维生素C生产中提取工艺研究进展
维生素C生产中提取工艺研究进展
发表时间：2018-01-20T19:06:29.420Z 来源：《基层建设》2017年第32期作者：朱玲王蕾
[导读] 摘要：综述了维生素C生产中提取的传统工艺和改进工艺，，重点介绍了目前生产常用的超滤法、纳滤法、离子交换法和减压浓缩法等提取技术的分离机理以及各自的优缺点，并指明了提取技术今后的发展方向。
沈阳东北制药设计有限公司辽宁省沈阳市 110027
摘要：综述了维生素C生产中提取的传统工艺和改进工艺，，重点介绍了目前生产常用的超滤法、纳滤法、离子交换法和减压浓缩法等提取技术的分离机理以及各自的优缺点，并指明了提取技术今后的发展方向。
研发先进的提取技术，应用于生产，提高古龙酸的质量和收率，也是降低成本、提高VC质量和收率的重要手段。
关键词：维生素C 2-酮基-L-古龙酸超滤膜纳滤减压浓缩
维生素C（化学名L-抗坏血酸，简称VC），是一种人体不能合成的维生素，是世界卫生组织和联合国工业发展组织共同确定的二十六种基本药物之一。
主要应用于医药、食品、饲料、化妆品和生化试剂等领域，具有相当广阔的市场前景。
我国目前采用二步发酵法生产VC，其生产过程包括发酵，提取，转化三大步骤，是世界上公认的较先进的生产方法[1]。
其中提取工艺中古龙酸的质量和收率对于提高VC的质量和产率有着至关重要的影响。
古龙酸，全称2-酮基-L-古龙酸，是维生素C的重要前体。
二步发酵法两次发酵以后，发酵液中仅含8％左右的古龙酸，而残留菌丝体、蛋白质、多糖或悬浮微粒等杂质的含量却很高。
这使古龙酸的分离提纯比较困难，处理费用较高。
因此采用先进的提取技术，提高古龙酸的收率和质量，也是整个VC生产中降低成本、提高收率和增加经济效益的重要手段。
1 传统工艺
1.1 加热沉淀法
加热沉淀法是提取古龙酸的传统工艺。
该法采用氢型离子交换树脂柱树脂，调pH至蛋白质的等电点后加热除蛋白。
此工艺会能耗大，树脂污染严重，古龙酸因受热遭到破坏，收率低。
因此该法已经逐渐被其他分离手段取代。
1.2 化学凝聚法
化学凝聚法是通过加入化学絮凝剂来除去蛋白质、菌体、色素等杂质，避免了加热沉淀时的能耗和有效成分的损失。
但仍存在蛋白分离不彻底、染菌处理效果不好、引入新的化学物质增加环境污染以及产品的质量和收率较低的缺点。
2 改进工艺
2.1 超滤法
超滤法[2]是一种现阶段较成熟的膜处理技术。
其基本分离原理是根据膜孔大小的不同选择性筛分不同分子量的物质。
超滤膜使得发酵液中蛋白质，菌丝体等杂质截留下来，达到分离的目的。
该法的优点是污染少、能耗低、古龙酸成分得到了极好的保留、收率高、操作简单、容易实现自动化连续化生产。
我国的东北制药厂1995年从丹麦引进目前全国最大膜面积的平板超滤装置后，古龙酸的分离提纯成本得到极大的降低，其收率和生产的自动化、连续化程度也明显提高。
其缺点是设备一次性投资较大，膜容易堵塞，装置的通量、抗污染能力尚待提高等。
随着新型膜材料技术的开发，如陶瓷膜、不锈钢膜等的应用，超滤法的应用效果将会进一步的提高，产品的收率和质量也会进一步提高。
2.2 纳滤法
纳滤膜分离[3]是一种相对较新的分离技术。
纳滤是一种压力驱动膜分离过程，介于反渗透与超滤之间。
古龙酸料液通过膜的截留作用，使料液中约1/2体积的水透过膜被除去，古龙酸被截留，从而提高料液浓度，达到浓缩效果。
纳滤膜分离和超滤膜分离一样，过程无相变、能耗低、操作简单，特别适用于热敏性物质的分离和浓缩。
