循环系统介绍
打开蛋壳后现象
1、 卵黄和前天比较明显变稀, 并且卵黄体积增大,颜色变 淡。胚体悬浮于蛋黄中,卵 黄囊血管包围卵黄近1/3; 2、胚体透明,弯曲呈c字形,头 尾靠拢。胚体大约有1cm长; 3、可以看到心脏搏动; 4、眼睛开始沉积黑色素; 5、脑泡、尿囊也可看到。
分离胚体移至体视镜下
1、可以更更清晰看到: 胚体透明,弯曲呈c字形, 头尾靠拢,体节明显, 大约有二十几节,胚 体约有1cm长。 2、眼睛、脑泡和尿囊等 结构也清晰可见。
循环系统
此时鸡胚尿囊浆膜血液循环系统才 刚有初步发育,而卵黄囊血液循环已 包围卵黄的近1/3,已初步成形,鸡 胚此时靠卵黄膜血液循环系统从卵黄 中吸收营养。
《鸡胚接种技术》课件

卫生管理
保持接种器具和操作区域的清 洁,防止细菌或病毒的污染。
鸡胚接种后的常见问题与处理方法
问题 鸡胚死亡 细菌感染 发育异常
处理方法
检查温度、湿度和操作技术是否合适,并调整相 应参数。
进行必要的消毒处理,更换培养基,增加卫生管 理措施。
观察并记录发育情况பைடு நூலகம்与预期结果进行对比,调 整相关因素。
总结与展望
鸡胚接种技术是一项重要的科研工具,通过研究鸡胚的发育过程,可以获得 对生命科学和医学领域的重要启示。未来,我们将继续探索和优化鸡胚接种 技术,为科学研究做出更大的贡献。
《鸡胚接种技术》PPT课件
鸡胚接种技术简介 影响鸡胚成活的因素 鸡胚接种前的准备工作 鸡胚接种过程详解 鸡胚接种后的管理要点 鸡胚接种后的常见问题与处理方法 总结与展望
鸡胚接种技术简介
鸡胚接种技术是一种重要的研究工具,用于研究鸡胚在发育过程中的变化。 研究人员可以通过接种不同物质来观察鸡胚的反应和发育情况,从而获得重 要的科学发现。
鸡胚接种前的准备工作
1 设备准备
确保接种所需的设备和材料已准备齐全,包括培养皿、接种针和培养基等。
2 培养基准备
根据实验需求制备适当的培养基,确保其成分和浓度符合实验要求。
3 消毒处理
对接种器具和操作区域进行彻底的消毒处理,以避免细菌或病毒的污染。
鸡胚接种过程详解
1
接种准备
2
将鸡胚放置在适当的接种器具中,准备
好需要使用的培养基和接种针。
3
鸡胚获取
选择具有良好质量的鸡胚,并在适当的 环境中进行保持,以避免其受到外界环 境的影响。
接种过程
使用接种针将所需物质接种到鸡胚中, 确保操作的准确性和稳定性。
鸡胚

鸡胚培养法的缺点:
1. 一般的病毒通常不使鸡胚产生特异性的感染指 征。 2. 卵黄中常常含有抗家禽病原体的母体抗体。 3. 某些细菌、衣原体和病毒能够从感染的母鸡传 递到鸡胚。 4. 通常鸡胚常常含有白血病病毒。 5. 在鸡食物中加入抗菌素,母鸡吃后会传递给鸡 胚,鸡胚就会产生对立克次体和衣原体感染的抵 抗。
五、注意事项
鸡胚为一活的有机体,因此要严格 无菌操作,同时动作要仔细,以免造成 物理死亡。接种后24小时内死亡应不计 结果。
Thank
you !
