拆方研究逍遥散对阿尔茨海默病模型_省略_A_ChAT_AchE活性的影响_王虎平

明显，表明在评价同属不同种植物的质量时，此方法要优于紫外分光光度法。

由于黄酮苷元含酚羟基，化合物显弱酸性，因此在流动相中需加入少量弱酸，否则会影响分离效果；但是流动相酸性太强会损坏色谱柱，因此综合考虑选用0．1%磷酸比较合适［14］。

为使待测三种物质的分离度达到要求，本实验曾尝试不同比例的甲醇－0．1%磷酸进行梯度洗脱，反复摸索，最终确定了上述分析条件。

胡颓子属4种药材的含量测定结果表明，胡颓子叶与同属药材间总黄酮、槲皮素、山柰酚和异鼠李素的含量差异较大，但由于含量差异还受产地、树龄等因素的影响，因此胡颓子属药材间是否能够混用仍需进一步的研究。

参考文献：［1］周国齐，郑小江．鄂西南木本植物资源［M ］．武汉：湖北科学技术出版社，2000．［2］李聪，葛月宾，胡婧，等．HPLC 法测定胡颓子叶中山柰素的含量［J ］．中国药房，2012，23（19）：1772．［3］万定荣，陈家春，余汉华．湖北药材志［M ］．武汉：湖北科学技术出版社，2002．［4］严永清，余传隆，黄泰康，等．中药辞海［M ］．北京：中国医药科技出版社，1996：1320．［5］Hasler A ，Sticher O．Identification and determination of the flavonoids from Ginkgo biloba by high －performance liquid chromatography ［J ］．Chromatogr ，1992，605（1）：41．［6］谢东．国类银杏叶及其制剂定量分析方法现状［J ］．中草药，1998，29（增刊）：18．［7］俞曼雷，谢德隆，胡馨．HPLC 法测定银杏叶制剂中黄酮苷的含量［J ］．中药新药与临床药理，1998，9（1）：46．［8］郭明娟，江洪波，田祥琴，等．胡颓子叶的化学成分［J ］．华西药学杂志，2008，23（4）：381．［9］李孟顺，廖矛川，葛月宾，等．胡颓子叶水溶性化学成分的研究［J ］．中国中药杂志，2012，37（9）：1224．［10］付义成，王晓静，等．胡颓子叶正丁醇部位化学成分及其细胞毒活性初步研究［J ］．中药材，2009，32（12）：1848．［11］赵鑫，朱瑞良，姜标，等．胡颓子有效部位化学成分研究［J ］．中国中药杂志，2006，31（6）：472．［12］茹凡书．胡颓子叶正丁醇部位活性成分的研究［D ］．河南中医学院硕士学位论文，2013．［13］Ge YB ，Li MS ，Mei ZN ，et al．Two new flavonol glycosides from theleaves of Elaeagnus pungens ［J ］．J Asian Nat Prod Ｒes ，2013，11（24）：1073．［14］李明娟，刘磊，傅春燕，等．车前草黄酮苷酸水解工艺条件的反相高效液相色谱法考察［J ］．时珍国医国药，2013，24（9）：2123．收稿日期：2015-08-17；修订日期：2015-12-17基金项目：甘肃省中药药理与毒理学重点实验室开放基金（No．ZDSYS －KJ －2013－010）；甘肃中医药大学中青年基金（No．2010－11）；国家自然科学基金（No．81060284）作者简介：王虎平（1980-），男（汉族），甘肃中医药大学基础医学院讲师，在读博士研究生，硕士学位，主要从事复方作用机理与有效物质基础研究工作．*通讯作者简介：吴红彦（1963－），男（汉族），甘肃中医药大学基础医学院教授，博士研究生导师，学士学位，主要从事中药复方的现代研究及老年病的中医药防治研究工作．拆方研究逍遥散对阿尔茨海默病模型小鼠记忆功能及血清SOD 、MDA 、ChAT 、AchE 活性的影响王虎平，吴红彦*（甘肃中医药大学、甘肃省中药药理与毒理学重点实验室、甘肃省中医方药挖掘与创新转化重点实验室、甘肃省中药新产品创制工程实验室，甘肃兰州730000）摘要：目的研究逍遥散对氢溴酸东莨菪碱致阿尔茨海默病模型小鼠记忆功能及血清SOD 、MDA 、ChAT 、AchE 活性的影响，探讨逍遥散防治阿尔茨海默病的作用及其机制，阐释疏肝、养血、健脾三者结合防治阿尔茨海默病的配伍意义。