同样，纳滤膜也存在容易被污染和堵塞，使操作压力增加、膜通量降低、物料浓缩倍数降低和浓缩周期延长的缺点。
2.3 离子交换法
离子交换法可采用弱碱性离子交换树脂从发酵液中直接提取古龙酸，用甲醇-硫酸溶液洗脱,将洗脱液直接用于甲酯转化,省去浓缩结晶步骤。
此法浓缩倍数可达4左右。
此外也可将超滤液（古龙酸钠溶液）通过强酸性阳离子树脂离子交换，使古龙酸钠转变成古龙酸。
同时蛋白体、色素和部分杂质会被吸附在树脂上，使古龙酸的质量得到大大提高。
目前，有VC厂家引进连续离子交换工艺[4]来替代原“固定床”树脂柱交换工艺。
连交工艺具有占地面积小，连续性和自动化程度高，可电脑控制的优点，提高了树脂利用率，减少再生剂、洗脱剂和水的消耗，显著提高了经济效益。
连交工艺是目前国际离子交换行业最先进的连续化生产工艺。
2.4 减压浓缩法
古龙酸减压浓缩，用真空泵对浓缩罐抽真空，在保持真空度不低于0.096MPa的状态下，控制蒸发温度低于45℃，使物料中溶剂沸点降低被除去，达到提高物料浓度的过程。
此法可降低热敏性物质古龙酸在浓缩时被破坏的程度
早在二十世纪八十年代初，设计人员就将三效蒸发器作为一级浓缩的蒸发设备，不但节约大量能源，而且可由计算机控制，提高了自动化程度并降低了劳动强度。
此外随着科学技术的发展，MVR蒸发器作为一种更高效节能的蒸发设备被引入国内，逐渐替代传统蒸发器进入VC生产行业。
3 其他方法
除了上述生产过程中常用的提取方法外，有许多研究机构正致力于溶媒萃取法以及超临界萃取法的研究，希望通过找到合适的萃取剂或利用超临界的气体溶液作为萃取剂，避开一系列繁多的分离操作，将古龙酸直接从发酵液中萃取出来，从而对古龙酸的提取工艺进行根本上的革新[4]。
4 结论
近年由于科学技术的发展带来的技术革新，使古龙酸的提取技术得到较大的提高与发展，但其工艺步骤较多，能耗仍较多，且浓缩过程中古龙酸的热损失仍然存在。
所以从根本上解决VC提取工艺操作繁琐、能耗较高、污染环境和收率较低的问题将是今后研究的重要方
向。
参考文献
[1].朱玲.维生素C生产发展趋势[J].《中国化工贸易》.2016,8(11):47-48
[2].李春艳,方富林,夏海平,等.超滤膜分离技术在维生素C生产中的应用[J].《膜科学与技术》.2001,21(1):49-51
[3].葛旭东.2-酮基-L-古龙酸纳滤浓缩工艺研究.天津大学硕士论文2007年
[4].吴春江,林延彬,马子兴.连续交换工艺和设备在VC生产转化工序的改造[J].《中国制药装备》.2009,230(20):30-31
[5].张成果,赵晓丽.古龙酸提取工艺研究进展[J].《河北化工》.2010,33(4):14-15,30。
维生素c的工艺流程
维生素c的工艺流程维生素C的工艺流程。
维生素C，化学名为抗坏血酸，是一种重要的营养物质，对人体健康具有重要的作用。
维生素C可以促进铁的吸收，增强免疫力，帮助伤口愈合，还具有抗氧化的作用。
由于人体无法自行合成维生素C，因此需要通过食物或补充剂来获取。
在工业上，维生素C的生产也是一个重要的过程，下面将介绍维生素C的工艺流程。
1. 原料准备。
维生素C的生产原料主要是葡萄糖，葡萄糖是一种碳水化合物，可以通过植物淀粉的水解来获取。
在工业生产中，通常使用玉米淀粉作为原料，经过水解反应得到葡萄糖。
2. 发酵。
葡萄糖经过一系列的发酵反应，转化为维生素C。
首先，将葡萄糖溶液加入发酵罐中，然后加入适量的微生物菌种，通常使用的是一种叫做谷氨酸杆菌的细菌。
这种细菌在适宜的温度和pH条件下，可以利用葡萄糖进行代谢，产生维生素C。