流感病毒鸡Байду номын сангаас培养法
福建省疾病预防控制中心 杨式芹
一、概况
1911年Rous和Murphy首先应用鸡胚 培养研究肉瘤病毒(Rous肉瘤)的繁殖。 1938年Goodpasture和Burnet等应用 鸡胚繁殖病毒、Cox应用卵黄囊培养立克 次氏体。
鸡胚培养法的优点:
1. 它的组织分化程度低,可选择适当途径 接种,病毒易复制,感染病毒的膜和液体 含大量病毒。 2. 是个整体,有神经血管的分布及脏器的 构造。 3. 来源充足,操作简单,通常是无菌的, 对接种的病毒不产生抗体。
二、鸡胚的结构与生理
鸡胚是由三个胚层发育起 来的,即外胚层,中胚层和内 胚层,它们构成胚胎的组织与 器官。
(约10日龄鸡胚的结构见图)
三、材料
(一)7~11日龄鸡胚
(二)孵卵箱
(三)检卵灯、开卵钻和卵盘 (四)其它
四、接种技术
(一)活胚检查
1.血管:活胚可见清晰的血管,有时可见血管搏 动,死胚血管模糊成淤血带或淤血块。 2.胎动:活胚可见明显的自然运动,尤其在转动 胚胎时,死胚见不到任何胎动,胚胎发红像出血样, 有的呈现黑块。 3.血管网是否丰满:发育好的鸡胚可见密布丰满 的血管网,也就是绒毛尿囊膜,死胚则见不到这一 现象。
鸡胚1、尿囊腔接种2、绒毛尿囊膜接种 3、卵黄囊等接种方式

2、用碘酊和酒精消毒后,
小心用刀尖撬起卵壳,造
成卵窗。
3、在气室端中央钻一个 小孔。
4、用针尖挑破卵窗中心
的壳膜,切勿损伤其下的
绒毛尿囊膜,滴加生理盐
水于刺破处。
5、用橡皮乳头紧贴于气室中央小孔上吸气,造 成气室内负压,使卵窗部位的绒毛尿囊膜下陷 而形成人工气室,此时可见滴于壳膜上的生理 盐水迅速渗入。 6、用1ml注射器滴2-3滴接种物于绒毛尿囊膜上。
鸡胚接种方法
鸡胚为活的动物机体,组织分化程度低, 病毒易于增殖,可选择不同的日龄和接种途 径,感染病毒的组织和液体中含大量病毒。
鸡胚的结构与功能
卵壳 壳膜 气室 绒毛尿囊膜 尿囊腔 羊膜与羊膜腔 卵黄 卵白
羊膜腔
卵壳
卵白 尿囊腔
卵壳膜 气室
绒毛尿囊膜
卵壳 上有细孔,进行气体交换 壳膜 使气体分子和液体分子在内外两方 面进行交换。
卵黄 在胚胎发育早期供给鸡胚营养。
卵白 在胚胎发育晚期供给鸡胚营养。
材料
1、鸡胚 10日龄
2、石蜡 6、注射器 7、蛋座 8、酒精棉球、碘酊棉球
鸡胚的选择
最好是来自SPF鸡群,以降低母源抗体的影响 受精卵的壳最好是白色的
受精卵必须新鲜,保存在5-20℃不要超过10天,
保存一个月的受精卵,孵化率将近于零。
孵育
孵卵箱内的温度应保持在37.5-38.5℃ 相对湿度:50%-60%
必须保证有充分的新鲜空气流通,特别是在孵
化5-6天以后
从孵育后第3天开始,每天翻卵一次。
检卵
自孵育后的第4天开始检卵,每天一次。
孵育4-5日于检卵灯上检查鸡胚受精与否及发育
情况。
室端 3)用钢锥在气室中央锥 一 小孔
鸡胚实验报告

一、实验目的1. 了解鸡胚的发育过程及形态变化;2. 掌握鸡胚培养的基本操作技能;3. 熟悉鸡胚培养在生物科学研究和医学领域的应用。
二、实验原理鸡胚是一种常用的实验动物模型,其胚胎发育过程与哺乳动物胚胎发育过程具有相似性。
通过观察鸡胚的发育过程,可以了解胚胎发育的规律和机制。
鸡胚培养是生物科学研究和医学领域的重要技术手段,可用于病毒分离、疫苗制备、基因功能研究等。