方法60只SPF 级KM 小鼠随机分为空白组、模型组、逍遥散全方组、疏肝养血组、疏肝健脾组、养血健脾组等6组，每组10只。

腹腔注射氢溴酸东莨菪碱复制阿尔茨海默病小鼠模型并分别以逍遥散全方及各配伍药组进行干预防治，给药第6、8天进行学习能力训练，第10天进行记忆功能测试，然后股动脉取血测定血清SOD 、MDA 、ChAT 、AchE 活性。

结果逍遥散全方组、疏肝养血组、疏肝健脾组、养血健脾组皆可提高小鼠记忆潜伏时间，降低错误次数，提高血清SOD 、ChAT 活性，降低MDA 、AchE 活性，但记忆功能及血清SOD 、MDA 、ChAT 、AchE 的改善皆以逍遥散全方组最为明显。

结论逍遥散能较好的改善阿尔茨海默病模型小鼠记忆功能、抗氧化能力及中枢神经递质活性，对阿尔茨海默病具有较好的防治作用，其疏肝、养血、健脾的结合配伍是有效防治阿尔茨海默病的组方结构。

关键词：逍遥散；阿尔茨海默病；拆方研究；氢溴酸东莨菪碱；记忆功能；SOD ；MDA ；ChAT ；AchEDOI 标识：doi ：10．3969/j．issn．1008-0805．2016．03．010中图分类号：Ｒ285．5文献标识码：A 文章编号：1008-0805（2016）03-0538-03据流行病学资料分析，阿尔茨海默病（Alzheimer Disease ，AD ）已成为严重威胁全球老年人生活质量甚至生命健康的杀手级疾病之一。

目前，现代医学对其发病机制的认识还处于基因突变、免疫功能紊乱、神经递质改变、神经生长因子缺失等多种学说阶段，相应的对症治疗根本不能满足患者的临床需求，于是，中医药防治AD 具有了广泛的开发前景。

我们前期基于从肝、脾论治AD 的科研假说，以调和肝脾之名方逍遥散（《太平惠民和剂局方》）对AD 小鼠模型进行了干预研究，初步确证了逍遥散对AD 明确的防治作用［1 6］。

为了进一·835·时珍国医国药2016年第27卷第3期LISHIZHEN MEDICINE AND MATEＲIA MEDICA ＲESEAＲCH 2016VOL．27NO．3步探索逍遥散防治AD的配伍结构、精选防治AD的主要药物，本研究以氢溴酸东莨菪碱复制AD小鼠模型、以记忆功能及血清SOD、MDA、ChAT、AchE活性为考察指标对逍遥散进行了疏肝、养血、健脾为单元药组的拆方配对研究。

1材料与仪器1．1动物SPF级KM小鼠60只，体重（20ʃ2）g，♀、♂各半，由甘肃中医药大学科研实验动物中心提供，合格证号：SCXK（甘）2004－0006。

1．2药物与试剂逍遥散组成各生药均购于甘肃中医药大学附属医院。

氢溴酸东莨菪碱（Scopolamine hydrobromide）注射液购于上海禾丰制药有限公司，批号：100101；超氧化物歧化酶（Su-peroxide Dismutase，SOD）、丙二醛（malondialdehyde，MDA）、乙酰胆碱酯酶（acetylcholinesterase，AchE）、胆碱乙酰转移酶（choline aeetyltransefrase，ChAT）试剂盒及考马斯亮蓝蛋白测试盒均由南京建成生物化学试剂有限公司提供，批号：20100522。