发酵过程通常需要持续数天至数周不等，期间需要不断监测反应物的浓度和微生物的生长情况。
3. 分离提纯。
经过发酵反应后，维生素C溶液中还会存在大量的杂质和微生物细胞。
因此，需要进行分离和提纯的步骤。
首先，通过过滤等物理方法，将微生物细胞和大部分杂质去除。
然后，采用化学方法，如酸碱沉淀、结晶、萃取等，将维生素C从溶液中提取出来。
最后，经过洗涤、干燥等步骤，得到纯度较高的维生素C产品。
4. 包装。
最后一步是将提纯后的维生素C产品进行包装。
通常采用密封包装的方式，以防止维生素C受潮和氧化。
在包装过程中，需要严格控制生产环境的洁净度，以确保维生素C产品的质量。
综上所述，维生素C的工艺流程包括原料准备、发酵、分离提纯和包装等步骤。
在生产过程中，需要严格控制各个环节的操作条件，以确保维生素C产品的质量和安全性。
同时，工艺流程的优化和改进也是一个持续不断的过程，以提高生产效率和降低成本，为人们提供更优质的维生素C产品。
药品生产技术《维生素C的生产》
生产案例二维生素C发酵维生素C在国外，1938年开始工业化生产，主要用作保健品及食品添加剂。
一般采用采用莱氏化学法。
生产流程图如下：在国内，开始工业化生产有30多年历史,主要作为药用。
采用自行开发的发酵法，分为发酵,提取,转化三个步骤。
1、发酵过程：2、提取过程：3、转化过程：莱氏法的优点是生产工艺成熟，总收率能到达60%〔对D-山梨醇计〕，优级品率为100%，但生产中为使其它羟基不受影响，需用丙酮保护，使反响步骤增多，连续操作有困难，且原料丙酮用量大，苯毒性大，劳动保护强度大，并污染环境。
由于存在上述问题，莱氏法工艺已逐步被两步发酵法所取代。
两步发酵法也是以葡萄糖为原料，经高压催化氢化、两步微生物〔黑醋菌、假单孢杆菌和氧化葡萄糖酸杆菌的混合菌株〕氧化，酸〔或碱〕转化等工序制得维生素C。
这种方法系将莱氏法中的丙酮保护和化学氧化及脱保护等三步改成一步混合菌株生物氧化。
因为生物氧化具有特异的选择性，利用适宜的菌将碳上羟基氧化，可以省去保护和脱保护两步反响。
此法的最大特点是革除了大量的有机溶剂，改善了劳动条件和环境保护问题，近年来又去掉了动力搅拌，大大地节约了能源。
我国已全部采用两步发酵法工艺，淘汰了莱氏法工艺。
第一节L-山梨糖的制备一、菌种制备黑醋菌是一种小短杆菌，属革兰氏阴性菌〔G-〕，生长温度为30~36℃，最适温度为30~33℃。
培养方法：将黑醋菌保存于斜面培养基中，每月传代一次，保存于0~5℃冰箱内。
菌种从斜面培养基移入三角瓶种液培养基中，在30~33℃振荡培养48h，合并入血清瓶内，糖量在100mg/ml以上，镜检菌体正常，无杂菌，可接入生产。
二、发酵液制备种子培养分为一、二级种子罐培养，都以质量浓度为16%~2021D-山梨醇投料，并以玉米浆、酵母膏、泡敌、碳酸钙、复合维生素B、磷酸盐、硫酸盐等为培养基，在pH5.4~5.6下于12021温30min灭菌，待罐温冷却至30~34℃，用微孔法接种。
维生素c的生产工艺
维生素c的生产工艺维生素C，也被称为抗坏血酸，是一种重要的营养物质，具有多种生理功能，例如抗氧化、促进免疫系统、合成胶原蛋白等。
由于人体无法自己合成维生素C，因此需要通过饮食或补充剂获取。
维生素C的生产主要通过工业化方法进行，以下是维生素C的典型生产工艺。
1. 选择原料：维生素C的主要原料是葡萄糖，葡萄糖可从淀粉中提取或通过转化工艺从蔗糖中得到。
葡萄糖是维生素C的基础，用于后续的发酵和精制过程。
2. 发酵：葡萄糖被用作维生素C生产中的发酵底物。