三、实验材料与仪器1. 实验材料:- 新鲜鸡蛋- 生理盐水- 灭菌滤纸- 鸡胚培养液- 培养皿- 显微镜- 培养箱- 计时器2. 实验仪器:- 研钵- 研杵- 灭菌镊子- 灭菌剪刀- 灭菌移液器四、实验步骤1. 鸡胚培养液的准备:- 将生理盐水加入研钵中,用研杵搅拌均匀;- 将生理盐水倒入培养皿中,用灭菌滤纸过滤;- 将过滤后的生理盐水倒入培养瓶中,加入鸡胚培养液,充分混合。
2. 鸡胚的收集:- 将鸡蛋放入温水中浸泡,待鸡蛋表面温度与室温相近;- 将鸡蛋敲碎,取出蛋黄和蛋白,弃去;- 将鸡蛋清加入鸡胚培养液中,搅拌均匀。
3. 鸡胚的接种:- 将鸡胚培养液倒入培养皿中,厚度约1cm;- 将鸡胚放入培养皿中,用灭菌镊子轻轻压平;- 将培养皿放入培养箱中,保持适宜的温度和湿度。
4. 鸡胚的观察:- 每日观察鸡胚的发育情况,记录发育过程;- 利用显微镜观察鸡胚的形态变化,如胚胎细胞分裂、器官形成等。
5. 实验结果分析:- 根据观察结果,分析鸡胚的发育规律和机制;- 结合相关文献,探讨鸡胚培养在生物科学研究和医学领域的应用。
五、实验结果1. 鸡胚发育过程:- 鸡胚在培养过程中,细胞分裂迅速,胚胎逐渐形成;- 随着时间的推移,胚胎细胞分化出不同的器官,如心脏、肝脏、肺等。
2. 鸡胚形态变化:- 通过显微镜观察,可见鸡胚细胞分裂、胚胎形成、器官发育等过程;- 鸡胚的形态变化与相关文献描述相符。
六、实验讨论1. 鸡胚培养在生物科学研究和医学领域的应用:- 鸡胚培养可用于病毒分离和疫苗制备;- 鸡胚培养可用于基因功能研究和疾病模型构建;- 鸡胚培养为研究胚胎发育规律和机制提供了有力工具。
鸡的胚胎发育总结

鸡的胚胎发育总结总结:鸡胚是讨论动物发育的重要模型,已被大量用于发育生物学的讨论。
对鸡胚的讨论可以追溯到古XX闻名的博物学家亚*,之后被许多生物学家予以深化的讨论。
鸡胚在疫苗的开发和讨论中有着不行替代的作用。
1、鸡胚发育阶段(1)种蛋形成中胚胎的发育卵黄自卵巢上排出后,被输卵管的漏斗部接纳,与精子相遇受精,成为受精卵,并在蛋形成过程中开头发育。
当受精卵到达峡部时发生卵裂,进入子宫部4~5小时后已达256个细胞期,到蛋产出时,胚胎发育已进入到囊胚期或原肠早期。
蛋产出后,由于外界气温低于胚胎发育所需要的温度,胚胎发育处于停滞状态,随着时间的延长,胚胎渐渐死亡,降低孵化率。
(2)孵化过程中胚胎发育当赐予种蛋适当的孵化条件,胚胎从休眠状态中清醒过来,连续发育。
以后就由内、中、外3个胚层渐渐发育成新个体全部的组织和器官。
2、各胚层发育命运内胚层:形成呼吸系统上皮、消化器官、内分泌器官。
中胚层:形成肌肉、骨骼、生殖系统、血液循环系统、消化系统的外层、结缔组织。
外胚层:形成羽毛、皮肤、喙、趾、感觉器官、神经系统。
3、鸡胚孵化期阶段划分鸡胚发育时间平均约21天。
但是不同类型鸡种之间有差异。
蛋用鸡种比肉用鸡种短;蛋用鸡种中,白壳蛋鸡种比褐壳蛋鸡种短。
大致可分为成4个阶段:1-4天为内部器官发育阶段;5-14天为外部器官形成阶段;15-19天为胚胎生长阶段;20-21天为出壳阶段。
4、孵化过程中胚胎发育特征孵化过程中胚胎发育表现出固有的特征,可以依据这些特征了解胚胎发育状况:5、鸡胚胚膜鸡胚有4种胚膜(卵黄囊膜、羊膜、浆膜、尿囊膜)和2套血管网(卵黄囊血管网、尿囊膜浆膜血管网)。
孵化至第8天时胚膜和血管网的发育已趋稳定。
在鸡胚绒毛尿囊膜的血管生成早期,机体免疫系统尚未完全建立,因此对各种异物几乎不发生排斥反应,便于将含药物载体臵于其表面,观看各种诱导剂和抑制剂对血管生成的影响。
由于其对抗血管生成药物敏感,目前仍被认为是一种较抱负的药物筛选模型。