1．3仪器小鼠跳台仪（DT－200）、小鼠避暗自动测试仪（BA－200）均由成都泰盟科技有限公司提供。

2方法2．1分组60只SPF级KM小鼠，（20ʃ2）g，♀、♂各半，随机分为空白组、模型组、逍遥散全方组（由柴胡，当归，白芍，茯苓，白术，煨姜，甘草，薄荷组成）、疏肝养血组（由柴胡，当归，白芍，薄荷组成）、疏肝健脾组（由柴胡，茯苓，白术，煨姜，甘草，薄荷组成）、养血健脾组（由当归，白芍，茯苓，白术，煨姜，甘草组成）等6组，每组10只。

2．2给药空白组及模型组小鼠每天灌胃生理盐水0．2ml·10g－1，逍遥散全方及各配伍药组小鼠每天灌胃各组对应药物水煎液0．2ml/10g。

逍遥散方中各组成药物的剂量均遵2005版《中国药典》中逍遥丸［7］剂量，即柴胡、当归、白芍、茯苓、白术、煨姜各4．615g，薄荷0．923g，甘草3．692g。

以人与小鼠体表面积体重比换算得到各实验剂量，即逍遥散全方组、疏肝养血组、疏肝健脾组、养血健脾组各实验组小鼠对应生药量分别为2．485，1．136，1．775及2．059g/kg。

连续灌胃给药10天。

2．3造模给药第6、8、10天，除空白组小鼠于灌胃1h后腹腔注射生理盐水0．2ml·10g－1外，其余各组小鼠皆于灌胃1h后腹腔注射氢溴酸东莨菪碱0．2ml·10g－1（浓度为：0．1mg·ml－1，即0．02mg·10g－1）复制AD模型。

2．4指标测定2．4．1记忆功能测试动物给药第6、8天，各组小鼠分别于腹腔注射20min后依次使用小鼠跳台仪、小鼠避暗自动测试仪进行学习能力训练，给药第10天，各组小鼠分别于腹腔注射20min后依次使用小鼠跳台仪、小鼠避暗自动测试仪进行记忆功能测试［8］。

2．4．2血清SOD、MDA、AchE、ChAT活性测定第10天记忆能力测试结束后，迅速采取小鼠股动脉取血，静置2h，用低温离心机3000r·min－1离心10min，吸取上清液，按各试剂盒要求测定小鼠血清SOD、MDA、AchE、ChAT活性。

2．5统计学处理各实验数据均以珋xʃs表示，以SPSS13．0软件进行单因素方差分析。

3结果3．1逍遥散及各拆方药组对AD模型小鼠记忆功能的影响（跳台法）见表1。

与空白组相比，模型组小鼠记忆潜伏时间缩短，错误次数增多，差异有统计学意义（P＜0．01）。

与模型组相比，逍遥散全方组及各配伍药组均可延长小鼠记忆潜伏时间、减少错误次数，差异有统计学意义（P＜0．01或P＜0．05）；但以逍遥散全方组组最为明显，且与疏肝养血组、疏肝健脾组及养血健脾组相比，差异有统计学意义（P＜0．05）。

表1逍遥散及各拆方药组对AD模型小鼠记忆功能的影响（跳台法）（珋xʃs）组别记忆潜伏时间/s错误次数（次）空白组259．43ʃ102．412）0．91ʃ0．732）模型组73．53ʃ85．623．57ʃ1．15逍遥散全方组190．01ʃ82．922）1．56ʃ0．922）疏肝养血组145．26ʃ91．031）3）2．43ʃ0．961）3）疏肝健脾组139．33ʃ87．811）3）2．71ʃ1．041）3）养血健脾组141．61ʃ87．741）3）2．52ʃ0．971）3）与模型组相比：1）P＜0．05，2）P＜0．01；与逍遥散全方组相比：3）P＜0．05；n=103．2逍遥散及各拆方药组对AD模型小鼠记忆功能的影响（避暗法）见表2。