首先，将葡萄糖与特定的微生物，如蜡样假丝酵母或废物葡萄糖放线菌进行培养。
这些微生物通过发酵将葡萄糖转化为L-环状的抗坏血酸。
发酵过程中需要控制合适的温度、pH值和氧气供应，以提高产量和维生素C纯度。
3. 提纯：发酵液包含了生产出的维生素C、微生物残留物和其他杂质。
为了提高维生素C的纯度，需要进行一系列的分离和提纯步骤。
常用的分离技术包括离心、过滤、萃取和结晶。
离心可以快速分离出微生物残留物，过滤则可以去除悬浮的固体颗粒。
萃取是使用溶剂将维生素C从废液中提取出来。
最后，通过结晶技术，进一步净化和浓缩维生素C，达到所需纯度。
4. 干燥：得到的维生素C溶液或膏状物是含有大量水分的，需要通过干燥步骤将其转化为固体形式。
常用的干燥方法包括喷雾干燥和真空干燥。
喷雾干燥是将维生素C溶液通过喷雾器喷成细小颗粒，然后在高温下与热空气接触，将水分蒸发出去。
真空干燥则是将溶液置于低压环境下，通过蒸发将水分去除。
5. 包装和存储：维生素C的最终产品在进行清洁检测后，通常以片剂、颗粒剂或粉剂的形式包装。
包装后的维生素C产品需要进行密封和贮存，以保持其稳定性和营养价值。
适当的贮存条件包括避光、防潮和防潮湿环境。
综上所述，维生素C的生产工艺主要包括原料选择、发酵、提纯、干燥和包装等步骤。
随着技术的进步和工艺的改进，维生素C的生产效率和纯度得到不断提高，有助于满足人们对于维生素C的需求。
维生素C注射液生产工艺的设计与稳定性探讨
目录
01 摘要
03 生产工艺设计
02 引言 04 参考内容
摘要
摘要
本次演示主要介绍维生素C注射液生产工艺的设计与稳定性探讨。通过实验研 究，本次演示得出结论：维生素C注射液具有高稳定性，其生产工艺设计合理， 可以作为维生素C注射液的生产工艺参考。
引言
生产工艺设计
维生素C注射液的生产工艺主要包括以下几个步骤： 1、原材料准备：选择符合质量要求的维生素C原料，进行必要的检验和验收。
生产工艺设计
2、溶解：将维生素C原料溶解于适当浓度的注射用水中。 3、滤过：使用过滤器去除溶液中的杂质和颗粒。
生产工艺设计
4、灌装：将滤过后的溶液灌装入预先清洗和灭菌的注射用瓶中。 5、封口：使用封口设备将灌装后的瓶口密封。
内容摘要
未来的维生素C生产工艺将更加注重环保和高效。例如，通过基因工程的方法， 可以改造微生物，使其产生更多的维生素C，提高生产效率。此外，还可以开发 新的提取和精制技术，以减少废弃物产生，降低能源消耗。
内容摘要
总的来说，维生素C的生产工艺发展经历了多个阶段，从最初的生物发酵法， 到化学合成法，再到现在的生物合成法，每个阶段都有其优点和不足。然而，随 着科技的不断进步，我们有理由相信，未来的维生素C生产工艺将更加环保，高 效和可持续。
参考内容
内容摘要
维生素C，也被称为抗坏血酸，是一种重要的水溶性维生素，对于人体健康有 着至关重要的作用。其不仅可以提高人体的免疫力，还可以预防和治疗多种疾病。 由于其重要的生理功能，维生素C的生产工艺发展也经历了多个阶段。
内容摘要
早期的维生素C生产主要采用生物发酵法。这种方法是利用某些微生物在培养 基中发酵产生维生素C，然后通过提取和精制的过程，得到纯度的维生素C。虽然 这种方法可以得到高纯度的维生素C，但是生产效率较低，且需要大量的水资源 和能源。
维生素c制剂的质量分析实验报告
维生素c制剂的质量分析实验报告维生素 c制剂是将维生素 c (或称甲基维生素）溶于稀盐酸溶液中制成，经加酶催化反应，然后与硫酸铜、硫酸铝钾、硫酸亚铁等反应得到一种脂溶性化合物，俗称“维生素 C”或“维生素 K”（亦称 VK),化学式为 KOH。