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鸡胚鸡胚概述鸡胚就是鸡的胚胎,是研究动物发育的重要模型,已被大量用于发育生物学的研究。
对鸡胚的研究可以追溯到古希腊著名的博物学家亚里士多德,之后被很多生物学家予以深入的研究。
现在对鸡胚发育的过程已有清楚的了解和认识。
鸡胚在疫苗的开发和研究中有着不可替代的作用。
鸡胚装片a.当孵化第一天,染色较深的一端为头部,染色较浅的一端为尾部。
血岛、脊索原基、神经板。
体节出现1—3对。
b.48小时鸡胚装片颈曲、背曲,脑已分化为前、中、后脑三部分。
体节已发展到16—23对。
视、听囊出现,心脏开始搏动。
胚盘血管已形成并与体内建立了联系。
胚体长度达9—12毫米。
c.72小时鸡胚装片脑已清楚地分为五个部分;体节数达33对左右。
前、后肢芽出现,鳃弓具有5对。
尿囊出现。
d.96小时鸡胚装片头部显著增大,大脑半球明显。
眼发育极快,眼内色素沉着,眼球明显。
鳃弓和鳃囊开始模糊不清,全部体节约50对左右。
心脏发育已近似成体心脏。
胚体已极度弯曲,大脑半球与前肢芽几乎和尿接触。
鸡胚培养目录[隐藏]基本原理途径器材操作步骤附:鸡胚培养法血凝试验基本原理途径器材操作步骤附:鸡胚培养法血凝试验[编辑本段]基本原理鸡胚培养法是用来培养某些对鸡胚敏感的动物病毒的一种培养方法,此方法可用以进行多种病毒的分离、培养,毒力的滴定,中和试验以及抗原和疫苗的制备等。
鸡胚培养的技术比组织培养容易成功,也比接种动物的动物来源容易,无饲养管理及隔离等的特殊要求,且鸡胚一般无病毒隐性感染,同时它的敏感范围很广,多种病毒均能适应,因此,是常用的一种培养动物病毒的方法。
[编辑本段]途径各种病毒接种鸡胚均有其最适宜的途径,故应注意选择.本实验用牛痘病毒(vac cinia virus)和鸡新城疫病毒(Newcastle-disease virus)接种鸡胚。
牛痘病毒适宜于在绒毛尿囊膜上生长,经培养后,产生肉眼可见的白色痘疱样病变,似小结节或白色小片云翳状。
鸡新城疫病毒适宜接种在尿囊腔和羊膜腔内,生长后,鸡胚全身皮肤出现出血点,以脑后最显著。
[编辑本段]器材牛痘病毒液,鸡新城疫病毒液;白壳受精卵(自产出后不超过10天,以5天以内的卵为最好);孵卵器,检卵灯,齿钻,磨壳器,钢针,蛋座木架,注射器,2.5%碘酒,70%酒精,镊子,剪刀,封蜡(固体石蜡加1/4凡士林,溶化),灭菌培养皿,灭菌盖玻片等。
[编辑本段]操作步骤1.准备蛋胚孵育前的鸡卵先用清水以布洗净,再用干布擦干,放入孵卵器内进行孵育(37℃,相对湿度是45—60%),孵育三日后,鸡卵每日翻动1—2次。
孵至第4日,用检卵灯观察鸡胚发育情况,未受精卵,只见模糊的卵黄黑影,不见鸡胚的形迹,这种鸡卵应淘汰。
活胚可看到清晰的血管和鸡胚的暗影,比较大一些的可以看见胚动,随后每日观察一次,将胚动呆滞或没有运动的、血管昏暗模糊者,即可能是已死或将死的鸡胚,要随时加以淘汰。
生长良好的蛋胚一直孵育到接种前,具体胚龄视所拟培养的病毒种类和接种途径而定。
2.接种1)绒毛尿囊膜接种(a)将孵育10—12天的蛋胚放在检卵灯上,用铅笔勾出气室与胚胎略近气室端的绒毛尿囊膜发育得好的地方。
(b)用碘酒消毒气室顶端与绒毛尿囊膜记号处,并用磨壳器或齿钻在记号处的卵壳上磨开一三角形或正方形(每边约5—6mm)的小窗,不可弄破下面的壳膜。
在气室顶端钻一小孔。
(c)用小镊子轻轻揭去所开小窗处的卵壳,露出壳下的壳膜,在壳膜上滴一滴生理盐水,用针尖小心地划破壳膜,但注意切勿伤及紧贴在下面的绒毛屑囊膜,此时生理盐水自破口处流至绒毛屑囊膜,以利两膜分离。
(d)用针尖刺破气室小孔处的壳膜,再用橡皮乳头吸出气室内的空气,使绒毛尿囊膜下陷而形成人工气室(e)用注射器通过窗口的壳膜窗孔滴0.05—0.1ml牛痘病毒液于绒毛尿囊膜上。
(f)在卵壳的窗口周围涂上半凝固的石蜡,作成堤状,立即盖上消毒盖玻片。
也可用揭下的卵壳封口,则将卵壳盖上,接缝处涂以石蜡,但石蜡不能过热,以免流入卵内。
将鸡卵始终保持人工气室在上方的位置进行37℃培养,48—96小时观察结果。
(2)尿囊腔接种用孵育10—12天的蛋胚,因这时尿囊液积存得最多。
(a)将蛋胚在检卵灯上照视,用铅笔画出气室与胚胎位置,并在绒毛尿囊膜血管较少的地方作记号。
(b)将蛋胚竖放在蛋座木架上,钝端向上。
用碘酒消毒气室蛋壳,并用钢针在记号处钻一小孔。
(c)用带18mm长针头的1ml注射器吸取鸡新城疫病毒液,针头刺入孔内,经绒毛尿囊膜入尿囊腔,注入0.1ml病毒液(图Ⅻ-5)。
(d)用石蜡封孔后于37℃孵卵器孵育72小时。
(3)羊膜腔接种(a)将孵育10—11天的蛋胚照视,画出气室范围,并在胚胎最靠近卵壳的一侧做记号。
(b)用碘酒消毒气室部位的蛋壳。
用齿钻在气室顶端磨一三角形,每边约1cm的裂痕。
注意勿划破壳膜。
(c)用灭菌镊子揭去蛋壳和壳膜,并滴加灭菌液体石蜡一滴于下层壳膜上,使其透明,以便观察,若将蛋胚放在检卵灯上,则看得更清楚。
(d)用灭菌尖头镊子,两页井拢,刺穿下层壳膜和绒毛尿囊膜没有血管的地方,并夹住羊膜从刚才穿孔处拉出来(图Ⅻ-6)。
(e)左手用另一把无齿镊子夹住拉出的羊膜,右手持带有26号针头的注射器,刺入羊膜腔内,注入鸡新城疫病毒液0.1ml。
针头最好用无斜削尖端的钝头,以免刺伤胚胎。
(f)用绒毛尿囊膜接种法的封闭方法将卵壳的小窗封住,于37℃孵卵器内孵育48—72小时,保持蛋胚的钝端朝上。
3.收获(1)绒毛尿囊膜(a)用碘酒消毒人工气室上的卵壳,去除窗孔上的盖子。
(b)将灭菌剪子插入窗内,沿人工气室的界限剪去壳膜,露出绒毛尿囊膜,再用灭菌眼科镊子将膜正中夹起,用剪刀沿人工气室边缘将膜剪下,放入加有灭菌生理盐水的培养皿内,观察病灶形状。
然后或用于传代,或用50%甘油保存。
(2)尿囊腔接种法收获尿囊液(a)将蛋胚放在冰箱内冷冻半日或一夜,使血管收缩,以便得到无胎血的纯尿囊液。
(b)用碘酒消毒气室处的卵壳,并用灭菌剪刀除去气室的卵壳。
切开壳膜及其下面的绒毛尿囊膜,翻开到卵壳边上。
(c)将鸡卵倾向一侧,用灭菌吸管吸出尿囊液。
一个蛋胚约可收获6ml左右尿囊液。
若操作时损伤了血管,则病毒会吸附在红细胞上,尿囊液成为无用。
收获的尿囊液经无菌试验后可在4℃以下的温度中保存。
(d)观察鸡胚,看有无典型的症状。
(3)羊膜腔接种法收获羊水(a)按收获尿囊液的方法消毒、去壳,翻开壳膜和尿囊膜。
(b)先吸出尿囊液。
(c)再用镊子夹出羊膜,以尖头毛细吸管插入羊膜腔,吸出羊水,放入灭菌试管内,每蛋胚可吸0.5—1.0ml。
经无菌试验后,保存于低温中。
(d)观察鸡胚的症状。
写鸡新城疫病毒接种鸡胚培养后,鸡胚所出现的变化。
[编辑本段]附:鸡胚培养法一、.实验材料(一)7—11日龄鸡胚(二)孵卵箱:孵卵箱要有两个,一个39℃,放正常鸡胚用,另一个33—35℃,放接种病毒后的鸡胚。
(三)照明灯,打孔器和卵盘。
(四)其它:注射器,针头,消毒剂(2.5%碘酒和75%酒精),镊子,酒精灯,试管架,蜡和胶布等。