维生素 c主要存在于豆科植物和动物性食物中，其主要作用是维持细胞代谢和正常生理功能等。
维生素 c不仅在生理上能保护心脏、肝脏、肌肉、造血、神经、生殖等器官及组织细胞，同时能调节内分泌系统，预防心血管病如心肌炎、心肌病等，是人体不可缺少的重要营养素。
在机体各个组织中分布广泛且较为稳定，但随着年龄增长和氧化还原反应等作用减弱而逐渐失去作用。
维生素 c作为一种广谱抗坏血酸药物，在防治疾病方面有着广泛应用；而且治疗疾病效果明显；是一种理想且廉价的常用抗菌药物、抗病毒、抗生素制剂，在人类使用和治疗方面均有着不可替代的作用。
因此维生素 c制剂被广泛应用于各大医院药品采购目录中。
鉴于维生素 c制剂质量控制的特殊性和重要性，为了保证医药产品质量监督与控制工作能够正常开展，我部组织本实验室开展了维生素 c制剂质量分析工作。
1、制定实验方案维生素 c制剂主要是用于治疗和预防维生素的缺乏引起的各种疾病。
对临床用量较大的药品，如治疗心肌炎药物、抗菌药物等，由于其成分含量的特殊性，在临床使用中其质量管理也尤为重要。
针对原料来源和生产工艺情况，建立科学合理的原料种植管理模式对提高质量管理水平起到至关重要作用。
我部有8个专业实验室，其中2个国家级实验室以及2个省级实验室。
各实验室各司其职，各负其责，形成了从原料到成品一条完整有序的质量管理链。
实验室制定了具体实施方案，保证按照质量管理程序开展试验工作并顺利实施。
2、试样制备称取1 g维生素 c (浓度为10%)溶于150 ml稀盐酸溶液中，充分溶解后移入100 ml刻度玻璃瓶中。
取适量维生素 c加入100 ml10%磷酸钠溶液中，搅拌均匀后静置15 min,使其溶解。
药品维生素c的工艺
药品维生素c的工艺
维生素C的工艺一般分为合成法和发酵法两种。
1. 合成法：
合成法是通过化学合成的方式制备维生素C。
主要步骤包括：
- 底物准备：将底物葡萄糖转化为脱氢抗坏血酸酸（DHA），通常采用糖脱氢酶催化反应。
- 脱氢化：将DHA脱氢为维生素C，脱氢反应一般使用金属或半导体催化剂。
- 精制：对脱氢反应产物进行纯化、结晶、过滤、干燥等工艺，以获得高纯度的维生素C。
2. 发酵法：
发酵法是通过微生物进行发酵生产维生素C。
这种工艺属于生物法，主要步骤包括：
- 微生物选育：选用适宜产维生素C的微生物，常用的包括双歧杆菌、废纸霉等。
- 发酵培养：将选用的微生物培养在适当的培养基上，提供充足的营养条件和适当的温度、pH等条件，使微生物产生维生素C。
- 分离提取：将发酵液进行分离提取，通常采用离心、膜过滤、吸附等技术，获得维生素C的粗品。
- 精制：对粗品进行纯化、结晶、干燥等工艺，以获得高纯度的维生素C。
维生素C的工艺除了以上两种常见的方法，还可以通过植物提取法或动物提取
法获得。
不同的制备方法会影响维生素C的产率、纯度以及成本等因素。
柑橘中维生素C的提取工艺研究
Science &Technology Vision科技视界※基金项目:2018年湖南省教育厅科学研究项目(18C1506)。
作者简介:胡文主,副教授,主要从事制剂研究。
柑橘中维生素C 的提取工艺研究胡文主(湖南食品药品职业学院,湖南长沙410000)【摘要】通过碘滴定法检测柑橘中维生素C 的含量变化,从选材、压榨取汁、浓缩、干燥等方法对柑橘进行提取处理,尽可能降低维生素C 的损耗。
柑橘通过常温压榨取汁后,采取60℃真空浓缩,60℃真空干燥后,维生素C 损耗小,并能得到干燥的提取物,方便进一步制成口服维生素C (柑橘味)咀嚼片。
【关键词】柑橘;维生素C ;碘滴定法中图分类号:G434文献标识码:ADOI :10.19694/ki.issn2095-2457.2020.30.31【Abstract 】Determination of vitamin C in citrus by iodine titration,from material selection,squeeze juice,concentrate,drying and other methods to extract Citrus.Reduce the loss of vitamin C as much as possible.After citrus juice is squeezed at room temperature,Take vacuum concentration at 60℃,vacuum drying at 60℃,Low loss of vitamin C,And dry extract can be obtained,Convenient for furtherpreparation of oral vitamin C (citrus flavor)chewable tablets【Key words 】Citrus;Vitamin C;Iodine titration0引言柑橘是湖南农业的支柱产业之一,主要品种有蜜橘、椪柑、脐橙、冰糖橙和柚子等知名品牌,常德石门被称为“中国柑橘之乡”,柑橘多以鲜食为主,富含维生素C,保鲜期短。
君迁子叶中维生素C的提取工艺及含量的动态研究
③ 提取 次数 的选 择 ： 君迁子 叶 的粉末 （ 取 ８月 ） １ ， 约 ０ｇ 精密 称 定 ， 水 加 ３０ｍ 避 光冷浸 ８小 时 ， 提取 次数 分 别 为 １ ２ ３次 ， 声 提 取 时 间 ４ ０ Ｌ， 按 ，， 超 ｏ ａ ， ｒｎ测 定 ， ｉ 计算 维 生素 ｃ的含 量 ， ３ 果显 示 ： 取 次数 为 １ 时 提取 效 表 结 提 次 率 就可 以达 到最 高 ， 增加 提 取 次 数 ， 取 效率 改 变 不 大 ， 提 因此 ， 选择 提 取 次
表 ４ 因素 水平 表
３ 小 结与讨 论
３ １ 由表 ７数据 可以看 出 ， 同生育期 君迁子 叶 中的维生 素 Ｃ含 量呈 ． 不 现 动态变 化 ， ９月采集 的维 生 素 Ｃ含量 最 高 ，１ 的次 之 ， 、 １月 ６月 ８月、０月 ｌ 含 量相差 不大 ， ５月份最 少 ， 高 峰期 与 低 峰期 差 异很 大 ， 且 ５月份 的含 量仅 为 ９月 份 的 ２ ．％ ； 可看出 ， 子二 年生茎 中维 生素 Ｃ含量 很 高 ， 有 １５ 还 君迁 很 研究利 用 价值 ， 因样 品较 少 ， 但 还需进 行进 一步研 究 。 ３２ 通过 三 因素考察 ， 定其最 佳提 取工 艺条 件为 料液 比 Ｉ３ ， ． 确 ：０ 提取
沸 水 （ ｌＯ ｌ 每 Ｏ ｍ 含稀 醋 酸 ｌｍ ） 避光冷 浸 ８小 时 ， 声 提取 ４ ｒ ｎ测定 ， Ｏ １， 超 ０ ｉ， ａ 计 算 维生 素 Ｃ的 含量 。 １结果显 示 ： 液 比为 １３ 表 料 ：０时维 生素 Ｃ含 量最 高 ， 增 大 料液 比 ， 效率 变化 不大 ， 虑到 节约实 验成本 ， 提取 考 选择料 液 比为 １３ 。 ：０ 表 １ 料液 比对 维生素 Ｃ含量 的影 响 （ ５ ｎ＝ ）
发酵工程——维生素C的生产工艺.