二、接种技术(一)活胚检查鸡胚使用前必须进行检查,可根据以下三方面来判断其活死:1.血管:活胚可见明显的血管,有时可见血管搏动;死胚血管模糊,成淤血带或淤血块。
2.胎动:活胚可见明显的自然运动,尤其用手轻轻转动卵时。
但胎龄大于14天胚胎,胎动则不明显,甚至无胎动;死胚见不到任何胎动,胚发红像出血样,有的呈现黑块。
3.绒毛尿囊膜发育之界线:生活良好之胚胎可见密布血管的绒毛尿囊膜与鸡胚胎的另一面形成较明显的界线。
必须把上述三方面结合起来进行观察,如果胚胎活动呆滞或不能主动地运动,血管模糊扩张或折断沉落,绒毛尿囊膜界限模糊,则可判断胚胎濒死或已经死亡。
(二)接种途径尿囊腔接种通常选9一11日龄鸡胚,照检后画出气室边界,在气室交界边缘以上约1mm处并避开血管作一标记此即为注射点。
在点周围用先用2.5%碘酒消毒,再用75%酒精脱碘。
用打孔器在注射点处打一小孔,勿损伤壳膜。
用注射器注入样品0.2ml,然后用石蜡溶化封口,置33—35℃培养。
于接种后24h内死亡者为非特异性死亡应弃去。
培养72h后进行收获。
收获前鸡胚须置4℃冰箱6h或过夜,不能置时间过长,过长会引起散黄。
如急于收获亦可置-20℃冰箱1h左右,但不能过长,过长会引起鸡胚结冰,再融化时卵黄膜就破碎,卵黄就流出。
预冷的目的是,将鸡胚冻死使血液凝固,避免收获时流出红细胞并同尿液或羊水里的病毒发生凝集,造成病毒滴度下降。
收获时,用碘酒或75%酒精消毒气室部卵壳,用消毒镊子轻轻敲碎气室部卵壳并取走,再用另一无菌镊子撕去气室部壳膜,然后用无菌注射器通过绒毛尿囊膜进入尿囊腔,吸取尿囊液,置西林瓶内4℃或低温保存待用。
[编辑本段]血凝试验一.仪器设备一次性注射器,微量血凝板(V型、96孔),微型振荡器,移液器二.所需试剂(1)稀释液10×PBS(磷酸缓冲液pH7.0~7.2)氯化钠8.5g,磷酸二氢钾0.68g,氢氧化钠0.15g,上述成分溶于100ml蒸馏水后高压灭菌,于4℃保存,使用时作10倍稀释。
(2)红细胞保存液(阿氏液)葡萄糖20.5克,氯化钠4.2克,柠檬酸0.55克,柠檬酸钠8.0克,溶于1000毫升蒸馏水中,调PH值6.8~7.2,分装,115℃15分钟灭菌,低温保存备用。
(3)1%红细胞悬液用一次性注射器吸取2ml阿氏液,再直接采成年公鸡翅下静脉血液2ml,混匀,转移到离心管中,用1×PBS洗涤红细胞三次,头两次以1500rpm离心5min,最后一次以2000rpm离心10min。
将1ml离心压积后红细胞加入到100mlPBS中或阿氏液中即配成。
三.操作方法(1)于微量血凝板的每孔中滴加稀释液1×PBS 50μL,根据被检样品数量定所加排数。
(2)吸取被检尿囊液分别滴加于第一列孔,每个样品50μL,然后由左至右顺序倍比稀释至第11列孔,再从第11列孔各吸取50μL弃之。
最后一列不加样品作空白对照。
(3)于每孔中加入1%红细胞悬液25μL。
(4)置微型振荡器上振荡1min,或手持血凝板绕圆圈混匀。
(5)放室温下(18~20℃)30min,观察结果。
一、检视标记鸡胚(1)用照蛋灯检视鸡胚,判断鸡胚状态血管:活胚血管清晰;死胚模糊,成淤血带或淤血块胎动:活胚有明显的自然运动,死胚无胎动绒毛尿囊膜发育界限:密布血管的绒毛尿囊膜与鸡胚胎的另一面形成明显的界限(2)标记出鸡胚的气室与尿囊的界限(3)如果鸡胚是死胚、没有受精、有裂痕、发育不全、或表面有好多渗水孔,应弃掉二、接种样本(1)将标记好的鸡胚的气室朝上放置在照蛋器上。
(2)用75%酒精消毒鸡胚,用无菌镊子在气室端钻孔,再无菌眼科剪剪开10x6mm窗口。
(3)用注射器吸800µl标本。