1933年瑞士化学家莱齐特因等用化学合成方法合成维生素C，也 称莱氏法。该法主要以D-山梨醇作为原料，是最早生产维生素C的方 法，也是国外采用的方法。工艺路线主要如下： 黑醋菌的发 丙酮 酵氧化 D-山梨醇 L-山梨糖 二丙酮-L-山梨糖 硫酸 次 氯 酸 纳 双丙酮-2-酮基L-古龙酸 酸化
氧化
维生素C
维 生 素 的 工 艺 原 理
王桐 潘明阳 郁鲲
一、维生素C ( Vitamin C VC)
维生素C又名抗坏血酸，呈白色粉末，无臭，味酸， 熔点 190～ 192℃，易溶于水和甲醇，略溶于乙醇， 不溶于乙醚、氯仿及石油醚等。具有较强的还原 性，易受光、热、氧等破坏，在碱液中或有微量 金属离子存在时，分解更快，但干燥结晶后较稳 定。VC是一种人体必需的水溶性维生素，也是一 种抗氧化剂，广泛应用于医药、食品、饲料等领 域。
维生素C的生产工艺
➢移入三角瓶种液培养基，29-33 ℃振荡培养24h，➢产酸量在6-9mg/mL，pH降至7以下，镜检正常无杂菌⏹发酵部分➢一级种子罐加料➢控温29-30 ℃，压强0.05MPa，pH6.7-7.0➢二级种子罐培养，➢发酵终点：温度31-33℃，pH7.2，残糖量<0.8mg/mL ➢两步发酵收率78.5%⏹提取部分➢一次交换盐酸酸化，调菌体蛋白等电点，沉降4h以上上清液以2-3m3/h的流速压入阳离子交换柱当流出液pH为3.5时，收集交换液，控制pH交换完，纯水冲柱➢加热过滤合并流出液和洗液调pH至蛋白等电点加热至70℃，加0.3%活性炭升温至90-95℃，保温10-15min，使蛋白凝结停止搅拌，快速冷却，高速离心➢二次交换上清液打入二次交换柱洗脱，至流出液pH=1.5时，收集交换液控制pH1.5-1.7之间。
交换完毕，洗柱➢减压浓缩二次交换液进行一级浓缩控制真空度、内温，至浓缩液的相对密度达1.2出料同样条件二次浓缩，至尽量干加少量乙醇，冷却结晶甩滤，冰乙醇洗涤得2-酮基-L-古龙酸（℃）收率80%3、反应条件及影响因素⏹山梨糖的影响➢山梨糖初浓度过高，将抑制菌体生长，使发酵收率降低➢从生产角度考虑，保证尽可能高的酸度，需山梨糖初浓度越高越好➢较适宜为80mg/mL➢采用滴加或待菌体生长正常后一次性补加的方法，来提高产物的浓度。
⏹溶解氧浓度的影响➢溶解氧浓度影响好氧菌的活性➢产酸前期应处于高溶氧浓度➢产酸中期，溶氧浓度为3.5-6.0mg/mL➢产酸后期，耗氧量减少。
⏹pH的影响➢pH过低（<6.4）不利于发酵➢控制pH6.7-7.94、注意事项及“三废”处理⏹调好等电点是凝聚菌体蛋白的重要因素⏹树脂再生直接影响2-酮基-L-古龙酸的提取，其标准为进出酸差在1%以下，无Cl-⏹浓缩时，温度控制在45℃左右较好，以防止跑料和炭化⏹三废处理。
➢母液回收、浓缩、结晶甩滤，提高收率➢废盐酸回收后可再用于第一次交换⏹浓缩时，温度控制在45℃左右较好，以防止跑料和炭化⏹三废处理。